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CONSEJO NACIONAL DE CIENCIA Y TECNOLOGIA-CONCYT-
SECRETARIA NACIONAL DE CIENCIA Y TECNOOGIA-SENACYT-
FONDO NACIONAL DE CIENCIA Y TECNOLOGIA –FONACYT-
UNIVERIDAD DEL VALLE DE GUATEMALA –UVG-
INFORME FINAL
“Búsqueda, rescate, caracterización agronómica,
botánica, molecular y conservación de cacao, Theobroma
cacao L., tipo criollo de los departamentos de Huehuetenango,
San Marcos, Quetzaltenango, Escuintla y Retalhuleu”.
PROYECTO FODECYT NO. 50-2008
MANUEL ANTONIO PORRES ARREAGA, Ph.D.
Investigador principal
GUATEMALA, Agosto 2013
ii
AGRADECIMIENTOS
La realización de este trabajo, ha sido posible gracias al apoyo financiero del
Fondo Nacional de Ciencia y tecnología -FONACYT- otorgado por la Secretaría
Nacional de Ciencia y Tecnología -SENACYT- y al Consejo Nacional de Ciencia y
Tecnología -CONCYT-.
iii
OTROS AGRADECIMIENTOS
Se agradece la colaboración prestada por la Asociación Nacional de Productores
de Cacao (ANAKAKAW) haciendo factible el contacto con agricultores productores de
cacao para la localización de variedades de cacao criollo. Agradecimientos a Marcelo
López Barrios y Marlon Reina de ANAKAKAW, San Marcos.
También se agradece la colaboración prestada por los ingenieros Jorge Estrada y
Walter Gerardo Maldonado Osorio en la propagación de material vegetativo de cacao y
por proporcionar contactos con agricultores del sur de Guatemala para la localización de
variedades de cacao criollos.
Así mismo, se agradece la colaboración del comité que dirige la finca los
“Brillantes” de Muluá, Retalhuleu por facilitar la obtención de clones de cacao criollo y
variedades de alta producción, principalmente al señor Cornelio Morales Solano y a
Aparicio Ardón Yax, Presidente del comité.
iv
INDICE
RESUMEN .................................................................................................................... xiii
SUMMARY .................................................................................................................. xiv
PARTE I ........................................................................................................................... 1
I.1. INTRODUCCIÓN .................................................................................................... 1
I.2. PLANTEAMIENTO DEL PROBLEMA.................................................................. 2
I.2.1. Antecedentes en Guatemala. .................................................................................. 2
I.2.2. Justificación del trabajo de investigación............................................................... 3
I.3. OBJETIVOS ............................................................................................................. 4
I.3.1. Objetivo General .................................................................................................... 4
I.3.2. Objetivos específicos.............................................................................................. 4
I.4. METODOLOGÍA ..................................................................................................... 5
I.4.1. Localización ........................................................................................................... 5
I.4.2. Metodología de muestreo ....................................................................................... 6
I.4.3. Indicadores ............................................................................................................. 6
I.4.4. Estrategia Metodológica ......................................................................................... 6
1.4.4.1 Búsqueda: ............................................................................................................ 7
1.4.4.2 Rescate: ................................................................................................................ 7
1.4.4.3 Caracterización Agronómica: .............................................................................. 7
1.4.4.4 Caracterización Botánica: .................................................................................... 8
1.4.4.5 Caracterización Molecular:.................................................................................. 8
1.4.4.6 Técnica Estadística: ............................................................................................. 8
1.4.4.7 Instrumentos a Utilizar: ....................................................................................... 9
PARTE II ........................................................................................................................ 10
II. MARCO TEÓRICO ................................................................................................. 10
II.1. Origen del cacao .................................................................................................... 10
II. 2. Genoma del cacao ................................................................................................. 10
II.3. Theobroma cacao ................................................................................................... 10
II. 4. Tipos de cacao....................................................................................................... 11
II.5. Investigación CATIE ............................................................................................. 12
II.6. Manejo del cacao ................................................................................................... 12
II.6.1. Proceso de la iluminación en el cultivo del cacao .............................................. 12
II.6.2. Propagación asexual del cacao............................................................................ 13
II.6.3 Preparaciones hormonales para el enraizamiento de estacas de cacao ............. 14
II.7. Factores relacionados a la calidad del cacao.......................................................... 14
v
II.8. Principales enfermedades el cacao......................................................................... 15
II.8.1. Marchitamiento prematuro (Cherelle Wilt) del cacao. ....................................... 15
II.8.2. Pudrición negra del fruto .................................................................................... 16
II.8.3. Monialisis ............................................................................................................ 18
II.8.4. Rosellinia ............................................................................................................ 19
II.8.5. Antracnosis del follaje ........................................................................................ 20
II.8.6. Escoba de bruja ................................................................................................... 20
II.9. Mercado del chocolate ........................................................................................... 21
II.9.1. Países productores de cacao ................................................................................ 21
II.10. Caracterización molecular ................................................................................... 21
II.10.1. Estudios anteriores sobre caracterización molecular ......................................... 23
PARTE III ...................................................................................................................... 25
III. RESULTADOS ....................................................................................................... 25
III.1. Departamentos de Búsqueda ................................................................................ 25
III.2. Rescate .................................................................................................................. 29
III.3. Caracterización Agronómica de las muestras ....................................................... 30
III.4. Caracterización Botánica ...................................................................................... 32
III.5. Caracterización Molecular .................................................................................... 34
PARTE IV ...................................................................................................................... 38
IV.1. DISCUSIÓN DE RESULTADOS ....................................................................... 38
IV.2. CONCLUSIONES ............................................................................................... 40
IV.3. RECOMENDACIONES ...................................................................................... 42
IV.4. REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS ................................................................. 43
Astiasaran, I. y Martinez,J.A. 2000. Alimentos, Composición y Prioridades. Editorial
Mc.graw-Hill Interamerican. Madrid.pp. 169-190. ........................................................ 43
Asociacion técnica para la coordinación agroalimentaria- ACTIA-. 2001. Sensory
evaluation. Guide of good practice. Paris, 2001. pp.128. ............................................... 43
Ávalos, A. y L. Molina. 2004. Caracterización de 20 variedades mutantes de frijol
(Phaseolus vulgaris L.) mediante la técnica del AFLP. Informe técnico de actividades
del Laboratorio de Biotecnología de la Región I ICTA, Guatemala. ............................. 43
Azofeifa-Delgado, Álvaro. 2006. Uso de marcadores moleculares en plantas;
aplicaciones en frutales del trópico. Agronomía Mesoamericana 17(2):221-242. ........ 43
B.B.C. News. March 24, 2004. Fat profits: Choc tactics. [Publicación en línea].
Disponibles Internet desde: http://news.bbc.co.uk/1/hi/business/3560857.stm [con
acceso el 18-06-2008]. .................................................................................................... 43
Beckett, S.T. 1994. Fabricación y utilización industrial del chocolate. Zaragoza,
España. ............................................................................................................................ 43
Borrone, J.; R. Schnell, J. Brown y D. Kuhn. 2007. Microsatellite-containing
expressed sequence tags for genetic mapping and genotyping Theobroma cacao.
Proceedings of the XVth International Cacao Conference. ............................................ 43
vi
Cervantes-Martínez,C.; J. Steven Brown, R. Schnell, J.C. Motamayor, A.W. Meerow,
D.Zhang. 2006. A computer simulation study on the number of loci and trees required
to estimate genetic variability in cacao(Theobroma cacao L. ). Springer Verlag. Tree
Genetics & Genomes DOI 10.1007/s11295-006-0038-0. .............................................. 43
Cheesnan, E. 1941. Notes on the nomenclature classification and possible relationship
of cacao populations. Tropical Agriculture, XXI: 144-159........................................... 43
Chocolate Manufacturers Association. 2003. Harvesting Cocoa Beans. [Publicación
en línea]. Disponible en Internet desde:
http://www.cocoatree.org/frombeantobar/harvestingcocoabeans.asp [con acceso el 18-
06-2008]. ........................................................................................................................ 43
Coe, S. y M. Coe. 2000. La verdadera historia del chocolate. Fondo de cultura
economica. Mexico. 396pp. .......................................................................................... 43
Cros, E. 1997. Factores condicionantes de la calidad del cacao. Presentado en el I
Congreso venezolano del cacao y su industria. Maracay Venezuela. [Publicación en
línea]. Disponible en Internet desde:
http://www.cacao.sian.info.ve/memorias/html/02.html [con acceso el 19-06-2008]. .... 43
Crouzillat, D., W. Phillips, W. Fritz and V. Pétiard. 2000. Quantitative trait loci
analysisi in Theobroma cacao using molecular markers. Inheritance of polygenic
resistance to Phytophthora palmivora in two related cacao populations. Euphytica
114(1):25-36. .................................................................................................................. 44
Cryer, N.C.; M.G.E. Fenn, C.J. Turnbull and M.J. Wilkinson. 2006. Allelic size
standards and reference genotypes to unify international cocoa (Theobroma cacao L.)
microsatellite data. Genetic Resources and Crop Evolution 53:1643-1652. ................. 44
Dagert, M.; F. Brito y M.J. Marcano. Caracterización molecular de cacaos criollos del
occidente de Venezuela. Red Nacional de Análisis Genético Poblacional.
http://cecalc.ula.ve/BIOINFO/proyectos/proyect11.html. Último acceso 18 -06-2008. 44
Díaz, L. 2008. Rusos, interesados en cacao nacional. Prensa Libre [Guatemala]. 29 de
marzo de 2008. [Publicación en línea]. Disponible en Internet desde:
http://www.prensalibre.com/pl/2008/marzo/29/228789.html [con acceso el 19-06-2008].
........................................................................................................................................ 44
Doyle, J.J. and J.L. Doyle. 1990. Isolation of plant DNA from fresh tissue. Focus
12:13-15. ......................................................................................................................... 44
Echemendia, Y. Sf. Phytophtora: Características, diagnóstico y daños que provoca en
algunos cultivos tropicales. Medidas de control. Instituto de Investigaciones en
Fruticultura Tropical. Cuba. 30 pp.
http://www.fao.org/docs/eims/upload/cuba/1060/cuf0022s.pdf..................................... 44
Federation of Cocoa Commerce. An overview of cocoa production in Côte d’Ivoire and
Ghana. [Publicación en línea]. Disponible en Internet desde:
http://www.cocoafederation.com/education/produce.jsp [con acceso el 18-06-2008]... 44
Garcia, H. 1984. Caracterización agronómica de las selecciones guatemaltecas de
cacao (Theobroma cacao L.). Tesis. Universidad de San Carlos de Guatemala. 52pp.
........................................................................................................................................ 44
Goltia,W. y Klaus Jaffe.1997. Morfologia Comparativa de las Flores de Theobroma
cacao L., T. bicolorHumb. & Bonpl.,T.glandiflorum (Willld.expreng.) Schum y
Herrania sp. Acta Cientifica Venezolana 48:13-18,1997. 18pp. ................................... 44
vii
Graziani, L. l995.Denominacion de Origen y Certificación de Calidad. Primer
Congreso Venezolano del Cacao y su Industria. ............................................................ 44
Hartmann,H.T. and D.E.Kester. 1964. Planta Propagation Principles and Practices.
Englewood Cliffs, N.J. : Prentice –Hall, Inc.p. 383. ...................................................... 44
Henao, A. y G. Raessens. 2005. El cacao en el desarrollo rural integral en los Yungas
de La Paz, Bolivia. Agroforestería en las Americas. 43-44,2005: 4-5. ........................ 44
Heredity 89: 380-386 ...................................................................................................... 44
ICCO Quarterly Bulletin of Cocoa Statistics, Vo. XXXVIII, No 4, Cocoa year
2011/2012 ....................................................................................................................... 45
IICA. 1985. Compendio de agronomia tropical/ Instituto Interamericano de
cooperación para la agricultura. San Jose, Costa Rica. ................................................. 45
INFOCOMM. 2008. Market information in the commodities area. [web en linea].
Disponible en Internet desde:
<http://r0.unctad.org/infocomm/anglais/cocoa/market.htm> [con acceso el 24-06-2008].
