Desarrollo de mtodos de ensayo cpsulas maleato de enalapril por espectrofotometra de absorcin en el ultravioleta

Desarrollo de la metodologa de ensayo para cpsulas Enalapril Maleato en espectrofotometra de absorcin en el ultravioleta porRecibido el 04/05/2009Aceptado en 11/02/2011Irene Clemes Klkamp1 * , Bianca Ramos Pezzini2 , Luiz Alberto Kanis3 , Marcos Antonio Segatto de Silva4

1 Universidad Federal de Rio Grande do Sul , RS , Brasil2 Universidad de la Regin de Joinville, SC , Brasil3 Universidad del Sur de Santa Catarina , SC , Brasil4 Universidad Federal de Santa Catarina , SC , Brasil

RESUMENEl objetivo de este estudio es validar un mtodo simple mediante espectrofotometra de absorcin ultravioleta para la determinacinmaleato de enalapril , tambin es aplicable al ensayo de cpsulas de la droga . Los parmetros evaluados fueron : linealidad, precisin, exactitud y especificidad , a raz de las recomendaciones de la legislacin brasilea. Se obtuvo el espectro de absorcin entre 200 y 300 nm para identificar la longitud de onda de absorcin mxima ( 202 nm ) . La linealidad fue evaluada por regresin lineal de la curva de calibracin ( 8 a 28 g / ml ) . El mtodo mostr un coeficiente de variacin dentro de plazo y entre distintas series por debajo de 1 y 5%, respectivamente. El porcentaje de recuperacin obtenido en el mtodo de adicin estndar era cerca de 100 % , lo que indica la exactitud del mtodo . La especificidad del mtodo se verific en presencia de excipientes , en cpsulas . Los resultados de la medicin de las cpsulas tenan un alto porcentaje de acuerdo ( 101,14 % ) en comparacin con los obtenidos por el mtodo previamente validado por cromatografa lquida de alta eficiencia . Las cpsulas analizadas por el mtodo propuesto mostraron adecuada uniformidad de contenido . El mtodo de anlisis validado en este trabajo es una innovacin y mejora de las tcnicas para la determinacin de maleato de enalapril, tambin puede ser aplicado a la cuantificacin de la droga en cpsulas.

Palabras clave : Riqueza , espectrofotometra UV , maleato de enalapril

RESUMENEl objetivo de este trabajo es validar un mtodo simple mediante espectrofotometra de absorcin ultravioleta para la determinacin demaleato de enalapril, y tambin para analizar este medicamento en cpsulas. Los parmetros evaluados linealidad , eran de precisin , exactitud y especificidad, acuerdo con la ley brasilea recomendacin . El espectro de absorcin entre 200 y 300 nm se obtuvo para identificar la longitud de onda de absorcin mxima ( 202 nm ) . La linealidad fue evaluada por regresin lineal de la curva analtica ( 8 a 28 g / ml ) . El mtodo que presenta coeficientes intra e inter- run de variacin de menos del 1 y 5%, respectivamente . El porcentaje de recuperacin Obtenido a partir del mtodo de adicin estndar era cerca de 100 % , proporcionando la exactitud del mtodo . La especificidad fue verificada en presencia de los excipientes cpsulas . Los resultados del ensayo de cpsulas presentadas porcentaje de concordancia alta ( 101,14 %) en comparacin con los obtenidos a partir del mtodo validado anterior por cromatografa lquida de alto rendimiento. Las cpsulas analizadas por el mtodo propuesto presenta uniformidad de contenido adecuado. El mtodo validado de anlisis en este trabajo representa una innovacin y mejora de las tcnicas de anlisis cuantitativos de maleato de enalapril y tambin se puede aplicar para analizar dicha droga en cpsulas.

