Facultad de Medicina de la Universidad Nacional de Trujillo

UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO

FACULTAD DE MEDICINA

ESCUELA DE MEDICINA

“Genotoxicidad de fenitoína en eritrocitos policromáticos

de Rattus novergicus cepa Holtzman”

TESIS

PARA OPTAR EL GRADO DE

BACHILLER EN MEDICINA

AUTOR:

ANGELA ESMERALDA EUSTAQUIO TUESTAS

ASESOR:

DRA. MARÍA LETICIA AMÉSQUITA CÁRDENAS

TRUJILLO- PERÚ

2015

Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación

Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/

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A DIOS, por haberme acompañado, y

guiado en cada etapa de mi vida, por ser

la fuerza que nunca me abandona.

A MI FAMILIA Y AMIGOS, por

brindarme su apoyo incondicional, por

creer en mí y estar conmigo en los

momentos difíciles.

A MI ABUELITA MARÍA, por sus

consejos y enseñanzas que me ayudaron

a ser una persona cada día mejor, por

representar en mí el ejemplo a seguir.



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AGRADECIMIENTO

Agradezco de manera muy especial a mi asesora de tesis, Dra. María Leticia

Amésquita Cárdenas, por todo el apoyo brindado, por los consejos y enseñanzas,

poniendo siempre a disposición sus conocimientos y experiencia como

investigadora, no sólo en la realización de esta tesis sino también en mi formación

como investigador por la exigencia y por ser siempre una mano amiga a quien

acudir.

Expreso mi más profundo agradecimiento a todas las personas que

participaron directa e indirectamente en la elaboración de esta tesis, a la Dra.

María Nimia Cruz Briceño y a mis amigos que siempre estuvieron y están

conmigo, a todos ellos, gracias.

Muchas gracias.



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ÍNDICE

RESUMEN………………………………………………………………………...i

ABSTRACT……………………………………………………………………….ii

INTRODUCCIÓN………………………………………………………………...1

MATERIAL Y MÉTODO………………………………………………………...3

RESULTADOS……………………………………………………………………8

ANÁLISIS Y DISCUSIÓN……………………………………………………...16

CONCLUSIONES……………………………………………………………….19

RECOMENDACIONES…………………………………………………………20

REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS…………………………………………...21



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RESUMEN

La investigación tuvo como objetivo demostrar la genotoxicidad de fenitoína en

eritrocitos policromáticos (EPC) de Rattus novergicus cepa Holtzman, mediante la

prueba de micronúcleos. Se establecieron cinco grupos de cinco especímenes cada

uno, un grupo control negativo (SSF), tres grupos experimentales tratados con

fenitoína (5, 7.5 y 10 mg/kg PC), los tratamientos a estos grupos fueron

diariamente por vía intraperitoneal durante 14 días; un grupo control positivo con

ciclofosfamida (50 mg/kg PC) tratado vía intraperitoneal por 24 horas. Se

determinó la frecuencia de EPC micronucleados en un total de 2000 por animal.

Los resultados muestran incremento significativo del índice de genotoxicidad de

fenitoína (4.62 ± 0.54, 5.39 ± 0.43, 5.49 ± 0.41) y ciclofosfamida (8.18 ± 0.29),

respecto al grupo control negativo (0.08 ± 0.15); se evidenció aumento

significativo de la frecuencia de EPC micronucleados en los individuos tratados

con fenitoína (92.4 ± 10.89, 107.8 ± 8.52, 109.8 ± 8.11) y con ciclofosfamida

(163.6 ± 5.77), en razón al grupo control negativo (1.6 ± 3.05), observándose

variación en el tamaño y número de micronúcleos.

Se concluye que fenitoína posee efecto genotóxico, reflejado en la presencia y alta

frecuencia de EPC micronucleados.

PALABRAS CLAVE: Genotoxicidad, prueba de micronúcleos, fenitoína, ratas.