........................................................................................................................................ 45
Info-Galaxy. 2003. From bean to chocolate. [web en linea]. Disponible en Internet
desde: <http://www.info-galaxy.com/ ........................................................................... 45
IV.5. ANEXOS .............................................................................................................. 50
PARTE V ........................................................................................................................ 55
V.1. INFORME FINANCIERO .................................................................................... 55
viii
INDICE DE FIGURAS
Figura 1. Proceso de injertación de cacao ..................................................................... 13
Figura 2. Ciclo biológico de Phytophtora palmivora .................................................... 17
ix
INDICE DE FOTOGRAFÍAS
Fotografía 1. Formas de cacao criollo y forastero. ........................................................ 12
Fotografía 2. Marchitamiento del cacao ........................................................................ 16
Fotografía 3. Pudrición negra del fruto, Phytophthora palmivora: Hongo ................... 18
Fotografía 4. Moniliasis de la planta: Hongo ................................................................ 19
Fotografía 5. Rosellinia: Hongo .................................................................................... 19
Fotografía 6. Antracnosis del follaje ............................................................................. 20
Fotografía 7. Escoba de bruja ........................................................................................ 21
Fotografía 8. Pudrición negra de la mazorca en frutos de cacao Calabacillo de
SanMarcos................................................................................................ 25
Fotografía 9. Zoosporas de Phytophthora palmivora producidas en agar .................... 25
Fotografía 10. Fruto del cacao Calabocillo en forma redondeada. ................................. 26
Fotografía 11. Semillas de color púrpura del Calabacillo de San Marcos. .................... 26
Fotografía 12. Color de las semillas de cacao de Flores Costa Cuca (Fca. San Juan) .. 27
Fotografía 13. Fruto de Teobroma bicolor (Pataxte) de Quetzaltenango ....................... 27
Fotografía 14. Pataxte ..................................................................................................... 27
Fotografía 15. Semilla de Pataxte T. bicolor de color blanco ....................................... 28
Fotografía 16. Recolección de varetas vegetativas de clones criollos (Retalhuleu)
para injertación en UVG. ....................................................................... 29
Fotografía 17. Porta-injertos para injertación de clones de cacao en la UVG............... 29
Fotografía 18. Jardín clonal de clones criollos y de producción en UVG del Sur ........ 30
Fotografía 19. Cones y flores de cacao de Fca. Los Brillantes, Retalhuleu .................. 30
Fotografía 19.b Clones y flores de cacao de Fca. Los Brillantes, Retalhuelu ................. 30
Fotografía 20. Clon 15R ................................................................................................. 33
Fotografía 21. Clon 22P ................................................................................................. 33
Fotografía 22. Clon 13R ................................................................................................. 33
Fotografía 23. Clon 8P. .................................................................................................. 34
Fotografía 24. Clon Sgu 32 ............................................................................................ 34
x
INDICE DE GRÁFICAS
Gráfica 1. Dendrograma comparativo del ADN de los clones criollos y los de alta
producción .................................................................................................... 35
Gráfica 2. Agrupamiento de tipo UPGMA (unweighed pair group method using
arithmetic averages) basado en los índices de similitud genética de Nei de
cada pareja de individuos (n=20). Código de procedencia: SGU,
materiales denominados “selección guatemalteca”, n=8; R, materiales
originarios de México (Rioja), n=5; P, materiales criollos guatemaltecos,
n=3; UF, materiales de origen costarricense (UFco), n=3; Ptx, T. bicolor
(“Pataxte”), n=1 ............................................................................................ 36
Gráfica 3. Análisis de los componentes principales (3 ejes) de la caracterización
molecular de los individuos empleando marcadores SSR. Los puntos
representan a los individuos; en la parte central de las elipses de inercia y
unidos a los puntos se encuentran los nombres de los grupos a los que
pertenecen: SGU, materiales denominados “selección guatemalteca”,
n=8; R, materiales originarios de México (Rioja), n=5; P, materiales
criollos guatemaltecos, n=3; UF, materiales de origen costarricense
(UFco), n=3; Ptx, T. bicolor (“Pataxte”), n=1. ............................................. 37
xi
INDICE DE TABLAS
Tabla 1. Separación de frutos según su forma………………………………………… 15
Tabla 2. Resumen de la principales características de los marcadores: Isoenzimas,
RFLP, RAPD, AFLP y SSR (Tomado de: Lowe et al. 2004, modificado)….. 225
Tabla 3. Características Cacao de Huehuetenango…………………………………… 31
Tabla 4. Caracterización agronómica de las muestras de clones de cacao Finca Los
Brillantes……………………………………………………………………... 31
xii
INDICE DE ANEXOS
Anexo 1. Plano de jardín clonal de cacao, en uvg campus sur, Escuintla ...................... 50
Anexo 2. Plano de clones de cacao recolectados en finca brillantes, retalhuleu(clones
criollos y de alta produccion ........................................................................... 51
Anexo 3. Ubicaciones de las plantaciones de cacao visitadas en Guatemala.............. 512
xiii
RESUMEN
Guatemala, a pesar de ser un país que se conoce como cuna del cacao, junto con
el sur de México, ha padecido un proceso de decadencia y abandono del cultivo desde
inicios del siglo pasado. En los últimos años el país ha cambiado su condición de
exportador a importador, para el 2010 se exportaron 32.07 toneladas de cacao, y se
importaron 635.37 toneladas.
A nivel mundial, Costa de Marfil, Ghana, Indonesia y Nigeria producen más del
75% del cacao mundial, mientras que Estados Unidos, Alemania, Francia y Reino
Unido consumen la mitad de la producción mundial.
Luego del abandono de las plantaciones de cacao criollo, debido al auge del
café, muchos agricultores reestablecieron sus plantaciones a partir de variedades
híbridas y de menor calidad. El cacao criollo ha sido considerado el mejor producto
para la elaboración de chocolate para la confitería.
El objetivo del estudio fue la búsqueda, rescate, caracterización agronómica y
molecular del Theobroma cacao tipo criollo en los departamentos de Huehuetenango,
San Marcos, Quetzaltenango, Escuintla y Retalhuleu. Se realizaron visitas periódicas a
las diferentes regiones con la finalidad de localizar sitios donde pudiera haber plantas de
cacao criollo. Basado en estudios de cacao, se considera que el cacao criollo tiene frutos
alargados con punta torcida y cuello de botella y lo más característico es el color de la
semilla blanca. Esas características se utilizaron para observar las variedades indicadas.
Los resultados obtenidos indican que no hay cacao con características de criollo
en ninguno de los departamentos estudiados excepto Retalhuleu donde en una colección
de cacao de finca “Los Brillantes” se seleccionaron los siguientes criollos 15R, 13R 22P
y SGU 32. En el resto de departamentos se encontraron únicamente cacaos del tipo
forastero, el cual se caracteriza principalmente por el color violeta de su semilla.
En finca “Los Brillantes” también se obtuvo material vegetal de algunos clones
de alta producción que ellos distribuyen. Estos clones fueron UFCO 650, SGU 66,
105R, R 19, SGU 21, SGU 22 y SGU 67. A estos materiales vegetativos se les llevo al
laboratorio de biología molecular para analizar su ADN.
De los clones anteriormente indicados, se tomó material vegetativo para
injertarlos en el jardín clonal establecido en las instalaciones de CAMPUS SUR – UVG.
xiv
SUMMARY
Guatemala in spite of the fact of being considered as the origin of cacao, as it is
the south of Mexico , in both have suffered a process of decrease of importance and
the culture has suffered a process of abandon since the middle of last past century. In
the last years the country has changed from exporter to importer. In the year 2010 they
exported 32.07 tons of cacao and they exported 635.37 tons.
In the world, Côte d’Ivoire, Ghana, Indonesia and Nigeria grow more than 75%
of cacao in the world while the United States, Germany, France and the United
Kingdom consume half of the world production.
Due to the increase of coffee, the Creole varieties of cacao were abandoned, and
many farmers re-established their plantations using hybrids of less quality. Creole
varieties of cacao have been considered the best product for production of chocolate for
candy production.
The objective of this study was searching, agronomic and molecular
characterization of Theobroma cacao Creole in the departments of Huehuetenango, San
Marcos, Quetzaltenango, Escuintla and Retalhuleu. Several periodic visits were done to
the different regions looking where to find Creole plants. Based on cacao studies, it is
considered that this type of cacao has elongated fruits with twisted tip and bottled neck,
and the most characteristic it is the color of white seed. Those characteristics were used
to find the Creole varieties.
The results indicate that there is no Creole plants in none of the studied
departments, except Retalhuleu, where a collection of cacao from “Los Brillantes farm
“was done. The next creoles were selected: 15R,13R, 22P and Sgu32. In the other
departments only Forastero varieties were found, which have purple seed color.
At los “Brillantes farm” some varieties of high production clones which are
distribute to farmers were collected. This clones were UFCO 650, SGU 66, 105R, R19,
SGU 21, SGU 22 and SGU67. All these clones were taken to the molecular laboratory
for analysis of DNA.
From the clones indicated before, plant material was taken for propagation
purposes at the UVG South Campus.
1
PARTE I
I.1. INTRODUCCIÓN
El cacao, Theobroma cacao L., es una especie de planta que crece en el trópico
en el área comprendida entre 20º norte y 20º sur del Ecuador (León, 1956). Es
producido principalmente por África Occidental, Centro y Sur América y Asia. Los
ocho países mayores productores son: Costa de Marfil, Ghana, Indonesia, Nigeria,
Camerún, Brasil, Ecuador y Malasia, los cuales representan alrededor del 90% de la
producción mundial. Por otro lado los países mayores consumidores del cacao, son
Estados Unidos, Alemania, Francia, Inglaterra, Federación Rusa y Japón (INFOCOMM,
2008). El ingrediente principal producido del grano es el chocolate, pero también los
son el licor del cacao, la manteca de cacao, la torta de cacao y el cacao en polvo. El
negocio del chocolate es de alrededor de 8 billones de dólares mundialmente.
(BBCNEWS, 2004).
En Centroamérica, se cultivan alrededor de 22,000 hectáreas de cacao, con una
producción de 6,000 toneladas métricas/año y con un valor de $7 millones de
dólares/año (Somarriba et al., 2007). En Guatemala se cultivan alrededor de 2,709
hectáreas (INE, 2003) con una producción de 1,136 toneladas métricas (Mollinedo,
2008 Comunicación Personal). Los departamentos con mayor número de fincas y
mayor producción son Alta Verapaz y San Marcos (Anexos). Si se compara con los
mayores productores de cacao del mundo, la producción centroamericana es
insignificante, ya que el África tiene cultivadas 4,316,000 hectáreas con una producción
de 1,808,000 toneladas métricas (Federation of Cocoa Commerce, 2008).
El valor importante del cacao para Guatemala no es necesariamente tener, en el
futuro, la producción más alta que otros países, sino más bien dirigir la producción a
obtener un cacao de alta calidad, lo cual podría lograrse con la utilización de los tipos de
cacao criollos que es de donde se obtiene el cacao gourmet (Mora ,1956; Don Veitia
Cocoa Products, 2003; InfoGalaxy, 2003). La calidad del chocolate depende de varios
factores: del grado de acidez del grano, la fermentación, el tostado y el proceso de
refinamiento del producto (Cros, 1997; Bressani, 2008 Comunicación Personal). Como
se indicó, los cacao criollos tienen los genes de calidad, pero es necesario un buen
proceso de fermentación para que la calidad se manifieste en el producto final.
El objetivo del presente proyecto fue la localización de plantas de cacao tipo
criollo en Guatemala, su rescate y su caracterización agronómica, botánica y molecular.
Esto con el fin de preservar estos tipos de cacao como fuente de producción de cacao de
calidad para el país. Los países europeos están interesados en cacaos que produzcan
chocolate de calidad, pagando precios especiales por la semilla de los criollos. La
caracterización molecular de estos será de utilidad, para la selección subsecuente de
cacaos élite para ser producidos en el país. Se conoce que los cacaos tipo criollo son
valiosos porque poseen un gen que determina la calidad del cacao pero son altamente
susceptibles a patógenos como Phytophthora palmivora (Porres, 2008 Comunicación
personal), witches' broom y C. perniciosa (Marita et al. 2001). Este estudio es
importante para poder conocer qué características posee el cacao tipo criollo que se
encuentra en Guatemala, y que sirva como referencia de comparación para futuros
estudios.
2
I.2. PLANTEAMIENTO DEL PROBLEMA
I.2.1. Antecedentes en Guatemala.
Guatemala, a pesar de ser un país que se conoce como cuna del cacao, junto con
el sur de México, ha padecido un proceso de decadencia y abandono del cultivo desde
inicios del siglo pasado. Fue con la introducción del café, cuando el cultivo fue
abandonado, y hoy se encuentra en manos de pequeños agricultores.
De la década de los años 50, a mediados de los años 70, se impulsó el cultivo de
nuevo, habiéndolo iniciado el Instituto Agropecuario Nacional, quien tenía el apoyo de
la AID de los Estados Unidos. Esta institución tenía el apoyo de un servicio de
extensión agrícola organizado para dar seguimiento y asesoría a los productores (Porres,
2008).
Durante varios años, la estación experimental Los Brillantes lideró mucha
investigación en diferentes cultivos, entre ellos el cacao; llegando a establecer un jardín
clonal de materiales de la región Centroamericana, México y Suramérica. Muchas de
las plantaciones establecidas en Guatemala, fueron desarrolladas a partir de material que
se produjo en este centro.
Subsecuentemente el MAGA inicia el fomento del cultivo en los años 80,
dirigido a la producción en el norte del país, lo que se llamó la Franja Transversal del
Norte y en Cahabón, Alta Verapaz (MAGA, 2003). Más tarde en los años 90 también
se pierde el interés por parte del gobierno y se deja de trabajar en el cultivo (MAGA,
2003).
En Guatemala de acuerdo con el MAGA existen alrededor de 159,000 hectáreas
aptas para el desarrollo del cultivo de cacao, de las cuales la mayoría está cercana a vías
asfaltadas (MAGA, 2003). El precio del cacao ha tenido un valor promedio de
$2,235.15/tonelada, alcanzando su máximo en el período de finales del 2009 e inicios
del 2011 (Indexmundi, 2013).
De acuerdo con el IV Censo Nacional Agropecuario (2003), el 82% de la
producción nacional de cacao se encuentra distribuida en los departamentos de Alta
Verapaz (40%), Suchitepéquez (24%) y San Marcos (18%).
En el año 2006 se tenía un estimado de áreas cosechadas de 3,110.09 hectáreas,
la cual ha sufrido un leve aumento, según datos estimados del Ministerio de Agricultura,
Ganadería y Alimentación a 4,069.40 hectáreas para el 2011.
Según datos del Banco de Guatemala, en los últimos años el país ha cambiado
su condición de exportador a importador, siendo el principal proveedor de cacao El
Salvador. Para el 2010 se exportaron 32.07 toneladas de cacao, y se importaron 635.37
toneladas.
Debido a las variaciones en los precios, y el impacto económico de
enfermedades como Phytophtora palmivora, las condiciones de las plantaciones es
bastante pobre, favoreciendo la variabilidad génetica de los diferentes materiales
3
establecidos en cada plantación, y reduciendo la disponibilidad de material con
características deseadas, como en el caso del tipo criollo.
El mercado actual, presenta un nicho especial para el cacao tipo criollo. Este
tipo de cacao corresponde a lo que en el mercado mundial se conoce como cacao fino o
de aroma. Y es utilizado usualmente para producir sabores específicos en productos
terminados. Sus granos dan características de aroma o color en chocolates finos (MAG,
2012). Esta oportunidad comercial hace necesaria la renovación y establecimiento de
nuevas plantaciones con materiales de cacao criollo, por lo que es de suma importancia
el identificar y recuperar este tipo de cacao.
I.2.2. Justificación del trabajo de investigación
Al presente, existe una iniciativa por parte del gobierno en impulsar el cultivo
de cacao en Guatemala, así como el interés de asociaciones como la Asociación
nacional de productores de cacao (ANAKAKAW), en buscar asesoría, producción de
producto seleccionado y de calidad, así como ventanas en diferentes mercados que
puedan asegurar un buen futuro al cultivo de cacao.
