Informe 10 de Microv
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INFORME DE LABORATORIO N10
Ttulo:
Numeracin de Mohos y Levaduras: HONGOS.
Docente:
MSc. Martn Martnez Vila
Integrantes:
Vsquez Pea Julian Gustavo 20132141E
Flores Crdenas Karen Kimberly 20123502I
2015
UNIVERSIDAD NACIONAL DE INGENIERA
Facultad de Ingeniera Ambiental
MICROBIOLOGA SANITARIA I
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INFORME DE LABORATORIO N10 2015
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I. OBJETIVOS
Conocer la importancia de la presencia de mohos y levaduras en muestras
ambientales.
II. MARCO TEORICO
SABOURAUD GLUCOSADO AGAR
Medio utilizado para el aislamiento, identificacin y conservacin de hongos
patgenos y saprfitos. Tambin es til para el cultivo de levaduras. Medio de cultivo
recomendado para el aislamiento y desarrollo de hongos, particularmente los
asociados con infecciones cutneas (piel, pelo, etc.).
En el medio de cultivo, la pluripeptona y la glucosa, son los nutrientes para el
desarrollo de microorganismos. El alto contenido de glucosa, la presencia de
cloranfenicol y el pH cido, favorecen el crecimiento de hongos por sobre el de
bacterias.
Adems, al medio de cultivo, pueden agregarse otros agentes selectivos de
crecimiento.
Fungi
El trmino Fungi (latn, literalmente "hongos") designa a un grupo de organismos
eucariotas entre los que se encuentran los mohos, las levaduras y las setas. Se
clasifican en un reino distinto al de las plantas, animales y protistas. Esta
diferenciacin se debe, entre otras cosas, a que poseen paredes celulares compuestas
por quitina, a diferencia de las plantas, que contienen celulosa. Se ha descubierto que
organismos que parecan hongos en realidad no lo eran, y que organismos que no lo
parecan en realidad s lo eran, si llamamos "hongo" a todos los organismos derivados
del que ancestralmente adquiri la capacidad de formar una pared celular de quitina.
Debido a ello, si bien este taxn est bien delimitado desde el punto de vista
evolutivo, an se estn estudiando las relaciones filogenticas de los grupos menos
conocidos, y su lista de subtaxones cambi mucho con el tiempo en lo que respecta a
grupos muy derivados o muy basales.
Los hongos se presentan bajo dos formas principales: hongos filamentosos
(antiguamente llamados "mohos") y hongos levaduriformes. El cuerpo de un hongo
filamentoso tiene dos porciones, una reproductiva y otra vegetativa. La parte
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vegetativa, que es haploide y generalmente no presenta coloracin, est compuesta
por filamentos llamados hifas (usualmente microscpicas); un conjunto de hifas
conforma el micelio (usualmente visible). A menudo las hifas estn divididas por
tabiques llamados septos.
Los hongos levaduriformes o simplemente levaduras son siempre unicelulares, de
forma casi esfrica. No existen en ellos una distincin entre cuerpo vegetativo y
reproductivo.
Los hongos tienen una gran importancia econmica: las levaduras son las
responsables de la fermentacin de la cerveza y el pan, y se da la recoleccin y el
cultivo de setas como las trufas. Desde 1940 se han empleado para producir
industrialmente antibiticos, as como enzimas (especialmente proteasas). Algunas
especies son agentes de biocontrol de plagas. Otras producen micotoxinas,
compuestos bioactivos (como los alcaloides) que son txicos para humanos y otros
animales. Las enfermedades fngicas afectan a humanos, otros animales y plantas;
en estas ltimas, afecta a la seguridad alimentaria y al rendimiento de los cultivos.
Moho
El moho es un hongo que se encuentra tanto al aire libre
como en lugares hmedos y con baja luminosidad. Existen
muchas especies de mohos que son especies microscpicas
del reino fungi, que crecen en formas de filamentos
pluricelulares o unicelulares. El moho crece mejor en
condiciones clidas y hmedas; se reproducen y propagan
mediante esporas. Las esporas del moho pueden sobrevivir
en variadas condiciones ambientales, incluso en extrema
sequedad, si bien sta no favorece su crecimiento normal.
