UNIVERSIDAD NACIONAL DE CHIMBORAZOFACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUDCARRERA DE LABORATORIO CLINICO E HISTOPATOLOGICO

CTEDRA DE TCNICAS HISTOLGICAS

INFORME N 1

TTULO: CONTROL DE CALIDAD Y BIOSEGURIDAD EN HISTOTECNOLOGATEMA: RECONOCIMIENTO DE UN LABORATORIO DE ANATOMA PATOLGICA

NOMBRE: WILIAN CHAGUARO DOCENTE: LIC. IVAN PEAFIELPERODO ACADMICO: OCTUBRE 2015- FEBRERO 2016FECHA DE ENTREGA: 04 DE OCTUBRE DEL 2015

TEMA: RECONOCIMIENTO DE UN LABORATORIO DE ANATOMA PATOLGICA OBJETIVOSOBJETIVO GENERALIdentificar el laboratorio de anatoma patolgica y las normas de bioseguridad que se debe aplicar en este.OBJETIVOS ESPECIFICOS Realizar la identificacin del rea anatoma patolgica y como est distribuida Observar e identificar los equipos, materiales e insumos necesarios en el rea de un laboratorio de anatoma patolgica Reconocer la clasificacin de los tipos de desechos que vamos a encontrar en el rea de anatoma patolgica INTRODUCCION.El primer laboratorio hicimos el reconocimiento del rea de anatoma patolgica y la identificacin de los distintos equipos y materiales para los cortes de tejidos, fue importante este reconocimiento, as como tambin se habl de normas de bioseguridad, como las barreras que deben protegernos a nosotros ya que vamos a estar manipulando contenidos peligrosos y estos pueden causar algn accidente, por otro lado la identificacin de las clases de desechos que vamos a encontrar en dicha rea y es muy importante tener muy en cuenta el orden la disciplina y ponerle empeo al trabajo que vayamos a realizar en el rea de anatoma patolgica.

FUNDAMENTO TERICO O CONTENIDO CIENTFICOEn el rea de anatoma patolgica se realiza lo que son los cortes de tejidos ya sean estos de una biopsia o una necropsia para su experimentacin, deben ser sometidos a un proceso al cual se le debe dar una serie de tcnicas y de tratados para poder ser observados en el microscopio Para empezar con la tcnica histolgica se debe obtener una MUESTRA DEL TEJIDO a estudiar y existen 2 formas: Necropsia: Examen u obtencin de tejido de un organismo muerto. Biopsia:(del griego bios = vida y oasis = visin) Examen u obtencin de tejido de un organismo vivo. Puede ser inscisional, excisional, por sacabocado, por puncin y absorcin, por raspado, por trepanacin. (1)FIJACINExisten diferentes formas de fijar los tejidos dependiendo del tipo de fijador, de la estructura a fijar y de lo queramos observar. Los mtodos de fijacin se pueden clasificar en dos tipos: fsicos y qumicos. Los fijadores fsicos se basan o bien en una congelacin muy rpida del tejido o bien en la aplicacin de calor elevado. Se utilizan cuando los fijadores qumicos alteran las estructuras que queremos observar, cuando necesitamos una fijacin muy rpida, o cuando el tipo de tejido y la tcnica que usaremos lo requiera. La congelacin rpida es un buen mtodo de preservacin de las caractersticas moleculares y es conveniente que sea rpida puesto que as se impide la formacin de grandes cristales de hielo que nos destrozaran la estructura del tejido. Existen variantes de esta tcnica como son la criodesecacin o liofilizacin y la crio sustitucin. La criodesecacin parte de tejido previamente congelado al que posteriormente se le sublima el hielo, es decir, el agua pasa de estado slido a gaseoso sin pasar por estado lquido. Al eliminar el agua se impide que se den reacciones qumicas, por lo que, adems de la fijacin, este mtodo preserva el tejido en el tiempo. La crio sustitucin tambin parte de tejido congelado pero en este caso se produce una sustitucin lenta del hielo por una solucin fijadora. Con ello se posibilita una fijacin qumica sobre un material que no ha sufrido deterioro puesto que est congelado. Los mtodos de fijacin por calor no son frecuentemente usados, excepto para el estudio microorganismos. Los mtodos qumicos utilizan soluciones acuosas compuestas por molculas fijadoras que establecen puentes entre las molculas del tejido, mantenindolas en sus lugares originales e impidiendo su degradacin. Hay dos mtodos bsicos de fijacin con fijadores lquidos: inmersin y perfusin. En cualquier caso el fijador debe llegar a todas las partes el tejido lo ms rpidamente posible. (2)