Palabras clave : ensayo analtico , espectrofotometra ultravioleta , Enalapril maleato

* Contacto: Irene Clemes Klkamp de la Facultad de Farmacia de la Universidad Federal de Ro Grande do Sul (UFRGS ) , Porto Alegre , RS, Brasil, e- mail:irene@ufrgs.br

INTRODUCCIN

En este trabajo se propone una metodologa para la determinacin de enalapril, un profrmaco, inhibidores del ECA . El mismo est disponible comercialmente en forma de maleato de enalapril ( CAS : 76095-16-4 ) y difiere estructuralmente por la presencia de enalaprilato un grupo etoxicarbonilo en lugar de un grupo carboxlico en la posicin 1 de 1 - alanil - 1 - prolina , ms la presencia de la sal de maleato ( Figura 1 ) . Estos cambios estructurales resultan en un aumento de la absorcin gastrointestinal en comparacin con enalaprilato enalapril , que se absorbe mal por el tracto gastrointestinal ( Delgado , 1998 ; Silva , 2002 ) .

Figura 1 . Estructura qumica de maleato de enalapril( A) y enalaprilato ( b )

La droga tiene monografa oficial de la Farmacopea de Estados Unidos, britnicos, portugueses y brasileos . La Farmacopea Britnica y portugus mtodo de ensayo que se presente para que el frmaco valoracin potenciomtrica en medio acuoso, mientras que la Farmacopea de Estados Unidos indica Cromatografa lquida de alta resolucin (HPLC ) . ( Portugus , 2003 Farmacopea , USP, 2008 ; Farmacopea Britnica ,2008 ) . La Farmacopea brasilea presenta como la valoracin potenciomtrica y mtodos de ensayo de HPLC ( Brasil 2010 Farmacopea ) . Hay varios mtodos descritos usando HPLC para la determinacin de enalapril solo o en composiciones farmacuticas (Al - Omari et al , 2001 ; . Stanisz , 2003 ; Bhushan et al , 2006 ; . Bonazzi et al , 2007 ) ..

Otros mtodos se han descrito para la determinacin de maleato de enalapril , por ejemplo , diferencial polarografa de pulso ( Elmali et al . , 2003 ) y electroforesis capilar ( Hillaert y Bossche , 2001 ) . Algunos trabajos abordan el desarrollo de mtodos espectrofotomtricos en el ( UV ) regin ultravioleta por tcnicas indirectas , tales como reacciones de oxidacin , el emparejamiento de iones y la formacin de complejos con enalapril colorimtrico ( Kato , 1985 ; Ayad et al , 2002 ; .. Ayad et al , 2003 Shama et al. , 2011 ) . Espectrometra UV se describe para el anlisis simultneo de enalapril y los comprimidos de losartn (Thomas et al. , 2009 ) y espectrofotometra UV derivado para la determinacin de la materia prima maleato de enalapril y formas farmacuticas ( Bonazzi et al. , 2007 ) , o incluso en combinacin con otros frmacos ( Walily et al , 1995 ; . Prasad et al , 1999 . ) .

Sin embargo, ningn mtodo por espectrofotometra de la absorcin UV se encontr para la lectura directaaislado para la determinacin de maleato de enalapril como una sustancia pura o se transporta en cpsulas . El objetivo de este trabajo es presentar un mtodo simple, preciso y exacto para la determinacin de la droga maleato de enalapril con adecuada para la dosificacin de cpsulas por UV especificidad espectrofotometra de absorcin , a pesar de la baja capacidad de absorcin molar del frmaco.

MATERIALES Y MTODOS MaterialesEl patrn de trabajo utilizado fue comprado al proveedor de Galena ( Brasil ), perteneciente al lote 20010405 y declar contenido igual a 99,80 %. La identidad de la norma de trabajo fue confirmado por anlisis de infrarrojos y el contenido fue confirmado por valoracin potenciomtrica ( Farmacopea Britnica , 2007 ) , debido a que es un mtodo absoluto que no requiere de la sustancia de referencia , y HPLC.

La materia prima utilizada para las pruebas de dosificacin y manejo de las cpsulas fue adquirido al proveedor de Galena ( Brasil ) para el lote 5111-00 -042- A y el contenido declarado igual a 99,60 % . Las soluciones se prepararon con agua destilada de grado analtico y reactivo de cido clorhdrico .

