CULTIVOSMétodos Tradicional y Automatizado

Dra. Susana PoggiLab. de Micobacterias “Dr. Abel Cetrangolo”Cátedra de Neumonología – Inst. “Dr. Raúl Vaccarezza”Hospital F.J. Muñiz.

CARACTERISTICAS DEL CULTIVO

• Complementa a la baciloscopía, pone en evidencia bacilos viables de la muestra (10 – 100 b/ml).

• Tiene mayor sensibilidad, es más compleja y más cara que la baciloscopía.

• Caracteriza los bacilos y permite diferenciar el M. tuberculosis del MOTT.

• Permite hacer ATB.• Tiene 100% de especificidad.• Es el método de referencia con el que se tiene que

evaluar todo nuevo método.

REQUERIMIENTOS QUE LIMITAN LA IMPLEMENTACION DE CULTIVOS

• Mayor dedicación del personal.

• Entrenamiento en prácticas de mayor riesgo biológico.

• Equipos de mediano y alto costo con mantenimiento asegurado.

• Laboratorio espacioso con direccionamiento y purificación del aire.

POBLACIONES MICROBIANAS EN LAS LESIONES DE LA TUBERCULOSIS HUMANA

FORMAS DE PRESENTACION SEGÚN MEDIO DE CULTIVO

• Formación de colonias en medio sólido (Löwenstein Jensen y Stonebrink).

• Turbidez en un caldo (Dubos).• Cambio de color en sensor incorporado

(MBBact) o emisión de fluorescencia (MGIT) cuando el bacilo libera CO2 o consume O2.

• Medición con isótopos radiactivos de CO2 (Bactec 460) liberado por las micobacterias y medido en una escala.

COMPOSICION DEL MEDIO DE LÖWENSTEIN-JENSEN

COMPOSICION DEL MEDIO DE STONEBRINK

COMPOSICION DEL MEDIO DE MIDDLEBROOK

PREPARACION DE MUESTRAS PARA REALIZAR CULTIVOS

• Muestras con flora acompañante decontaminar con NaOH al 4% (se puede agregar Nacetil-cisteína ) neutralización con SO4H2 al 12% lavado con agua (método de Petroff).

• Muestras tomadas asépticamente de sitio estéril: se siembran sin tratar y tratadas con el método de Petroff.

SEGUIMIENTO DEL CULTIVO

• Siembra Verde (ácido)

Amarillo (básico)

• A las 48 hs se tapa, se revisa que no hubiera contaminación.

• Revisar la estufa cada 7/10 días.

• Sacar los positivos e informar.

• Descartar los negativos a los 60 días.

LECTURA DE CULTIVOS

• Fecha en que se observó el cultivo.• Cuantificación de colonias

Positivo 1 a 19 colonias+ 20 a 100 colonias++ +100 colonias separadas+++ colonias incontables

• Morfología de las colonias(rugosas, lisas, otras características peculiares)

• Pigmentación(no pigmentada, amarillenta, anaranjada)

CARACTERISTICAS DEL BACILO

• La luz solar, la desecación y el calor son bactericidas.El fenol, formol, formalheido e hipoclorito de sodio son letales.

• Puede resistir a bajas temperaturas.(2 a 4º C hasta -70º C). También a ciertos desinfectantes como trifosfato de Na y a bases fuertes como el NaOH.

• Se divide cada 18/24 hs, es aeróbeo y una atmósfera de CO2 al 10% favorece su crecimiento.

IDENTIFICACION DEL M. tuberculosis

• Colonias rugosas, secas de color crema.

• Test de identificación positivo y NAP.

• Métodos moleculares (sondas).• Pruebas bioquímicas.

Niacina +Catalasa inhibida a 68º CNitratasa +Velocidad de desarrollo lenta.

MEDIOS LIQUIDOS

• Dubos Cepario Reactivación de cepas CIM

• Middlebrook Bactec MBBact Mgit