Guatemala no cuenta con una colección de clones de cacao criollos, por lo que
se hace necesario buscar y recuperar el material establecido en campo, para a partir de
su caracterización seleccionar los materiales con las características deseadas, y
establecer un jardín clonal para tener material vegetativo disponible cuando se necesite.
Esto a partir de una caracterización agronómica de los clones que se encuentren, para
observar sus características, y conociendo la forma del fruto y el color del grano, que es
característico de los criollos, poderlos analizar en laboratorio de biología molecular,
para obtener el ADN de ellos y compararlos con clones que producen cacao de alta
calidad.
La calidad aromática de un chocolate, está relacionada a varios factores, como
el origen de las almendras (de aquí la importancia de los criollos), con la fermentación,
secado y tostado (Bressani, 2008 Comunicación Personal). La fermentación es la etapa
clave de la formación del aroma en forma cualitativa y cuantitativa. Existe un gran
número de compuestos relacionados a todos los cacaos, pero el aspecto de calidad del
chocolate está íntimamente relacionado al genotipo de los granos usados (Cros, 1997;
Portillo et al., 2006).
La demanda de los países compradores del cacao está dirigida a cacao tipo
criollo, que por su variedad genética y características organolépticas permite la
producción de chocolate de alta calidad. La producción mundial de cacao fino de aroma
representa el 4,62% del total, la que para el año 2005 alcanzó alrededor de 153,000
toneladas (MAG, 2012). De aquí que los europeos y norteamericanos estén interesados
en este tipo de cacao, pagando precios altos por el producto. La producción de cacao
guatemalteca debe de ir dirigida no a producir altos rendimientos de cacao, sino que a
producir cacao de alta calidad, ya que se tienen el potencial para hacerlo (Díaz, 2008;
Kalin, 2007).
4
I.3. OBJETIVOS
I.3.1. Objetivo General
Buscar, rescatar, conservar y caracterizar agronómica, botánica y
molecularmente el germoplasma de cacao, Theobroma cacao L., tipo criollo como
fuente de genes de alta calidad.
I.3.2. Objetivos específicos
Localizar los tipos de cacao criollos.
Caracterizar agronómica y botánicamente los tipos de cacao criollo.
Caracterizar molecularmente los tipos de cacao criollo.
Establecer un jardín clonar como área de conservación y fuente de material
tipo criollo.
5
I.4. METODOLOGÍA
I.4.1. Localización
Huehuetenango
Coordenadas geográficas:
Latitud Norte 15 ° 88 394´ Longitud oeste 91°13.675´
Temp. Máxima 24°C, Mínima 12°C. Promedio 21°C Humedad relativa: 47%
En Huehuetenango se visitaron varias plantaciones de cacao en la Aldea Nuevo
Malacatán Barillas, propiedad de Oscar Julio Mérida, Esequiel Castillo, Juan Jesús
Pérez, así como de Samuel Castillo y Alfonso Vásquez, y en la Aldea Malacatán
Barillas, la plantación de Eluvia Castillo Martinez. Se realizaron las observaciones y
análisis correspondientes de los frutos y semillas, y no se encontraron plantas con
características de criollos.
San Marcos
Coordenadas geográficas:
Latitud Norte 14° 47.954´ Longitud oeste 95°59.815´
Temperatura Max. 25°C Min 6°C Promedio 21°C Humedad relativa 95%
En San Marcos, se visitaron plantaciones en el Amparo y Pajapita, del municipio El
Tumbador. Las fincas tienen plantas de cacao de 45-50 años de edad en proceso de
renovación, todas las variedades observadas tenían semilla de color violeta. En este
lugar, se encontró el criollo mexicano que se le conoce como calabacillo, el cual tiene
un fruto pequeño y redondo, y semilla de color blanco.
Quetzaltenango
Coordenadas Geográficas
Latitud Norte 14° 38.987´. Longitud Oeste 91°99´.585´
Temperatura Max. 28°C. Temp Min. 9°C Promedio 14.7°C Humedad Relativa 72%
En Quetzaltenango, se visitó el municipio de Costa Cuca, donde se encontró la
especie de cacao Theobroma bicolor, llamado Pataxte, la cual cuenta con semilla de
color blanca, por lo que se llevó al laboratorio para obtener el ADN correspondiente.
Este tipo de cacao se utiliza para hacer una bebida de chocolate en Mazatenango y San
Antonio Suchitepequez, y para producir chocolate de color blanco en áreas de la
Antigua Guatemala.
Escuintla
Coordenadas Geograficas
Latitud Norte 14°33.117´ Longitud Oeste 91°05.981´
6
Temperatura Max. 25°C Minima 6°C. Humedad Relativa 94%
Unicamente en este departamento se encontraron arboles del cacao criollo
llamado Pataxte el cual en realidad no es un Theobroma cacao, sino que una especie de
Theobroma bicolor. En otras areas de tiquizate y Palin Escuintla se encontraron plantas
de Forastero.
Retalhuleu
Coordenadas Geograficas
Latitud Norte 14°38.740´ Longitud Oeste 91°49.715´
Temperatura Max. 37.99 Temp Min 36.4 Promedio 37.99 Humedad Relativa 89%
En Retalhuleu, se visitó la Finca Los Brillantes, la cual funcionó hace varios
años como Estación Experimental, dedicándose a la investigación de diferentes cultivos,
entre ellos el cacao. Esta finca cuenta con una colección de más de 180 clones de
Guatemala, Centroamérica y México. Con apoyo de algunos agricultores, que son
propietarios de la finca, se revisaron registros del jardín clonal establecido, y se
buscaron materiales de cacao tipo criollo. También se incluyeron materiales de clones
categorizados de “alta producción”, los cuales se siguen distribuyendo como material
vegetativo para establecimiento de nuevas plantaciones en la actualidad.
I.4.2. Metodología de muestreo
Con la colaboración de ANAKAKAW y el MAGA se identificaron áreas donde
se localizaron algunas plantaciones de cacao, donde se tenía la posibilidad de encontrar
cacaos con características de criollos.
Las primeras visitas consistieron en realizar contacto con agricultores, para
poder obtener la autorización de ellos de colectar material vegetativo, colecta de flores y
compra de frutos al momento de la cosecha.
I.4.3. Indicadores
Para la localización de tipos de cacao criollos, se usó como criterio las
características de los frutos, como lo es constricción de cuello de botella, superficie muy
rugosa, surcos profundos, cáscara delgada y con terminación en punta aguda y curva y
color blanco de las semillas. La característica más importante es el color de la semilla
blanca o blancuzca.
I.4.4. Estrategia Metodológica
La metodología a seguir consistió en las siguientes etapas: Búsqueda, rescate y
caracterización agronómica y botánica de las plantas de cacao criollo, y toma de
muestras de follaje y fruto, para transportarlas al laboratorio de biología molecular para
ser analizadas y obtener el ADN respectivo.
7
Población y Muestra. Los arboles con características de criollos son difíciles de
encontrar y la mayoría de ellos tienen uno o dos frutos los cuales fueron analizados ya
que estos no tienen alta producción.
Método de campo. Se buscaron plantas con frutos (Principalmente, en
Noviembre y Diciembre) que es cuando en la costa sur fructifica el cacao. Se buscó las
características de frutos alargados, con cuello de botella y con punta torcida.
Método de laboratorio. Se tomaron fotografías de los frutos completos,
midiendo el largo y ancho de ellos, se pesaron y luego se abrieron para contar el número
de semillas por fruto, su tamaño, peso y color.
Análisis de ADN. Se realizó tomando brotes de hojas recién formadas,
llevándolas al laboratorio de biología molecular para su respectivo análisis. Para realizar
este proceso se tomaron follajes nuevos de puntas de cada una de las especies
analizadas.
1.4.4.1 Búsqueda:
La búsqueda se realizó en los departamentos antes indicados. La
ANAKAKAW, el MAGA y la información de algunos productores de cacao del área
sirvieron como información para buscar los cacaos criollos. Se buscaron plantas con
características de criollos como se indicó anteriormente.
Se encontraron 6 clones criollos en una colección de clones (180 en total)
centroamericanos localizados en finca Los Brillantes de Muluá Retalhuleu.
En Escuintla, San Marcos, Huehuetenango se encontraron plantaciones de cacao
tipo forastero con semillas de color violeta. En Quetzaltenango and Escuintla se
encontró el cacao llamado Pataxte el cual tiene la semilla blanca, pero este tipo
pertenece a la especie Theobroma bicolor.
1.4.4.2 Rescate:
Este proceso se realizó al encontrar variedades prometedoras, tomando material
vegetativo para ser injertado en el campus de la UVG del sur. También se tomo parte
del material vegetativo, para llevarlo al laboratorio de biología molecular y realizar las
extracciones del ADN de cada grupo recolectado. Para este proceso se llevaron hojas
nuevas de los nuevos crecimientos de los clones.
1.4.4.3 Caracterización Agronómica:
Este proceso consistió en poner en una tabla las características de cada uno de
los clones criollos, principalmente: el clon encontrado, el tamaño del fruto, peso, grosor
de la corteza del mismo, número de semillas por fruto, peso, peso total de las semillas
en fresco, y el color de la semilla (Tablas 3 - 4).
8
1.4.4.4 Caracterización Botánica:
Este proceso consistió en recolectar flores de los clones criollos y llevarlos al
laboratorio para hacer una descripción morfológica de ellos por medio de fotografía
(Fotografías 8 - 15). Algunas variedades tienen algunas estructuras como tricomas
glandulares que pueden caracterizar la variedad (Goitia y Jaffe 1997). El objetivo de
esta caracterización fue averiguar si las variedades de tipo criollo son diferentes
estructural o morfológicamente a las variedades corrientes. Se observaron las
variedades en el campo, tomando microfotografía de las flores, luego este proceso se
completó en el laboratorio.
1.4.4.5 Caracterización Molecular:
Las muestras de campo se trasladaron al laboratorio el mismo día en que fueron
colectadas. Las mismas muestras que se evaluaron agronómica y botánicamente, se
evaluaron molecularmente. Estas muestras se ingresaron al libro de control, y se
prepararon para ser almacenadas adecuadamente, para la posterior extracción del ADN.
Para esto se cortaron varios discos de hojas que se almacenaron en nitrógeno líquido
hasta su extracción. La extracción se llevó a cabo utilizando el método de Doyle y
Doyle (1990) y se utilizó ribonucleasa A para eliminar todo el ARN presente. El ADN
se cuantificó en un fluorímetro. Las extracciones de ADN se hicieron en duplicado
dejando un tubo a -40 grados centígrados como control y el otro se utilizó para las
pruebas. Se analizaron 46 muestras.
Para los AFLPs, se utilizaron kits para AFLPs de INVITROGEN. Estos kits
están divididos en dos partes, la primera parte llamada “core” contiene dos enzimas de
restricción que cortan la secuencia del ADN que se deseaba estudiar en dos puntos.
Además contiene los adaptadores. Estas secuencias mediante el uso de la ligasa se
unieron a la secuencia del ADN. Esta secuencia se amplificó y con ella todo el ADN de
la muestra. La segunda parte del kit llamada “starter” contiene una serie de iniciadores
que se pueden hibridizar a la secuencia adaptador y a la secuencia de ADN de la
muestra. Mediante PCR, se amplificó por completo la secuencia de ADN de la muestra.
Después, los PCRs se corrieron en geles de poliacrilamida para visualizar los
patrones de los fragmentos amplificados. Finalmente las bandas se leyeron en un
programa especial para AFLPs. Se hizo un análisis estadístico de los patrones de ADN
obtenidos, analizando el índice de similitud de Dice, el cual sugiere posibles relaciones
de parentesco mediante la presentación de dendrogramas.
1.4.4.6 Técnica Estadística:
Para el análisis molecular del cacao, se llevó a cabo el análisis estadístico con el
programa Peakall R. y P.E, Smouse 2006. Genealex 6, Genetic Analysis en Excel, que
consiste en un análisis para establecer la estructura genética del grupo analizado, en
términos de equilibrio de Hardy-Weinberg (proporciones de individuos homocigotos y
heterocigotos).
9
1.4.4.7 Instrumentos a Utilizar:
Congelador
Nitrógeno liquido
Método Doyle and Doyle (1990)
Ribonucleasa
Fluorímetro
Kits de INVITROGEN
PCR (Polymerase Chain Reaction)
10
PARTE II
II. MARCO TEÓRICO
II.1. Origen del cacao
Aunque la historia del origen del cultivo es aún tema de debate, se sabe que en
la época del descubrimiento de América, ya lo consumían los aztecas y no hay duda que
se había estado cultivado desde varios siglos antes. Algunos indican que su origen es en
la América del Sur de la cuenca del Río Orinoco o el Río Amazonas y otros que su
origen es México (Heredity 1989). También se sabe que los mayas habían cultivado
cacao en México y Guatemala. El tipo de cacao que utilizaban los aztecas y mayas era
el tipo criollo, y no hay documentación de que se utilizará el tipo forastero antes de que
los españoles iniciaran la expansión del cultivo. En la mayoría de países
latinoamericanos, el cacao se cultiva en fincas grandes y en pequeñas propiedades
(Wood 1982).
II. 2. Genoma del cacao
En el 2010 se obtiene la secuenciación y el análisis del genoma del cacao criollo
el cual es considerado que produce el mejor chocolate del mundo. Este estudio fue
completado en Cirad Francia por Claire Lanaud con Marcos Guiltinam de la
Universidad estatal de Pensilvania (USDA 2010).
II.3. Theobroma cacao
Según Wood (l982) y León (l956) el cacao pertenece al género Theobroma,
miembro de la familia Sterculiaceae, siendo un grupo de árboles pequeños que se
encuentra distribuido desde el sur de México hasta la cuenca del Amazonas. En el
género se reconocen más de veinte especies, pero sólo T. cacao se cultiva
extensamente.