Se prepararon cpsulas que contienen el equivalente de 36020 mg de enalapril en forma de maleato de enalapril , el mtodo de encapsulacin por llenado manual y tapado . Los excipientes utilizados y sus cantidades fueron: bicarbonato de sodio ( 5 % w / w ) lauril sulfato de sodio ( 1 % w / w ) , estearato de magnesio ( 1 % w / w ) , dixido de silicio coloidal ( 1 % w / w ) y lactosa ( 82 % w / w ) . La proporcin del frmaco correspondiente al 10 % ( w / w ) de la formulacin . Esta misma composicin y proporcin de excipientes se utilizaron en la preparacin de placebo se utiliza en las pruebas de validacin .

equipo

Un espectrofotmetro bomen Hartmann & Braun, Modelo MB - 100 , para los anlisis en la regin del infrarrojo y un espectrofotmetro modelo Shimadzu UV - 1601PC , se utiliz para la exploracin espectrofotomtrica en el intervalo de 300-200 nm . Todo otro modelo lambda epectrofotomtricas anlisis 10 se realizaron en un espectrofotmetro Perkin - ElmerUV / VIS . Los anlisis de HPLC se llevaron a cabo en un equipo Shimadzu , que comprende una bomba LC -10AD VP y UV- Vis detector SPD- 10AV VP , controlados por el regulador SCL- 10AVP , acoplado a una computadora Mega Corp, y operados por el programa Class- VP .

Preparacin de soluciones estndar y obtener el espectro de absorcin UV

Una solucin madre que contiene 1 mg / ml se preparde la solucin patrn de trabajo de cido clorhdrico en 0,1N. Esta solucin madre se us para preparar el

solucin de ensayo a una concentracin de 20 g / ml usando el mismo vehculo . Obtenido el espectro de absorcin en la regin UV entre 300 y 200 nm de la solucin de ensayo que contiene 20 g / ml de la droga para determinar la longitud de onda a la que la absorcin es ms grande .

Validacin del mtodo

Se determin la linealidad , rango , exactitud , precisin y especificidad del mtodo . A partir de diluciones de la solucin madre para la construccin de una curva de calibracin en el rango de 8 a 28 g / ml (n = 11 ) fueron hechas . La absorbancia de cada punto se midi en tres das diferentes por triplicado para cada da , en una longitud de onda igual a 202 nm . La ecuacin de la recta se determina a partir de la media de las lecturas de los tres das . La curva analtica se utiliz para determinar el contenido de maleato de enalapril .

Se evalu la linealidad por clculos de regresin lineal de los tres rplicas de la curva de calibracin por el mtodo de los mnimos cuadrados . Los datos obtenidos a partir de la regresin lineal matemtico se utiliz para estimar el grado de linealidad . Los clculos se realizaron el coeficiente de correlacin , la ecuacin de la recta con su pendiente y la interseccin del eje y. La pista tambin fue uno determinado a partir del estudio de parmetro de linealidad .

Para estimar con precisin los parmetros intra - e inter- run run de precisin de repetibilidad y precisin intermedia , respectivamente , se evalu . Repetibilidad se evalu a partir de 6 determinaciones en concentracin de ensayo ( 20 mg / ml) . Para evaluar la exactitud de inter -run esta prueba se repiti por triplicado , la evaluacin de la precisin intermedia a partir del coeficiente de variacin entre los tres das de anlisis diferentes .

La precisin en la determinacin de la materia prima se analiz por el porcentaje de recuperacin obtenido a partir de una cantidad conocida de estndar de trabajo aadido a la muestra de las materias primas , utilizando tres concentraciones diferentes con determinaciones por triplicado para cada uno. De una solucin madre de 100 g / ml enalapril , se hicieron diluciones en solucin de cido clorhdrico 0,1 N a fin de lograr una concentracin final de 12 g / ml . A partir de una solucin madre que contiene 100 g / ml de alcuotas de trabajo estndar se tomaron y se aade a las diluciones que contienen 12 g / ml de materia prima con el fin de obtener concentraciones finales de 16 , 20 y 24 g / ml .

La especificidad del mtodo fue verificada por comparacin de los resultados obtenidos en el ensayo de muestras de ensayo preparadas con la concentracin de las muestras en las que se aadi el excipiente equivalente a la cantidad presente en una cpsula . Anlisis estadstico se realiz mediante la prueba de ANOVA y Tukey. La adquisicin del espectro de absorcin en el ultravioleta ( 300 a200 nm ) placebo tambin se utiliz para evaluar el efecto de los excipientes en el anlisis .

