Ensayos de las vias de

inoculación del huevo

fértil Practica no. 6

Objetivos

Determinar la viabilidad del embrión al ovoscopio .

Dominar las técnicas comúnmente utilizadas para la

inoculación de huevos fértiles de ave.

Diferenciar las estructuras embrionarias observando la

organización de los tejidos fuera de su cutícula.

Se reconoce el embrión que esta vivo porque en la transiluminación se ven

como telaraña

venas que forman la membrana corioalantoidea y se observa que se

desplaza un punto negro intermitente (el ojo).

Al morir, los vasos se desintegran y este

yace fijo al polo superior del huevo.

A medida que aumenta de tamaño

disminuye el volumen de los líquidos

extraembrionarios

Se emplean huevos con 5 a 14 días de incubación,

según la vía de inoculación:

Membrana corioalantoidea

Cavidades alantoidea y amniótica

Saco vitelino

Intracerebral

Endovenosa.

UTILIDAD: Es una fuente de tejido vivo conveniente y fácil de manipular que se

utiliza en la propagación, titulación e identificación de virus, así como en la preparación de algunas vacunas virales.

MIXOVIRUS-Influenza

-Parotiditis

POXVIRUSViruela

HERPESVIRUSHerpes simplex

Huevo fértil

Material

Huevos fértiles de ave de 10 días de

inoculación (+/- 1 día), calidad ALPES.

Ovoscopio y pinzas de disección

Recipiente para recibir desechos

Charola porta embriones

Perforadores, bulbos y lápiz.

Jeringas de insulina

Agujas de 20 x 38 mm.

Colorantes

CONFIRMACIÓN DE LA VIABILIDAD DEL EMBRIÓN

Transluminar cada embrión colocando el

extremo romo en la ventana del ovoscopio.

Un embrión no viable puede reconocerse a

través de:

Desprendimiento de la membrana

corioalantoidea de la parte interna de la

cutícula.

Falta de irrigación.

Falta de movimiento.

Cualquier coloración de verde a negra que

indica por lo general contaminación bacteriana.

VIAS DE INOCULACION

a Transluminar el huevo fértil con

ayuda del ovoscopio.

b Marcar un punto o cruz de 2 a 3

mm. por arriba del límite de la

cámara de aire del lado contrario

al embrión y en una zona

escasamente irrigada.

c Perforar la marca señalada.

d Con una jeringa que porte aguja

de insulina o tuberculina, inocular

en ángulo de 45 grados con

respecto al huevo fértil de ave.

Localizar la parte más alta del embrión

sobre la cámara de aire y marcar con un

punto o cruz.

b Marcar otro punto o guía que indicara

la localización del embrión.

c Perforar la marca señalada

d Introducir una aguja de 20 x 38mm

recta con ligera inclinación opuesta a la

localización del embrión

Localizar la parte más alta de la cámara de aire

y marcar un punto o cruz (*).

b Marcar otro punto en la parte media opuesta

a la localización del embrión en un área con la

menor irrigación posible.

c Perforar ambas marcas.

d Succionar con un bulbo de goma a través del

punto marcado en la primera posición (*),

creando así una cámara de aire falsa en la parte

media del embrión.

e Inocular empleando jeringas con aguja de

insulina o tuberculina en el lugar que se

desarrolló la cámara de aire falsa.

MEMBRANA VIRUS TIPO DE

EMBRIÓN

CANTIDAD DE

INOCULACIÓN

SIGNOS DE

CRECIMIENTO

Saco vitelino Herpes simple

Neumonía y

Rickettsias

Se emplean

embriones de

5 – 8 días

0.2 – 1 ml Muerte

Cariolantoíes Herpes simple

Poxvirus

Sarcoma de Rous

Varicela

Virus de

Laringotraqueitis

aviar

Enfermedad de

Beyer

Se emplean

embriones de 10 –

12 días

0.1 – 0.5 ml Muerte

Pústulas

Pústulas

Focos o pústulas

fácilmente visibles

Alantoides Influenza

New Castle

Virus de la

bronquitis

infecciosa

Se emplean

embriones de

9 – 12 días

0.1 – 0.2 ml Hemoglutinación

Amniótica Parotiditis

Virus de la Gripe

7 – 15 días 0.1 – 0.2 ml Muerte

Intravenosa Virus de la

Leucemia

10 - 15 días 0.02 - 0.05 ml. Pústulas

Intracerebral Virus del herpes

Rabia

8 – 14 días 0.01 – 0.02 ml Alteraciones

cerebrales

VENTAJAS DESVENTAJAS

Control preciso y fino del medio ambiente

(fácil manipulación)

Caracterización y homogeneidad de la

muestra

Economía

No es necesario el espacio ni el cuidado

que requieren los animales.

Mantenimiento de los cultivos celulares.

Se pueden cuantificar aveces al correlacionar el

numero de pustulas con la dilución viral

inoculada. (Herpes y vaccinia).

Se emplea para preparar vacunas (influenza,

fiebre amarilla)

Aislamiento para diagnostico (viruela, herpes,

influenza)

Hacer ensayos de nuevos agentes virales

técnica sensible

calidad y costos

Inestabilidad

Apreciación difícil durante los tres

primeros días de edad del embrión