INCLUSIN: Las parafinas son mezclas de hidrocarburos saturados de cadena que oscilan entre 22 y 28 tomos de carbono. El punto de fusin depende del nmero de tomos de carbono y se encuentra entre 46 y 60 C. Las mezclas de parafinas comerciales tienen un punto de fusin entre 54 y 56C. La parafina para en castracin se presenta como pequeas lentejas de unos 5 mm de dimetro. El tamao y la textura facilitan su manejo.Aunque la parafina ms comercial est libre de impurezas, algunos trabajadores prefieren filtrarla. Para hacer esto, poner un embudo grande con un papel de filtro en el horno de parafina y que el embudo desemboque en un gran vaso. Poner la parafina en el embudo. Como la parafina funde ser filtrado mientras pasa a travs del papel de filtro hasta el recipiente.Algunas mezclas de parafinas comerciales y sus propiedadesNombre mezcla parafinaTemperatura de fusinGrosor mnima de la seccinNotas

TissuePrep (Fisher) 55-57C 4 mParafina purificada ms polmeros sintticos

TissuePrep 2 56-57C 2 m TissuePrep original ms aditivos que permiten hacer secciones ms finas

Paraplast 56C 4 m Parafina purificada ms polmeros plsticos

Paraplast Plus 56C 2 m Contiene DMSO

Paraplast X-tra 50-54C 2 m Parafina ms polmeros de bajo peso molecular

La tcnica de inclusin en parafina es una perfusin de la misma en los tejidos para crear un medio homogneo, que permita la realizacin de los cortes de menor grosor con gran facilidad y una precisin mayor que cuando los mismos se realizan por congelacin. Como toda tcnica, presenta ventajas e inconvenientes; sobre todo es en la modalidad de inclusin donde se pueden discutir ciertos procesos que son vlidos en histologa animal pero que al aplicarlos a los tejidos vegetales pueden originar alteraciones a veces profundas, en las estructuras anatmicas e histolgicas; el primer problema que nos encontramos al incluir en parafina un tejido es la apolaridad de la misma; para poder incluir el tejido se han descrito varios mtodos de deshidratacin, pero en general se sigue, como en histologa animal, la deshidratacin por alcohol etlico en graduaciones crecientes hasta llegar a alcohol absoluto.La parafina y el alcohol etlico absoluto tampoco son miscibles, por lo que hay que sustituir ste por un lquido apolar miscible con aquellas. Hay varios lquidos apolares como el benceno, cloroformo, xileno, etc., que se han descrito en todas la tcnicas histolgicas, pero que deben usarse con muchas reservas, por las grandes retracciones y deformaciones que producen en los tejidos vegetales, alteraciones que no son homogneas, puesto que cada uno de los distintos tejidos de una muestra al cortar, reaccionan de forma muy distinta a la retraccin debido al distinto grosor y naturaleza de la pared celular. Nosotros sustituimos el benceno, xileno, etc., por acetato de isoamilo o bien biristato de isopropilo; ms frecuentemente el primero. Si la deshidratacin se ha realizado correctamente, la pieza a incluir se hundir en el acetato. Si flotase sobre el mismo, hay que esperar 15 minutos y si sigue flotando es que la deshidratacin no se ha realizado correctamente, debiendo ser introducida la muestra de nuevo en alcohol absoluto.Despus de tres baos de acetato de isoamilo, la muestra puede ser incluida en parafina, Histotec, Paraplast, etc. Este proceso es quiz el que merezca mayor atencin junto con el anteriormente explicado. Los manuales de tcnicas y los distintos trabajos sobre histologa vegetal nos dan tiempos muy dilatados de inclusin: mnimo de 6 horas. Los tejidos vegetales tienen una naturaleza muy distinta a la de los animales, pero las tcnicas de inclusin que se describen en los distintos manuales han sido aplicadas a partir de las experiencias sobre tejidos animales; en algn caso, esta experiencia es til y sirve para el proceso de inclusin de vegetales, pero en la mayora de los casos no lo es, y cada muestra vegetal hay que darle un tratamiento muy distinto dependiendo de los tejidos que presente y de la disposicin de los mismos. No se puede tratar de igual manera una muestra que contenga grandes parnquimas o grandes conductos aerferos. Por tanto, lo ms importante antes de realizar una inclusin es conocer la naturaleza y la organizacin de la muestra a incluir, o por lo menos presuponerla. Los cortes realizados con el micrtomo de congelacin nos pueden dar