PRACTICA N 1:

CUESTIONARIO N 1 Y 2ESTAFILOCOCO AUREUSCaractersticas Morfolgicas: Coco inmvil.

Entre 0.8 y 1 micrmetro de dimetro.

Gram Positivo.

Es aerobio y anaerobio facultativo. No presenta movilidad ni cpsula. Es capaz de crecer hasta con un 10 % de sal comn. Por esto puede crecer en el agua del mar.

Colonias lisas, brillantes y convexas Posee un endopigmento color amarillo naranja a blanco porcelana al cual se le conoce como aureus. Fermenta glucosa, lactosa y maltosa Crecimiento a temperatura entre 6,5 a 50 C, siendo ptimo 30 40 C.Las 3 principales patologas producidas por el Estafilococo Aureus

Imptigo, muy contagiosa, y aparece como costras y supuraciones que crecen a diario. Ectima, dolor crujiente que crece sobre las lceras profundas de la piel. Sndrome de Shock Txico, fiebre alta, una cada repentina en la presin arterial, vmitos, erupcin cutnea y confusin.ESCHERICHIA COLI

Caractersticas Morfolgicas:

Bacilo Gram negativo. No forma esporas

Mviles, mediante flagelos pertricos.

Miden 0.5 de ancho por 3 de largo.

Catalasa positiva.

Oxidasa negativos.

Reducen nitratos a nitritos.

Producen vitamina B y K

Fermenta glucosa y lactosa con produccin de gas.

Es anaerobio facultativo

Las 3 principales patologas producidas por el Escherichia coli

Diarrea del viajero, representada por sntomas no relacionados en 24 horas, comnmente definidos por calambres abdominales, nusea, e hinchazn Diarrea hemorrgica, diarrea con sangrado.

Insuficiencia renal, son ms comunes en mujeres por la corta longitud de la uretra (25 a 50 mm), en comparacin con los hombres (15 cm).CUESTIONARIO N 3DIFERENCIAS ENTRE LA PARED CELULAR DE LAS BACTERIAS

GRAM + Y GRAM -Pared celular de las bacterias Gram positivas

Pared ms gruesa y en su vista exterior tiene una apariencia lisa.

El peptidoglicano representa hasta el 90% de la pared, pequeas cantidades de cidos teicoicos (polmeros que contienen glicerolfosfato o residuos de fosfato de ribitol) tambin formar parte de la misma.

Varias capas de peptidoglicano, unas 25 en algunos casos espesor entre 20-80 nm.

Sensibles a la accin de la lisozima y penicilina (inhibe la sntesis de la pared) o sus derivados.

Pared celular de las bacterias Gram negativos

Tienen en su pared una capa adicional y con la cara externa convoluta (arrollada sobre s mismo).

El peptidoglicano constituye slo alrededor del 10% de la pared, estando constituido el resto por una capa compleja. Estructura ms complicada, tienen 2 reas separadas con una membrana adicional adems de la membrana celular. Hacia fuera de la membrana citoplasmtica hay un rea abierta llamada periplasma. Por fuera de ella hay una fina capa de peptidoglicano y, finalmente externamente a ste est la membrana adicional, la membrana externa (bicapa lipdica similar a la membrana celular).

DETERMINANTES DE PATOGENICIDAD DE LAS BACTERIAS

GRAM + Y GRAM -

Determinantes de patogenicidad de las bacterias Gram positivas

Fimbrias, apndices que consisten de subunidades de protenas que estn ancladas en la pared celular. Adhesinas fimbriales

cidos teicoicos y cidos lipoteicoicos los cuales actan como adhesinas no fimbriales.

Peptidoglicano, forma la pared de bacteria

El peptidoglicano, los cidos teicoicos y lipoteicoicos producen una respuesta inflamatoria idntica a una producida por endotoxinas.Determinantes de patogenicidad de las bacterias Gram negativas.

Fimbrias, servir como soporte de las adhesinas, encargadas de reconocer a su receptor en la clula hospedera estan ancladas en la membrana externa.

Adhesinas fimbriales

Protenas de membrana externa cuya funcin es la adherencia (adhesinas no fimbriales). Lipopolisacrido son endotoxinas que forman parte de la membrana externa. Sistemas de secrecin (II, III, IV y V), complejas maquinarias para transferir protenas codificadas en su cromosoma a clulas eucariontes.

CUESTIONARIO N 4Por qu se utiliza sangre de carnero y no sangre humana en la preparacin del Agar sangre?

