Fase analítica. Interferencias analíticas. Control de calidad

interno y externo.

Shaila Rubio AriasFIR 2º Análisis Clínicos

Establecimiento del proceso analítico

– Cuando hablamos de proceso analítico nos referimos a procedimientos, instrucciones, materiales y equipamiento necesario para dar los resultados analíticos.

– En este proceso hay dos partes:• Procedimientos de medida• Procedimientos de control

• En general, para cualquier magnitud biológica que queramos establecer en el laboratorio hay que determinar las necesidades médicas y seleccionar un test que nos de información.

• Si existe un test de rutina, debemos evaluarlo y asegurar que su rendimiento analítico es adecuado y así poder proporcionar resultados útiles.

• Debemos participar en programas externos e internos de controles de calidad.

• Actualizar nuestro conocimiento.

Conocer la necesidad médica

Seleccionar y evaluar los tests diagnósticos

Establecer los requisitos de

calidad analítica

Seleccionar y evaluar el procedimiento

de medición

NO

SI

Determinación de errores de medición

Seleccionar

procedimiento de control

NO

Implementar el proceso

de análisisSI

Ejecutar elproceso analítico

de rutina

SI

Reevaluar las

necesidades

Modificarproceso

Estimación de

los errores

NO

NO

Rediseñarproceso

Rediseñarproceso

Resultados

Resultadoscontrol

¿Ejecución Analítica escorrecta?

Satisfacción delos usuarios

Cost-Effective Quality Control: Managing the Quality and Productivity ofAnalytical Processes. James O. Westgard

• Tipos de procesos analíticos– Proceso por lotes

• Ej.: métodos manuales, analizadores de un canal.

– Procesos simultáneos de lotes• Ej.: analizadores multicanal

– Procesos de acceso aleatorio.• Ej.: analizadores automáticos

• La calidad del proceso analítico puede ser descrito por su tasa de errores y la proporción de resultados que son errores clínicamente importantes.

• La productividad del proceso analítico puede ser descrito por el rendimiento de la prueba, la proporción de las mediciones y los resultados correctos.

Validación de métodos• Recomendaciones de la AACC/TDM:

• Precisión• Exactitud • Linealidad

• Sensibilidad• Interferencias

• Comparación de métodos

C. E. Pippenger, Dave Berry.TDM Roundtable Recommendations: Generic TDM Assay Validation Guidance http://www.aacc.org/resourcecenters/leadership/DivisAdmin/TDM/Documents/Final_Generic.pdf

– Exactitud: Acuerdo entre el estimado de una cantidad y su verdadero valor. Una cantidad conocida de fármaco puro es añadida y se valora el porcentaje de recuperación.

– Precisión(1): Grado de concordancia entre los resultados obtenidos al aplicar el proceso experimental repetidas veces, bajo las condiciones establecidas. Deben evaluarse al menos tres concentraciones que abarquen el rango de ensayo.

(1) NCCLS EP05-A

– Interferencia: Es el efecto que produce un componente en la exactitud de la medición del analito. Los efectos de los interferentes potenciales deben ser estudiados y observar si afecta al rendimiento del análisis.

– Comparación de métodos: Si no es posible compararlo con el método de referencia, realizarlo con el método disponible en nuestro laboratorio.

INTERFERENCIAS ANALÍTICAS

• Definición: Es el error sistemático producido por una sustancia distinta de la que se pretende medir en un procedimiento analítico.

• La cuantía de la interferencia depende de la concentración de la sustancia interferente y del método utilizado.

• Los usuarios sólo deberían realizar estudios de interferencias en aquellos casos en que introdujeran modificaciones apreciables en un procedimiento de medida, o cuando se considerase que la información del fabricantesea insuficiente.

• Posibles fuentes de interferencias:– Anticoagulantes y conservantes– Componentes endógenos:

• Bilirrubina: Falsos positivos de acetaminofeno con hiperbilirrubinemia.(1)

• Fibrina: Genera resultados incorrectos al precipitar en muestras que han estado refrigeradas mucho tiempo o han sufrido ciclos de congelación-descongelación.

(1) False-Positive Acetaminophen Results in a Hyperbilirubinemic Patient Clinical Chemistry 49:4 695–698 (2003)

– Determinaciones interferidas por fármacos:• Ginseng contiene componentes que tienen

una estructura muy similar a la digoxina.(1)

• Antiepilépticos deben evaluarse con sus metabolitos.

(1) Ashwagandha and Digoxin Assay—Dasgupta et al. Arch Pathol Lab Med Vol 131, August 2007

– Reacciones cruzadas con anticuerpos:• Paraproteina IgM: Su presencia nos puede dar

resultados falsamente bajos en la determinación de acetaminofeno.(1)

• Anticuerpos heterófilos: Su presencia nos puede dar resultados falsamente altos en la determinación de digoxina.(2)

(1) An IgM Paraprotein Causing a Falsely Low Result in an Enzymatic Assay for Acetaminophen. Clinical Chemistry 45, No. 1, 1999

(2) Therapeutic Drug Monitoring of Digoxin. Toxicol Rev 2006;25 (4); 273-281

CONTROL INTERNO

• Definición• Técnicas de CC para resultados

cuantitativos• Gráficos de Levey-Jennings• Reglas Westgard• Six sigma

• Definición:– El C.C interno asegura la precisión y la

reproducibilidad de los resultados del laboratorio.