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ii

ABSTRACT

The study aimed to demonstrate the genotoxicity of phenytoin in polychromatic

erythrocytes (PCE) of Rattus norvegicus strain Holtzman, through using

micronucleus test. Five groups of five specimens each one were established, a

negative control group (SSF), three experimental groups treated with phenytoin

(5, 7.5 and 10 mg / kg BW), treatments for these groups were intraperitoneally

during 14 days; a positive control group treated with cyclophosphamide (50

mg/kg BW) intraperitoneally for 24 hours. Micronucleated PCE frequency in a

total of 2000 per animal was determined.

The results show significative increase in genotoxicity rate of phenytoin (4.62 ±

0.54, 5.39 ± 0.43, 5.49 ± 0.41) and cyclophosphamide (8.18 ± 0.29) compared to

negative control group (0.08 ± 0.15); significative increase in the frequency of

micronucleated EPC in individuals treated with phenytoin (92.4 ± 10.89, 8.52 ±

107.8, 109.8 ± 8.11) and cyclophosphamide (163.6 ± 5.77), in proportion to

negative control group (1.6 ± 3.05) was evident, it was observed variation in the

size and number of micronucleus.

It was concluded that phenytoin has genotoxic effect, reflected in the presence of

high frequency of micronucleated PCE.

KEY WORDS: Genotoxicity, micronucleus test, phenytoin, rats.



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INTRODUCCIÓN

La integridad genética de la población humana se ve comprometida por la

gran actividad industrial que nos hace vulnerables a agentes genotóxicos, los que

conducen a aumentar la frecuencia de mutaciones. Los agentes genotóxicos

pueden ser físicos, biológicos y químicos1,2,3,4

; muchos de ellos causan daños

reproductivos como infertilidad y mutaciones que a su vez pueden ser letales o

no5,6

. Otros, producen mutaciones en células somáticas, que con el transcurrir del

tiempo puede conllevar a cáncer.

Dentro de la actividad industrial está la farmacoquímica, que muchas veces

produce fármacos que presentan efectos adversos y mutagénicos; caso de

cloroquina, acetaminofen, diazepam, ciclofosfamida, mitomicina, y fenitoína7. La

fenitoína, tiene una estructura química constituida por dos amidas cíclicas

sustituidas. (Fig.1)

Fig.1. Fenitoína

Asimismo, fenitoína es utilizada en la clínica por su eficacia contra

convulsiones parciales y tónico-clónicas, por su acción despolarizante que

bloquea los canales de sodio dependientes de voltaje, en crisis epilépticas;

también actúa a nivel de tejidos excitables, lo que justifica su uso como

antiarrítmico; y a nivel de células post y presinápticas solo a dosis elevadas7,8

. Sin

embargo, se ha reportado efectos adversos como toxicidad en hepatocitos y



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linfocitos, anemia aplásica, síndrome de Stevens-Johnson, eritrodermia y erupción

morbiliforme9-11

; esto podría deberse a que este fármaco al ser metabolizado en el

hígado por las enzimas citocromo P4502C9/10 y CYP2C19, genera un metabolito

inactivo derivado del parahidroxifenilo que, según reportes, causa aumento de

micronúcleos en fibroblasto deficientes de UDP-gluconosiltransferasa (UGT) en

ratas y embriones de ratón;12

y el óxido areno, metabolito activo, asociado con

efectos teratógenos en humanos y efectos mutágenos en bacterias7,13,14

.

Así, Rusen Dündaroz et al (2001) reportan mayor daño celular en mujeres

epilépticas tratadas con fenitoína respecto a aquellas tratadas con medicamentos

diferentes15

. Además, Martín-Calderón et al (2001), describen que del 10-30% de

las mujeres que reciben 100-800 mg/kg del fármaco en el primer trimestre del

embarazo presentan fetos con síndrome hidantoínico y defectos congénitos8. Sin

embargo, Griselda Fernández et al (2007) refieren que, a pesar del alto riesgo de

mutaciones fetales, se requiere de su uso durante el embarazo, puesto que las

convulsiones podrían ser potencialmente más dañinas para el producto16

.

La toxicidad reportada, la utilización amplia y a largo plazo de fenitoína, y

la vulnerabilidad del material genético; hacen imprescindible identificar la

potencialidad mutagénica en diferentes bioensayos17

, siendo el bioensayo estándar

de genotoxicidad, el test de micronucleos18,19

, el cual es el ensayo citogenético in

vivo más clásico, validado a nivel mundial como un biomarcador efectivo de daño

de ADN20

y reconocido por su alta sensibilidad, validez y bajo costo21,22

.

