ComparaciComparacióón bioln biolóógica y bioqugica y bioquíímica mica de ocho aislamientos de granulovirus de ocho aislamientos de granulovirus

patpatóógenos de genos de Tecia solanivora Tecia solanivora (Lep.: Gelechiidae).(Lep.: Gelechiidae).

David PDavid Pááez, Yangari B., Orbe K., ez, Yangari B., Orbe K., Rebaudo F., Lery X., Zeddam JRebaudo F., Lery X., Zeddam J--L.L.

INTRODUCCIINTRODUCCIÓÓNN

SolanumSolanum tuberosum tuberosum L.L.

Uno de los productos de mayor Uno de los productos de mayor importancia agroimportancia agro--econeconóómica en el mica en el Ecuador.Ecuador.

Forma parte de la dieta bForma parte de la dieta báásica de muchos sica de muchos hogares.hogares.

Base econBase econóómica para las comunidades mica para las comunidades rurales de la sierra ecuatoriana rurales de la sierra ecuatoriana

Symmetrischema plaesiosemaSymmetrischema plaesiosema(Turner)(Turner)

Á. Barragán y N. Velasco

Tecia solanivora Tecia solanivora (Povolny)(Povolny)

PhthorimaeaPhthorimaea operculellaoperculella(Zeller)(Zeller)

Á. Barragán y N. Velasco

Á. Barragán y N. VelascoTuta absolutaTuta absoluta(Meyrick)(Meyrick)

www.inia.cl

Polillas de la papa (Ecuador)Polillas de la papa (Ecuador)

Tecia solanivoraTecia solanivora (Povolny, 1973)(Povolny, 1973)

Guatemala

Venezuela(1983)

Ecuador (1996) 2 000 - 3 400 msnm

Colombia(1985)

En las principales En las principales ááreas paperas de las reas paperas de las provincias de Carchi, Cotopaxi, provincias de Carchi, Cotopaxi, Chimborazo y CaChimborazo y Caññar, tanto en el campo ar, tanto en el campo como en bodega (100%).como en bodega (100%).

Servicio Ecuatoriano de Sanidad Servicio Ecuatoriano de Sanidad Agropecuaria (SESA) la declarAgropecuaria (SESA) la declaróó peste peste nacional debido al manejo insatisfactorio.nacional debido al manejo insatisfactorio.

Tecia solanivoraTecia solanivora(Povolny, 1973)(Povolny, 1973)

BaculoviridaeBaculoviridae

NucleopolihedrovirusNucleopolihedrovirus (NPV).(NPV).

GranulovirusGranulovirus (GV) (GV) LepidLepidóópterospteros..

PhopGV:PhopGV: PhthorimaeaPhthorimaea operculella operculella granulovirus. granulovirus.

PhopGV PhopGV ≠≠ T. solanivoraT. solanivora..

GranulovirusGranulovirus

Foto

: D

r H

ans

Acke

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uebe

c, C

anad

á

Cuerpos de InclusiCuerpos de Inclusióón (CI)n (CI)

SSííntomasntomas

A. Barragán K. Orbe

SanasSanas EnfermasEnfermas

Aislamientos GVAislamientos GV

Variaciones genotVariaciones genotíípicas y/o fenotpicas y/o fenotíípicas.picas.

Las diferencias en la actividad biolLas diferencias en la actividad biolóógica se gica se evidencian al realizar bioensayos.evidencian al realizar bioensayos.

Objetivo: Objetivo: comparacicomparacióón de las n de las caractercaracteríísticas bioqusticas bioquíímicas y biolmicas y biolóógicas de gicas de varios aislamientos de PhopGV para varios aislamientos de PhopGV para controlar a controlar a T. solanivoraT. solanivora..