la pauta a seguir en el caso que se desconozca la organizacin de un vegetal determinado.El calor es uno de los enemigos ms importantes de los tejidos vegetales. La presencia de pared celular y la distinta naturaleza que sta puede presentar es la causa de que el calor, los fijadores, los compuestos hidratantes y deshidratantes, el xileno, el benceno, etc., produzcan en las paredes celulares reacciones muy importantes y no constantes, que pueden distorsionar en gran manera la estructura anatmica de un vegetal. Ante los mismos agentes, en una reaccin, no todos los tejidos responden igual: las deformaciones dependen entre otras cosas del grosor de la pared celular, naturaleza de la misma, disposicin de los diferentes tejidos, tiempo de actuacin de los distintos agentes, etc. Por tanto, si las deformaciones son variables, las interpretaciones que se dan son, con frecuencia, errneas.Por tanto, para incluir una muestra vegetal en parafina, o bien en sucedneos de la misma (Paraplast, Histotec, etc.), es necesario calcular los tiempos mnimos, que pueden oscilar desde 35 minutos a varias horas. Por ejemplo, para incluir una hoja que presenta unos parnquimas con paredes tenues y grandes meatos que permiten un fcil paso de la parafina, tendramos los siguientes pasos y tiempos:1.- Alcohol etlico 96-------------1/2 hora2.- Alcohol etlico 96-------------1/2 hora3.- Alcohol etlico absoluto--------1/2 hora4.- Alcohol etlico absoluto--------1/2 hora5.- Alcohol etlico absoluto--------1/2 hora6.- Acetato de isoamilo------------1/2 hora7.- Acetato de isoamilo------------1/2 hora8.- Acetato de isoamilo------------1/2 hora9.- Parafina a 56-58C------------3/4 hora10.- Confeccin del bloqueLos tiempos de deshidratacin pueden ser ms o menos constantes para todos los tejidos, pero varan mucho los tiempos de parafinacin. Un tallo macizo, con mucho tejido esqueltico (esclernquima), o de proteccin (peridermis), pueden necesitar varias horas. La prctica nos ir diciendo cuales son los tiempos ms idneos para los rganos o partes del rgano que estemos utilizando.Lo ms importante es comprender que no existen dos muestras vegetales o tejidos iguales y por ello, cada una se comportar de distinta forma. Con experiencia se calcula fcilmente los tiempos que necesitan los distintos tejidos.Para la confeccin de bloques utilizando parafina se realiza de la misma forma que en histologa animal: existen pinzas (Leukart) y recipientes especiales para realizar los bloques, pero lo ms barato es confeccionar recipientes, de papel satinado o de aluminio, ms o menos cbico o en formas de paraleleppedo, dependiendo de las caractersticas de la muestra incluir. Lo ms importante en la confeccin de bloques es la orientacin que se da a la muestra, porque de ello va a depender que el corte sea bueno o malo.Existen diferentes alternativas de infiltracin en parafina y es interesante destacarlas en este puntoMtodo con solvente intermedio parafina/TBALos pasos intermedios entre la deshidratacin con EtOH la infiltracin en parafina deben incluir un solvente en parafina, puesto que los tejidos estarn fijados eventualmente en parafina. Ter-Butanol (TBA) o n-butanol son buenos solventes intermedios para la tcnica adicional de parafina. El TBA se prefiere saber el n-butil alcohol porque tiene menor efecto de aplastamiento de los tejidos. El isopropanol se usa en la tcnica de microondas. El TBA debe preservar la suavidad de algunos tejidos, al contrario que el xileno o el EtOH, que tienden a endurecer los tejidos. Muchos microscopistas de plantas consideran que las series de EtOH/TBA son el mejor mtodo disponible. El problema est en que el TBA es difcil de utilizar, ya que el TBA 100% es un slido a temperatura ambiente. Mantener el contenedor en la parte superior del horno de parafina a 42C para mantener el TBA lquido.Deshidratar los tejidos con EtOH al 50% usando gradacin en series de EtOH. Cuando uses series de TBA en la tcnica que no usa microondas permitir un tiempo de entre 1-4 horas por paso durante la infiltracin.*Si se usaron FAA o FPA como fijadores, los tejidos estarn listos como mximo con EtOH al 50%. Desde este punto usar la serie de EtOH.* Si los tejidos han sido deshidratados con EtOH 100%, comienza la serie en el paso 4 y contina la deshidratacin.PasoEtOH 95%EtOH 100%AguaTBAAceite de parafinaNota