La adicin de sangre de carnero desfibrinada enriquece la base y lo hace un medio adecuado para realizar la prueba del factor CAMP La sangre se obtiene especficamente de un cordero sacrificado para el consumo de su carne. Aspticamente, mediante puncin yugular y en recipientes estriles la sangre. Ha sido procesada sin uso alguno de aditivos o preservantes para remover la fibrina, factor que estimula la coagulacin de la sangre, que interfiere con la preparacin y utilizacin en el medio de cultivo. Est libre de citratos u otros anticoagulantes y libre de otros agentes complejos, que puedan intervenir en el desarrollo microbiano, Adems est libre de factores inmunolgicos que comnmente se encuentran en la sangre humana interfiriendo con el diagnostico. Los Glbulos Rojos de cordero son los adecuados para la preparacin de Agar Sangre y Agar Chocolate. Comnmente se utiliza la sangre de cordero entre un 5 10 %, como medio de enriquecimiento nutritivo en la preparacin de medios de cultivo. Este es utilizado principalmente para el crecimiento, identificacin y observacin de las reacciones hemolticas causadas por alguna bacteria con importancia clnica.

Seale los microorganismos que crecen en el Agar Mc ConkeyEl agar Mc Conkey es un medio slido que permite el crecimiento de bacilos Gram negativos fermentadores y no fermentadores de lactosa. Ms frecuentemente utilizado. Es un medio selectivo y diferencial. Es selectivo porque tiene mucha concentracin de sales biliares que solo permiten que crezcan las enterobacterias. Es diferencial porque aquellas enterobactericeas que fermenten la lactosa formarn colonias de color rosa. Las que no fermentan la lactosa sern colonias incoloras.

Lactosa + Lactosa -

Seale la utilidad del Agar Chocolate.El agar chocolate se obtiene calentando la sangre antes de adicionarla al medio base. Por esta razn el agar chocolate contiene hemoglobina, que aporta al medio un importante elemento para el crecimiento: el factor X o hemina termoestable. El agar chocolate es un medio destinado principalmente al aislamiento de Neisserias (gonococos y meningococos) y Haemophilus, pero en l pueden crecer muchos otros microorganismos exigentes. El agar chocolate puede convertirse quizs en uno de los medios ms enriquecidos si aadimos una mezcla de factores de crecimiento no contenidas en la sangre. Estas mezclas, denominadas de forma diferente segn las casas comerciales (Polivitex, Isovitalex, etc.) contienen ms de una docena de compuestos que confieren a este medio unas cualidades nutritivas extraordinarias. Por adicin de uno o varios antibiticos pueden lograrse medios inhibidores o selectivos para el crecimiento de determinados microorganismos. Un ejemplo clsico es el Thayer-Martin, utilizado para el aislamiento del gonococo y que no es otra cosa que un agar chocolate enriquecido al cual se ha aadido una mezcla de tres antibiticos especficos que impedirn el crecimiento del resto de la flora acompaante.Seale la utilidad y algunos ejemplos de medios de transporte

Los medios de transporte son medios diseados especialmente para la transportacin de muestras para cultivos, aseguran la viabilidad de los microorganismos desde el momento de la toma de la muestra hasta su siembra en el laboratorio. El medio de Stuart modificado se usa para el transporte de gonococos, streptococos beta hemolticos, haemophylus y otros microorganismos exigentes. La siembra debe efectuarse hasta las 36 horas siguientes a la obtencin de la muestra. Son utilizados para asegurar la viabilidad de la bacteria sin multiplicacin significativa de los microorganismos desde el momento de su extraccin hasta su posterior estudio. Se utilizan generalmente cuando las muestras deben ser enviadas de un laboratorio a otro. Se recomienda un lmite de dos horas desde la recoleccin delas muestras y su estudio en el laboratorio, pero este lmite de tiempo es superado (frecuentemente cuando se trata de muestras tomadas en un consultorio). Esta demora hace necesario el uso de medios de transporte adecuados. Los medios de transporte ms frecuentemente utilizados son los de Stuart, Amies y Carey - Blair. Existe una unidad descartable de cultivo de transporte llamada Culterette que consiste en un tapn estril de poliestireno y un ampolla en la parte inferior que se rompe cuando se ejerce presin liberando el medio de transporte de Stuart alrededor del extremo del tapn impregnado en la muestra. Hasta hace algunos aos los componentes orgnicos mencionados deban ser obtenidos por el microbilogo y el medio de cultivo se preparaba en el laboratorio. Actualmente se dispone comercialmente de la mayor parte de los medios e incluso de sus componentes adicionales. Un gran nmero de medios de cultivo usados en el laboratorio de microbiologa son mixtos, es decir que tienen como finalidad la de varios grupos de los mencionados, por ejemplo, el agar S- S es selectivo (pues tiene un inhibidor: el verde brillante) y es a laves un medio diferencial (lleva lactosa y un indicador) que permite diferenciar las bacterias fermentadoras o no de dicho polisacrido. El medio de Thayer y Martin para Neisseria es un medio enriquecido (contiene plasma) y es selectivo (tiene 3antibiticos inhibidores de la flora bacteriana y fngica: colistina, vancomicina y nistatina).

