Detección de mutaciones con Detección de mutaciones con tecnología CLARTtecnología CLART

enen

Biopsia LíquidaBiopsia Líquida

I Simposio de Biopsia LíquidaDetección de Mutaciones en Biopsia Líquida

Biopsia LíquidaBiopsia Líquida

Detección de mutaciones con Detección de mutaciones con tecnología CLARTtecnología CLART®®

enen

Biopsia LíquidaBiopsia LíquidaBiopsia LíquidaBiopsia Líquida

2015 Considerada una de las 10 tecnologías más innovadoras del 2015 por la revista

Biopsia Líquida

I Simposio de Biopsia LíquidaDetección de Mutaciones en Biopsia Líquida

Considerada una de las 10 tecnologías más innovadoras del 2015 por la revista

Biopsia Líquida

Biopsia Líquida: ADNtc

3 biomarcadores:1. ADNtc2. CTC3. Exosomas

ADNtc

I Simposio de Biopsia LíquidaDetección de Mutaciones en Biopsia Líquida

Las células tumorales liberan pequeños fragmentos de ADN

Fácil análisis a partir de una muestra de sangre

ADNtc

Biopsia Líquida: ADNtc ¿utilidad?

Detección temprana de mutaciones asociadas a respuesta a tratamientos

I Simposio de Biopsia LíquidaDetección de Mutaciones en Biopsia Líquida

Detección de RESISTENCIAS a los fármacos administrados

Ver la heterogeneidad del tumor: DIFERENTES CLONES

¿utilidad?

Detección temprana de mutaciones asociadas a respuesta a

a los fármacos administrados

Ver la heterogeneidad del tumor: EVOLUCIÓN DE LOS

Retos Tecnológicos de la B

Extracción del ADNtc: separación del plasma y

Tipo de muestra a la que nos enfrentamos

I Simposio de Biopsia LíquidaDetección de Mutaciones en Biopsia Líquida

Sensibilidad y especificidad requerida

Viabilidad del ensayo en un entorno clínico

de la Biopsia Líquida

y extracción del ADNtc.

1. Extracción del ADNtc

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ADNtc

Punto crítico independiente de la técnica de detección:

Separar el plasma.

Requisitos a cumplir:Requisitos a cumplir:� Tiempo de procesamiento

� Centrifugaciones,

� Calidad del método de

extracción

Retos Tecnológicos de la B

Extracción del ADNtc: separación del plasma y

Tipo de muestra a la que nos enfrentamos

I Simposio de Biopsia LíquidaDetección de Mutaciones en Biopsia Líquida

Sensibilidad y especificidad requerida

Viabilidad del ensayo en un entorno clínico

de la Biopsia Líquida

y extracción del ADNtc.

2. Tipo de Muestra

ALTO NIVEL DE FRAGMENTACIÓN (180-200pb).

206pb óptimo para seguir con la adaptación de la tecnología CLART®

I Simposio de Biopsia LíquidaDetección de Mutaciones en Biopsia Líquida

la tecnología CLART®

Hemos determinado la viabilidad de nuestra tecnología teniendo en cuenta la fragmentación del ADNtc de estas muestras.

ADNtc vida media corta:

Manipulación de las muestras.

2. Tipo de Muestra: concentración y cantidad

23%

35%

5%-5ng/ul

20-100ng

0,05-0,5ng/ul1-10ng

10ng/ul200ng

I Simposio de Biopsia LíquidaDetección de Mutaciones en Biopsia Líquida

95% Pacientes: 1ng-100ng (0,05-5ng/ul)

Individuo sano: 1-4 ng (0,03-0,13ng/ul)

37%0,5-1ng/ul10-20ng

2. Tipo de Muestra: concentración y cantidad

Estandarizar CLART® para que se

adapte a todas las muestras de

ADNtc obtenidas desde 1.5-2 ml de

plasma:plasma:

• Concentración mínima ADNtc

• Cantidad ADNtc

Retos Tecnológicos de la B

Extracción del ADNtc: separación del plasma y

Tipo de muestra a la que nos enfrentamos

I Simposio de Biopsia LíquidaDetección de Mutaciones en Biopsia Líquida

Sensibilidad y especificidad requerida

Viabilidad del ensayo en un entorno clínico

de la Biopsia Líquida

y extracción del ADNtc.

