GERMENES PIOGENES

STAPHYLOCOCCUS: Staphylococcus aureus

• Factores de patogenicidad:

- Hemólisis (grado Variable)

- Coagulasa (+)

- Patógenos: no presente en flora normal

- Endotoxina

- Catalasa (-)

- Hialuronidasa: Otorga versatilidad, permite que se disemine por

todo el organismo (sangre, endocrino, articulaciones, huesos)

- Se adapta a cualquier medio, aerobio o anaerobio

- Produce shock tóxico y el síndrome de piel escalada en niños.

• Procedimiento para investigar su presencia

En condiciones de asepsia se obtiene la muestra problema

(sangre, líquido sinovial, secreciones de heridas, secreciones

mucosas, esputo) para luego:

1º Coloración GRAM: Los cocos son GRAM(+) y se trasladan al

Agar sangre, su fueron bacilos GRAM(-) se siembran en Agar Mc

ConKey.

2º Siembra de cultivo en Agar Sangre: Para hacer evidente sus

propiedades hemolíticas: (sangre de carnero 10%)

- α - Hemólisis: Es parcial e incompleta con la producción de

Biliverdina alrededor de la colonia (los estreptococos también

tiene esta propiedad)

- β- Hemólisis: Total con destrucción completa de los

eritrocitos, lo que forma un halo transparente alrededor de la

colonia.

Siembra de cultivo en Agar Chaptman: Es un medio selectivo

que contiene una elevada (7.5%) concentración de NaCl donde se

desarrollan estos microorganismos además de Manitol 1% e

indicador rojo de fenol.

Sirve para la diferenciación bioquímica por poseer manitol y un

indicador, el cual vira al calor amarillo si el manitol se metaboliza

Manitol(+) (S.aureus y algunas otras cepas) otorgándole acidez al

medio; si el metabolismo es básico, el indicador no vira Manitol(-).

3º Prueba de la Coagulasa (Confirmatoria) Se realiza en lámina

o en tubo (mejor)

- Se coloca 0.5 ml de plasma en las colonias con Agar Chaptman,

luego se incuba a 37ºC por 24 h, Si los resultados son positivos

Coagulasa (+) se trata del S. aureus, pero si son negativos se

trata del S. epidermidis, agente causal de bacteremia y

septicemia.

- No todas las cepas de S. auerus producen el factor de

agregación que provoca la aglutinación de los microorganismos

uniéndolos a través del fibrinógeno.

- La reacción debe leerse dentro de 10 seg. y la inclusión de un

control disminuiría el número de resultados falso positivos. Es

preferible el plasma de conejo, conecta o citrato, al plasma

humano, porque este puede contener sustancias que inhiben la

reacción.

Streptococcus

• Clasificación:

Grupo A: Causan faringitis, enfermedades de la piel,

endocarditis.

Muestra: secreción faríngea

Grupo B: Causan enfermedades neonatales, sepsis puerperal

Muestra: Neonato

Grupo C: Enterococo: Causa enfermedades de las vías

urinarias

Muestra: Orina

Viridans: Causante de endocarditis, caries dental

Muestra: Sarro dentario

S.pneumonae:Termina a diferencia del resto, en forma

lanceolada, causante de otitis, meningitis,

neumonía.

Muestra: sangre – secreciones

• Procedimiento para investigar su presencia: Todos se

diagnostican de igual manera, así que su identificación depende de

la muestra.

La muestra problema se obtiene en condiciones de asepsia y en

algunos casos se usa el Medio Thyoglicolato para transporte, el

cual es semisólido con una concentración pequeña de Agar donde

se pueden observar grumitos: “colonias” que no producen

turbidez.

Este medio contiene una sustancia queda potencial REDOX:

Rezasurim que permite un crecimiento selectivo de

microorganismos.

Anaerobios: Fondo

Facultativos: A lo largo del tubo (Streptococcus)

Microaerófilos: Cerca de la superficie

Aerobio: En la superficie de tubo.