Por lo antes mencionado, el objetivo de la investigación es evaluar la

genotoxicidad de fenitoína en eritrocitos policromáticos de Rattus novergicus cepa

Holtzman, mediante la identificación y cuantificación de micronúcleos.



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MATERIAL Y MÉTODO

El tipo de diseño de investigación que siguió el estudio fue, el de estímulo

creciente con controles positivo y negativo

1. Material de estudio

1.1. Material biológico:

Constituido por 25 especímenes de Rattus novergicus cepa Holtzman de

01 mes de edad y con peso promedio de 250 gr., consanguíneos

obtenidos del bioterio del Instituto Nacional de Salud.

1.2. Material de prueba:

Experimental: Fenitoína a concentraciones de 5, 7.5 y 10 mg/kg PC, las

cuales fueron convertidas al peso del animal según la

guía de la FDA23

.

Control positivo: ciclofosfamida a concentración de 50 mg/Kg PC.

Control negativo: suero salino fisiológico (SSF) (01 ml).

2. Criterios de selección de la muestra:

2.1. Criterios de inclusión:

Especímenes machos de Rattus novergicus cepa Holtzman.

2.2. Criterios de exclusión:

Especímenes hembras de Rattus novergicus cepa Holtzman

Especímenes que durante el periodo de aclimatación adquirieron alguna

enfermedad.

2.3. Criterios de eliminación:

Especímenes que murieron durante el periodo de experimentación.



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2.4. Criterios de reposición:

Especímenes que sustituyeron a aquellos que fueron eliminados durante

el periodo de experimentación, y que cumplieron con los criterios de

inclusión.

3. Variables

Cuadro 1. Variables según su domino, naturaleza y escala de medición

Genotoxicidad Fenitoína

Según su dominio Dependiente Independiente

Según su naturaleza Cualitativa Cuantitativa

Según su escala de

medición

Nominal De razón

4. Definiciones operacionales:

Genotoxicidad: Es la capacidad relativa de un agente de ocasionar daño en el

material genético, originando efectos biológicos adversos24

.

Fenitoína: Fármaco sintetizado que pertenece químicamente a una diamida

cíclica sustituida, y es ampliamente aplicada en la práctica clínica

por su eficacia contra todas las variedades de convulsiones

parciales y tónico-clónicas, pero no contra las crisis de ausencia7,8

.

Micronúcleos: Son diminutos cuerpos extranucleares procedentes de

fragmentos de cromátides/cromosomas acéntricos o



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cromátides/cromosomas enteros que se retrasan durante la

anafase de la división celular y no son incluidos en el núcleo

principal durante la telofase25

.

5. Método:

5.1. Mantenimiento de especímenes

Los especímenes fueron distribuidos por grupos en jaulas de 60 x 60 x 40

cm., según su peso y alimentados con ratonina y agua sin restricción,

bajo condiciones de temperatura y humedad convencionales, en el

laboratorio de Genética de la Facultad de Medicina de la Universidad

Nacional de Trujillo.

5.2. Tratamiento y vías de administración

Se constituyeron 05 grupos: 01 grupo control negativo, 01 grupo control

positivo y 03 grupos experimentales; de 05 especímenes cada uno,

tratados vía intraperitoneal durante 14 días.

El esquema de tratamiento fue el siguiente:

Grupo control negativo: se les inyectó 01 ml de SSF.

Grupo control positivo: 50 mg/Kg PC de ciclofosfamida

Grupos experimentales: a los que se les administró dosis de fenitoína a

concentraciones de 5, 7.5 y 10 mg/kg PC.

