Injertos tecnicas modernas

7/24/2019 Injertos tecnicas modernas

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Criopreservación de células madre de sangre periférica.Criopreservación de células madre de sangre periférica.

Copyright © Treviño-Quintanilla LE Treviño-!angel L Treviño-"alinas #$ %riegas-&le'andro & (alde)-*lores +L (alde)-Le)a CE (alde)-

!am,re) #& ()ue)-&yala +& ()ue)-Cisneros /C. Monterrey, NL. México. Julio de 1998.

1

Criopreservación0Criopreservación0 Técnicas para conservar tejidos vivos a bajas temperaturas.Técnicas para conservar tejidos vivos a bajas temperaturas.

Transplante de células madre de sangre periféricaTransplante de células madre de sangre periférica

12$"CT3012$"CT30 Transplante autólogo o alogénico de células madreTransplante autólogo o alogénico de células madre

pluripotenciales obtenidas de sangre periférica (no de médula pluripotenciales obtenidas de sangre periférica (no de médula

ósea).ósea).

Introducción.Introducción.






2

Antecedentes. Antecedentes.

4565.4565. /licerol como crioprotector./licerol como crioprotector. 12olge12olge et al et al .3.3..

4574.4574. Células madre en sangre periférica en ratonesCélulas madre en sangre periférica en ratones

12$"C312$"C3 1$recher1$recher et al et al 33..

4586.4586. 2$"C en humanos2$"C en humanos 1*reireich1*reireich et al et al 33..

4599.4599. 2rimer 2$"CT en perros2rimer 2$"CT en perros 1Cavins1Cavins et al et al 33..

45:8.45:8. 2rimer 2$"CT y criopreservación en humanos2rimer 2$"CT y criopreservación en humanos

1;essinger1;essinger et al et al 33..

455<.455<. 2rimer 2$"CT humano con selección de2rimer 2$"CT humano con selección de

células C=<6células C=<6>> 1"hpall1"hpall et al et al 33..






3

Transplante de médula ósea (BMT) vs. PBSCT.Transplante de médula ósea (BMT) vs. PBSCT.

BMTBMT

BMTBMT PBSCTPBSCT

PBSCTPBSCT

2aciente internado.2aciente internado.2aciente internado.2aciente internado.

!euiere anestesia.!euiere anestesia.!euiere anestesia.!euiere anestesia.

!econstitución inmune a 4 año.!econstitución inmune a 4 año.!econstitución inmune a 4 año.!econstitución inmune a 4 año.

4? veces ms células madre.4? veces ms células madre.4? veces ms células madre.4? veces ms células madre.

&mplia e@periencia. &mplia e@periencia. &mplia e@periencia. &mplia e@periencia.

2aciente no internado.2aciente no internado.2aciente no internado.2aciente no internado.

"in anestesia."in anestesia."in anestesia."in anestesia.

!econstitución inmune temprana.!econstitución inmune temprana.!econstitución inmune temprana.!econstitución inmune temprana.

4? veces ms linfocitos T.4? veces ms linfocitos T.4? veces ms linfocitos T.4? veces ms linfocitos T.

2oca [email protected] [email protected] [email protected] e@periencia.






4

Ao hay necesidad de hospitali)ar al donador deAo hay necesidad de hospitali)ar al donador de

2$"C.2$"C.

Ao precisa ningBn tipo de anestesia.Ao precisa ningBn tipo de anestesia.

!pida recuperación hematopoyética en el receptor.!pida recuperación hematopoyética en el receptor.

$uen recurso para pacientes en uienes es dif,cil$uen recurso para pacientes en uienes es dif,cil

otener médula ósea.otener médula ósea.

Ventajas del PBSCT.Ventajas del PBSCT.






5

ases del PBSCT.ases del PBSCT.

#ovili)ación.#ovili)ación.

&féresis. &féresis. "elección celular."elección celular.

Criopreservación.Criopreservación.

QuimioterapiaQuimioterapia

yDo radioterapia.yDo radioterapia.

=ilución=ilución

y lavado.y lavado.=escongelamiento.=escongelamiento.

#ieloestimulación.#ieloestimulación.

nfusión.nfusión.






6

Movili!ación de células madre a san"reMovili!ación de células madre a san"re

peri#érica. peri#érica. La administración de /#-C"* aumenta a ms deLa administración de /#-C"* aumenta a ms de

<?@4?<?@4?88 el nBmero de /#-C*%.el nBmero de /#-C*%.

La administración de uimioterapia por 6 o 7 d,asLa administración de uimioterapia por 6 o 7 d,as

aumenta 46 veces los valores asales de /#-C*%.aumenta 46 veces los valores asales de /#-C*%.

<@4?<@4?55DFg de /#-C"*.DFg de /#-C"*. La cantidad óptima de células mononucleares es de 8-La cantidad óptima de células mononucleares es de 8-

9@4?9@4?::DFg de peso.DFg de peso.