1º Coloración GRAM: Cocos GRAM(+)

2º Cultivo en Agar Sangre: Donde van a crecer colonias

pequeñas y transparentes (streptococcus), pero también pueden

crecer otras colonias grandes, cremosas o no que son otros

microorganismos.

Pueden producir hemólisis α (viridans) o β (otros)

3º Prueba de la Catalasa: Se realiza en una lámina portaobjeto,

donde se realiza un extendido de una porción de colonia a la que

se le agrega 1 gota de H2O2 (3%)

Si la reacción es positiva es porque es inmediata la libración de

O2, pero si la muestra permanece homogénea, sin reacción,

entonces indica la presencia de estreptococos.

Medio Tioglicolato: Es un medio poco líquido, enriquecido previo al cultivo,

preferentemente para recuperar gérmenes en su mayoría. Este medio permite

el crecimiento tanto de Staphylococcus como streptococcus.

PRUEBA DE LA CATALASA

FORMACIÓN DE BURBUJAS EN EL TUBO DE ENSAYO

STAPHYLOCOCCUS

STREPTOCOCCUS

OBSERVACIÓN DE CLOSTRIDIUM Y BACILLUS

• Son bacilos Gram(+) formadores de esporas, por lo que son

ubicuos y pueden sobrevivir en estados adversos por muchos

años.

• La mayor parte de las especies de estos géneros no son

patógenos, pero existen varias especies que causan enfermedades

peligrosas en el ser humano.

• B. anthracis: Causante del Antrax. Son bacilos aerobios grandes

que forman cadenas (Estreptobacilo). Sus colonias son redondas y

tienen aspecto de vidrio esmerilado.

No son exigentes en cuanto a medio de cultivo. Licuan la gelatina

y crecen en el Agar Gelatina en forma de árbol de pino invertido

(Gelatina +); en el Agar Almidón son Amilasa (+) y en el Agar

nutritivo forman “cabellos de medusa” las cepas rugosas.

Producen zoonosis

La enfermedad de los animales afecta al hombre, existen 3 formas

de contagio, cutánea, digestiva e inhalatoria.

Factores de virulencia:

Cápsula de Acido Poli D-Glutámico (antifagocítica)

Toxina constituida por 3 proteínas: Antígeno protector (AP) factor

de edema (FE) y factor letal (FL).

• Clostridium tetani: Es un bacilo anaerobio grande, grampositivo,

su hábitat natural es el suelo. Forman esporas terminales

deformantes adquiriendo la forma de “palillo de tambor”.

Sin difíciles de cultivar in Vitro por lo que se requiere del medio

Loffler para su cultivo (mas adecuado con suero de caballo)

aunque también se puede realizar en Agar Sangre.

Son catalasa (-) y realiza sus reacciones metabólicas sólo en un

medio reductor, razón por la cual en el medio Tarozzi (caldo

glucosado + carne molida) producen un olor fétido por la

descomposición de la carne.

Clostridium botolinum: Produce toxinas A,B (en la carne), Cα, Cβ,

D, E, (en el pescado), F y G.

Clostridium difficile: Para su identificación, es necesario un

diagnóstico diferencial con Shigella y E. coli enterohemorrágica.

Corynobacterium diphtheriae: Es pleomórfico (formas muy

variadas).

Bacillus anthracis

Clostridium tetani

AGENTES QUE PRODUCEN ENFERMEDADES

GASTROINTESTINALES

“ENTEROBACTERIAS”

• Se transmiten vía fecal-oral.

• Se deben al mal saneamiento ambiental, falta de higiene personal

y por el hacinamiento. Todos son oxidasa negativo.

CLASIFICACIÓN

1. Toxoinfecciones: Por S. aureus, Clostridium botulinum, C

perfringes, Bacillus cereus.

2. Enfermedades diarreicas no inflamatorias: Causadas por E.

coli, enterotoxigénica, Salmonella ententidis (mayonesa), Vibrium

cholerae (no es enterobacteria). No existen leucocitos en las

heces.