Los tipos de mohos ms comunes son:
o Cladosporium Penicillium
o Alternaria
o Aspergillus
o Mucor
La penicilina (cuyo nombre deriva del hongo Penicillium) es un antibitico. Fue
descubierto por Alexander Fleming.
Mohos en el Ambiente:
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Los mohos se encuentran prcticamente en cada ambiente y pueden ser detectados,
tanto en interiores como al aire libre, durante todo el ao. Las condiciones hmedas y
clidas favorecen el crecimiento del moho. Al aire libre pueden encontrarse en reas o
lugares hmedos sombreados donde hay descomposicin de hojas o de otro tipo de
vegetacin. En los interiores pueden encontrarse en lugares donde los niveles de
humedad son altos como los alrededores del lavavajillas.
Mohos como causantes de infecciones
Algunas personas son sensibles a los mohos. La exposicin a los mohos en estas
personas puede causarles sntomas como congestin nasal, irritacin de los ojos o
resuello. Otras personas que tienen graves alergias a los mohos pueden experimentar
reacciones ms severas. Las reacciones severas pueden ocurrir entre trabajadores
expuestos a grandes cantidades de mohos en los lugares de trabajo, como en el caso
de los granjeros que trabajan todo el da alrededor del heno mohoso. Algunas
reacciones severas pueden incluir fiebre y dificultad para respirar. Las personas con
enfermedades crnicas, como enfermedad obstructiva de los pulmones, pueden
presentar infecciones de moho en los pulmones. Algunos mohos son txicos porque
producen micotoxinas que pueden afectar gravemente a humanos y animales.
Las personas sensibles deben evitar reas que tienen ms probabilidad de tener moho
como los lugares donde se apila el abono, el prado cortado y las zonas boscosas. Al
interior de las casas, el crecimiento del moho puede disminuirse manteniendo los
niveles de humedad por debajo del 50% y ventilando las duchas y los lugares donde se
cocina. Los crecimientos de moho pueden eliminarse de las superficies duras con
productos comerciales, agua y jabn, o con una solucin de blanqueador preparada
con una mezcla de no ms de 1 taza de cloro y 1 galn de agua. Las personas sensibles
deben ponerse una mscara ajustada en la cara en los casos en que no pueda evitarse
la exposicin de s mismo al moho.
El consumo del moho del pan en pequeas cantidades es altamente txico para el
organismo. El cuadro aparece lentamente y consiste inicialmente en manifestaciones
prodrmicas (nuseas, cefalea, vmitos), y alcanza su pico a las 20 horas, cuando se
presentan: disfuncin erctil irreversible, hipogonadismo progresivo, convulsiones,
alucinaciones y sndrome de Cushing.
Levadura
Se denomina levadura a cualquiera de los diversos hongos microscpicos unicelulares
que son importantes por su capacidad para realizar la descomposicin mediante
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fermentacin de diversos cuerpos orgnicos, principalmente los azcares o hidratos
de carbono, produciendo distintas sustancias.
Aunque en algunos textos de botnica se considera que las levaduras verdaderas
pertenecen slo a la clase Ascomycota, desde una perspectiva microbiolgica se ha
denominado levadura a todos los hongos con predominio de una fase unicelular en su
ciclo de vida, incluyendo a los hongos basidiomicetes.
A veces suelen estar unidos entre s formando cadenas. Producen enzimas capaces de
descomponer diversos sustratos, principalmente los azcares.
Una de las levaduras ms conocidas es la especie Saccharomyces
cerevisiae. Esta levadura tiene la facultad de crecer en forma
anaerobia1 realizando fermentacin alcohlica. Por esta razn se
emplea en muchos procesos de fermentacin industrial, de forma
similar a la levadura qumica, por ejemplo en la produccin de
cerveza, vino, hidromiel, aguol, pan, antibiticos, etc.
Las levaduras se reproducen asexualmente por gemacin o
brotacin y sexualmente mediante ascosporas o basidioesporas.
Durante la reproduccin asexual, una nueva yema surge de la levadura madre cuando
se dan las condiciones adecuadas, tras lo cual la yema se separa de la madre al
alcanzar un tamao adulto. En condiciones de escasez de nutrientes las levaduras que
son capaces de reproducirse sexualmente formarn ascosporas. Las levaduras que no
son capaces de recorrer el ciclo sexual completo se clasifican dentro del gnero
Candida.