5.3. Obtención de preparados citológicos: Test de Micronúcleos

Para la obtención de micronúcleos (MN) se utilizó la técnica de Schimid

(1976)19

modificada, para ello, se sacrificaron los especímenes de cada

tratamiento, se realizó la disección de ambos fémures y luego se extrajo

la médula ósea en 10 ml de (KCl 0.7 %), en seguida se centrifugó a 1000



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r.p.m durante 10 minutos. El pellet se fijó en alcohol: ácido acético 3:1

(carnoy) por 10 minutos. Posteriormente se resuspendió y centrifugó; con

el pellet homogenizado, se realizó el goteo sobre las láminas portaobjeto

limpias, se dejó secar y luego se tiñó con Giemsa al 5%. Finalmente, se

dejó secar al ambiente y se analizó los preparados con el microscopio

óptico a 100X.

5.4. Análisis citológico

Para identificar los Micronúcleos (MN) presentes en los eritrocitos

policromáticos de médula ósea por efecto de la fenitoína se tuvo en

cuenta los criterios de identificación de Fenech (2000)26

quién establece

que los micronúcleos deben:

Ser menor de 1/3 del volumen del núcleo principal

Estar claramente separados del núcleo principal

Ser coloreados con la misma intensidad que el núcleo principal.

En los preparados citológicos de cada uno de los tratamientos se

cuantificó el número de eritrocitos policromáticos (EPC) portadores de

micronúcleos (EPC-MN) en un total 2000 (EPC) por animal. Se

determinó el índice de genotoxicidad como la relación de EPC-MN/EPC

total x 10027

.

5.5. Análisis e interpretación de la información

Los resultados fueron analizados mediante la prueba no paramétrica de

Kruskal-Wallis para determinar las diferencias significativas entre los

tratamientos, con un nivel significancia de 0,0528

. Se usó el programa

estadístico SPSS versión 18.



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5.6. Aspectos éticos

En la investigación se usó animales, con interés científico y bajo estricta

responsabilidad, teniendo en cuenta el principio de las “tres erres”:

reducir, reemplazar y refinar las técnicas empleadas para aminorar el

sufrimiento y daño del animal29

. No se violó ninguno de los principios

éticos establecidos para el trabajo con animales de experimentación30

.



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RESULTADOS

Al evaluar el efecto genotóxico de fenitoína en los eritrocitos

policromáticos de médula ósea de Rattus novergicus cepa Holtzman se observó,

incremento significativo del índice de genotoxicidad de las células tratadas con

fenitoína (4.62 ± 0.54, 5.39 ± 0.43, 5.49 ± 0.41) y ciclofosfamida (8.18 ± 0.29),

respecto al grupo control negativo (0.08 ± 0.15), mostrando que el índice de

genotoxicidad aumenta de manera proporcional a la concentración utilizada

(Tabla 1 y Fig.2).

Además, se evidenció un aumento significativo de la frecuencia de micronúcleos

en eritrocitos policromáticos de los individuos tratados con fenitoína (92.4 ±

10.89, 107.8 ± 8.52, 109.8 ± 8.11) y con ciclofosfamida (163.6 ± 5.77), en razón

al grupo control negativo (1.6 ± 3.05), como también se encontró que la

frecuencia de micronúcleos varía proporcionalmente a la concentración

administrada. (Tabla 2 y Fig. 3).

Por otra parte, se observó variación en el tamaño y número de los

micronúcleos presentes en los eritrocitos policromáticos de médula ósea, de los

individuos tratados con fenitoína y ciclofosfamida (Fig. 5 y 6).



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Tabla 1. Índice de genotoxicidad de tres concentraciones de fenitoína en

eritrocitos policromáticos de médula ósea de Rattus novergicus cepa

Holtzman.

Resultados estadísticamente significativos p< 0.05

Fuente: Datos hallados por el autor, FMUNT-2015

El índice de genotoxicidad de fenitoína aumenta de manera proporcional a la

concentración utilizada.

GRUPOS DE TRABAJO

N° DE

REPETICIONES

INDICE DE

GENOTOXICIDAD

(X ± DE)

Control negativo: Suero

salino fisiológico

5 0.08 ± 0.15

Control positivo:

Ciclofosfamida 50mg/kg PC

5 8.18 ± 0.29

Grupo

experimental:

Fenitoína

(mg/kg PC)

5 5 4.62 ± 0.54

7.5 5 5.39 ± 0.43

10 5 5.49 ± 0.41



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Fig. 2. Índice de genotoxicidad de tres concentraciones de fenitoína en eritrocitos

policromáticos de médula ósea de Rattus novergicus cepa Holtzman.