Enterotoxina: Provoca alteración de los electrolitos y este

desbalance produce que los microorganismos sean eliminados por

EDA.

Inóculo: 108 gérmenes/ml o más.

Enfermedad Diarreica Inflamatoria

• Si afecta el tacto gastrointestinal alto: vómitos, náusea, sin

fiebre.

• Si afecta tracto gastrointestinal bajo: diarrea, dolo abdominal,

fiebre.

3. Disentería: Afecta mucosa del intestino grueso produciendo daño

y eliminación de la misma junto con sangre.

Agentes: Shigella dysenteri, E. coli enteroinvasiva o algunos

parásitos.

4. Fiebre entérica: Causada por Salmonella typhi, la que ingresa de

la misma manera que la Shigella, pero atraviesa la mucosa y pasa

a la sangre (Bacteremia), luego afecta al hígado y se instala en el

tejido biliar (circulación enterohepática) para eliminarse en heces

y orina (poco).

Muestra: Mielocultivo (LCR de médula espinal)

(+) al tercer día.

• Coprocultivo (heces)

(+) a los 15 días

• Hemocultivo (sangre)

(+) a la segunda semana

• Serología:

Hallazgo de Ab en la primera semana (Ab O y Ab H)

“Prueba de Widal”

Todos los cultivos deben hacerse bajo condiciones estériles.

• Para un mielocultivo se puede transportar el LCR en un medio

estéril.

• Para el coprocultivo es más conveniente que la muestra se

obtenga de un Hisopado rectal para transportarla en el medio

Cary Blair o en solución salma estéril, luego se debe descartar

diarrea inflamatoria por la ausencia de moco, sangre o

leucocitos.

• Para realizar un hemocultivo es necesario que la sangre sea

procesada de inmediato, después de obtener la muestra,

evitando que ésta se coagule. El uso de anticoagulantes puede

interferir con los resultados.

PROCEDIMIENTO PARA EL ANÁLISIS DE LA MUESTRA

1. Sembrar en un medio selectivo para los agentes que

producen enfermedades gastrointestinales: Mc Conkey; que

por su contenido de sales biliares inhibe el crecimiento de

cocos (grampositivos), además es un medio de diferenciación

bioquímica por su contenido de lactosa y del indicador rojo

neutro para identificar a las bacterias fermentadoras de este

carbohidrato.

• Lactosa (+) (E. coli y Klebsiella)…Colonias de color fucsia

• Lactosa (-) Salmonella, Shiguella, Proteus vulgaris y

Vibrium cholerae (No enterobacteria)…Colonias de color

cremoso claro hasta amarillo.

2. Prueba de diferenciación bioquímica más completa; para lo

cual cogemos con el asa Pasteur una muestra de la colonia, la

introducimos hasta el fondo del tubo de ensayo con el medio

indicado y hacemos estrías en la parte superior.

Agar hierro tres azúcares (TSI): Medio en el que la

fermentación de lactosa en la parte superior (pico de flauta),

de la sacarosa en la parte intermedia y de glucosa en el fondo

(en condiciones anaerobias) da lugar a la producción de

ácidos que se detecta por cambios de color de Rojo fenol

hacia amarillo o la alcalinización mantenimiento un color rojo.

Los azúcares se distribuyen según el peso molecular.

El tiosulfato sódico que contiene se reduce a Acido

sulfhídrico, el cual reacciona con una sal de hierro dando lugar

al sulfuro de hierro de color negro.

La presencia de cavidades en el medio se deben a la

formación de CO2.

Agar Lisina Hierro (LIA): Permite evidenciar

descarboxilación y desaminación de Lys, también la

producción H2S; mediante el viraje del indicador Púrpura de

Bromocresol que en reacción ácida da color amarillo y en

reacción alcalina, color púrpura; y por la formación de sulfato

ferroso de color negro.

Aquellas enterobacterias que no poseen enzimas producen

una pendiente alcalina y una base, ácida.

