Practica de laboratorio

No.8

Enzimas Mitocondriales

Procedimiento Extracción y preparación de las enzimas y

coenzimas: Tomar una muestra de aproximadamente 5g de tejido libres de sangre

(hígado, pollo)

colocarlos en un mortero con arena lavada, macere cuidadosamente hasta formar una masa suave !

(pollo)

(hígado)

Adicione poco a poco tres porciones (cada una de 5ml) de buffer fosfatos hasta completar un volumen aproximado de 15ml.

Transfiera la mezcla a un erlenmeyer de 150ml y manténgalo en un baño con hielo durante 15 minutos, mezclando ocasionalmente.

Pase la muestra a tubos de centrífuga y centrifugue a 1500 rpm por 10 minutos, después de esto llevar a nevera el tubo o poner en hielo hasta su posterior uso

Prepare una serie de tubos debidamente marcados según las indicaciones de la Tabla 2.

Antes de agregar el extracto enzimático, deje los tubos incubando a 37ºC durante 10 minutos, y sin retirarlos del baño agregue el extracto enzimático, inmediatamente agite bien y coloque el aceite mineral. Tome como tiempo cero el momento en que colocó el extracto enzimático y anote el tiempo requerido para la decoloración de cada tubo. Anote los resultados de cada tubo.

Tiempo cero

Pollo

5 minutos

10 Minutos

15 Minutos

20 Minutos

Hígado 5 minutos

Hígado10 minutos

Hígado15 minutos

Hígado20 minutos