Su hábitat natural es el estrato arbóreo inferior de bosques maduros, ya que las
condiciones de temperatura son de poca oscilación, con presencia de altos volúmenes de
precipitación y períodos de sequía cortos y baja luminosidad (Wood 1982). En
Guatemala ocurre a altitudes entre 600 a 1000 msnm, aunque puede cultivarse a
altitudes más bajas, donde se hace necesario el uso de riego (Porres 2008 Comunicación
Personal). Según el IICA (l985) , En la zona ecuatorial el cacao puede cultivarse hasta
una altura de 1400 msnm, pero a medida que se aleja de esta zona, la altitud límite
decrece. El cultivo crece bien a precipitaciones de 1200 mm hasta 2500 mm por año.
Áreas con alta humedad relativa deben evitarse debido a la alta prevalencia de
patógenos de la mazorca y el follaje. La regulación de la sombra y la poda de las
plantas favorece la ventilación y reduce la incidencia de patógenos, principalmente
Phytophthora palmivora (Bowers et al. 2001). La temperatura ideal del cultivo es de
25ºC; una temperatura mínima de 15ºC y una máxima de 30ºC (Sullca sf).
Según Wood (1982) la raíz primaria de la plántula crece en forma vertical hacia
el interior del suelo, desarrollando sus raíces secundarias en la capa superior del suelo
(15 – 20 cm de profundidad).
11
El árbol crece hasta una altura de 8 a 10 metros, aunque tiende a ser más bajo
cuando se le cultiva sin sombra. La plántula se desarrolla como un solo tronco sin
ramificación, hasta una altura de 2 metros. Luego la yema terminal detiene su
crecimiento y empiezan a desarrollarse de tres a cinco ramas laterales para formar una
horqueta. Por debajo de la horqueta se produce una nueva rama vertical llamada brote o
chupón, el cual a su vez forma una nueva horqueta. Otro tipo de ramas producidas por
el cacao son las laterales o de abanico, las cuales tienen hojas alternas (Wood 1982).
Como regla, los chupones sólo producen chupones, excepto en la formación de
la horqueta, y las de abanico dan origen a ramas del mismo tipo. Este hábito de
ramificación tiene importancia en relación con la producción de plantas por estacas.
Los chupones producidos por las ramas laterales son los más adecuados para el
desarrollo de una nueva planta, aún cuando el crecimiento posterior iniciará con una
ramificación baja y muy diferente al que presenta una planta procedente de semilla
(Wood 1982).
II. 4. Tipos de cacao
De acuerdo con Wood (l982), en la actualidad se diferencian tres grupos o
poblaciones de cacaos: los criollos, los forasteros y los trinitarios.
Los cacaos criollos se caracterizan por tener frutos de color tanto morado como
verde, con la superficie muy rugosa, surcos profundos, sin constricción en forma de
“cuello de botella”, cáscara delgada, y con terminación en punta aguda y curva. La
característica más importante son las semillas redondeadas y con cotiledones de color
blanco o violeta muy claro generalmente con el interior blanco. Otro carácter que se
considera típico del criollo es que no ramifica formando horqueta. Es el cacao que
produce la mejor calidad de chocolate (Mora 1956).
Los cacaos forasteros se caracterizan por sus frutos de superficie lisa, surcos
superficiales, ápice redondeado, no presenta constricción de “cuello de botella”, forma
oval, fruto de color verde o blanco y con una concha muy gruesa con una capa de
madera en su interior. Los cotiledones son de color púrpura, de forma aplastada y
pequeña (Mora 1956). El color proviene de un grupo de sustancias químicas, las
antocianinas, que dan la mayor parte de los colores azules y rojos a las flores. Estos
pigmentos de los cotiledones, están ubicados en células especiales pigmentarias, que
forman parte del 10% de las células de almacenamiento. No se conoce su función en la
semilla, si bien se ha propuesto que pueden tener cierto papel protector (Beckett 1994).
Según Cheesman (l941), un tercera clase de cacao, generalmente llamado
Trinitario, es un grupo complejo con enorme variabilidad.. Se pueden encontrar frutos
largos, con o sin “cuello de botella”, cáscara gruesa, y semillas con color púrpura claro
hasta púrpura oscuro (Mora 1956).
12
Fotografía 1. Formas de cacao criollo y forastero.
a)
c)
b)
d)
Puede notarse el cacao criollo (a) y el color blanco o blancuzco de su semilla (b) y el
cacao forastero (c) y el color violeta de su semilla (d). FUENTE: FODECYT
Proyecto 50-2008
II.5. Investigación CATIE
El Centro Agronómico Tropical de Investigación y Enseñanza (CATIE), en
Costa Rica ha establecido un jardín clonal, para suplir materiales para hibridaciones de
cacao en Centroamérica, lo cual es parte de los esfuerzos entre esa institución y los
países Centroamericanos para mejorar la producción de cacao. Ellos han seleccionado 6
clones por su buen comportamiento en lo que se refiere a resistencia a moniliasis
(Monilia roreri) que está causando serios daños en algunos países de Centroamérica.
Tales clones también fueron seleccionados por su calidad y producción de grano
(CATIE 2007).
II.6. Manejo del cacao
II.6.1. Proceso de la iluminación en el cultivo del cacao
Existen tres procesos en lo que respecta a la iluminación de las plantas, el
primero es la fotosíntesis, el movimiento estomatal y la expansión de las células de los
tejidos.
La luz es esencial para la manufactura de carbohidratos de anhídrido carbónico y
de agua por medio de la clorofila. El anhídrido carbónico entra a las hojas a través de
los estomas, lo cuales están bien abiertos durante la luz solar, pero pueden cerrarse
13
durante el día por un disminución en la intensidad de la luz. Las células guardianas
regulan el grado de apertura y así la perdida de agua de las hojas. Bajo pleno sol las
hojas de las plantas son pequeñas, pálidas y gruesas, con internudos cortos. El
movimiento estomatal no sufre de un suministro restringido de agua, ni de transpiración
excesiva. Este está controlado por la iluminación. La iluminación disminuye la
actividad de las hormonas del crecimiento, lo cual explica el tamaño reducido de las
hojas expuestas a la luz solar, así también el aislamiento de los tallos de cacao con
sombra intensa (Alvin 1958 y Goodhall l950).
II.6.2. Propagación asexual del cacao.
Todos los métodos de propagación vegetativa pueden aplicarse con éxito. La
propagación se hace principalmente usando patrones injertados con materiales jóvenes,
los cuales se injertan cuando tienen el grosor de un centímetro de diámetro. Para
enraizar otros materiales vegetativos, esto puede hacerse utilizando hojas sazonas las
cuales enraízan fácilmente (Cheeseman, l935 y Evans 1951).
Figura 1. Proceso de injertación de cacao
FUENTE: Hartmann et al.1964
14
Otra forma de reproducción, es a través de los acodos. Donde se seleccionan
ramas de abanico saludables y bien conformadas de 6 centímetros de diámetro. Se corta
y se remueve una banda de 2 centímetros de corteza de la rama. Se raspa el cambium
levemente con un cuchillo esterilizado, y en el tejido expuesto se aplica una hormona
enraizadora. La porción de rama cortada se cubre con suelo húmedo y se envuelve
firmemente con plástico (Vásquez et al 1999).
La forma de colocación de las hojas sobre el patrón tierno es una forma de que
se peguen los materiales vegetativos más jóvenes (Boffelli, and Sirton, 2003).
II.6.3 Preparaciones hormonales para el enraizamiento de estacas
de cacao
Según EDA(50l-501)Para el enraizamiento de estacas de cacao para
propagación, se utilizan soluciones de ácido indolbutírico al 0.3%.
II.7. Factores relacionados a la calidad del cacao
Entre los factores que afectan la calidad del grano de cacao, están las
características del grano como lo son el origen, el color del cotiledón, acidez, dulzura,
manejo del cultivo, cosecha, beneficio del grano, procesamiento de este, desgrano,
fermentación y secado.
La calidad aromática de un chocolate, está relacionada a varios factores, como el
origen de las almendras (de aquí la importancia de los criollos), con la fermentación,
secado y tostado (Bressani, 2008 Comunicación Personal). La fermentación es la etapa
clave de la formación del aroma en forma cualitativa y cuantitativa. Existe un gran
número de compuestos relacionados a todos los cacaos, pero el aspecto de calidad del
Portillo et al. 2006).
En el mercado mundial se conocen dos tipos de cacao: Cacao corriente, el cual
se destina para producción de manteca de cacao, cacao en polvo y producción de
bebidas. También existen los cacaos finos que se dedican a la producción de chocolates
finos, los cuales tienen un sabor y aroma especial. En los Estados Unidos a los cacao
corrientes, se les denomina “bulk beans” y a los cacaos finos como “flavor beans”. En
Europa se le llama “bulk beans” a los cacaos corrientes y los finos son llamados “finos”.
Por otro lado los Venezolanos les llaman “cacao extrafinos” a los de primera
fermentados y los “finos de segunda” los no fermentados Graziani (1995).
Es importante la selección de frutos al momento de fermentar el grano. Esto
debe de realizarse de acuerdo al grado de maduración, por lo que pueden separarse los
muy maduros, los medianamente maduros y semiverdes. Otra separación de frutos es
por tamaño, grandes, medianos y pequeños y por su forma como angoleta, cundeamor,
amelonados y calabacillos. (INTECAP 1978).
15
Tabla 1. Separación de frutos según su forma
Angoleta
Frutos: largos, rugosos, sin “cuello de
botella”, grandes, cascara o concha gruesa
profundamente surcada (cercano al
criollo)
Semillas: Ligeramente aplastadas y de
color purpura claro
Cundeamor
Frutos: Largos con “cuello de botella”
característico, surcos menos profundos y
menos rugosos que en el angoleta.
Semillas: color purpura
Amelonado
Es el más común de los trinitarios.
Frutos: grandes, ovalados, superficie casi
lisa, pero se notan bien los surcos, sin
“cuello de botella”, cascara gruesa. Muy
semejante en sus características al
Forastero Amazonico.
Semilla: pequeña aplastada, color
purpura. Es más resistente al sol y a las
enfermedades que el criollo
Calabacillo
Frutos: Los mas redondeados y los mas
lisos del grupo, surcos muy superficiales y
no muestra “Cuello de botella”.
Semillas purpuras muy oscuras, muy
aplastadas. Es el más dilatado para
fermentar y se conoce como el más
resistente a enfermedades, rustico y
adaptable FUENTE: (Mora Urpi , l956)
II.8. Principales enfermedades el cacao
II.8.1. Marchitamiento prematuro (Cherelle Wilt) del cacao.
El marchitamiento y enjutamiento prematuro de los frutos jóvenes, es un
fenómeno común en los arboles de cacao. El fenómeno consiste en la perdida de
turgencia, el amarillamiento siguiendo por la caída de los fruto. Puede ocurrir en
cualquier tiempo desde la polinización hasta la edad de 10 semanas.
16
Fotografía 2. Marchitamiento del cacao debido a Cherelle wilt.
FUENTE: Manual del curso Cacao ,IICA 1961.
Según Raunce, Smarty Cheesman (l935) no se ha dilucidado la causa de este
fenómeno, algunos creen que las lluvias y cambios extremos de temperaturas son
responsables del marchitamiento. Otros relacionan el marchitamiento a factores
nutricionales.
Raunce y Smart y Humpries sugieren que la fecundación imperfecta o la
autoincompatibilidad pueden causar este fenómeno. Humpries considera que puede
existir una sustancia inhibidora producida por las mazorcas madura, la cual ha sido
eliminada al quitar los frutos grandes. Menos caída de los fruto ocurre al eliminar los
frutos grandes (Solórzano 1950).
II.8.2. Pudrición negra del fruto
Este hongo infecta los brotes de las plantas y estos se marchitan y mueren. Las
esporas se trasladan por medio del aire o por contacto a los frutos tiernos de las plantas
e infectan los frutos causando la pudrición negra de la mazorca, también causa la
pudrición de las semillas que se tornan negras. Es la enfermedad principal del cacao en
Latinoamérica, y principalmente en Guatemala. Los clones criollos son susceptibles a
infecciones del hongo. El ciclo biológico de la enfermedad se presenta en la figura 3,
indicando cómo se infectan los frutos de esporas del suelo. Su control se lleva a cabo
por medio de variedades resistentes que se han desarrollado en el África. Utilizando
también la eliminación de frutos infectados de las plantas y haciendo aplicaciones de
fungicidas cúpricos. Existen investigaciones que indica que el hongo Trichoderma sp.
es antagonista a P. palmivora (Maros Alonso et al.2009).
17
Figura 2. Ciclo biológico de Phytophtora palmivora
FUENTE: (Echemendia sf)
18
Fotografía 3. Pudrición negra del fruto, Phytophthora palmivora: Hongo
FUENTE: CATIE 2009
II.8.3. Monialisis
Es un patógeno que causa problemas de pudrición a los frutos de 3 meses de
edad, los cuales son más susceptibles que los que tienen una edad mayor. El daño es
producida por el hongo Moniliophthora roreri (Basidiomyceto) (Fotografia 4).
El hongo produce esporas que se desarrollan en los frutos, los cuales al ser
infectados pueden causar hasta un 95% de daño de estos los cuales producen una
infección de color claro al principio (micelio) que luego desarrolla conidios. Su control
se lleva a cabo en forma cultural, podando las plantas a alturas mayores de 2-3 metros,
eliminando la sombra y tener un buen control de malas hierbas. También puede usarse
el control químico, con productos cúpricos (Parra y Sánchez 2009).
19
Fotografía 4. Moniliasis de la planta: Hongo
FUENTE: CATIE, 2009
II.8.4. Rosellinia
Es un hongo de las raíces del cacao producido por Rosellinia bunodes. Se inicia
afectando la base del tallo de las plantas de cacao y el sistema radicular que aparece con
micelio de color blanco que cubre las raíces. (Fotografia 5). Luego la planta toma una
coloración amarillenta y muere. El control se lleva a cabo aplicando Trichoderma al
suelo para reducir su avance en las raíces. El control cultural se realiza eliminando
plantas enfermas y enterrando los tallos y raíces alejados de la plantación.