0.08

8.18

4.62 5.39 5.49

-2

0

2

4

6

8

10

12

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Tabla 2. Frecuencia de micronúcleos en eritrocitos policromáticos de médula ósea

de Rattus novergicus cepa Holtzman tratados con tres concentraciones de

fenitoína.

Resultados estadísticamente significativos p< 0.05

Fuente: Datos hallados por el autor, FMUNT-2015

La frecuencia de micronúcleos aumenta de manera proporcional a la

concentración de fenitoína utilizada.

GRUPOS DE TRABAJO N° DE

REPETICIONES

FRECUENCIA

(%)

(X ± DE)

Control negativo: Suero

salino fisiológico

5 1.6 ± 3.05

Control positivo:

Ciclofosfamida 50mg/kg PC

5 163.6 ± 5.77

Grupo

experimental:

Fenitoína

(mg/kg PC)

5 5 92.4 ± 10.89

7.5 5 107.8 ± 8.52

10 5 109.8 ± 8.11



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Fig.3. Frecuencia de micronúcleos en eritrocitos policromáticos de médula ósea

de Rattus novergicus cepa Holtzman tratados con tres concentraciones de

fenitoína.

1.6

163.6

92.4 107.8 109.8

-50

0

50

100

150

200

250

Mic

ron

úcl

eos



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Fig. 4. Eritrocito policromático normal de médula ósea de Rattus novergicus cepa

Holtzman. 1000X

Fuente: Coloración realizada por el autor, FMUNT-2015



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Fig. 5. Eritrocitos policromáticos de médula ósea de Rattus novergicus cepa

Holtzman tratados con fenitoína, mostrando micronúcleos en diferente

tamaño. (A, B, C, D, E) 1000X




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Fig. 6. Micronúcleos en diferente número y tamaño (A y B), por efecto de

fenitoína en eritrocitos policromáticos de médula ósea de Rattus

novergicus cepa Holtzman. 1000X




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DISCUSIÓN

Al determinar el efecto genotóxico de fenitoína en los eritrocitos

policromáticos (EPC) de médula ósea de Rattus novergicus cepa Holtzman se

encontró una alta frecuencia de EPC micronucleados en los especímenes tratados

con fenitoína (Tablas 1 y 2, Figuras 1 y 2), a diferencia de los EPC de los

especímenes del control negativo; estos resultados evidenciarían el efecto de los

metabolitos tóxicos de fenitoína como los epóxidos o iones carbonio, tal es el caso

del óxido areno, el cual tiene propiedad electrofílica, es decir, capacidad de unirse

covalentemente al ADN13

e inducir lesiones a nivel de los carbonos C5 y C6 de

las bases nitrogenadas, o también reaccionar con el nitrógeno N7 de las bases

púricas31

llevando a rupturas en los cromosomas, evidenciadas en la investigación

como micronúcleos; los daños en el ADN por estos metabolitos tóxicos también

fueron encontrados en mujeres epilépticas tratadas con este medicamento

mediante el ensayo cometa15

.

Asimismo, el efecto genotóxico del óxido areno de fenitoína, también ha

sido reportado in vitro en células de sangre periférica en humanos, en los que

encontraron supresión significativa de la actividad de las células natural killler

dependientes de la dosis; mostrando además, un leve pero significativo

incremento en las rupturas de una sola cadena de ADN de las células

mononucleares de sangre periférica expuestas a 40 µg/ml de fenitoína por 18 a 72

horas32

. Otro reporte acerca del efecto genotóxico de fenitoína es la prueba de

recombinación y mutación somática en alas (SMART) de Drosophila

melanogaster, en la que se encontró aumento de la frecuencia de manchas en las

alas a concentraciones por encima de 1.25 µg/ml de este medicamento33

. La



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presencia y la alta frecuencia de micronúcleos en los eritrocitos policromáticos de

los especímenes utilizados en la presente investigación, son similares a los

obtenidos en investigaciones realizadas en cloranfenicol, ciclofosfamida,

paracetamol, cloroquina, acetato de medroxiprogesterona; tanto en animales de

experimentación como en células humanas34,35,36,37,38,39

.