La levadura es la primera clula eucariota en la que se ha intentado expresar protenas
recombinantes debido a que es de fcil uso industrial: es barata, cultivarla es sencillo y
se duplica cada 90 minutos en condiciones nutritivas favorables. Adems, es un
organismo fcil de modificar genticamente, lo que permite realizar experimentos en
varios das o semanas. Sin embargo, las levaduras poseen un mecanismo de
glicosilacin diferente al que se encuentra en clulas humanas, por lo que los
productos son inmunognicos.
III. MATERIALES Y EQUIPOS
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Tubos de ensayo 16 x 150mm con 10ml de agua peptonada (0.1%) ms tween
80 (1%).
Tubos de ensayo 15 x 150mm con 10ml de agua peptonada (0.1%).
Torundas estriles con vstego de madera.
Plantillas de hojalata o aluminio de 10cm x 10cm (100cm2).
Esptula Drigalsky.
Incubadora 35oC.
Pipetas bacteriolgicas 1ml.
Refrigeradora.
Bao Mara a 46oC.
Agar TSA en placa Petri estril (recuento de hetertrofos).
Agar Endo en placa Petri estril.
Agar Manitol Salado en placa Petri estril. (para aislar estafilococos).
Agar sabourand glucosado en placa Petri estril.
IV. PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL
Preparacin de la muestra
Colocar 10 gramos de muestra de avena en el vaso de la licuadora (15mil
revoluciones x minuto)
Agregar 90 ml de diluyente (agua peptonada al 0.1%) licuar y obtener una
dilucin de 10-1. Homogenizar por 2 minutos.
Preparacin de Diluciones
Luego extraer 1 ml de muestra con una pipeta correctamente esterilizada y
vaciar en un tubo de ensayo esterilizado que posee un tapn que contiene
9 ml de agua peptonada (En el proceso utilizar un mechero para que no
haya una contaminacin externa, siempre vaciar la pipeta al tubo de
ensayo en presencia del mechero).
Tapar inmediatamente el tubo de ensayo con algodn o tapa rosca
despus de haberle echado 1 ml de muestra.
Etiquetar este tubo de ensayo con 10-1 lo cual me indica que esta es su
concentracin.
Extraer 1 ml del tubo de ensayo de 10-1 con otra pipeta correctamente
esterilizada y vaciarlo en otro tubo de ensayo correctamente esterilizado
que contiene 9 ml de agua peptonada y etiquetarlo con 10-2.
As seguir sucesivamente con instrumentos correctamente esterilizados
hasta llegar a una concentracin de 10-5.
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Recuento por Difusin
Primero se coloca el inoculo (1 ml) en la placa Petri estril con la ayuda de
una pipeta estril, luego aadir 15 -18 ml del Agar Sabourand Glucosado (a
46C) (Esto se realiza en la proximidad de las llamas del mechero), ir
homogeneizando con movimientos de arriba hacia abajo y luego de
derecha izquierda hacer esto muy suavemente.
Se echa 1 ml de cada tipo de concentracin a las placas Petri y se repite el
movimiento mencionado anteriormente, realizar este proceso con todas
las concentraciones preparadas.
Dejar enfriar las placas e incubar sin invertir a una temperatura de 20-24C
x 4das.
Despus de estos das hacer un conteo de colonias en placas que
contengan 20-200 colonias de mohos y levaduras por separado.
Reportar UFC / ml.
V. RESULTADOS
DILUCIONES OBSERVACION
10-1 Incontable
10-2 15 levaduras. 2 Mohos
10-3 18 levaduras, 1 moho
10-4 1 moho
10-5 1 moho
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VI. CONCLUSIONES
- Se pudo observar presencia de hongos en los cereales ya que en ellos ha crecido
levadura y moho indicando que hay presencia de hongos.
- Los hongos y las levaduras tienen sus propios medios de cultivacion
VII. RECOMENDACIONES
- Los hongos tiene sus condiciones de crecimiento por eso no se lo introducir a la
incubadora y se lo dejara al aire libre
- Licuar bien el cereal para que al momento de usar la pipeta esta no se atasque.
VIII. BIBLIOGRAFA
o http://es.wikipedia.org/wiki/Fungi
o http://es.wikipedia.org/wiki/Levadura
o Manual Prctico de Microbiologa. R. Daz, y colaboradores, 2a edicin. Ed.
Masson.