Fotografía 5. Rosellinia: Hongo
FUENTE: CATIE 2009.
20
II.8.5. Antracnosis del follaje
Esta enfermedad del cacao es producida por el hongo Colletotrichum
gloeosporoides. Las esporas se diseminan en el follaje, y el patógeno crece más
fácilmente durante la época lluviosa. Puede controlarse con aplicaciones foliares de
fungicidas cúpricos. Se relaciona el control a sombra del cacao y elementos químicos,
por lo que es importante el manejo de sombra en el cultivo y a un buen programa de
fertilización (MAG 1991).
Fotografía 6. Antracnosis del follaje
FUENTE: CATIE, 2009
II.8.6. Escoba de bruja
Ocurre una proliferación de yemas apicales progresiva y estas pueden engrosar y
atrofiar el sistema de brotación de las plantas causándoles la muerte. La brotación
puede ocurrir en las flores, tallos y raíces. La escoba de bruja es producida por el hongo
Crinipellis perniciosa. Su control se lleva a cabo por medio de eliminación de plantas
enfermas o podas de los brotes dañados (Parra et al 2008).
21
Fotografía 7. Escoba de bruja
FUENTE: CATIE 2009
II.9. Mercado del chocolate
La demanda de los países compradores del cacao está dirigida a cacaos que
produzcan chocolate de alta calidad. Los genes de los tipos criollos confieren la calidad
al producto. De aquí que los europeos y norteamericanos estén interesados en este tipo
de cacao, pagando precios altos por el producto. La producción de cacao guatemalteca
debe de ir dirigida no ha producir altos rendimientos de cacao, sino que ha producir
cacao de alta calidad, ya que se tienen el potencial para hacerlo (Díaz, 2008; Kalin
2007).
Según Becket (l994), actualmente, una proporción muy alta de la cosecha
mundial de cacao es Forastero, y es difícil conseguir el cacao criollo puro.
II.9.1. Países productores de cacao
Los ocho países de mayor producción (2009 - 2012) del mundo son Costa de
Marfil (39.3%), Ghana (23.6%), Indonesia (13.4%), Nigeria (6.5%), Camerún (6.0%),
Brasil (5.4%), Ecuador (4.7%) y Nueva Guinea (1.2%) (ICCO 2012). Los principales
países exportadores son también los mayores exportadores, excepto por Brasil y
Malasia que su consumo es absorbido por la producción local (Chatt, 1953).
II.10. Caracterización molecular
La caracterización de plantas puede hacerse utilizando los llamados marcadores
moleculares. Según Azofeifa-Delgado,(2006)existen dos clases de marcadores ), los
morfológicos y los moleculares. Los marcadores morfológicos y/o agronómicos
(robustez, coloración, altura, etc.), han sido muy útiles pero poseen muchas limitantes
porque la expresión de estos caracteres está sujeta a factores ambientales o fenológicos.
Además se pueden evaluar cuando la planta llega a su etapa adulta y mejor si posee
flores. Los moleculares actualmente están usándose como complemento a los
morfológicos gracias a los avances que ha tenido la tecnología. Se están usando
métodos de identificación y caracterización basados en marcadores moleculares que
hasta cierto punto superan las limitantes de los morfológicos (pueden aplicarse en
22
cualquier etapa de la vida de la planta, no se afectan por el ambiente, etc.). Dentro de
estos marcadores moleculares se mencionan a las proteínas y a los marcadores de ADN.
En este estudio utilizaremos marcadores de ADN. Se usarán como marcadores,
fragmentos de ADN cercanos a un gen o secuencia de interés (SIDTA 1999).
Los marcadores moleculares se emplean actualmente para la caracterización
genética y para el mejoramiento genético de muchos cultivos, para determinar la
biodiversidad y reconstruir relaciones filogenéticas de los mismos o bien la de sus
patógenos. Según Ávalos y Molina (2004), también pueden utilizarse para hacer
estudios de interacción entre plantas y sus microorganismos.
Según Karp y Edward (l998), los marcadores diferencias de pequeñas secuencias
entre individuos. Hay una gran variedad de técnicas y pueden ser de carácter dominante
o codominante . Un resumen de las características de los marcadores que actualmente
existen se presenta en el Tabla 2, en donde se visualiza el nivel de polimorfismos que
detecta y la dominancia.
En este estudio utilizaremos dos técnicas basadas en la reacción en cadena de la
polimerasa (PCR), los AFLP's (polimorfismos en la longitud de los fragmentos
amplificados) y los microsatélites o SSRs. Estas técnicas usan grupos de primers o
iniciadores específicos para ciertas secuencias que producen millones de copias de
determinados fragmentos de ADN y luego son separados por técnicas electroforéticas
produciendo un patrón de bandas específico que permite diferenciar a los individuos.
Se seleccionaron estas dos técnicas porque una, los AFLPs, produce bandas de los
alelos codominantes y dominantes, con alta abundancia de secuencias en el genoma, y
los microsatélites producen bandas de los codominantes pero su abundancia es media en
el genoma. Esta doble técnica permitirá que se cubra de mejor manera la
caracterización de los genomas de los diferentes individuos y así poder encontrar más
fácilmente los genes de interés para elaborar los mapas del genoma.
Tabla 2.Resumen de la principales características de los marcadores: Isoenzimas,
RFLP, RAPD, AFLP y SSR (Tomado de: Lowe et al. 2004, modificado).
FUENTE: Lowe et al 2004
Según Karp et al (l997) Los AFLPs combinan la digestión con enzimas de
restricción con PCR. El primer paso involucra el corte con enzimas de restricción
específicas, una de las cuales corta secuencias precisas y la otra corta más
frecuentemente, produciendo fragmentos no adecuados para actuar como iniciadores.
Se agregan adaptadores para que se peguen a estos fragmentos recién formados y de
esta manera proveer una secuencia conocida y adecuada para amplificarse mediante el
Características Isoenzimas RFLPs RAPDs AFLPs SSR
Nivel de
polimorfismo
que detecta
Medio Medio Medio Medio Alta
Dominancia Usualmente
codominante
Codominante Dominante Codominante
/dominante
Codominante
Número de loci Multiloci Multiloci Multiloci Multiloci Multiloci
Abundancia en
el genoma
Baja Media Muy alta Alta Media
23
PCR. También se requiere el uso de ligasas para facilitar la unión entre los bordes de
los fragmentos y las secuencias conocidas. Según Váladez y Kahl (2000), los AFLPs
surgen a partir de polimorfismos en los sitios de restricción en donde una secuencia
específica para el reconocimiento de una endonucleasa de restricción está o no presente.
También pueden surgir de polimorfismos en la longitud de la secuencia donde el
número de las secuencias repetidas arregladas en serie tienen sitios variables o de
cambios en los pares de bases de ADN no asociados con sitios de restricción.
Los micro satélites o secuencias simples repetidas (SSR) son regiones de
secuencias pequeñas (2 a 10 pares de bases) repetidas, arregladas en series, las cuales se
asume que están distribuidas al azar por todo el ADN. Estas secuencias son altamente
variables, no codifican para genes conocidos y pueden o no estar asociadas a genes.
Estas secuencias repetitivas del ADN pueden recombinarse y expandirse más
frecuentemente que otras secuencias y por esto son muy útiles para medir
polimorfismos entre especies o variedades muy relacionadas Phillips et al (l995)
Valadez(l995) y Kahl (2000). Los SSRs representan un nivel adicional de información
que se puede usar para estudios de mapeo y determinación de polimorfismos. Las
variaciones detectadas por los SSR son el resultado de cambios en el número de
unidades repetidas (Lowe et al. 2004).
II.10.1. Estudios anteriores sobre caracterización molecular
Se han llevado a cabo varios estudios a nivel genético en cacao en diferentes
países y con técnicas diferentes. Podemos encontrar estudios hechos con los tres
diferentes tipos de cacao más importantes así como con poblaciones desconocidas a las
que se debe determinar su origen. Entre estos estudios podemos citar algunos que
utilizan isoenzimas, RFLP (restricted fragment lenght polimorphisms y RAPD's
(random amplified polimorphic DNA) como el llevado a cabo por Sounigo et al. (2005)
para determinar la diversidad genética de 26 poblaciones de cacao de la Colección
Internacional de Cocoa de Trinidad. N'Goran et al. (1994) del CIRAD (Centro de
Cooperación Internacional en Investigaciones Agronómicas para el Desarrollo),
analizaron germoplasma de cacao de diferentes orígenes para estudios de diversidad
mundial. Otro estudio muy importante es un estudio llevado a cabo en Venezuela con
cacaos criollos del occidente de ese país (Dagert et al. en www.cecalc.ula.ve ). En este
estudio se desarrolla una metodología de evaluación molecular para el estudio de cacao
criollo del occidente de Venezuela.
En otros estudios como el de Laurent et al. (1993), han utilizado técnicas como
RFLPs para el estudio de 203 clones de cacao en el que se incluyeron tipos criollos. Se
encontró un alto nivel de polimorfismo entre los clones investigados en Venezuela. La
información obtenida de estos estudios sugiere que debe de proponerse una nueva
hipótesis sobre el origen y evolución de las diferentes poblaciones de cacao. Sin
embargo, estas técnicas se basan en alelos dominantes únicamente por eso en la
actualidad se están utilizando otras técnicas como AFLPs, microsatélites o SSRs y Snps
que se basan en diferente grado, en alelos dominantes y codominantes. Entre los
estudios de AFLPs en cacao podemos mencionar a Perry et al. (1998), en el cual
analizaron plantas madre y sus híbridos para la eficiencia de un programa de
cruzamientos. Compararon la técnica de RAPDs y la de AFLPs llegando a la
conclusión que los RAPDs fue ineficiente porque mostró baja frecuencia de
polimorfismos y poca reproducibilidad. Los AFLPs fueron confiables en distinguir
24
variedades fenotípicamente idénticas de cacao y mostró variación tanto intra como inter
varietal.
Hay otros dos estudios de Crouzillat et al. (2000), que determinan los
componentes genéticos que controlan la producción en la F1 de cruces entre clones y
usan también marcadores relacionados a resistencia de enfermedades desarrollando un
mapa genético. Estudios utilizando microsatélites son los más frecuentes últimamente
porque detecta caracteres que se heredan de forma codominante, abundan, hay
tresferabilidad, son locus específicos, hay reproducibilidad, requieren muy poco ADN y
tienen alto grado de polimorfismos (Borrone et al. 2007). Con esta técnica se
encuentran estudios en cacao como los de Sereno et al. 2006 en el Amazonas, Brasil,
Schnell et al. 2005 en Hawaii para padres superiores en calidad de producción de cacao,
Cryer et al. 2006 que enfatiza en la estandarización de microsatélites entre laboratorios
y estudió genotipos unificados internacionalmente, Zhang et al. 2006 estudia la
variación de la estructura de la población en cacao Refractario en Ecuador. Como se
mencionó con anterioridad, resistencia a enfermedades como witches'broom y otras
como la caracterización del cacao swollen shoot virus (CSSV), se estudia, mediante
estas técnicas también (Lot et al. 1991).
Finalmente, así como se ha avanzado en las técnicas de detección de variedades
de cacao y enfermedades que lo afectan, así también se ha avanzado en las técnicas de
análisis de los datos y en la hechura de mapas genómicos. Entre los ejemplos de
estudios de este tipo están uno elaborado por Cervantes-Martínez et al. 2006 en el que
hacen una simulación de estudio sobre el número de loci y número de árboles
requeridos para estimar la variabilidad genética de cacao y otro por Zhang et al. 2007,
que analizan la estructura genética del cacao refractario de Ecuador, mediante
microsatélites. En ellos y en otros, se presentan formas de análisis novedosos así como
para la elaboración de mapas de genomas.
25
PARTE III
III. RESULTADOS
III.1. Departamentos de Búsqueda
San Marcos
Con la colaboración de ANAKAKAW se realizaron contactos en algunas
plantaciones de la Aldea El Amparo, Tumbador.
Se visitó una plantación de cacao, del Señor Florentin Mendez, a una altitud de
387 msnm y coordenadas N 14°48.656´ W 92°00.100´. La plantación tiene una edad de
45 años, la cual estaba en proceso de poda. Se abrieron frutos de cacao para observar
las semillas, éstas presentaron el color violeta de frutos de tipo forastero.
Pudo observarse que los frutos en un 95% estaban comidos por ardillas y
dañados en forma secundaria con pudrición negra de la mazorca, Phytophthora
palmivora.
Fotografía 8. Pudrición negra de la mazorca en frutos de cacao Calabacillo de San
Marcos.
a)
b)
FUENTE: FODECYT 50-2008
Fotografía 9. Zoosporas de Phytophthora palmivora producidas en agar
FUENTE: FODECYT 50-2008
26
También se visitó la plantación de cacao de la señora Elizabeth Álvarez, a una
altitud de 390 msnm y coordenadas N 14º47.979’ W 91º59.786’. La plantación es de
cacao forastero, pero tienen también lo que llaman criollo mexicano que es el llamado
calabacillo. Se considera un cacao de alta calidad en México.
Fotografía 10. Fruto del cacao Calabocillo en forma redondeada.
FUENTE: FODECYT 50-2008
Fotografía 11. Semillas de color púrpura del Calabacillo de San Marcos.
FUENTE: FODECYT 50-2008
Por no tener características de criollo (semilla blanca), estos cacaos, no fueron
propagados.
Quetzaltenango
Gracias a la colaboración del MAGA de Coatepeque, el Señor Cesar Aníbal
Batres colaboro con la localización de plantaciones de cacao del área. Se visitaron las
siguientes plantaciones de cacao:
La Finca San Juan ubicada en Flores, Costa Cuca a 450 msnm, en las
coordenadas N 14°38.74´, W 91°49.715 manejada por Tito Natanael Vásquez. Se
observaron 4 plantas aisladas de 30 años de edad sembradas entre la vegetación. Los
frutos observados tenían la semilla púrpura, sin características de criollos.
27
Fotografía 12. Color de las semillas de cacao de Flores Costa Cuca (Fca. San Juan)
FUENTE: FODECYT 50-2008
La plantación de Silvia Patricia Arreaga localizada en Colonia Santa Rita de
Flores Costa Cuca, a una altitud de 465 msnm y coordenadas N 14°38.740’ W 91°
49.715´.