Medio de CARY BLAIR:

Se utiliza para el transporte de muestras fecales o raspados rectales, para coprocultivo. Se recomienda este medio, ya que permite el desarrollo de salmonellas y shigellas aun despus de 49 das a 28C.El medio de Cary Blair se utiliza primordialmente en el transporte de coprocultivos, debido, a que la viabilidad de las especies de Shigella es superior que en otros medios de transporte. Se ha obtenido desarrollo de Salmonellas y Shigellas hasta despus de 45 das de estar en medio de Cary Blair. Y, se ha obtenido desarrollo de Vibrio cholerae despus de 92 das en este medio.

Medio de AMIES C/CARBN:

Este medio se obtuvo de una modificacin del medio stuart al cual se reemplaz el glicerol fosfato por un buffer inorgnico superior, la adiccin del carbn permiti la absorcin de toxina y bactericidas del medio, lo que permite el desarrollo de patgenos aun presencia de antibacterianos

CUESTIONARIO N 5Qu caractersticas de las bacterias se evalan en un medio semislido?

La siembra en este tipo de medio, que contiene una proporcin menor de agar que los medios slidos y que se envasa en tubos, se lleva a cabo con un hilo de siembra esterilizado, con el cual se toma la muestra. El medio queda inoculado al introducir el hilo en profundidad hasta el fondo del tubo, retirndolo posteriormente por la misma trayectoria utilizada al realizar la picadura. Una siembra con asa o con un cierto movimiento de vaivn podra originar un patrn de crecimiento que se interpretara errneamente como movilidad bacteriana.En medio semislido se podr comprobar si el microorganismo es o no mvil, ya que en el primer caso se observar que el crecimiento difunde alrededor de la zona donde se hizo la picadura, detectndose turbidez. Por eso es tan importante que, cuando se inocula el medio de cultivo, no se distorsione el agar y se vuelva a sacar el hilo por el mismo sitio de inoculacin. Los microorganismos inmviles crecern nicamente a lo largo de la picadura.

Este tipo de siembra en picadura sirve, tambin, como otro de mtodo de conservacin de microorganismos anaerbicos facult ativos.Cul es la utilidad de la siembra por dispersin - agotamiento?

Con ste procedimiento se puede conseguir una buena separacin de las colonias y aislarlas fcilmente. Para ello se funde el medio de cultivo, se vuelca en caja de Petri y se deja solidificar. Con el asa previamente esterilizada se toma material de un cultivo heterogneo y se descarga sobre la superficie del medio formando estras.

CUESTIONARIO N6Para qu es til un Antibiograma? La utilidad bsica del antibiograma es la instauracin de un tratamiento antibitico correcto al paciente. Es necesario conocer si el microorganismo responsable de la infeccin posee mecanismos que le confieran inmunidad frente a algn antibitico para no incluirlo cromoterapia.

En cuanto al tratamiento el antibiograma no slo es necesario en la instauracin, tambin resulta til en el seguimiento e incluso en la confirmacin de tratamientos empricos. En ocasiones la enfermedad infecciosa resulta grave y se comienza el tratamiento antes de conocer los datos de sensibilidad de la cepa. El antibiograma tiene que confirmar, o en su caso corregir el tratamiento.

Otra aplicacin de las tcnicas de estudio de resistencia es la epidemiologa. Es necesario detectar el aumento de los niveles de resistencia en los aislamientos clnicos para tomar medidas correctoras.

Por otro lado tambin puede tener utilidad diagnstica porque el perfil de resistencia puede en algn caso orientar en la identificacin bacteriana.

Seale cinco ejemplos de antibiticos que sean: Aminoglucsidos, Betalactmicos, Quinolonas, indicando el nivel de accin con respecto a la estructura bacteriana Antibitico Aminoglucsidos

_Amikacina. Aminoglucsidico semisinttico, acta a nivel de la subunidad 30S ribosmica e inhibe la sntesis de las protenas bacterianas._Estreptomicina. Se utiliza para la brucelosis y la peste. Inhibe la sntesis proteica bacteriana a nivel de subunidad 30S ribosmica.

