DETERMINACION DE TOXINAS EN MARISCOS POR CROMATOGRAFIA Esta prueba determina la presencia de toxinas diarreicas en mariscos, y se aplica fundamentalmente a los moluscos bivalvos como mejillones, ostras y almejas. La ingestin de estos mariscos contaminados por acumulacin de toxinas causa, en el ser humano, la Intoxicacin Diarreica por Mariscos (DSP). La prueba se realiza a partir de la masa carnosa de estos moluscos, que es sometida a un tratamiento con cido en caliente, para obtener un extracto donde se investiga la presencia de la toxina. Anlisis qumicos Cromatografa en capa fina La cromatografa en capa fina detecta las toxinas DSP. El procedimiento consiste en limpiar los extractos (cromatografa en columna de gel), aplicar las fracciones directamente sobre una placa de gel de slice y eluir con una mezcla de tolueno, acetona y metanol. Las toxinas DSP cidas se presentan como manchas poco intensas bajo luz UV. Los steres dilicos y las toxinas cidas libres aparecen como una mancha de un color rojo rosado caracterstico luego de rociar la placa con una solucin de vanilina en etanol y cido sulfrico concentrado y de dejarla en reposo a temperatura ambiente durante varios minutos. Los cidos libres son de color rojo rosado brillante y los steres dilicos del mismo color pero menos brillante. Con material limpio aplicado sobre una placa para cromatografa en capa fina el lmite es de 1 g de toxina, aunque es necesario contar con al menos 2 o 3 g si se trabaja con fracciones menos limpias (Hallegraeff. et al., 1995). Los lmites de deteccin algo altos constituyen una limitante a la utilizacin de la cromatografa en capa fina para la determinacin de las toxinas DSP. Cromatografa de gases Los mtodos con cromatografa de gases detectan y separan tambin las toxinas del AO(sustancia que causa diarrea). El procedimiento consiste en aislar las toxinas de los extractos de ter dietlico de cultivos de algas, posteriormente purificados con cromatografa de particin con fase invertida, cromatografa con permeacin sobre gel y cido saliclico. La cromatografa de gases de los derivados trimetilsillicos de toxinas y de steres metlicos intactos se realiza con detector de ionizacin de llama (Hungerford y Wekell, 1992). En la prctica esta tcnica se utiliza rara vez.

Cromatografa lquida El mtodo original de cromatografa lquida es una de las tcnicas analticas ms utilizadas en la determinacin del AO y de la DTX1 (sustancias que causan diarrea). El procedimiento consiste en la extraccin secuencial del tejido de marisco con metanol, ter y cloroformo; la derivatizacin con antrildiazometano (ADAM), y la determinacin por cromatografa lquida de alto rendimiento (HPLC) con detector de fluorescencia. El mtodo ADAM es muy sensible a las toxinas DSP y permite detectar 10 pg de un derivado del AO inyectado en la columna. Sin embargo, la concentracin mnima detectable en el tejido de marisco est limitada, no por la sensibilidad del detector, sino por la composicin qumica de la muestra que puede presentar grandes variaciones. En la prctica, el lmite de cuantificacin es de aproximadamente 100 ng/g de tejido. Este lmite, si solo se analizan glndulas digestivas, equivale a entre 10 y 20 ng/g de tejido entero de mejillones.

En la actualidad se contina trabajando en el desarrollo de distintos procedimientos analticos para la determinacin de toxinas DSP y algunos artculos de divulgacin recientes describen un amplio espectro de mtodos (Quilliam, 2001) y Suzuki et al. (2000) trabajaron especialmente con al AO, la DTX1 y utilizando CL acoplada a espectrometra de masas para obtener el perfil de toxinas DSP en bivalvos (vieiras y mejillones).