150-4010-

250-3020-

350-1535-

450--50-

5-25-75-0.1% Safranina O, o Azul de timol en el paso 5. Incubar durante 1-2 horas.

6-25-75-

7---100-

8---100-

9---6733

Proceder con la infiltracin en parafina/TBA

Infiltracin en parafina/TBA1. Quitar 1/3 del volumen, y reemplazar con un volumen igual de parafina fundida. Intenta formar un "capuchn" de parafina en lo alto del TBA, destapar el vial, e introducir en el horno de parafina (58C). El TBA se evaporar lentamente, por eso asegurarse de aadir suficiente parafina para cubrir los tejidos cuando esto suceda.2. A intervalos de 4-12 horas, quitar 1/2 del volumen (en el contenedor de parafina para desechar) y volver a llevar al volumen con parafina lquida.3. Repetir dos veces.4. Eliminar toda la mezcla de parafina/TBA y aadir parafina lquida pura.5. Volver a realizar tres veces a intervalos de 1-4 horas (overnight para el ltimo paso).6. Cuando no detectes residuos de TBA proceder con la en castracin.Mtodo con parafina/xilenoUn solvente intermedio alternativo puede ser el xileno, Histo-Clear, cloroformo, benceno o tricloroetileno. El solvente utilizado histricamente en microtcnicas de plantas es el xileno, pero muchas investigaciones han adoptado el Histo-Clear (o equivalentes) con un sustituto. Histo-Clear actualmente es considerado no txico y puede ser dispensado fcilmente. Usar Histo-Clear slo si completas los pasos de deshidratacin e infiltracin en un periodo relativamente corto de tiempo (Histo-Clear puede ser sustituido por xileno, pero asegrate de transverir los tejidos a travs de las soluciones dentro de un periodo de una semana. Una mayor cantidad de tiempo a altas temperaturas destilar Histoclear en una masa viscosa que atrapar los tejidos, volvindolos no tiles). Debido a las dificultades potenciales usando Histo-Clear, el mtodo de infiltracin descrito aqu usa xileno, aunque puede ser sustituido por Histo-Clear. Los tiempos en este programa asumen muestras de tejidos pequeas (1-2 mm). Comenzar esta serie despus de completar los pasos de deshidratacin del tejido.PasoEtOH:xilenoTiempo