En la experiencia, las variaciones del tamaño de micronúcleos encontrados

en los EPC demuestran el comportamiento de la fenitoína como un compuesto

clastogénico y aneugénico. En diversos estudios realizado acerca de

genotoxicidad se han establecido que los compuestos clastógenos producen

micronúcleos pequeños, los cuales se forman como producto de roturas en la

hélice del ADN o fragmentos cromosómicos25,40,41,42

y los aneugénicos produce

micronúcleos grandes formados por cromosomas completos que no migraron por

alteraciones en las proteínas de los microtúbulos del huso mitótico, alteraciones en

las proteínas del cinetocoro, hipometilación de secuencias centroméricas o

paracentroméricas, y mutaciones en los genes cuyos productos participan en el

control de la anafase.25,40,41,43

En cuanto a la variación del número de micronúcleos observados en la

experiencia, se debería a que fenitoína no solo estaría produciendo daño en un

fragmento cromosómico o en un cromosoma completo, sino estaría afectando a

más de un cromosoma, tanto los fragmentos cromosómicos como los cromosomas

completos quedan incluidos en el citoplasma de las células hijas, debido a que se

retrasan durante la anafase en la división celular disminuyendo sus probabilidades

de integrarse a cualquiera de los núcleos hijos por sufrir cambios en las secuencias

nucleotídicas de ADN centromérico o en las secuencias génicas de proteínas



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centroméricas como las CEN-P que no le permiten asociarse al huso acromático;

mostrándose así uno o más micronúcleos, dependiendo del número de

cromosomas afectados.25,40,44,45

La alta frecuencia de EPC micronucleados encontrados en la presente

investigación reafirman el efecto genotóxico de fenitoína reportada por otros

investigadores quienes reportan que la genotoxicidad está mediada por productos

secundarios que interaccionan además del ADN, con los lípidos y proteínas, y a su

vez, puede estar interviniendo en los procesos de transcripción, replicación y

reparación del ADN, y por tanto, en el funcionamiento celular. Estos daños están

ligados a la muerte celular y a posibles efectos carcinógenos. Por lo tanto las

personas tratadas con este medicamento, presentan mayor riesgo de daños en su

genoma, debido a que la frecuente exposición a este medicamento puede conllevar

al desarrollo de cáncer en un individuo, en cualquiera de sus tejidos susceptibles.

Aun cuando en nuestra investigación se usó como organismo de prueba a

Rattus novergicus cepa Holtzman, el daño evidenciado en su ADN, muestra que

fenitoína es un fármaco de alto riesgo en humanos, puesto que la estructura del

material genético es similar en todos los seres vivos, por tanto nuestros resultados,

apoyados con otros estudios que reportan asociación predictiva entre la frecuencia

de micronúcleos y el desarrollo de cáncer36

, permiten advertir a la población del

riesgo de este medicamento para el genoma humano.



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CONCLUSIONES

De acuerdo a los resultados, se puede concluir que:

Fenitoína posee efecto genotóxico, reflejado por la presencia de EPC

micronucleados de Rattus novergicus cepa Holtzman.

Fenitoína induce a la alta frecuencia de EPC micronucleados en Rattus

novergicus cepa Holtzman, en relación a los EPC del grupo control

negativo.



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RECOMENDACIONES

Repetir la investigación del efecto genotóxico de fenitoína en cultivos

celulares humanos, utilizando la técnica de citometría de flujo.

Dar a conocer a la población del riego tóxico de fenitoína, para evitar el

uso indiscriminado de este fármaco o de cualquier otro.

Dar a conocer a las autoridades del riesgo genotóxico de fenitoína para el

tener en cuenta un estricto control en el uso de este fármaco, pudiendo

optar por otras alternativas de tratamiento.

Considerar el efecto tóxico de fenitoína, especialmente en el tratamiento

de mujeres epilépticas gestantes, porque puede traer consecuencias en su

producto.



