UNIVERSIDAD NACIONAL DE COLOMBIAFACULTAD DE CIENCIAS.

DEPARTAMENTO DE FARMACIA.LABORATORIO DE FARMACOGNOSIA Y FITOQUÍMICA

PRÁCTICA 3. GLICÓCIDOS ANTRACÉNICOS

Manuel Alejandro Angarita Ramos. Código: 124888

OBJETIVO GENERAL:

Determinar la presencia de glicósidos antracénicos en una muestra de material molido de hojas de Sen (Cassia Angustifolia) y en el extracto previamente obtenido de Lirio sp por medio de pruebas de caracterización específicas

OBJETIVOS ESPECÍFICOS:

Analizar la incidencia de los reactivos utilizados en el proceso de extracción de los glicósidos antracénicos y las condiciones químicas prevalecientes en el mismo.

Comprender e interpretar los resultados que arrojan las pruebas de cromatografía familiarizándose con los tipos de color que revelan los resultados positivos, al igual con los que descartan la presencia de estos metabolitos.

Realizar pruebas de detección de los compuestos quinónicos en el material vegetal por medio de la reacción de Borntrager.

Por medio de una cromatografía en capa delgada determinar la presencia o ausencia de glicósidos antracénicos en una muestra de hojas de Sen y en una de Lirio sp

MARCO TEÓRICO

Antraquinonas: son una clase de metabolitos secundarios vegetales con una funcionalidad p-quinoide en un núcleo antracénico.

Los derivados naturales de las antraquinonas son glucósidos con acción laxante y purgante sumamente potente. En la terapéutica farmacológica, las antraquinonas pertenecen a la categoría de catárticos y se usan en la terapia contra el estreñimiento. Un derivado de la antraquinona, la antralina es un irritante utilizado en dermatología para combatir la psoriasis. Son sustancias que forman parte de la composición de algunos medicamentos de homeopatía cuyas principales indicaciones son: Factor activo en el metabolismo energético, favorece la desoxidación, trastornos gastrointestinales(1)

Propiedades generales y caracterización de las antraquinonas- Las agliconas antraquinónicas son compuestos sólidos, cuyo color va desde el amarillo al pardo rojizo.- Son solubles en solventes orgánicos: Éter, cloroformo, alcohol caliente, benceno.

- Los glucósidos antraquinónicos son cristalizados, estas tienen un color más pálido que la aglicona correspondiente y son solubles en agua caliente y soluciones hidroalcohólicas(1)

Clasificación: Los compuestos antracénicos vegetales pueden clasificarse según su estado de oxidación en siete grupos estructurales (2):a. Antraquinonasb. Antronasc. Diantronasd. Antranolese. Oxantronasf. Naftodiantronasg. Antrahidroquinonas

Reacción de Bornträger La reacción de Bornträger se utiliza frecuentemente para investigar la presencia de principios antraquinónicos en vegetales. Esta reacción consiste en agregar un reactivo alcalino como amoníaco, solución de hidróxido de sodio o de potasio directamente a la droga en polvo o a un extracto y se basa en la coloración roja que dan los derivados antraquinónicos en medio alcalino; la aparición de una coloración anaranjada o roja indicará la presencia de agliconas libres oxidadas y la intensidad del color será proporcional a la concentración de principios activos. (3)Este tratamiento no solo hidroliza los glicósidos antracénicos, sino que también oxida las antronas y antranoles hasta antraquinonas. La solución alcalina se deja enfriar, se acidifica y se extrae con benceno. Cuando la fase bencénica se separa y se pone en contacto con una solución acuosa diluida de un álcali, la fase bencénica pierde su color amarillo, y la fase acuosa se torna de color rojo si la muestra contiene antraquinonas. El ensayo no es específico para las antraquinonas ya que las naftoquinonas también dan coloraciones rojas. Si la muestra contiene antraquinonas parcialmente reducidas, la solución original no se torna roja inmediatamente después de hacerla alcalina, pero se torna de color amarillo con una fluorescencia verdosa, y poco a poco se va tornando roja, a medida que ocurra la oxidación. Si se desea, la oxidación puede acelerarse añadiendo un poco de peróxido de hidrógeno al 3% acuoso. La reacción colorimétrica puede utilizarse también como base para la valoración cuantitativa de estas sustancias en diferentes muestras. Es posible también reconocer con la ayuda de un espectrofotómetro ultravioleta si la muestra contiene formas reducidas u oxidadas, ya que las primeras absorben alrededor de 360 nm, mientras las segundas absorben alrededor de 440 nm. (2)

Hojas de Sen: El Sen (Cassia Angustifolia Vahl) también llamado Sen de la India, perteneciente a la familia Papilionáceas es una planta medicinal proveniente de la india o Egipto. Crece espontáneamente en países tropicales de África y en la India. Es cultivada especialmente en Egipto y Sudan. En Colombia tiene algunos nombres comunes como hojas de sen o acacia de la india. Se utiliza principalmente como laxante o catártico en el tratamiento del estreñimiento, además tiene propiedades como purgante. Las hojas y las semillas de sen contienen un 2 a 3% de glicósidos antraquinónicos como senósidos A, B, C y D (Fig. No. 1); emodina, aloe-emodina, crisofanol además posee mucilagos y flavonoides, que colaboran con su acción laxante, y una resina de acción irritante que puede provocar náuseas y vómitos a dosis altas. (4)

METODOLOGÍA

ResultadosA continuación se presentan los resultados obtenidos para cada extracto, tras la realización de la prueba de Borntranger – Kraus a medio mL de extracto toluenico inicial y a un mililitro de extracto toluenico final obtenido luego de la hidrolizacion y oxidación de los glicósidos ( presentes en la muestra; si es que los hay).