_Tobramicina. Antibitico aminoglucsido bactericida activo contra enterobacterias y contra P.aeruginosa, H. influenzae y S. aureus. Inhibe la sntesis proteica bacteriana por unin a subunidad 30S ribosmica.

_Gentamicina. Penetra en la bacteria y se une a las subunidades ribosomales 30S y 50S inhibiendo la sntesis proteica.

_Kanamicina. Como todos los antibiticos aminoglucsidos, la kanamicina se une a la subunidad S30 del ribosoma bacteriano, impidiendo la transcripcin del DNA bacteriano y, por tanto, la sntesis de protenas en los microorganismos susceptibles

Antibitico Betalactmicos

_Aztreonam. Antibitico betalactmico monociclico (monobactmico) sinttico, pero aislado originalmente de la bacteria Chromobacterium violaceum. Inhibe la sntesis de pared celular bacteriana. Activo frente a un amplio espectro de patgenos aerobios Gram- incluyendo P. aeruginosa.

_Dicloxacilina. Penecilina antiestafiloccica con actividad bactericida, que acta por inhibicin de la sntesis de la pared bacteriana, su accin depende de la habilidad para llegar y unirse a las protenas de unin a penecilinas, localizadas en la membrana interna de la pared bacteriana._Cefalexina. Antibitico Betalactmicos como las penicilinas. Inhibe la tercera y ltima etapa de la sntesis de la pared celular bacteriana unindose preferentemente a las protenas de unin a penicilina (PBP especficas) que se encuentran dentro de la pared celular bacteriana.

_Meropenem. Bactericida. Inhibe sntesis de pared celular bacteriana en bacterias Gram+ y Gram-, ligndose a protenas de unin a penicilina en la fases tercera y ltima de la misma, al unirse de forma preferencial a determinadas protenas bacterianas, denominadas protenas ligandos especficos de las penicilinas.

_Ertapenem. Penetra rpidamente a travs de la pared bacteriana e inhibe su sntesis debido a su unin a las protenas bacterianas de unin a las penicilinas PBP 1a, 1b, 2, 3, 4 y 5, sobre todo a las PBP 2 y 3.

Antibitico Quinolonas_cido nalidxico. Agente antimicrobiano de sntesis con un espectro antibacteriano reducido. Es bacteriosttico o bactericida en dependencia de su concentracin. El cido nalidxico parece actuar inhibiendo la sntesis bacteriana del ADN posiblemente interfiriendo con la polimerizacin del ADN. Se puede desarrollar resistencia rpidamente durante el tratamiento._cido pipemdico. Antibacteriano con accin bactericida. Acta bloqueando la ADN-girasa bacteriana, impidiendo con ello la replicacin del ADN bacteriano. Acta fundamentalmente frente a bacterias Gram-negativas aerbicas, especialmente de la familia de las enterobactericeas. No es activo frente a Pseudomonas ni sobre especies Gram-positivas.

_Norfloxacina. Su mecanismo de accin es similar al de otros anlogos del cido nalidxico. Acta intracelularmente inhibiendo la subunidad A de la DNA girasa, alterando la replicacin del ADN y llevando eventualmente a la lisis de la clula bacteriana.

_Ciprofloxacina. Los efectos antibacterianos de la ciprofloxacina se deben a la inhibicin de la topoisomerasa IV y la DNA-girasa bacterianas. Estas topoisomerasas alteran el DNA introduciendo pliegues super helicoidales en el DNA de doble cadena, facilitando el desenrollado de las cadenas.

_cido oxolnico. Antibacteriano con accin bactericida. Acta bloqueando la ADN-girasa bacteriana, impidiendo con ello la replicacin del ADN bacteriano. Acta fundamentalmente frente a bacterias Gram-negativas aerbicas, especialmente de la familia de las enterobactericeas. No es activo frente a Pseudomonas ni sobre especies Gram-positivas.

Seale mecanismos de resistencia antimicrobiana.El fenmeno de resistencia tiene un sustrato gentico intrnseco o adquirido que se expresa fenotpicamente por mecanismos bioqumicos. De esta manera puede observarse la resistencia desde el ambiente biolgico y otro el bioqumico.

Se conoce como resistencia natural a los mecanismos permanentes determinados genticamente, no correlacionables con el incremento de dosis del antibitico. Un ejemplo de esto es la resistencia de la Pseudomonas aeruginosa. a las bencilpenicilinas y al trimetoprin sulfametoxazol; bacilos gram negativos aerbicos a clindamicina.

La resistencia adquirida aparece por cambios puntuales en el DNA (mutacin) o por la adquisicin de ste (plsmidos, trasposones, integrones).