13:11 h

21:11 h

31:31 h

4xileno1 h

5xileno1 h

6proceder con la infiltracin en parafina/xileno

Infiltracin en parafina/xileno1. Aadir virutas de parafina (alrededor de 1 viruta / mm de xileno) al vial del tejido, tapar y poner a temperatura ambiente. Repetir despus de 4 h hasta overnight o hasta que se disuelva la viruta.2. Transferir el vial tapado a 42C y aadir 2 3 virutas de parafina cada hora o dos horas. Cuando no se disuelvan ms virutas, el xileno se ha saturado de parafina (a esa temperatura) y puedes proceder con el paso 3.3. Quitar 1/3 del volumen, y reemplazar con un volumen igual de parafina fundida. Quitar la tapa del vial y poner a 58C como mnimo durante 4 horas. Es mejor, sin embargo, continuar con el paso 4 mejor que dejar overnight.* Cuando viertas parafina sobre xileno a 42C (o temperatura ambiente) la parafina solidificar. Intenta formar un capuchn de parafina sobre la parte alta del xileno de manera que no se estropeen los tejidos que estn en la parte baja del vial. Esta tcnica disminuye la posibilidad de dao en los tejidos por temperatura.4. Despus que la parafina funda (unas 4h) quitar la mitad del lquido y reemplazar con un volumen igual de parafina fundida. Los tejidos deben ser mantenidos ahora overnight a 58C, aunque contina si es posible.5. Rehacer el paso 4 dos veces ms, entonces vaca toda la mezcla de parafina/xileno y aade parafina lquida pura. Rehazlo dos veces ms a intervalos de 4 horas (overnight para el ltimo paso).6. Cuando no detectes residuos de xileno procede con la en castracin.En castracin en parafinaLas muestras de tejidos estn encastradas en bloques de parafina (o PEG) usando contenedores disponibles en plstico o porcelana, discos de aluminio, o en "botes hechos con papel". Cuando uses estos mtodos, extiende una fina capa de aceite de parafina en la superficie antes de vaciar la parafina lquida para permitir que se desmonte ms fcilmente el bloque de parafina.La en castracin de tejidos imbibidos con parafina se realiza ms fcilmente sobre una plataforma de en castracin. Esta es una superficie simple de aluminio, que tiene una de sus superficies calentadas y no la otra. Cuando est caliente, el lado calentado mantiene la parafina lquida permitiendo que el tejido pueda ser orientado.Cuando el bloque de parafina ha solidificado, pon cuidadosamente el bloque entre 4C-temperatura ambiente. La parafina actual no necesita ser enfriada en un bao de hielo. La solidificacin rpida da como resultado la formacin de cristales ms pequeos de parafina y permite lograr unos cortes ms uniformes. (3)

Corte: El taco ahora se puede cortar en secciones lo suficientemente delgadas como para permitir el paso de la luz. La mayor parte de los preparados para microscopia ptica tienen un grosor entre 3 a 10 micrmetros. Para estos cortes se utiliza un aparato llamado MICROTOMO. Cuando deseamos estudiar grasas o lpidos que se extraen en el proceso de aclaramiento o enzimas que quedan inactivadas por el calentamiento de la inclusin, nos auxiliamos con la Tcnica de Congelacin de Tejidos. Un tejido congelado, es los suficientemente duro para ser cortado.Se sumerge la muestra de tejido en Nitrgeno lquido para tener una congelacin rpida. Luego se corta con un aparato especial denominado MICROTOMO DE CONGELACIN, existe un aparato ms elaborado y eficiente para los cortes de congelacin llamado CRIOSTATO. La ventaja de esta tcnica es que los cortes que se obtienen son muy rpidos, se puede utilizar en el diagnstico de material patolgico, tomado en intervenciones quirrgicas y el resultado se obtiene en el transcurso de una operacin. (4)Tincin: La tincin es necesaria, ya que los tejidos animales son en su gran mayora incoloros, excepto aquellos que poseen algn tipo de pigmento como la sangre o la melanina de la epidermis, por lo cual es necesario teirlos para observar sus caractersticas morfolgicas. Las tinciones generales estn basadas en el uso de colorantes, sustancias mediante las cuales se consigue colorear a los tejidos. Los colorantes son normalmente hidrosolubles y se caracterizan por unirse a ciertas molculas presentes en los tejidos debido a afinidades qumicas. Existen otras tcnicas de tincin como la histoqumica, lectinas, inmunocitoqumica, hibridacin. (5)

Observacin: El ltimo paso de todo proceso histolgico es la observacin del resultado producido por la tcnica realizada, para lo cual se utilizan los microscopios que son equipos que permiten aumentar la imagen de las muestras para observar estructuras tisulares tan pequeas como son las clulas o sus compartimentos. (5)