Tipo de extracto Resultado de la prueba de Borntranger – Kraus

Apariencia

Extracto toluenico primario Cassia Angustifolia +

Extracto toluenico final Cassia Angustifolia

+

Extracto toluenico primario Lilium sp -

Extracto toluenico final Lilium sp -

Cuadro 1. Resultados de la prueba Borntranger – Kraus

Figura 1. Cromatografía de capa delgada. Fase móvil: mezcla de tolueno – acetato de etilo – ácido acético (75:24:1). Revelador: KOH 10%. De izquierda a derecha: A) Sen (Cassia Angustifolia); B) Lirio sp

Análisis de resultadosPara la identificación de glicósidos cardiotónicos en las muestras se procedió a extraer primero con etanol y posteriormente se disolvió cada uno de los extractos en 10 ml de etanol: agua (1:7) ya que se podría inferir que los compuestos antracénicos se encuentran en forma de heterósidos (glicosilados) en el extracto, y estos heterósidos tienen la capacidad de ser muy solubles en soluciones acuosas o hidroalcohólicas. Aadicionalmente calentamos para ayudar a que la forma aglicona se solubilice (en forma de antraquinona). Se filtró y se extrajo una primera porción con tolueno (con el fin de seleccionar solo la parte no soluble, ósea la parte no glicosilada) la cual fue analizada con el reactivo de Berntranger- Kraus. El fin de realizar esta prueba fue el de comprobar que hubiesen agliconas en forma de antraquinona libre. Tras la realización de la prueba se demostró en la muestra de hojas de Sen hay presencia de gliconas libres, mientras que Lirio sp no las presenta. Para esta primera prueba no se identifican completamente todos los glicosidos antracenicos presentes ya que solo se extrajo las gliconas (sin azúcar en su estructura), además no se oxido la muestra por lo que no todas las gliconas pudieron haber dado respuesta positiva debido a que solo la glicona oxidada (antraquinona) da la prueba de manera positiva.

La adición del ácido sulfúrico al 50% busca hidrolizar los compuestos antracénicos, para poder obtener así su genina (aglicona) y su parte glicosilada (o-glicósidos). La adición del peróxido de hidrógeno oxida las geninas (quinonas y sus derivados libres) a antraquinonas, las antraquinonas son más estables que las formas reducidas y son muy solubles en compuestos orgánicos, por esta razón se emplea posteriormente el tolueno como solvente de la extracción de las antraquinonas en dos ocasiones. Lo que permitirá su posterior cuantificación. Para los extractos se realiza la prueba de detección esta se llevó a cabo mediante el uso de los reactivos NaOH e hidróxido de amonio, al someter los reactivos con el extracto se obtuvieron dos fases, en la muestra de Sen tornándose la fase de abajo de color rojo (cuadro 1) indicándonos que la prueba es positiva para la presencia de glicósidos antracénicos en este extracto, dado que estos compuestos tienden a formar complejos que permitirán el viraje de color; sin embargo la prueba no cambia de color en el extracto de Lirio lo que nos indica que es negativa la presencia de glicósidos antracénicos.

Al revelar la placa cromatográfica con la solución de KOH al 10% en etanol se puede observar un resultado positivo para el extracto de sen debido a que hay presencia de manchas de color rosado sobre la placa y un resultado negativo para el extracto de Lirio porque no se evidencia la mancha mencionada. Al momento de interpretar la cromatografía para glicósidos antracénicos se debe tener en cuenta que estos quedan en estas posiciones de la placa cromatográfica debido a su baja polaridad y por ende una afinidad intermedia con esta. La muestra de Sen Presento un RF de 0,55

Conclusiones. La muestra de sen dio resultado positivo para compuestos antracénicos y estos pueden estar

tanto en formas oxidadas como en formas reducidas. Mientras que la muestra de Lirio sp mostro un resultado negativo para estos compuestos.

La cromatografía con una fase móvil con mezcla de tolueno - acetato de etilo - ácido acético (75:24:1) permitió una observación optima de los compuestos antracénicos presentes en la muestra de sen debido a su polaridad media.

La adición de un ácido y un agente oxidante es una técnica muy útil para poder aislar compuestos antracénicos (geninas) en forma de antraquinonas a partir del extracto vegetal.

La prueba con los reactivos (NaOH e hidróxido de amonio) es una técnica muy útil para detectar la presencia de compuestos antracénicos, tanto en sus formas oxidadas como en sus formas reducidas

Bibliografía

1. J. E. Bustamante, L. M. Carrascal, “Estandarización de la técnica espectrofotométrica (uv-vis) para la cuantificación de antraquinonas presentes en productos a base de Aloe vera”, tesis de grado, Universidad Tecnológica de Pereira, 2010, pp 22-24

2. E.J. Osorio, “Quinonas y compuestos relacionados”. Universidad de Antioquia, Facultad de Química Farmacéutica, 2012, pp 4

3. C. Delporte. “Farmacognosia trabajos prácticos”, Facultad de ciencias quimicas farmaceuticas. Universidad de Chile, 2010. Pp 21

4. Fonnegra R, Jiménez S. Plantas medicinales aprobadas en Colombia. Medellin : Universidad de Antioquia, 2007. pág. 238.