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REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS

1. Repetto M, Repetto G. Toxicología Fundamental. 4a ed. Madrid. Ed. Díaz de

Santos; 2009. p: 329-336.

2. Gómez B. Modelo experimental para evaluar la genotoxicidad transferida por

leche materna durante la lactancia. [Tesis Doctoral]. Colima: Universidad de

Colima. Facultad de Medicina; 2009.

3. Solari A. Genética Humana. Fundamentos y Aplicaciones en Medicina. 4a ed.

Buenos Aires: Médica Panamericana; 2011.

4. Nussbaum RL, McInnes RR, Willard HF. Thompson & Thompson. Genética

en Medicina. 7a ed. Barcelona: Elsevier Masson; 2008.

5. Vega S. Evaluación epidemiológica de riesgos causados por agentes químicos

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ANEXOS



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ANEXO Nº 2

EVALUACIÓN DE LA TESIS

El Jurado deberá:

a. Consignar las observaciones y objeciones pertinentes relacionadas a los

siguientes ítems.

b. Anotar el calificativo final.

c. Firmar los tres miembros del Jurado.

TESIS:……………………………………………………………………………...

………………………………………………………………………………………

………………………………………………………………………………………

…………

1. DE LAS GENERALIDADES:

El Título

………………………………………………………………………….……..….…

………………………………………………………………………………..……..

Tipo de Investigación:

………………………………………………………………………….……..….…

………………………………………………………………………………….…...

2. DEL PLAN DE INVESTIGACIÓN:

Antecedentes:…………………………………………………………………….…

………………………………………………………………………………………

Justificación:..............................................................................................................

Problema:…………………………………………………………………………...

Objetivos:………………………………………………………………………...…

………………………………………………………………………………………

Hipótesis:……………………………………………………………………………

Diseño de Contrastación:

………………………………………………………………………………………

Tamaño Muestral:

………………………………………………………………………………………

Análisis Estadístico:

………………………………………………………………………………………

3. RESULTADOS:……………………………………………………………….

.………………………………………………………………………………….

4. DISCUSIÓN:………………………………………………………………..…

………………………………………………………………………………..…

……...………………………………………………………………………...…

……………..........................................................................................................

5. CONCLUSIONES:

…………………………………………………………………………………



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6. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS:

………………………………………………………………………………….

7. RESUMEN:……………………………………………………………………

…………………………………………………………………………………..

8. RELEVANCIA DE LA INVESTIGACIÓN:

………………………………………………………………………………..…

…..........................................................................................................................

9. ORIGINALIDAD:……………………………………………………………..

………………...………………………………………………………………...

10. SUSTENTACIÓN

10.1Formalidad:……………………………………………………………………

10.2 Exposici6n: …………………………………………………………………..

10.3 Conocimiento del Tema: …………………………………………………



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CALIFICACIÓN:

(Promedio de las 03 notas del Jurado)

JURADO: Nombre Código

Firma

Docente

Presidente: Dr.……………………........ …………………………...

Grado Académico: …………………………………………………………..

Secretario: Dr.………………………… …………………………...

Grado Académico: ……………………………………………………….….

Miembro: Dr….……………………… …………………………..

Grado Académico: …………………………………………………………..



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ANEXO Nº 3

RESPUESTAS DE TESISTAS A OBSERVACIONES DEL JURADO

El Tesista deberá responder en forma concreta de las observaciones del jurado a

manuscrito en el espacio correspondiente:

a) Fundamentando su discrepancia.

b) Si está de acuerdo con la observación también registrarla.

c) Firmar.

TESIS:………………………………………………………………………………

….………………………………………………………………………………...…

……….…………………………………………………………………………...…

…………….………………………………………………………………………...

1.- DE LAS GENERALIDADES:

El Titulo

………………………………………………………………………………………

….………………………………………………………………………………...…

………………………………………………………………………………………

Tipo de Investigación

………………………………………………………………………………………

………………………………………………………………………………………

2.- DEL PLAN DE INVESTIGACIÓN:

Antecedentes:……………………………………………………………………….

.……………………………………………………………………………………...

Justificación:………………………………………………………………………..

.……………………………………………………………………………………...