´
Se colectaron frutos de un árbol de Pataxte, Theobroma bicolor. Las semillas de
los frutos tenían una coloración blanca típica de un cacao criollo (Fotografías 13 - 15).
Fotografía 13. Fruto de Theobroma bicolor (Pataxte) de Quetzaltenango
FUENTE: FODECYT 50-2008
Fotografía 14. Pataxte
FUENTE: FODECYT 50-2008
28
Fotografía 15. Semilla de Pataxte T. bicolor de color blanco
FUENTE: FODECYT 50-2008
Huehuetenango
Se recorrieron, con la colaboración de Faustino Camposeco de la Universidad
del Valle de Guatemala, 6 plantaciones de cacao de este departamento. Los lugares
donde se realizaron las colectas fueron las casas de los siguientes agricultores:
l. Alubia Castillo Martínez. Aldea Malacatán, Barillas.
2. Oscar Julio Mérida de Aldea Nuevo Malacatán, Barillas.
3. Ezequiel Castillo de la Aldea Nuevo Malacatán, Barrillas.
4. Juan Jesús Pérez Pérez de la Aldea Nuevo Malacatán.
5. Alfonso Vásquez de la Aldea Nuevo Malacatán Barillas.
6. Samuel Castillo de la Aldea Nuevo Malacatán, Barillas.
Las variedades encontradas en todas la plantaciones eran del tipo Forastero, con
semilla de color purpura, ninguna planta con semilla de color blanco. Las
características de los frutos recolectados pueden observarse en tabla no.3.
Retalhuleu
Se visitó varias veces durante el año 2011 la finca “Los Brillantes, localizada en
Mulúa, Retalhuleu. Esta finca es de mucho interés para el proyecto, porque
anteriormente era una estación experimental dedicada a la investigación del cultivo de
cacao. Se obtuvo la autorización por parte del presidente de la Asociación Prodesarrollo
Los Brillantes, para observar y recolectar frutos y materiales vegetativos de la colección
de plantas de cacao. La colección de plantas de cacao del jardín clonal se encuentran en
la UVG de Escuintla (Fotografías 16 - 18).
La plantación contaba con un registro de clones, de los cuales se llevaba un
registro de su procedencia y tipo de cacao. Gracias a la información brindada por
personal de la asociación, se recolectaron frutos y yemas de los clones identificados
como 9R, 106R, SGU 77, SGU 2, 24R, 30R, SGU 21, SGU 32, 39R y 13R. Estos
clones son los que se tienen del tipo criollo.
Así también se colectó material de los que son distribuidos para agricultores por
ser reconocidos como de alta producción 8P, 15R, 22P, y SGU 77. Los detalles de estos
clones están presentados en Tabla 4.
29
Se hizo una búsqueda de cacao en áreas adyacentes a Muluá Retalhuleu, pero
todos los agricultores mencionaron que las plantaciones fueron establecidas con
materiales de alta producción de Finca Los Brillantes.
III.2. Rescate
Una vez localizados e identificados los tipos criollos de cacao, se procedió a
tomar materiales vegetativos (yemas) para injertación y propagación. El proceso de
injertación se llevo a cabo en las instalaciones de la Universidad del Valle – Campus
Sur, localizada en Santa Lucia Cotzumalguapa, Escuintla. Los materiales vegetativos
para injertación, fueron tomados de los árboles seleccionados como criollos buscando
ramas jóvenes que tuvieran el grosor de un dedo anular de la mano, semejante al del
porta-injerto utilizado.
Fotografía 16. Recolección de varetas vegetativas de clones criollos (Retalhuleu) para
injertación en UVG.
FUENTE: FODECYT 50-2008
Los porta-injerto fueron comprados a la Asociación de Finca Los Brillantes, y
fueron llevados a las instalaciones del Campus Sur – UVG, para poder realizar los
injertos en el lugar.
Fotografía 17. Porta-injertos para injertación de clones de cacao en la UVG
FUENTE: FODECYT 50-2008
30
Al estar pegado el injerto y haber crecido por 90 días, las plantas se
establecieron en un jardín clonal en la sede de la Universidad del Valle de Guatemala.
También se le brindó un grupo de todos los clones injertados a la Asociación Nacional
del Cacao, ANAKAKAW, quienes establecieron el material en un terreno ubicado en
San Marcos.
Fotografía 18. Jardín clonal de clones criollos y de producción en UVG del Sur
FUENTE: FODECYT 50-2008
Lo más valioso es que se tiene una colección de los clones criollos y de alta
producción de cacao en el jardín clonal de UVG del sur. Esta incluye también la especie
de cacao T. bicolor llamado Pataxte y los materiales mexicanos del cacao calabacillo.
Se cuenta con clones criollos que tienen semilla blanca y de buena producción
en el jardín clonal. El plano de las siembras de las especies recolectadas está adjunto en
el anexo 1.
III.3. Caracterización Agronómica de las muestras
Se tomaron muestras de frutos de cacao con características de criollos y se
llevaron al laboratorio para estudio. En el laboratorio se procedió a hacer una tabla con
la siguiente información:. Identificación de la variedad, largo y ancho (ms.) y peso del
fruto (grms), color de semilla, tamaño (cms) y numero de semillas por fruto
(Tablas 3 - 4).
Fotografía 19. Clones y flores de cacao de Fca. Los Brillantes, Retalhuleu..
Fuente: FODECYT 50-2008
Identificación de clones de cacao en
Finca Los Brillantes
Flores de clon 13 R de Theobroma
cacao en Finca Los Brillantes
Flores de clon 24 R de Theobroma
cacao en Finca Los Brillantes
31
Fotografía 19. b. Clones y flores de cacao de Fca. Los Brillantes, Retalhuleu.
Fuente: FODECYT 50-2008
Tabla 3. Características Cacao de Huehuetenango
Clon Tamaño
fruto
No.
Semillas
Tamaño fruto
(largo, ancho)
cms.
Peso
semilla
grs.
Grosor
cáscara
cms.
Color
semilla
Peso
total
fruto
grs.
1 Grande 45 18 x 8.4 144.6 1.6 purpura 500
2 Grande 40 16 x 8.7 114.3 1.5 purpura 591
3 Grande 48 18 x 8.5 183.5 1.0 purpura 444.5
4 Grande 38 16 x 7.6 104.0 1.2 purpura 417
5 Grande 44 16.5 x 8.5 119.0 1.5 purpura 378
6 Mediano 35 11.5 x 7.2 75.0 1.0 café -------
FUENTE: FODECYT 50-2008
Tabla 4. Caracterización agronómica de las muestras de clones de cacao Finca Los
Brillantes.
Clon Largo
fruto
(cm)
Ancho
fruto
(cm)
Grosor
cascara
(cm)
Peso
fruto
(gr)
Peso
semillas
(gr)
Color
semilla
Tamaño
semilla
Numero
semillas
22P 16 8 0.7 233 21.18 Blancas y
violeta
grande 11
30R 21 7 0.5 289 13.14 violeta grande 22
Sgu 2 21 8 0.7 400 20 violeta grandes 19
UF221 16 8 0.3 256 9.14 violeta grandes 28
Sgu 5 16 8 0.4 236 5.76 Violetas y
blancas
medianas 41
Mezcla 20 10 0.5 553 5.9 blancuzcas medianas 40
UF 650 20 9 0.8 505 12.95 violeta grandes 39
San
Antonio
22 10 0.5 575 33.82 Violeta medianas 17
blancuzca
15R 20 8 0.5 432 13.94 Blancuzca
y violeta
grandes 31
8P 17 8 0.7 376 12.96 blancas medianas 29
Flores de clon SGU 2 de Theobroma
cacao en Finca Los Brillantes
Flores de clon UF 221 de Theobroma
cacao en Finca Los Brillantes
32
24R 21 9 1.7 450 15 Blancuzcas
y violetas
grandes 30
FUENTE: FODECYT 50-2008
Dos grupos de cacao ocurren en Retalhuleu. Los que tienen semilla de color
blanco y son criollos, los cuales están en la colección de clones de cacao de Los
Brillantes: 15R, 13R, 22P, 8P y SGU 32, y los que distribuyen a los agricultores como
clones de alta producción: 105R, P-10,UFCO 667,UFCO 221, Sgu 88,Sgu 694,UFCO
650,10P, Sgu 66,Sgu 2, 2- P ,R 19,30R ,13F Sgu 21,105R y Sgu 67. Ambas clones han
estado sembrados en la colección por más de 40 años. Los que tienen una R son de la
Rioja, México originalmente. Los de alta producción no son criollos ya que tienen la
semilla de color violeta.
En Quetzaltenango (Costa Cuca) y San Antonio Suchitepéquez existe el clon
llamado Pataxte, T. bicolor aunque es de otra especie de cacao, tiene la semilla de color
blanco y es un cacao tipo criollo. En este último lugar, se produce una bebida en polvo
que se comercializa en Guatemala para mezclarse con agua y producir cacao líquido
para beber.
III.4. Caracterización Botánica
Fuente: FODECYT 50-2008
Se estudió la morfología de las flores del cacao con características de criollos.
Estudios morfológicos de flores de T. cacao fueron hechos por Goiti y Jaffe, 1997,
indican que las flores de cacao varían en forma y tamaño y pueden tener algunas
estructuras de secreción como tricomas glandulares y nectarios. El estudio botánico de
clones criollos fue llevado a cabo por la Dra. Elfriede de Pöll , botánica de la UVG.
Flor en disposición unitaria
Flores en par
Flores en fascícula
Formación de fruto
Fruto de color rojizo
Frutos de color verde
33
Las características de las flores observadas fueron las siguientes:
Fotografía 20. Clon 15R
a) b)
c) d) FUENTE: FODECYT 50-2008
Fotografía 191. Clon 22P
a) b) c) FUENTE: FODECYT 50-2008
Fotografía 202. Clon 13R
FUENTE: FODECYT 50-2008
34
Fotografía 213. Clon 8P.
FUENTE: FODECYT 50-2008
Fotografía 224. Clon Sgu 32
FUENTE: FODECYT 50-2008
Las únicas diferencias encontradas en las flores del cacao criollo fueron por los
tamaños de las flores, las estructuras fueron todas similares.
III.5. Caracterización Molecular
Se hizo el análisis respectivo para generar el ADN de los clones criollos
recolectados, así como los clones que se están distribuyendo como de alta producción
en finca Los Brillantes, Retalhuleu. Estos incluyen clones como el Patox que es de
Quetzalteanango. Puede observarse la similitud que existe entre ellos. Los que están
más cercanos como el Sgu 21 y el 105 R comparten ADN cercanos, lo que indica que
Sgu 21 que es de buena producción tiene ADN cercano al clon criollo de 105 R, que
puede producir cacao de buena calidad genéticamente. Los clones que están separados
en la Gráfica 1, no tienen similitud entre los ADN respectivos como ocurre entre el Sgu
50 de buena producción y el P10 que es un criollo que produce cacao de buena calidad.
Lo interesante es que con el dendrograma de similitud de clones, podría
organizarse un programa de mejoramiento genético de cacao para Guatemala utilizando
clones de producción cercanos al criollo. Así también puede conocerse qué clones se
deben de propagar para programas de producción en Guatemala.
35
Gráfica 1. Dendrograma comparativo del ADN de los clones criollos y los de alta
producción
FUENTE: FODECYT 50-2008
Análisis molecular llevado a cabo por el Ing. Andrés Weinfeld Avalos Figueroa
investigador del laboratorio de Biología Molecular de la UVG.
El clon 13 Patox pertenece al área de Quetzaltenango a pesar de ser Theobroma
bicolor y no Theobroma cacao. Tiene la semillas blanca y se obtiene un chocolate de
color blanco que se usa para hacer una bebida liquida de chocolate. En Escuintla se
origina un clon de alta producción Sgu 67, este no es criollo y las semillas son de color
violeta. Los clones analizados de Huehuetenango son forasteros y no tienen
características de criollos, siendo su semilla de color violeta.
Se analizaron tanto los clones criollos recolectados en diferentes localidades, así
como los clones que se están distribuyendo como “criollos de alta producción” en finca
Los Brillantes, Retalhuleu. En las Gráficas 2 y 3 se representa gráficamente el
agrupamiento de los individuos según su similitud genética basada en los marcadores
microsatélites (SSR) analizados, mediante un agrupamiento jerárquico y mediante un
análisis de componentes principales, respectivamente.
100
16
35
58
5684
16
21
2214
14
28
28 37
22
27 4343
12
20
29
0 2.5 5 7.5 10 12.5 15 17.5 20 22.5
0.55
0.6
0.65
0.7
0.75
0.8
0.85
0.9
0.95
Sim
ilarity
38-S
GU
50(1
)
13-P
ato
x
17-1
05R
19-P
10
27-U
F667
22-U
F221
30-S
GU
88
02-S
GS
94
35-U
F650
10-P
10
37-S
GU
66
05-S
GU
2
40-2
P
29-R
19
34-1
5R
39-2
2P
32-3
0R
08-1
3F
31-S
GU
21(2
)
01-1
05R
06-S
GU
32
11-S
GU
67
36
Gráfica 2. Agrupamiento de tipo UPGMA (unweighed pair group method using
arithmetic averages) basado en los índices de similitud genética de Nei de cada pareja
de individuos (n=20). Código de procedencia: SGU, materiales denominados
“selección guatemalteca”, n=8; R, materiales originarios de México (Rioja), n=5; P,
materiales criollos guatemaltecos, n=3; UF, materiales de origen costarricense (UFco),
n=3; Ptx, T. bicolor (“Pataxte”), n=1
-------
FUENTE: FODECYT 50-2008
37
Gráfica 3. Análisis de los componentes principales (3 ejes) de la caracterización
molecular de los individuos empleando marcadores SSR. Los puntos representan a los
individuos; en la parte central de las elipses de inercia y unidos a los puntos se
encuentran los nombres de los grupos a los que pertenecen: SGU, materiales
denominados “selección guatemalteca”, n=8; R, materiales originarios de México
(Rioja), n=5; P, materiales criollos guatemaltecos, n=3; UF, materiales de origen
costarricense (UFco), n=3; Ptx, T. bicolor (“Pataxte”), n=1.