ESTUDIE LAS CARACTERTICAS DEL DISEO DE SU MICROTOMO Y APRENDA A UTILIZARLASLos micrtomos con retraccin estn diseados para que la muestras se retire de la cuchilla en la carrera ascendente. Es importante saber si su micrtomo tiene esta prestacin. La posicin retrada es una caracterstica de diseo que proporciona distintas ventajas durante el corte y prolonga la vida de la cuchilla Al usas un micrtomo de retraccin, el alineamiento de la cara del bloque al borde de la cuchilla deber ser efectuad con el bloque en la carrera descendente ( en la posicin avanza- no retrada) Si un bloque est alineado cerca del borde de la cuchilla mientras el brazo de la muestras est en la posicin retrada mas el grosor de la seccin seleccionada. Esto provocara que se cortara un trozo grueso que podra daar tanto la muestras como la cuchilla Los micrtomos tambin pueden ser manuales, semimotorizados o completamente motorizados. Los equipos motorizados reducen los movimientos repetitivos que pueden contribuir a desarrollar enfermedades msculos- esqueltico.CLASIFICACION DE RESIDUOS Bolsas negras: residuos de tipo no infeccioso o riesgoso Bolsas rojas: residuos patognicos Desechos especiales Corto punzantes Se requiere que el personal ponga los desechos en el lugar que corresponde y las bolsas de basura deben ser cambiadas a diario por el personal de aseo MUESTRA: Instrumentos y equipos

MATERIALES, EQUIPOS Macroscpica Equipos o estacin de inclusin de tejidos en parafina Plancha fra (5C) Micrtomo Bao de flotacin Estufa de histopatologa Batera de tincinPROCEIMIENTO1. El estudiante recibir informacin sobre el rea, distribucin y elementos que deben integrar el laboratorio de anatoma patolgica2. El estudiante observara, conocer y pondr en prctica los protocolos de generacin y eliminacin de desechos

TCNICA*El estudiante describir en su informe las reas, cada equipo que conforma la misma, protocolos utilizados en la presente practica en lo que se refiere al reconocimiento del rea de anatoma patolgica.ANEXOSEn esta imagen podemos observar la adecuada forma de ponernos las barreras que nos protegern de un accidente

En esta imagen tenemos lo que es la clasificacin de los desechos

En esta imagen se observa la maquina de inclusin de parafina

En esta imagen se observa el micrtomo para el corte de tejidos

CONCLUCIONES.Se identific cada rea que existe en el rea de anatoma patolgica y que as tengamos ideas claras de ubicaciones para poder realizar los diferentes tipos de procesamientos de tejidos.Una vez que se presente las respectivas indicaciones sobre la distribucin del rea de anatoma patolgica tambin es necesario recalcar en que parte se ubican los equipos y los materiales que vamos a ocupar en esta rea as como tambin las distintas clases de desechos es decir la clasificacin de estos, y, las normas de bioseguridad que debemos aplicar en esta rea para as no ocasionar algn accidente

RECOMENDACIONES Se recomienda el uso de las barreras protectoras para el personal que este en el rea de anatoma patolgica.Se recomienda la aplicacin de las normas de bioseguridad, para no ocasionar accidentesTambin se recomienda al encargado del grupo del laboratorio encender unas 5 horas antes de la prctica el equipo de inclusin de parafina

SITIOS WEB.1. yusse. monografias. [En lnea] [Citado el: 02 de 11 de 02//11/15.] http://www.monografias.com/trabajos11/intecnic/intecnic.shtml.2. atlas de histologia . [En lnea] [Citado el: 02 de 11 de 02/11/2015.] http://mmegias.webs.uvigo.es/6-tecnicas/2-metodos-fijacion.php.3. [En lnea] [Citado el: 02 de 11 de 02/11/2015.] http://www.euita.upv.es/varios/biologia/tecnicas_de_histologia_vegetal/Documentos/Inclusion_p.htm.4. mongrafias. [En lnea] [Citado el: 02 de 11 de 2015.] http://www.monografias.com/trabajos11/intecnic/intecnic2.shtml#seccionoca.5. wikibooks. [En lnea] [Citado el: 02 de 11 de 2015.] https://es.wikibooks.org/wiki/Histolog%C3%ADa/Preparaci%C3%B3n_de_cortes_histol%C3%B3gicos.