Problema:…………………………………………………………………………...

….……………….......................................................................................................

Objetivos:………………………………………………………………………...…

….………………………………………………………………………………...…

………………………………………………………………………………………

Diseño de Contrastación:..………………………………………………………….

Tamaño Muestral: …………………………………………………………………

Análisis Estadístico:……………………………………………………………….

3.- RESULTADOS:

…………………………………………………………………………………..

.…………………………………………………………………….....................

4.- DISCUSIÓN:

…………………………………………………………………………………..

.……………………………………………………………………………….…

……......................................................................................................................



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5.- CONCLUSIONES:…………………………………………………………….

.….…………………............................................................................................

..............................................................................................................................

6.- REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS:……….…...........................................

..............................................................................................................................

7.- RESUMEN:……………………………………………………………………

…………………………………………………………………………………..

8.- RELEVANCIA DE LA INVESTIGACIÓN:……………………………....

9.- ORIGINALIDAD:…………………………………………………………….

10.- SUSTENTACIÓN:…………………………………………………………. ..

10.1 Formalidad:…………………………………………………………

10.2 Exposición:…………………………………………………………

10.3 Conocimiento:……………………………………………………

………………………...........

Nombre

Firma



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ANEXO N° 6

HOJA PARA LA CALIFICACION DEL INFORME FINAL DE LOS

TRABAJOS DE INVESTIGACIÓN EN LA FACULTAD DE MEDICINA

DE LA UNT

INSTRUCCIONES:

Encerrar en un círculo la letra correspondiente a la valoración asignada a

cada ítem.

Cada ítem se calificará de la siguiente manera.

a = 1

b = 0.5

c = 0

I.- GENERALIDADES INFORME FINAL

1.1. El Título a b c

1.2. Tipo de investigación a b c

II.- PLAN DE INVESTIGACION

2.1. Antecedentes a b c

22. Justificación a b c

2.3. Problema a b c

2.4. Objetivos a b c

2.5. Hipótesis a b c

2.6. Diseño de contrastación de hipótesis

a b c

2.7. Tamaño muestral a b c

2.8. Análisis estadístico a b c

III.- RESULTADOS a b c

IV.-DISCUSIÓN a b c

V.- CONCLUSIONES a b c

VI.- REFERENCIAS BIBLlOGRÁFlCAS

a b c

VII.- RESUMEN a b c

VIII.- RELEVANCIA DE LA INVESTIGACIÓN

a b c

IX.-ORIGINALIDAD a b c



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X. SUSTENTACION

10.1. Formalidad a b c

10.2. Exposición a b c

10.3. Conocimiento del tema a b c

SUBTOTAL



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Calificación

a: x 1 =

b: x 0.5 =

c: x 0 =

NOTA:

Jurado:

_______________________________________________________________

_______________________________________________________________

_______________________________________________________________

IDENTIFICIÓN DE LA TESIS:

Nombre:

_______________________________________________________________

_______________________________________________________________

_______________________________________________________________

Autor:

_______________________________________________________________



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CONSTANCIA DE REVISIÓN DE INFORME DE TESIS

Yo, MARÍA LETICIA AMÉSQUITA CÁRDENAS, Profesora Asociada a

Tiempo Completo del Departamento Académico de Morfología Humana de la

Facultad de Medicina de la Universidad Nacional de Trujillo, ASESORA de la

tesis titulada: “GENOTOXICIDAD DE FENITOINA EN ERITROCITOS

POLICROMÁTICOS DE RATTUS NOVERGICUS CEPA HOLTZMAN”,

certifico que la tesis ha sido desarrollada de acuerdos a los objetivos propuestos

y que el informe ha sido revisado y acoge las observaciones y sugerencias

alcanzadas.

Por tanto, se expide la presente, para que la autora alumna Angela Esmeralda

Eustaquio Tuestas, identificada con número de matrícula 511801110, del sexto

año de Medicina, Facultad de Medicina, Universidad Nacional de Trujillo, siga

con los trámites correspondientes.

Trujillo, 06 de Noviembre del 2015

Dra. MARÍA LETICIA AMÉSQUITA CÁRDENAS

Asesora



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