MATERIALESMATERIALESMMÉÉTODOSTODOS

RESULTADOSRESULTADOS

Aislamientos PhopGVAislamientos PhopGV

AISLAMIENTOSAISLAMIENTOS HOSPEDERO ORIGINALHOSPEDERO ORIGINALPhopGV 1346PhopGV 1346** Phthorimaea operculellaPhthorimaea operculellaPhopGV 1390PhopGV 1390--22 Phthorimaea operculellaPhthorimaea operculellaTesoGV CC1TesoGV CC1** Tecia solanivoraTecia solanivora

GV5GV5 Tecia solanivoraTecia solanivoraGV6GV6 Tecia solanivoraTecia solanivora

JLZ9fJLZ9f** Symmetrischema plaesiosemaSymmetrischema plaesiosemaPadeGVPadeGV Paraschema detectendumParaschema detectendumEumeGVEumeGV Eurysacca melanocamptaEurysacca melanocampta

PurificaciPurificacióón y cuantificacin y cuantificacióón CIn CI CentrifugaciCentrifugacióón n en un gradiente en un gradiente

discontinuo de glicerol al 30, 50 y discontinuo de glicerol al 30, 50 y 70% (v/v en TE pH 7.6).70% (v/v en TE pH 7.6).

Pellet final, conteniendo CI, Pellet final, conteniendo CI, resuspendido con resuspendido con 200 200 µµL de HL de H22Od Od y se almaceny se almacenóó a a --20 20 ººC.C.

PhopGV: (DOPhopGV: (DO450nm450nm = 1) = 1) concentraciconcentracióón viral de 679.9 x 10n viral de 679.9 x 1066

CI/mL.CI/mL.

CaracterizaciCaracterizacióón bioqun bioquíímicamica

ProteProteíína viral: na viral: granulina.granulina.

Perfil polipeptPerfil polipeptíídico (Electroforesis endico (Electroforesis en gel gel de poliacrilamida 12%).de poliacrilamida 12%).

Marcador pesos moleculares para Marcador pesos moleculares para proteproteíínas (Sigma).nas (Sigma).

PhotoCapt (programa informPhotoCapt (programa informáático).tico).

GranulinaGranulinaPhopGV

1346 MPMTesoGV

CC1 JLZ9fPhopGV1390-2 PadeGV GV6 GV5 EumeGV

Eficiencia biolEficiencia biolóógica (CLgica (CL5050))

Coeficiente Coeficiente de variacide variacióón n (<10).(<10).

KruskalKruskal--WallisWallis(P>0,05).(P>0,05).

CLCL5050 = = CI/mmCI/mm22

BioensayosBioensayos

Eficiencia biolEficiencia biolóógica (CLgica (CL5050))sobre sobre T. solanivoraT. solanivora

CI/

mm

2

144

6145

2918 12 10 10

TesoGV CC1 PhopGV 1346 GV5 GV6EumeGV PadeGV PhopGV 1390-2 JLZ9f

CONCLUSIONESCONCLUSIONES

El granulovirus PhopGV tiene la capacidad El granulovirus PhopGV tiene la capacidad de infectar a varias especies de de infectar a varias especies de Gelechiidae, ademGelechiidae, ademáás de las especies s de las especies previamente reportadas en la literatura (previamente reportadas en la literatura (P. P. operculellaoperculella, , T. solanivorT. solanivora y a y S. tangoliasS. tangolias).).

Se evidencia la existencia de otras dos Se evidencia la existencia de otras dos especies hospederas naturales del especies hospederas naturales del entomopatentomopatóógeno, geno, P. detectendumP. detectendum y y E. E. melanocamptamelanocampta. .

Aislamientos con mismo peso molecular Aislamientos con mismo peso molecular de granulina (de granulina (~29 kDa)~29 kDa)..

Diferencias a nivel de otras proteDiferencias a nivel de otras proteíínas nas (viriones).(viriones).

CaracterizaciCaracterizacióón bioqun bioquíímicamica

Los aislamientos mLos aislamientos máás virulentos o s virulentos o efectivos para controlar a efectivos para controlar a T. solanivoraT. solanivorason JLZ9f y PhopGV1390son JLZ9f y PhopGV1390--2, debido a que 2, debido a que su CLsu CL5050 fue la mfue la máás baja de todas: s baja de todas: alrededor de 10 CI/mmalrededor de 10 CI/mm22..

Hasta el momento, ambos serHasta el momento, ambos seríían los an los candidatos mcandidatos máás ids idóóneos para la neos para la formulaciformulacióón de un bioplaguicida. n de un bioplaguicida.

Eficiencia biolEficiencia biolóógicagica

¡¡GRACIAS!GRACIAS!