3. Sensibilidad y Especificidad: EGFRTECNOLOGÍA

BIOPSIA SÓLIDASENSIBILIDAD

BIOPSIA SÓLIDACUALIFICACIÓN TÉCNICA

SENSIBILIDADBIOPSIA LÍQUIDA

qPCR INTERMEDIA

1%-5%

ARMS-PCR+qPCR INTERMEDIA

I Simposio de Biopsia LíquidaDetección de Mutaciones en Biopsia Líquida

1%-5%1%-5%

Por determinar el significado clínico

Compact qPCR INTERMEDIA

PCR DIGITALINTERMEDIA

CLART-EGFR(ARMS-PCRMicroarrays)

INTERMEDIA

3. Sensibilidad y Especificidad: EGFRSENSIBILIDAD

BIOPSIA LÍQUIDA

5%

� 40 dianas a determinar en un mismo

ensayo: exones 18, 19, 20, 21

�Incluimos un paso de pre-amplificación

específica para aumentar la sensibilidad,

y además te permite tener muestra

suficiente para repetir el ensayo o incluir

nuevas dianas en el mismo

5%determinar el

significado clínico

�Aumento de la sensibilidad en la

detección de la mutación T790M en el

paso posterior a la pre-amplificación

�Cualificación intermedia para la

realización de la técnica: fácil implantación

en un hospital.

Extracción y purificación del

ADN

Muestra

Tecnología CLART

Biopsia SólidaMultiplex-PCR

Amplification del ADN ARMs

I Simposio de Biopsia LíquidaDetección de Mutaciones en Biopsia Líquida

QiAmp DNA FFPE.2,5hs

Tejido incluidoen parafina o

fijado con formalina

2,5hs

Visualización de Microarrays

Tecnología CLART® / Biopsia Sólida

Mutación Resultado Controles

Exón 18 Negativo Conforme

G719C (c.2155 G>T) Negativo Conforme

G719S (c.2155 G>A) Negativo Conforme

G719A (c.2156 G>C) Negativo Conforme

del

Deleción exón 19 POSITIVO Conforme

Exón 20 Negativo Conforme

Inserción exón 20 Negativo Conforme

S768I (c.2303 G>T) Negativo Conforme

T790M (c.2369 C>T) Negativo Conforme

Exón 21 Negativo Conforme

L8561Q (c.2582 T>A) Negativo Conforme

L858R (c.2573 T>G) Negativo Conforme

Tecnología CLART®

Obtención del plasma a partir de sangre.

Extracción del ADN circulante a partir del plasma.Proceso de pre-amplificación:

+ sensibilidad+ especificidadDetección de las mutaciones en EGFR Detección de las mutaciones en EGFR

asociadas al Cáncer de Pulmón asociadas al Cáncer de Pulmón

I Simposio de Biopsia LíquidaDetección de Mutaciones en Biopsia Líquida

Multiplex específica de las mutaciones.

ARMS-PCR específicamutaciones en EGFR

Visualización en arraysdensidad (CLART®

Nuevo primer de amplificación para la mutación T790M

® / Biopsia Líquida

Extracción del ADN circulante a partir del plasma.

Pre-amplificación delos genes de interés.

Primersgenéricos de

los exones 18, 19, 20 y 21 de EGFR

amplificación:+ sensibilidad

+ especificidadDetección de las mutaciones en EGFR Detección de las mutaciones en EGFR asociadas al Cáncer de Pulmón asociadas al Cáncer de Pulmón NNo o MicrocíticoMicrocítico..

arrays de baja densidad (CLART® technology)

Plataforma CLART Strip®

(CS) en forma de tira de 8 pocillos

Lectura automática de los resultados.

de amplificación para la mutación T790M

3. Sensibilidad y Especificidad

CLART®

SENSIBILIDAD EN BIOPSIA LÍQUIDA: >95%

Habiendo al menos un 2-3% de mutación presente.

CLART®

SENSIBILIDAD EN BIOPSIA SÓLIDA: >95%

Habiendo al menos un 1-5% de mutación presente.

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PreAmp- CLART®

Objetivo: alcanzar la misma sensibilidad que tenemos en biopsia

sólida (1-5%) incrementando la sensibilidad en T790M (2%)

Objetivo: alcanzar la misma especificidad que tenemos en biopsia

sólida (>98%). No se han obtenido falsos positivos en Biopsia

Líquida

PreAmp- CLART®

Objetivo: alcanzar la misma sensibilidad que tenemos en biopsia

sólida (1-5%) incrementando la sensibilidad en T790M (2%)