Descarboxilación Desaminación

CO3 NH2 H+

pH pH

Es posible introducir un papelito impregnado con

paradimetilaminobenzaldehido (reactivo de KOVAC) en el tubo de

ensayo, sin entrar en contacto con el agar, para evidenciar el uso del

Trp: Prueba del Indol.

Además, para la identificación de enterobacterias se les puede

mocular en tubos con caldo glucosado-lactosado, rojo fenol y

campana de Durham, para evidenciar su capacidad de producir

ácido y gas a partir de azúcares; incluso inocularlas en calcio

peptonado – triptonado agregándole luego 4 gotas de reactivo de

KOVAC’S: paradimetilamino benzaldehído + alcohol amílico que eleva

hacia la superficie el compuesto con indol para que se haga evidente

la reacción.

CAMPANA DE DURHAM

Al examen sexológico de S. typhi en una muestra, si se aglutina el

AgH indica presencia de Ab de una enfermedad pasada y si lo hace el

Ag O indica presencia de la enfermedad, mas no el estadío.

Reacciones:

Escherichia coli

Indol Positivo

Glucosa: +

Lactosa: +

Descarboxilación +

pH: ácido

Gas: positivo

Salmonella typhi

Indol negativo

Glucosa: +

Descarboxilación +

pH: ácido

Gas: negativo

Shiguella

Indol positivo variable

Glucosa: +

Lactosa:-

pH: ácido

Gas: negativo

Vibrium cholerae

Indol positivo

Lactosa: -

Glucosa: +

Descarboxilación +

pH: ácido

Gas: negativo

Kleibsella

Lactosa: +

Glucosa: +

Gas: abundante

Proteus

Producción de hierro

Total alcalinidad

Vibrium cholerae:

- Agente causal del cólera.

- No invade todo el tejido intestinal.

Serotipos : Ogawa , Inaba e Hikojina

Biotipos: El Tor, Clásico (más severo)

PROCEDIMIENTO PARA SU IDENTIFICACIÓN

Obtención de la muestra: heces o hisopado rectal, este último se

coloca en el medio de transporte Cary Blair.

Sembrado en un medio de cultivo: se utiliza el medio TCBS

(Tiosulfato, Citrato, Bilas Sacarosa) que es selectivo, de color verdoso

por contener verde de Malaquita que inhibe el crecimiento de hongos

y grampositivos. Indicador: Azul de Bromotimol.

El inóculo después de 4 horas forma colonias que por fermentar la

sacarosa toman el color amarillo y por no fermentar lactosa en medio

Mc Conkey se ven incoloras.

Crecimiento en medio de MacConkey: Es un medio selectivo para

un grupo amplio de microorganismos, las enterobacterias, por su

contenido en sales biliares, y diferencial por permitir distinguir entre

microorganismos lactosa positivos y lactosa negativos. Contiene un

indicador de pH que vira a rosa fucsia en medio ácido (lactosa

positivos) y a amarillo en medio básico (lactosa negativos) ,

inicialmente es rojo. Se utiliza en placas.

TCBS es un medio selectivo para el aislamiento de Vibrio Cholerae,

ya que este medio contiene sales biliares que inhiben en crecimiento

de enterococos. El tiosulfato se sodio como fuente de azufre y la

sacarosa como fuente de carbohidrato fermentado por los Vibrios

PRUEBAS COMPLEMENTARIAS:

String Test.- Se obtiene una muestra, usando el asa bacteriológica

del medio TSI y se coloca en una lámina portaobjeto, junto con

Desoxicolato de Sodio. Luego se mueve el preparado sin levantar el

asa por un momento, si al levantarla se forma un cordón (+) se trata

de V. cholerae.

• Es oxidasa positivo (toma un color grosella) en comparación con

las enterobacterias que son negativas (la solución no cambia de

color).

• El biotipo, serotipo y serogrupo son determinadas por pruebas

serológicas.

¿Cómo obtener una muestra de orina?

- Debe tomarse en condiciones de asepsia (buena limpieza)

- Recoger la primera orina de la mañana o después de 4 horas de

retención.