FUENTE: FODECYT 50-2008
38
PARTE IV
IV.1. DISCUSIÓN DE RESULTADOS
De todos los departamentos donde se trató de ubicar los clones de cacao criollos,
únicamente en Retalhuleu se encontraron especímenes con las características que así lo
indican. La característica importante fue el color de la semilla blanca que los clones
criollos así la presentaban. En Quetzaltenango existe una especie de cacao Theobroma
bicolor llamado comúnmente Pataxte y tiene las semillas de color blanco y lo usan en
San Antonio Suchitepéquez para hacer una bebida de cacao en polvo y se disuelve en
agua. Corrientemente la venden como bebida de chocolate.
La caracterización detallada de cualquier cultivo es fundamental para su
apropiado y óptimo aprovechamiento. La caracterización detallada de los materiales de
T. cacao incluidos en el estudio tiene el potencial de acelerar la producción de
individuos que posean características deseables mediante propagación vegetativa o bien
la creación de organismos que combinen características deseables de dos organismos
parentales como resultado de un programa de mejoramiento genético.
Los frutos o “pochas” de los árboles de cacao criollo encontrados tenían, en su
mayoría, semillas de color blanco pero, en algunos casos, una proporción de las semillas
del mismo fruto tenían coloración púrpura; esto sugiere que, como resultado de un
proceso de polinización cruzada los óvulos y el polen provenían de distintos clones.
Más aún, hubo casos en los que la coloración de la semilla no era blanca, sino blancuzca
o casi blanca.
El “Pataxte” es una especie diferente del género Theobroma y no es producido
comercialmente a pesar de que sus frutos tienen semilla de color blanco; en San Antonio
Suchitepéquez es utilizado para hacer una bebida de cacao en polvo que al combinarla
con agua produce cacao líquido que es de excelente calidad.
Con el dendrograma de la Gráfica 1 podría organizarse un programa de
mejoramiento genético de cacao para Guatemala utilizando clones de producción
genéticamente cercanos a materiales criollos; por ejemplo, es muy probable que la
descendencia de 8P (criollo) y SGU2 (alta productividad) dé origen a un organismo con
alta calidad y alta productividad. El grupo de individuos 22P/15R (criollos) y
19R/SGU66/10P (alta productividad) también puede considerarse con potencial para
emplearse en mejoramiento genético. Este agrupamiento puede servir de referencia
para saber qué clones deben propagarse vegetativamente, apoyando a programas de
producción en Guatemala. Los individuos UF667 y UF221 que comparten la
característica de “alta productividad” conforman un grupo con T. bicolor evidenciando
su cercanía.
Los cacaos pertenecientes a la denominada “selección guatemalteca” SGU son
los más diversos, pues su elipse de inercia abarca a los demás grupos; la ubicación del
individuo Ptx (Pataxte) sugiere que los dos individuos fuera de la elipse de SGU
(SGU50 y SGU88, no se muestran) comparten alelos con T. bicolor; ambos individuos
comparten la característica de “alta productividad”. Las Gráficas 2 y 3 difieren
principalmente en la forma de agrupar a los individuos.
39
Es importante aprovechar algunos de los clones de cacao que se tienen en la
finca Los Brillantes (Retalhuleu) porque su propagación mediante cultivo de tejidos
podría aumentar la distribución de clones de valor.
40
IV.2. CONCLUSIONES
Conclusión 1
El objetivo del presente proyecto fue la localización de plantas de cacao tipo criollo
en Guatemala, su rescate y caracterización agronómica, botánica y molecular.
Los resultados del estudio indican que hay cuatro clones criollos en
Retalhuleu:13R,15R,22P y Sgu22. El los otros departamentos se encontraron
únicamente clones forasteros excepto que en Escuintla se encontró el criollo Pataxte
que es de otra especie de cacao Theobroma bicolor.
Recomedacion l
Se sugiere propagar los clones criollos ya que son posiblemente de un fuente de
cacao fino de alta calidad.Tambien mantener el Pataxte de Escuintla porque se pueden
producir cacao en polvo blanco para disolver en agua.
Conclusion 2.
La caracterización de los materiales estudiados dio a luz la característica del color
blanco de las semillas lo que sirvió para separar las criollas del resto.
Recomendación 2
La sugerencia repite la sugerencia anterior sobre que deben de propagarse los clones
de semilla blanca que son criollos.
Conclusion 3
La caracterización molecular dio como resultado determinar el ADN de los clones
criollos, lo cual puede relacionarse a otros clones de cacao de alta producción.
Recomendación 3
Utilizar la informacion del ADN de los clones para un programa de mejoramiento
genético del cacao ya que se tiene también informacion molecular de clones de alta
producción. Los que están genéticamente cercanos según el dendrograma indica que
algunos clones tiene caracteristicas de ser de alta calidad de cacao.
Con base a la caracterización agronómica realizada de los clones de cacao, se
encontraron clones con características del tipo criollo en la localidad de Mulúa,
Retalhuleu. Estos clones forman parte del jardín clonal establecido en la Finca Los
Brillantes, y están identificados como 13R, 15R, 22P y SGU22. Dicha caracterización
se realizó a partir de la forma del fruto y disectando las semillas.
Luego de una revisión de todos los materiales que se colectaron, y la
caracterización agronómica y botánica, se pudo determinar que en su mayoría, los
materiales de cacao que se encuentran establecidos en jardines o plantaciones en los
departamentos evaluados, son del tipo forastero. Poseen frutos en forma oval y semillas
41
de color violeta. El análisis de ADN indica que algunos de estos clones están cercanos
al ADN de los criollos.
En la caracterización molecular, se determinó el ADN de los materiales
colectados, y se encontró que existen algunas relaciones entre clones de alta producción
y clones criollos. Como se observa en el Dendrograma XX, las comparaciones
permiten establecer cercanías genéticas entre los materiales
El establecimiento del jardín clonal en las instalaciones de Campus Sur, de la
Universidad del Valle de Guatemala, es un logro importante ya que se han establecido
materiales criollos y de alta producción, de los cuales se podrá obtener material vegetal
propagativo en los próximos años, así como la oportunidad de seguir con estudios en
estos materiales.
El clon Patox aunque no es T. cacao, es importante continuar produciéndolo, ya
que es un material de cacao de color blanco que se puede continuar utilizando para
producir bebidas liquidas de cacao. Esta especie de cacao se siembra en Quetzaltenango
y Mazatenango.
42
IV.3. RECOMENDACIONES
Es importante aprovechar la información sobre biología molecular de los clones
criollos y de producción que se encontraron. Esta información podría utilizarse
para hacer un programa de mejoramiento genético a corto plazo para el cultivo
del cacao. Además, si se necesita aumentar las siembras de cacao en el país,
podría, mientras se tiene más información, propagar los clones que tienen mayor
similitud a los criollos, porque posiblemente éstos tienen genéticamente la
característica de alta calidad de cacao que podría volverse homocigótica y
expresarse en individuos de subsiguientes generaciones.
El clon criollo Pataxte T. bicolor debe de continuarse estudiando y propagando
por ser un cacao de color blanco que se utiliza para hacer bebidas liquidas de
cacao en Guatemala.
Para mejorar la productibilidad del cultivo es importante utilizar para
propagación, clones selectos de alta producción, también utilizar clones que
tengan calidad para producir cacaos finos que son los criollos. En este estudio se
encontró que algunos cacao de alta producción son cercanos también a clones
criollos. El manejo en el campo como es la poda debe de practicarse para que
las plantas tengan follaje joven y que permita el paso de luz al follaje para que se
tenga buena producción. En muchos cacaotales observados la mayor parte de los
agricultores no practican podas para estructurar las plantas. La poda es
importante para reducir la pudrición negra de la mazorca (Phytopthora) que es la
enfermedad que hace que muchos frutos se pierdan por pudrición.
No existen limitantes en la adaptabilidad de los materiales criollos para las
distintas regiones del país, sin embargo debe de tomarse en cuenta, que por ser
materiales susceptibles a enfermedades es necesaria la implementación de
programas de monitoreo y control eficaces que permitan la obtención de frutos
sanos.
Deben de continuarse los estudios de mejoramiento en materiales de cacao, y
realizar un esfuerzo de recuperar todos los materiales de cacao que están
establecidos en el jardín clonal de Finca Los Brillantes, ya que es una fuente de
información y genética latinoamericana, y por falta de recursos en su
mantenimiento se está perdiendo.
43
IV.4. REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS
Astiasaran, I. y Martinez,J.A. 2000. Alimentos, Composición y Prioridades. Editorial
Mc.graw-Hill Interamerican. Madrid.pp. 169-190.
Asociacion técnica para la coordinación agroalimentaria- ACTIA-. 2001. Sensory
evaluation. Guide of good practice. Paris, 2001. pp.128.
Ávalos, A. y L. Molina. 2004. Caracterización de 20 variedades mutantes de frijol
(Phaseolus vulgaris L.) mediante la técnica del AFLP. Informe técnico de
actividades del Laboratorio de Biotecnología de la Región I ICTA, Guatemala.
Azofeifa-Delgado, Álvaro. 2006. Uso de marcadores moleculares en plantas;
aplicaciones en frutales del trópico. Agronomía Mesoamericana 17(2):221-242.
B.B.C. News. March 24, 2004. Fat profits: Choc tactics. [Publicación en línea].
Disponibles Internet desde: http://news.bbc.co.uk/1/hi/business/3560857.stm
[con acceso el 18-06-2008].
Beckett, S.T. 1994. Fabricación y utilización industrial del chocolate. Zaragoza,
España.
Borrone, J.; R. Schnell, J. Brown y D. Kuhn. 2007. Microsatellite-containing
expressed sequence tags for genetic mapping and genotyping Theobroma cacao.
Proceedings of the XVth International Cacao Conference.
Cervantes-Martínez,C.; J. Steven Brown, R. Schnell, J.C. Motamayor, A.W.
Meerow, D.Zhang. 2006. A computer simulation study on the number of loci
and trees required to estimate genetic variability in cacao(Theobroma cacao L. ).
Springer Verlag. Tree Genetics & Genomes DOI 10.1007/s11295-006-0038-0.
Cheesnan, E. 1941. Notes on the nomenclature classification and possible relationship
of cacao populations. Tropical Agriculture, XXI: 144-159
Chocolate Manufacturers Association. 2003. Harvesting Cocoa Beans. [Publicación
en línea]. Disponible en Internet desde:
http://www.cocoatree.org/frombeantobar/harvestingcocoabeans.asp [con acceso el
18-06-2008].
Coe, S. y M. Coe. 2000. La verdadera historia del chocolate. Fondo de cultura
economica. Mexico. 396pp.
Cros, E. 1997. Factores condicionantes de la calidad del cacao. Presentado en el I
Congreso venezolano del cacao y su industria. Maracay Venezuela. [Publicación
en línea]. Disponible en Internet desde:
http://www.cacao.sian.info.ve/memorias/html/02.html [con acceso el 19-06-
2008].
44
Crouzillat, D., W. Phillips, W. Fritz and V. Pétiard. 2000. Quantitative trait loci
analysisi in Theobroma cacao using molecular markers. Inheritance of polygenic
resistance to Phytophthora palmivora in two related cacao populations.
Euphytica 114(1):25-36.
Cryer, N.C.; M.G.E. Fenn, C.J. Turnbull and M.J. Wilkinson. 2006. Allelic size
standards and reference genotypes to unify international cocoa (Theobroma cacao
L.) microsatellite data. Genetic Resources and Crop Evolution 53:1643-1652.
Dagert, M.; F. Brito y M.J. Marcano. Caracterización molecular de cacaos criollos
del occidente de Venezuela. Red Nacional de Análisis Genético Poblacional.
http://cecalc.ula.ve/BIOINFO/proyectos/proyect11.html. Último acceso 18 -06-
2008.
Díaz, L. 2008. Rusos, interesados en cacao nacional. Prensa Libre [Guatemala]. 29
de marzo de 2008. [Publicación en línea]. Disponible en Internet desde:
http://www.prensalibre.com/pl/2008/marzo/29/228789.html [con acceso el 19-06-
2008].
Doyle, J.J. and J.L. Doyle. 1990. Isolation of plant DNA from fresh tissue. Focus
12:13-15.
Echemendia, Y. Sf. Phytophtora: Características, diagnóstico y daños que provoca en
algunos cultivos tropicales. Medidas de control. Instituto de Investigaciones en
Fruticultura Tropical. Cuba. 30 pp.
http://www.fao.org/docs/eims/upload/cuba/1060/cuf0022s.pdf
Federation of Cocoa Commerce. An overview of cocoa production in Côte d’Ivoire
and Ghana. [Publicación en línea]. Disponible en Internet desde:
http://www.cocoafederation.com/education/produce.jsp [con acceso el 18-06-
2008].
Garcia, H. 1984. Caracterización agronómica de las selecciones guatemaltecas de
cacao (Theobroma cacao L.). Tesis. Universidad de San Carlos de Guatemala.
52pp.
Goltia,W. y Klaus Jaffe.1997. Morfologia Comparativa de las Flores de Theobroma
cacao L., T. bicolorHumb. & Bonpl.,T.glandiflorum (Willld.expreng.) Schum y
Herrania sp. Acta Cientifica Venezolana 48:13-18,1997. 18pp.
Graziani, L. l995.Denominacion de Origen y Certificación de Calidad. Primer
Congreso Venezolano del Cacao y su Industria.
Hartmann,H.T. and D.E.Kester. 1964. Planta Propagation Principles and Practices.
Englewood Cliffs, N.J. : Prentice –Hall, Inc.p. 383.
Henao, A. y G. Raessens. 2005. El cacao en el desarrollo rural integral en los Yungas
de La Paz, Bolivia. Agroforestería en las Americas. 43-44,2005: 4-5.