En el primero se dan casos tales como la transformacin de una Betalactamasa en una Betalactamasa de espectro extendido o como en el caso de mutaciones de los genes que codifican las porinas con el consecuente bloqueo del ingreso del antibitico al interior del microorganismo.

Existen otras denominaciones de resistencia como son:

Resistencia relativa o intermedia: ocurre un incremento gradual de la MIC (concentracin inhibitoria mnima) a travs del tiempo. Para obtener un efecto teraputico es necesario alcanzar niveles sricos y tisulares adecuados. La susceptibilidad o resistencia del germen es en este caso dependiente de concentracin.

Resistencia absoluta: sucede un incremento sbito en la MIC de un cultivo durante o despus de la terapia. Es inefectivo el incremento de la dosis clnica usual. Ejemplo de ello es la Pseudomonas spp. resistente a gentamicina y el Streptococcus pneumoniae altamente resistente a penicilina y uso de levofloxacina.

Seudorresistencia: ocurre una resistencia in vitro pero una gran efectividad in vivo. Se denomina tolerancia antibitica al fenmeno en el cual la diferencia entre la MBC (concentracin bactericida mnima) y la MIC es muy grande lo cual ocurre con relaciones MBC/MIC mayores de 8 lo que permite la persistencia del microorganismo.

Cul es el medio de cultivo ms utilizado para realizar un antibiograma?

Agar Mueller Hinton

Medio de cultivo nutritivo no selectivo que promueve el desarro llo microbiano. Por su composicin, ha sido recomendado por el Clinical and Laboratory Standards Institute (CLSI) antiguamente llamado National Committee for Clinical Laboratory Standards (NCCLS), para ser utilizado en forma rutinaria en la realizacin del antibiograma en medio slido, debido a que presenta buena repro ducibilidad lote a lote en las pruebas de sensibilidad, su contenido en inhibidores de sulfonamidas, trimetoprima y tetraciclina es bajo, la mayora de los patgenos microbianos crece satisfactoriamente y una gran cantidad de datos adicionales que han sido evaluados y avalados usando este medio de cultivo.

Cuando se suplementa con sangre de carnero al 5%, permite rea lizar las pruebas de sensibilidad a los antimicrobianos en especies de estreptococos. Tambin, con el agregado de sangre puede utilizar se para el cultivo y aislamiento de microorganismos nutricionalmente exigentes.

CUESTIONARIO N 7Enumere a todos los Gneros y principales Especies de la Familia de las Enterobacterias.

ENTEROBACTERIAS Dominio:Bacteria

Filo:Proteobacteria

Clase:Gammaproteobacteria

Orden:Enterobacteriales

Familia:Enterobacteriaceae

Gneros:

Alishewanella Escherichia Pragia

Alterococcus Ewingella Proteus

Aquamonas Grimontella Providencia

Aranicola Hafnia Rahnella

Arsenophonus Klebsiella Raoultella

Azotivirga Kluyvera Salmonella

Blochmannia Leclercia Samsonia

Brenneria Leminorella Serratia

Buchnera Moellerella Shigella

Budvicia Morganella Sodalis

Buttiauxella Obesumbacterium Tatumella

Cedecea Pantoea Trabulsiella

Citrobacter Paracolobactrum Wigglesworthia

Dickeya Pectobacterium Xenorhabdus

Edwardsiella Phlomobacter Yersinia

Enterobacter Photorhabdus Yokenella

Erwinia Plesiomonas

Especies:

Escherichia: coli, alberti, alvei

Klebsiella: pneumoniae, oxytoca, granulomatis

Salmonella: choleraesuis

Enterobacter: aerogenes, cloacae, aglomerans, gergoviae, sakazakii

Serratia: marcencens

Hafnia: alves

Citrobacter: freundii, amalonaticus, diversus

Yersinia: pestis, enterocolitica, pseudotuberculosis

Proteus: mirabilis, vulgaris

Providencia: rettgeri, stuartii

Morganella: morganii

Shigella: dysenterii, flexneri, sonnei, boydei

Plesiomonas: shigelloides

Edwarsiella: tarda

Ewingella: americana

Seale a las enterobacterias que causan diarreas disentricas

Diarrea aguda inflamatoria o disentrica: Se caracteriza por la presencia de deposiciones con sangre, mucus y pus. Habitualmente son de alta frecuencia y de escaso volumen y se acompaan de pujo y tenesmo rectal. Adems tienen fiebre y dolor abdominal importante. Las causas ms frecuentes son: Shigella, Salmonella, E. Coli entero invasora, Yersinia. 1