Los resultados de la medicin de las cpsulas se compararon con los obtenidos por el mtodo de HPLC validado previamente : columna Lichrospher RP- 18 ( 5 m) x 1254mm . La fase mvil fue acetonitrilo / agua ( 20 : 80 ) se ajust a pH 3,8 con cido actico , con un flujo isocrtico de 1 ml / min . La deteccin se realiz con UV215 nm .

La aplicacin del mtodo para la determinacin de cpsulas

Se determin la uniformidad de contenido de las cpsulas de ingeniera del mtodo propuesto y validado . Se realiz la prueba para el anlisis de uniformidad del contenido de 10 unidades de cpsulas individuales . Cada concentracin terica cpsula de 20 mg se someti a diluciones en serie en solucin de HCl 0,1 N , la obtencin de la concentracin terica final de 20 g / ml y se cuantific por 202 nm . Estas mediciones se realizaron por triplicado y el contenido de maleato de enalapril en cada cpsula calculado a partir de la curva de calibracin .

RESULTADOS Y DISCUSIN

Droga maleato de enalapril tiene la mxima capacidad de absorcin en el rango de longitud de onda del lmite inferior del espectro UV. Para seleccionar la longitud de onda se hara donde se obtuvo el anlisis del espectro de absorcin entre 200 y 300 nm en la regin UV de la solucin de ensayo . La solucin tena una mxima absorcin cerca de la longitud de onda de 202 nm , como se muestra en la Figura 2 .

Figura 2 . Espectro de Absorcin Infrarrojo ( 300-200 nm ) en el espectro UV de la solucin de la regin de prueba de maleato de enalapril .

Tanto la Agencia Nacional de Vigilancia Sanitaria (Brasil, 2003 ) como la gua de la Conferencia Internacional de Armonizacin (ICH , 2005 ) para la determinacin cuantitativa de un medicamento que no abogan por la necesidad de evaluar todos los parmetros de validacin , y la eleccin de los mtodos debe basarse en la finalidad prevista del mtodo . Dado que el mtodo propuesto tiene como objetivo la determinacin de maleato de enalapril en la materia prima y cpsulas , se han propuesto parmetros : linealidad , exactitud gama ,

precisin ( repetibilidad y precisin intermedia ) y especificidad.Tabla 2 . Anlisis de la precisin

se muestra en la Tabla 1 . Los coeficientes de variacin entre el Inter - da linealidad de los puntos de la curva estn por debajo de 5 % , tal como se recomienda ( Brasil , 2003 Randau , 2005 ) .

Tabla 1 . Los datos de la curva de calibracin : absorbancia medio , la desviacin estndar y el coeficiente de variacin

inter - raza 99,65 0,91 0,92

El porcentaje medio de recuperacin obtenido en el mtodo de adicin estndar de trabajo, fue cercano al 100% , como se muestra en la Tabla 3 , que indica la proximidad a el verdadero valor y la precisin del mtodo (Brasil,2003 ) .

concentracin( g / ml ) Absorbancia(Promedio ) DesviacinCoeficiente estndarvariacin

Tabla 3 . Prueba de Recuperacin para Maleato(% ) Enalapril obtenidos por espectrofotometra de absorcin8 0,320 1,54 0,0049 UV

1012 0.4450.536 0.00910.0254 2.06Aadi 4.75 Estndar( mg / ml ) Estndarrecuperado (% ) Coeficientevariacin ( %)14 0.609 0.0102 1.67 4 105.66 0.01 1.0916 0,722 0,0314 4,35 8 97,50 0,03 3,1518 0,799 0,0323 4,04 12 97,76 0,01 0,8920 0.0411 0.889 4.63 4.65 4.64 Promedio 100,2922 0,999 0,0466 4,66 Cada valor representa la media de tres determinaciones24 1.134 0.0148 1.3126 0,0148 1,20 1,237 El mtodo de anlisis mostr especificidad para28 4,87 1,304 0,0635 presencia de excipientes examin , como puede serCada valor es la media de tres mediciones realizadas en das diferentes.