– Los C.C. son sensibles a errores aleatorios y sistemáticos.

• Error aleatorio: la incapacidad de obtener el mismo resultado cuando se analizan muestrasidénticas.

• Error sistemático: Da una desviación de los resultados con respecto al valor verdadero.

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• Técnicas de CC para resultados cuantitativos– Se debe establecer la media y la diferencia fija a partir:

• de la media de los objetivos.• como un múltiplo de la desviación estándar de los resultados

del material de control a lo largo del tiempo.

– Típicamente se utilizan 20 resultados de control en al menos 5 procesos diferentes para establecer la desviación estándar.

– El valor de DE se usa para establecer los límites de control fijos (± 3 DE a partir de la media del objetivo).

– Los resultados se repre-sentan en un histograma de frecuencias, se puede ver que la distribución se asemeja a una distribución gaussiana o normal.

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• Gráficos de Levey-Jennings– Exponen datos del C.C. en el tiempo.– En el eje de abscisas está el tiempo y en

ordenadas las concentraciones de C.C (se centra en la media del objetivo con los límites de control superior e inferior marcados para una mejor visualización).

– Nos permite ver los resultados durante semanas o meses.

– Nos identifica tendencias.

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• Método CUSUM– Es el método de la suma acumulativa. Se calcula la

diferencia que aparece entre los resultados de CC y las medias.

– Los valores fluctuarán sobre cero o aumentarán lentamente a lo largo del tiempo. La magnitud de la fluctuación es pequeña.

– Sirve para identificar sesgos con mucha claridad. Pero no sirve en métodos poco precisos porque mostrará grandes fluctuaciones.

• Reglas múltiples: Westgard:– Westgard vio que al usar los límites simples de

control superior e inferior carecía de poder para identificar problemas analíticos.

– Para poder mantener una tasa aceptable en la detección de errores los límites de control deben ser estrechos y debe haber una frecuencia alta de análisis.

– Utilizando reglas múltiples se puedeincrementar las tasas de detección del error sin aumentar la tasa de rechazo falso.

– Nomenclatura:• Ab: A puede ser el número de resultados de control que

se necesitan para poner en práctica la regla o bien un rango. b es el símbolo que describen la estadística que se aplica a los resultados de control.

• Multirreglas de Westgard son:– 12S (resultado superior a 2 DE a partir de la media)– 13S (resultado superior a 3 DE a partir de la media)

– 22S (2 últimos resultados de control son mayores de 2DE)– R4S (la diferencia entre resultados control sucesivos es 4 DE)– 41S (últimos 4 resultados control sucesivos superan + 1DE o

son menores de – 1DE)– 10 (los últimos resultados control sucesivos están en el

mismo lado que la media)

xx

X

– Se aplican de forma secuencial.– Pueden modificarse añadiendo o quitando

reglas, cambiando los límites que actúan en una regla o cambiando el número de resultados control comprobados mediante las reglas.

– Cada modificación altera la tasa de detección del error y la tasa de rechazo falso.

• Algoritmos de Westgard

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• Six sigma– El criterio SIX SIGMA puede ser considerado como el

nivel de excelencia que deben alcanzar los laboratorios con un alto grado de automatización que incluya informática y robótica.

– SIX SIGMA: Tiene el nivel más elevado de exactitud equivalente a un nivel de seguridad de 99.9997% y representa un total de 3.4 errores por millón de unidades.

CONTROL EXTERNOS• Definición• Programas de evaluación externa de la

calidad– Controles establecidos por Sociedades Científicas

• AEBM-AEFA• SEQC

– Bio-Rad laboratories– UK NEQAS

• Definición: Es el procedimiento en el que se utilizan los resultados de varios laboratorios que analizan los mismos especimenes. Un organizador compara los resultados obtenidos mediante diferentes métodos para verificar si hay homogeneidad entre ellos.

• Son de frecuencia variable. • Nos dan la medida de la trazabilidad horizontal.• Permite comparar métodos analíticos para tomar

decisiones.• Verifican la imprecisión y la inexactitud de cada

laboratorio y del conjunto de laboratorios, acreditando la calidad de los participantes.– Inexactitud se cuantifica como el porcentaje de

desviación con respecto al valor diana.

Programa de evaluación externa de la calidad de bioquímica (suero) de la Sociedad Española de Bioquímica Clínica y Patología Molecular .

• Los laboratorios que desean participar deben inscribirse indicando su metodología e instrumentación para distribuirlos en grupos de laboratorios que operen en condiciones más afines.

• La totalidad de los resultados mensuales se procesan al final del año y se hace por medio de gráfica de Levey-Jenning.

• Se hace también un desglose semestral.

• Mensualmente:– Se analizan los viales que contienen un

homogeneizado de suero humano o animal.– Se envían los resultados y se introducen en el

sistema informático.– Se convierten a unidades del Sistema Internacional.– Con todos los datos se calcula el valor consenso y la

desviación estándar general.• Eliminando los valores situados fuera de ± 3 DE.

– Luego se calculan por métodosy por grupos.

• Se hace un calculo del grado de inexactitud para cada constituyente y cada laboratorio.

• Se expresa en % y en número de desviaciones estándar respecto de la media de su método.(mínimo de 10 participantes)

MUCHAS GRACIAS