Heredity 89: 380-386
45
ICCO Quarterly Bulletin of Cocoa Statistics, Vo. XXXVIII, No 4, Cocoa year
2011/2012
IICA. 1985. Compendio de agronomia tropical/ Instituto Interamericano de
cooperación para la agricultura. San Jose, Costa Rica.
INFOCOMM. 2008. Market information in the commodities area. [web en linea].
Disponible en Internet desde:
<http://r0.unctad.org/infocomm/anglais/cocoa/market.htm> [con acceso el 24-06-
2008].
Info-Galaxy. 2003. From bean to chocolate. [web en linea]. Disponible en Internet
desde: <http://www.info-galaxy.com/
Chocolate/From_Bean_to_Chocolate/from_bean_to_chocolate.html> [con acceso el
24-06-2008]
Instituto Nacional de Estadística (INE). 2003. Área cultivada de cacao en Guatemala.
Censo, Guatemala.
Internacional Cacao Organization. http://www.icco.org/ . United Kingdom. [Pagina
en línea] [con acceso el 18 de junio de 2008]
Kälin, S. 2007. Ghriradelli Chocolate. Corporate Communications. Lindt & Srpügli
(Internacional) AG. [Publicación en línea]. Disponible en Internet desde:
http://chuchutrain.wordpress.com/2007/02/ [con acceso el 19-06-2008].
Karp, A.; S. Kresovich, K. Bhat, W. Ayad y T. Hodgkin. 1997. Molecular tools in
plant genetic resources conservation: a guide to the technologies. International
Plant Genetic Resources Institute (IPGRI). Roma, Italia. 47 pp.
Karp, A. y K. Edwards. 1998. DNA markers: a global overview. In: G. Caetano-
Anollés,P.M. eds. DNA markers protocols, aplications and overviews. Gresshoff.
New York. Pp. 1-13.
Lanaud C.; A.M. Risterucci, . Pieretti, M. Falque, A. Bouet and P.J.L. Lagoda. 1999. Isolation and characterization of microsatellites in Theobroma cacao L. Mol.
Ecol. 8:2141-2143.
Laurent, V. 1993. Etude de la diversité génétique du cacaoyer (Theobroma cacao L.)
basée sur le polymorphisme de la longueur des fragments de restriction (RFLP).
Doctoral thesis, Université de Paris, Paris.
Laurent, V., A.M. Risterucci and C.Lanaud. 1993. Genetic Diversity in
CocoaRevealed by cDNA probes. [Publicación en línea] Disponible en Internet
desde: www.springerlink.com/index [con acceso el 20-06-2008]
León, J. 1956. Taxonomia del genero Theobroma (L). Instituto Interamericano de
Ciencias Agrícolas. Turrialba, Costa Rica. Curso de Cacao.
46
Lot, H.; E. Djiekpor and M. Jacquemond. 1991. Characterization of the genome of
cacao swollen shoot virus. Journal of General Virology 72:1735-1739.
Lowe, A.; S. Harris y P. Ashton. 2004. Ecological genetics; design, analysis and
application. Blackwell Science. Victoria, Australia. 326 p.
Lumbsdem, R. 2007. World Cocoa Foundation Research update: September 2007.
[web en linea]. Disponible en Internet desde:
<http://www.worldcocoafoundation.org/About/research/usda_Sept_2007.htm> .
[con acceso el 24-06-2008].
Marita, J.M.; J. Nienhuis, J.L. Pires and W.M. Aitken. 2001. Analysis of genetic
diversity in Theobroma cacao with emphasis on withches' broom disease
resistance. Crop Sci. 41:1305-1316.
Ministerio de Agricultura y Ganadería. 1991. Cacao. Dirección General de
Investigación y Extensión Agrícola Costa Rica.
Ministerio de Agricultura y Ganadería. 2012. Caracterización de la cadena de valor
del cacao en El Salvador. PAF Cadenas Productivas. El Salvador. Disponible en
Internet desde:
http://www.iica.int/Esp/regiones/central/salvador/Documents/Documentos%20PA
F/caracterizacion_cadena_cacao.pdf [con acceso el 27-05-2013]
Ministerio de Agricultura, Ganadería y Alimentación (MAGA). 2003. Programa
Mejoramiento de la competitividad del caco como alternativa para el desarrollo
rural. Guatemala.
Motamayor, J. C., et. al. 2002. "Cacao domestication I: The Origin of the cacao
cultivated by the Mayas", Heredity 89: 380-386
Mollinedo, J. 2008. Comunicación personal. Asociación Nacional del Kakaw
Mora, J. 1956. Origen y Tipos de Cacao. Instituto Interamericano de Ciencia
Agrícola. Turrialba, Costa Rica.
Motomayor, J.C; M. Risterucci; V. Lousent; A. Moreno y C. Lonaurd. 1997. The
genetic diversity of criollo cacao and its consequence in quality breeding.
Estación experimental de Concagua, FONAIAP, Venezuela. Presentado en el I
Congreso Venezolano del cacao y su industria. Maracay, Venezuela.
[Documento en línea]. Disponible en Internet desde:
<http://www.cacao.sian.info.ve/memorias/html/03.html> [con acceso el 19-06-
2008]
N'Goran, V. Laurent, A.M. Risterucci and C.Lanaud. 1994. Comparative genetic
diversity studies of Theobroma cacao L. using RFLP and RAPD markers.
Heredity 73:589-597.
Parra D., I. Contreras y J.Pineda. 2008. Escoba de Bruja del Cacao en Venezuela.
INIA. Centro de Investigaciones del Estado de Miranda. Venezuela.
47
Parra, D. y L. Sánchez. 2005. Moniliasis en el Cacao. El control de la moniliasis en
el cacao. INIA. Estación Experimental Miranda Caucagua. Centro de
Investigaciones Agrícolas del Estado de Tachira. Venezuela.
Peakall R. y P.E. Smouse. 2006. GenAlex 6. Molecular ecology 6(1):288.
Perry, M.; M. Davey, J.B.Power, K.C.Lowe, H.F.J. Bligh, P.S. Roach and C.Jones. 1998. DNA isolation and AFLP
tm genetic fingerprinting of Theobroma cacao
(L.). Plant Molecular Biology Reporter 16:49-59.
Phillips, W.; H. Rodríguez y P. Fritz. 1995. Marcadores de ADN: Teoría,
aplicaciones y protocolos de trabajo con ejemplos de investigaciones en cacao
(Theobroma cacao). Serie técnica. Informe técnico#252. CATIE. Turrialba,
Costa Rica. 183 p.
Ploetz, R. 2007. Cacao diseases: Important threats to chocolate production. Presented
at the Annual Meeting of The American Phytopathological Society, Joint with
The Canadian Phytopathological Society and the Mycological Society of
America, July 30, 2006, Québec City, Quebec, Canada. [Publicación en línea].
Disponible en Internet desde: http://www.worldcocoafoundation.org/info-
center/document-research-center/documents/Ploetz2007D.pdf [con acceso el 18-
06-2008].
Porres, M. 2008. Comunicación personal. Centro de Estudios Agrícolas y Forestales.
Laboratorio de Entomología Aplicada. Universidad del Valle de Guatemala.
Portillo, E; L. Graziani y E. Cros. 2006. Efecto de algunos factores post-cosecha
sobre la calidad sensorial del cacao criollo porcelana (Theobroma cacao L.)
[Documento en línea]. Disponible en Internet desde:
http://www.serbi.luz.edu.ve/pdf/fagro/v23n1/art_05.pdf [con acceso el 19-06-
2008].
Ramos, G.; J. Vivas; A. Azocar; C. Lacruz; N. Marquez. Rescate, conservación y
caracterización de cacaos criollos del Guasare, Estado Zulia. FONAIAP – Centro
de investigaciones agropecuarias del Estado de Merida. [Publicación en línea].
Disponible en Internet desde:
http://www.fonaiap.gov.ve/publica/divulga/fd60/cacao.html [con acceso el 18-06-
2008].
Rieges, M. Cacao – Theobroma cacao. University of Georgia. [Publicación en línea].
Disponible en Internet desde: http://www.uga.edu/fruit/cacao.html [con acceso el
18-06-2008].
Schnell, R.J.; C.T.Olano, J.S. Brown, A.W. Meerow and C. Cervantes-Martínez. 2005. Retrospective determination of the parental population of superior cacao
(Theobroma cacao L.) seedlings and association of microsatellite alleles with
productivity. J.Amer. Soc. Hort. Sci. 130(2):181-190.
Sereno, M.L.; . Albuquerque, R. Vencovsky and A. Figueira. 2006. Genetic
diversity and natural population structure of cacao (Theobroma cacao L.) from
48
Brazilian Amazon evaluated by microsatellites markers. Conservation Genetics
7:13-24.
SIDTA 1999. Los marcadores moleculares en ineniería genética y en mejora vegetal.
España. Consultado 19 de junio del 2008. Disponible en:
http://www.jcyl.es/jcyl/cag/dgiadr/svidta/boletin/dic99/bold.html
Somarriba, E.; L. Orozco y M. Villalobos 2007. Competitiveness and environment
in Cocoa landscapes of Central America (Regional Cocoa Project RCP). Centro
Agronómico Tropical de Investigación y Enseñanza (CATIE), Turrialba, Costa
Rica. [Publicación en línea]. Disponible en Internet desde:
http://web.catie.ac.cr/cd_multiestrata/Poster/session4/Competitiveness.pdf [con
acceso el 18-06-2008].
Somarriba, E. y L. Trujillo. 2005. El proyecto “Modernización de la cacaocultura
orgánica de Alto Beni, Bolivia”. Agroforestería en las Americas. 43-44,2005: 6-
14.
Somarriba, E; L. Trujillo; D. Stoian; G. Palencia; F. Cancari; G. Trujillo; J.
Cuaquira; V. Mendieta; F. Aguirre; W. July; E. Huanca; J. Mamani; R.
Flores, y G. Castro. 2005. ¿Cómo modernizar la cadena del cacao del Alto
Beni, Bolivia? Agroforestería en las Americas. 43-44, 2005: 15 – 19.
Soria, J. 1956. El mejoramiento del caco. Curso de Cacao. Instituto interamericano
de ciencias agrícolas. Turrialba, Costa Rica.
Solozano, V.A. l950. Marchitamiento de los frutos jóvenes del cacao (Cherelle wilt)
Instituto Interamericano de Ciencias Agricolas, Turrialba, Costa Rica (Curso de
cacao).
Sounigo, O.; R. Umbaharan, Y. Christopher, A. Sankar y S. Ramdahin. 2005.
Assessing the genetic diversity in the International Cocoa Genebank, Trinidad
(ICG,T) using isozyme electrophoresis and RAPD. Genetic Resources and Crop
Evolution 52(8):1111.
Stephenson, M. 2007. Estudio genético de una población de cocoteros altos (Cocos
nucifera L.) en el puerto de Ocós, San Marcos, mediante secuencias de
microsatélites. Tesis para optar al grado Licenciada en Bioquímica. Universidad
del Valle de Guatemala. 71 pp.
Sullca, J. sf. Paquete tecnológico de Manejo Integrado del Cacao. Instituto Nacional
de Investigación y Extensión Agrícola – Ministerio de Agricultura. Perú.
Consultado en: www.inia.gob.pe/cacao/PAQUETE TECNOLÓGICO -
CACAO.pdf
Thorold, C.A. 1955. Observations on Theobroma cacao in Fernando Po. The Journal
of Ecology 43(1):219-225.
Valadez, y G. Kahl. 2000. Huellas de ADN genómico en plantas (teoría y protocolos
de laboratorio). Editorial Mundiprensa. México. 147 PP.
49
Vázquez-Yanes, C., A. I. Batis Muñoz, M. I. Alcocer Silva, M. Gual Díaz y C.
Sánchez Dirzo. 1999. Árboles y arbustos potencialmente valiosos para la
restauración ecológica y la reforestación. Reporte técnico del proyecto J084.
CONABIO - Instituto de Ecología, UNAM.
Vega, M. y E. Sommariba. 2005. Planificación agroforestal de fincas cacaoteras
orgánicas del Alto Beni, Bolivia. Agroforestería en las Americas. 43-44,2005: 20
- 26.
Wood, G.A.R. 1982. Cacao. Compañía Editorial Continental, S.A. de C.V. México.
363pp.
Zhang, D.; M. Boccara, L. Motilal, D. R. Butler, P. Umaharan, S. Mischke and L.
Meinhard. 2007. Microsatellite variation and population structure in the
‘‘Refractario’’ cacao of Ecuador. Springer Science+Business Media B.V.
Conservation Genetic DOI10.1007/s1059.
50
IV.5. ANEXOS
Anexo 1. Plano de jardín clonal de cacao, en uvg campus sur, Escuintla
15R Ufco 650 Sgu 694 Plantas de canela
13R 10R Sgu 88
Uf667 22P Sgu66 UF221
P10 8P Sgu22 Uf667 15R
105R Sgu67 R19 P10 13r
Sgu 232 R105 30R 105R 22P
Sgu 21 13F Sgu32 8P
Siembra a 5x5 metros.
Fuente: FODECYT 50-2008.
51
Anexo 2. Plano de clones de cacao recolectados en finca brillantes, retalhuleu(clones
criollos y de alta produccion
Fuente: FODECYT : 50-2008
SGU 60
SGU 60
SGU 60 UF 667
UF 667
UF 676
UF 676
SGU 53
SGU 53
UF 650
UF 650
UF 650
SGU 32
SGU 32 22 P
22 P
24 R 22 P
24 R
24 R 10 P
10 P
2 P (8 P)
2 P (8 P)
2 P (8 P)
117 R
15 R 117 R
15 R 117 R
15 R
SGU 67 13 R
SGU 67 13 R 105 R
SGU 2 SGU 67 13 R 105 R
SGU 2 105 R
SGU 2
8 R
8 R
8 R
52
Anexo 3. Ubicaciones de las plantaciones de cacao visitadas en Guatemala
FUENTE: FODECYT 50-2008
53
FUENTE:FODECYT 50-2008
54
FUENTE: F0DECYT 50-2008
55
PARTE V
V.1. INFORME FINANCIERO
FUENTE: Departamento financiero SENACYT