Objetivo: alcanzar la misma especificidad que tenemos en biopsia

sólida (>98%). No se han obtenido falsos positivos en Biopsia

Líquida

3. Sensibilidad y Especificidad

MÉTODO CONTROL

NGS sensibilidad 1-5%(10ng muestra)

biopsia

biopsia

Biopsia

biopsia

biopsia

Biopsia

CALIDAD DEL RESULTADO ASEGURADO CON UNA

PROFUNDIDAD DE 15000 LECTURAS

CENTROS COLABORADORES

• HOSPITAL UNIVERSITARIO VALL D´HEBRON

• HOSPITAL CLINICO SANCARLOS

• HOSPITAL UNIVERSITARIO 12 DE OCTUBRE

• HOSPITAL UNIVERSITARIO PUERTA DE HIERRO

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CENTROS COLABORADORES

HEBRON

HOSPITAL UNIVERSITARIO 12 DE OCTUBRE

HOSPITAL UNIVERSITARIO PUERTA DE HIERRO

Retos Tecnológicos de la B

Extracción del ADNtc: separación del plasma y

Tipo de muestra a la que nos enfrentamos

I Simposio de Biopsia LíquidaDetección de Mutaciones en Biopsia Líquida

Sensibilidad y especificidad requerida

Viabilidad del ensayo en un entorno clínico

de la Biopsia Líquida

y extracción del ADNtc.

4. Viabilidad del Ensayo

Diagnóstico rápido y

específico desde 1,5-2 ml

plasma

Detección múltiple

varias dianas en un solo análisis

I Simposio de Biopsia LíquidaDetección de Mutaciones en Biopsia Líquida

Laboratorio de biología

molecular

4. Viabilidad del Ensayo

Detección múltiple de

varias dianas en un solo análisis

Alta Sensibilidad (2-

3%) y especificidad

(100%)

ADAPTABLE A LAS NECESIDADES DE LA CLÍNICA

Tiempo de procesamiento:

< 5 horas

4. Viabilidad del Ensayo

CUALIFICACIÓN DEL PERSONAL PARA LLEVARLO A CABO.

Técnico de laboratorio

(adición de

muestra, lavados

similares a la técnica

ELISA).

Interpretación

automática de

resultados

Equipo automático

que procesa hasta

96 muestras

PCR.

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ELISA). PCR.

4. Viabilidad del Ensayo

CUALIFICACIÓN DEL PERSONAL PARA LLEVARLO A CABO.

Equipo automático

que procesa hasta

muestras desde

PCR.

FLEXIBILIDAD PARA AÑADIR NUEVAS DIANASFLEXIBILIDAD PARA AÑADIR NUEVAS DIANAS

COSTE DEL ENSAYO

PCR.

30-40% inferior al de tecnologías similares30-40% inferior al de tecnologías similares

CLART® CMA EGFR: Disponible en biopsia líquida

Detección y diferenciación de 40 mutaciones puntuales,

en pacientes con cáncer de pulmón no microcítico.

CLART® CMA KRAS·BRAF·PI3K:

Detección y diferenciación de 15 mutaciones puntuales asociadas a

metastásico.

CLART CMA oncología

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metastásico.

CLART® CMA NRAS·iKRAS:

Detección y diferenciación de 10 mutaciones puntuales asociadas a

metastásico.

CLART® CMA BRAF·MEK1·AKT1:

Detección y diferenciación de 6 mutaciones puntuales asociadas a respuesta a

Disponible en biopsia líquida

y diferenciación de 40 mutaciones puntuales, deleciones e inserciones asociadas a respuesta a terapia

y diferenciación de 15 mutaciones puntuales asociadas a respuesta a terapia en pacientes con cáncer de colon

y diferenciación de 10 mutaciones puntuales asociadas a respuesta a terapia en pacientes con cáncer de colon

y diferenciación de 6 mutaciones puntuales asociadas a respuesta a terapia en pacientes con melanoma.

Rutina de diagnóstico según el modelo ACCE para la evaluación de

genéticos

Criterio

ACCE.

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ACCE.

Ético, Legal y Social.

Rutina de diagnóstico según el modelo ACCE para la evaluación de test

genéticos.

Grado de precisión por el que un test detecta la presencia o ausencia de una mutación.

¿Son las variantes destinadas a ser identificadas por el test ¿Son las variantes destinadas a ser identificadas por el test asociadas con la enfermedad?

Cómo puede ser gestionado el riesgo de enfermedad

Ético, Legal y Social.

Gracias por su atenciónGracias por su atención

GENOMICA S.A.U.

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GENOMICA S.A.U.Parque Empresarial Alvento, Edificio B

Vía de los Poblados 1, 1ª28033-Madrid

Tel: 91 674 8 990www.genomica.com

Gracias por su atenciónGracias por su atención