- Separar labios mayores / recoger el prepucio del pene.

- Recoger el chorro intermedio de la orina.

PROCEDIMIENTO PARA EL ANÁLISIS DE LA MUESTRA

1° Coloración GRAM para identificar la presencia de cocos (+) o

bacilos (-)

2° Siembra en Agar sangre si se trata de cocos; o en Agar Mc

Conkey y a la vez 1/10 se esparce en Agar nutritivo, el primero

para saber que bacteria es y el último en 24 horas se hace

conteo de las unidades formadoras de colonias en los 4

cuadrantes y se halla su concentración mediante la siguiente

formula:

mlUFCcuadrantes

cuadranteUFC/

4:#dilución x placa la de Area x /

=∑

Área: πr2 π = 3.14 Dilución: Si es una ⇒ x 10

r = 4.5 son 2 ⇒ x 100

son 3 ⇒ x 1000

3° Evaluar los resultados

Si tiene: 102 UFC/ml, en un varón sintomático ⇒ Infección

103 UFC/ml, en una mujer sintomática ⇒ Infección

104 UFC/ml, en un paciente asintomático⇒Infección

105 a mas UFC/ml, indica mala manipulación de la

muestra o que la persona no se realizó bien la higiene,

por lo tanto es necesario TOMAR OTRA MUESTRA.

MEDIO SS: selectivo para salmonella y shigella; contiene

inhibidor del desarrollo de coliformes; verde brillante,

además de rojo neutro y agar nutritivo.

Mycobacterium

Características.-

• Bacilos aeróbicos, no móviles ni esporulados; con una pared

celular en lípidos (hidrofóbica) lo que los hace resistentes a

muchos desinfectantes y colorantes: Gram – Giemsa

• Resistentes a decoloración con soluciones ácidas (Acido

resistente).

• Dado que su pared celular es muy compleja, la mayoría crece

con lentitud (18 – 24 horas).

Clasificación.- En 3 grupos:

Fotocromógenas: Producen un pigmento de color amarillo-naranja

cuando se cultiva en medio Lowenstein-Jensen y al ser sometidos a

luz intensa.

No fotocromógenas: en presencia de luz no cambian de color: M.

intracellulare y M.aurum → Ambos forman un complejo importante

para producir enfermedades en pacientes con SIDA aunque no tan

severas como la producida por el M. tuberculosis.

De crecimiento rápido.- En el medio Lowensten-Jensen producen

el mismo color que el M. tuberculosis; pero se diferencian de este

que se replica cada 18 - 22 h y se necesita esperar 15 – 30 días para

evidencia colonias en un cultivo.

Medio Lowenstein - Jensen: Esta altamente enriquecido con

huevo, proteínas papa (≈menú), además con VERDE DE MALAQUITA

que inhibe el crecimiento de otros microorganismos.

• Mycobacterium tuberculosis.-

- Forma copoide o bacilo

- No se decolora con alcohol: bacilo ácido – alcohol resistente

(BAAR).

- Posee una capa lipídica muy gruesa con un componente

propio: 6,6 dinicolato de trehalosa que constituye el principal

factor de virulencia: ANTIFAGOCITICO

- Agrupación de manera paralela ≈ cordones

Dx.-

- Baciloscopia (cultivo) la mas importante prueba

- Radiografía del tórax

- Antibiograma (útil)

- Prueba de Elisa (altamente sensible, pero inespecífico ⇒

puede ser falso positivo)

• Muestra para Baciloscopia

Condiciones:

Puede ser sangre, esputo, orina, líquido sinovial, LCR (color

transparente - cristalino ≈ enfermedades virales, pero con otras

bacterias se pone turbio)

- Debe realizarse en un recipiente esteril (de primer uso),

de boca ancha con tapa.

- De preferencia el primer esputo matutino y en caso de

orina se le recolecta por 24 h.