La ecuacin resultante de la lnea de regresin lineal de los datos presentados pendiente igual a 26,51 y el coeficiente lineal de 0,037 . El coeficiente lineal cerca de cero es una adicional para hacer la linealidad de los criterios del mtodo . El coeficiente de correlacin determinado fue 0,99868 (R2 = 0,99736 ) . ANVISA aboga por un coeficiente mnimo de correlacin de 0.99 para dar fe de la linealidad del mtodo (Brasil, 2003 ) .

La Tabla 2 muestra el coeficiente de variacin para la determinacin de la concentracin de las soluciones de maleato de enalapril a una concentracin de 20 g / ml llevado a cabo en tres das diferentes y cada da por sextuplicado . Las seis determinaciones realizadas cada da mostraron coeficiente de variacin inferior al 1% , con buena precisin intra - run ( repetibilidad) . Del mismo modo , los coeficientes de variacin entre las diferentes carreras fue0,92 % , con una buena precisin intermediamtodo . La precisin dentro de plazo, tambin llamada repetibilidad , precisin expresa las mismas condiciones de funcionamiento dentro de un mismo da , mientras que la precisin inter -run expresa la variacin en diferentes condiciones, tales como la variacin de la jornada de anlisis. Estos valores estn de acuerdo con el mtodo recomendado por la ANVISA , que no admite ninguna variacin de ms del 5 % (Brasil, 2003 ) .visto en la figura que muestra el espectro de absorcinlos excipientes ( Figura 3 ) . El anlisis mediante la prueba de ANOVA y de Tukey mostr ninguna diferencia estadsticamente significativa entre las muestras en la ausencia y presencia de excipientes utilizados ( Tabla 4 ) .

Figura 3 . Espectro de absorcin infrarrojo ( 200-300 nm ) en la regin UV de la solucin de placebo

Adems , los resultados se compararon con los obtenidos por HPLC para el mismo lote de cpsulas . La determinacin de las cpsulas por HPLC mostr un contenido promedio de 98,70 % , presentando as un porcentaje de 101,14 % de concordancia con los resultados obtenidos por espectrofotometra ultravioleta ( 97,58 % , como se muestra en la Tabla 5 ) . Es de destacar , sin embargo , que el

especificidad del mtodo en presencia de productos de degradacin y sustancias relacionadas no se ha evaluado especficamente , y la especificidad fue evaluado slo en presencia de excipientes . Cabe sealar tambin que los relativamente altos coeficientes de variacin puede ser debido a la longitud de onda de anlisis, que es susceptible de variaciones , tales como disolvente de interferencia , en vista de las longitudes bajas anlisis de la especificidad de onda inferior , ya que la absorcin de diferentes grupos funcionales puede ocurrir en la misma regin .

Tabla 4 . Especificidad de la prueba para la concentracin de maleato de enalapril en el ensayo en presencia de excipientes cpsulas *CONCLUSIN

La determinacin de maleato de enalapril por espectrofotometra de absorcin UV mostr linealidad en el intervalo dado, as como la exactitud , precisin y especificidad y se puede aplicar de forma sencilla y rpidamente . No se tcnicas de aislamiento determinacin de maleato de enalapril se encontraron como una sustancia pura o en cpsulas por espectrofotometra UV directa . Las tcnicas descritas anteriormente utilizando complejo colorimtrico , derivacin de los resultados o el enfoque sobre la determinacin simultnea de enalapril y otras drogas . Por lo tanto , la validacin de la tcnica presentada en este trabajo es una innovacin y la mejora de tcnicas de ensayo para este frmaco , y tambin se puede aplicar para el ensayo de cpsulas .

Enalapril ( materia prima )

Enalapril ( materia prima en la presencia de excipientes )

F - valor de p - valor

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* N = 3 , p < 0,01

Las cpsulas analizadas por el mtodo propuesto tenan buena uniformidad de contenido , como puede verse a partir de los resultados en la Tabla 5 . Existen especificaciones de la farmacopea de los contenidos de las cpsulas maleato de enalapril . Sin embargo , los resultados de la determinacin de las concentraciones individuales de cada cpsula se encontraban dentro de los lmites especificados por la Farmacopea de los comprimidos de maleato de enalapril , que es de 90 a 110 % del contenido declarado (USP ,2005 ) .

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