- Luego llevar de inmediato al laboratorio de preferencia se

realiza un misterio seriado (por varios, 4 días)

En el laboratorio:

1° Se destruye la mucosa con HCl ⇒ diluye el moco y libera

la bacteria, pero como se produce un medio ácido es

necesario neutraliza con NaOH IN hasta obtener un pH

neutro.

Las láminas deben ser nuevas para evitar falsos positivos.

a) Fijar bien al calor.

b) Cubrir el frotis con fucsina de Zietil (básica)

c) Calentar suavemente el mechero para disolver el lípido

(dimicolato de trehalosa) hasta que desprenda vapor por

3 veces consecutivas ⇒ penetra el colorante y da a las

bacterias el color fucsia.

d) Eliminar el colorante con agua corriente, luego decolorar

con una solución de Alcohol-Ácido (alcohol 95%, 4Cl

3%) hasta que ya no desprenda más colorante el

preparado. Lavar luego con agua corriente.

e) Agregar al frotis el colorante del contraste, azul de

f) metileno, dejando actuar por 1 min, los microorganismos

que no son mycrobacterias se clorean de azul.

g) Lavar, secar y observar al microscopio con lente de

inmersión.

Mycobacterium tuberculosis

Con la observación microscópica no e determina la

especie, solo el género, pues para ello es necesario

cultivar la bacteria.

“A la desnutrición es un factor muy importante para el

contagio”.

• Factor cordón.- para obtenerlo es necesario cultivar M.

tuberculosis en medio líquido, sin agar (medio base: Lowenstein-

Jensen) al que se le puede agregar sangre.

Procedimiento:

- Frotis en lámina

- Introducir la mitad en el medio de cultivo

- Incubar a 37°C por 7 días en una estufa, para favorecer

el desarrollo.

- Realizar coloración Z – N y observar al microscopio.

Historia natural de la tuberculosis en un individuo

- Tuberculosis bacilífero

- Inhalación de bacilos

- Inflamación pulmonar inespecífica, debido a que el

Mycobacterium tuberculosis tiene muchos antígenos y es

de virulencia variable.

- Fagocitosis de bacilos por macrófagos alveolares.

- Transporte a ganglios hiliares (vía linfática)

- Bacteremia

- Siembras orgánicos posprimarias.

Infecciones del Tracto Genito-Urinario

Neisseria gonorrehoeae

- Diplococo gramnegativo.

- Cultivado en Agar chocolate o en medio Thayer-Martin, colonias

pequeñas.

- Fermentan solo glucosa.

- Antigénicamente heterogéneo, capaz de cambiar su estructura

para evitar defensa del huésped.

Gonorrea: ETS, ITU

Sintomatología:

- Disurea: Sensación de ardor al miccionar en variones,

vulgarmente el infectado dice que se quemó.

- Flujo uretral: Moco en varones, en mujeres exudado semejante

a descenso (asintomático)

Diagnóstico: Gram de secreción uretral

Tratamiento:

- Penicilina a dosis elevadas o de 24000/1 dosis

- Gentamicina 280 mg/1 dosis

- Tetraciclina

- Doxicilina

- Roxocina

Complicaciones:

- Varones: Proceso inflamatorio crónico, uretritis que puede

producir infertilidad por estenosis uretral, en la que dificulta la

salida de orina y mucho más del semen.

- Mujeres: Enfermedad pélvica inflamatoria, ooforitis o

infertilidad por estenosis tubárica que impide que el óvulo

pueda ser fecundado. Además, conjuntivitis gonocócica

neonatal.

Gardnerella vaginalis

- Forma variada: cocobacilo

- Tinción inespecífica

- Infecta células del aparato genitourinario femenino.

- Causa principal de vaginosis bacteriana

Sintomatología:

- Disuria, menor que con Neisseria.

- Dispaurenia, dificultad para el coito.

Signo especial:

- Secreción vaginal con olor fétido a pescado, por presencia de

aminas.

Diagnóstico:

- Gram de secreción vaginal con el hallazgo específico de

CÉLULAS CLAVE.

Tratamiento: Metronidazol