7

$ecolección de PBSC.$ecolección de PBSC.

"e inicia cuando las células C=<6"e inicia cuando las células C=<6>> son el ?.4G de lasson el ?.4G de las

células nucleadas.células nucleadas.

Htención por aféresis de 8? mlDmin por 6 horas.Htención por aféresis de 8? mlDmin por 6 horas.

"e prepara en 7 d,as con un m,nimo de 47@4?"e prepara en 7 d,as con un m,nimo de 47@4?88 célulascélulas

C=<6C=<6>>DFg de peso.DFg de peso. La mayor parte de la recolección es en la Bltima hora.La mayor parte de la recolección es en la Bltima hora.

7 células C=<67 células C=<6>>DDµµl de sangre periférica.l de sangre periférica.






8

Procesamiento de PBSC.Procesamiento de PBSC.

Ieterogeneidad entre la polación de células madreIeterogeneidad entre la polación de células madre

en médula y sangre periférica.en médula y sangre periférica.

#ayor nBmero de células maduras en sangre#ayor nBmero de células maduras en sangre

periférica.periférica.

#enor nBmero de células madre 1J?.4G3 en sangre#enor nBmero de células madre 1J?.4G3 en sangreperiférica.periférica.

En las neoplasias la presencia de invasión medular.En las neoplasias la presencia de invasión medular.

+ustificación. 1#édula ósea vs sangre periférica3.






9


&féresis. &féresis.

/radientes de separación por densidad./radientes de separación por densidad.

"elección de células C=<6"elección de células C=<6>>..

Eliminación de linfocitos y granulocitos.Eliminación de linfocitos y granulocitos.

E@pansiónE@pansión ex vivoex vivo..

#étodos.






10


=estrucción de células diferenciadas 1eritrocitos=estrucción de células diferenciadas 1eritrocitos

granulocitos etc3.granulocitos etc3.

Criopreservación imperfecta por la presencia deCriopreservación imperfecta por la presencia de

células maduras.células maduras.

To@icidad en la infusión por citocinas y componentesTo@icidad en la infusión por citocinas y componentesintracelulares.intracelulares.

2rolemas del procesamiento.






11

%esión por con"elación.%esión por con"elación.

=año mecnico por formación de hielo intra- y=año mecnico por formación de hielo intra- y

[email protected]@tracelular.

=año mecnico por e@pansión térmica.=año mecnico por e@pansión térmica.

Iiperosmolaridad e@tracelular y deshidratación.Iiperosmolaridad e@tracelular y deshidratación.

Camios en el pI.Camios en el pI.

=esnaturali)ación de prote,nas.=esnaturali)ación de prote,nas.

Causas de daño celular por congelación.






12

Teor&a de la con"elación.Teor&a de la con"elación.2ropiedad coligativa de los solutos.

?KC ?KC

?KC ?KC

Centros de nucleación

de hielo.

"olución eutéctica con

ms solutos segregados

1aBn con menor punto

de congelación3.

"olución eutéctica

1con menor punto de

congelación3.

"olución superenfriada.






13

%esión por con"elación.%esión por con"elación. =año mecnico.

Célula

sangu,nea.

Célula sangu,nea

destruida.


de hielo intracelulares.


de hielo.






14

%esión por con"elación.%esión por con"elación. =año osmótico 1deshidratación3.

Espacio e@tracelular

normosmótico.


hiperosmolal.


de hielo.

Célula sangu,nea

deshidratada.

Célula sangu,nea

normosmolar.

"alida de agua

intracelular.






15

Crioprotección.Crioprotección. #ecanismo coligativo.


normosmótico.

Espacio e@tracelular ligeramente hiperosmolal.


de hielo.Célula sangu,nea

con poco estrés

osmótico.

Célula

sangu,nea.

#olécula de

=#"H.






16

Crioprotección.Crioprotección. #ecanismo de la envoltura cristalina.


normosmótico.


hiperosmolal.


de hielo.

Célula sangu,nea con

ligera deshidratación.

Célula

sangu,nea.

#olécula de

IE".

Envoltura cristalina

de IE".






17

Ao dee ser tó@ico para las células a lasAo dee ser tó@ico para las células a las

concentraciones reueridas para la criopreservación.concentraciones reueridas para la criopreservación.

La concentración de los crioprotectores depender deLa concentración de los crioprotectores depender de

la tolerancia de la célula al crioprotector.la tolerancia de la célula al crioprotector.

=ee de ser eliminale antes de la infusión o inocuo=ee de ser eliminale antes de la infusión o inocuopara el paciente.para el paciente.

Crioprotectores.Crioprotectores.2ropiedades.






18

Crioprotectores.Crioprotectores.

Las sustancias crioprotectoras ms utili)adas son0Las sustancias crioprotectoras ms utili)adas son0Glicerol.Glicerol.

DMS (dimetilsulfóxido).DMS (dimetilsulfóxido).

Soluciones salino!glucosadas.Soluciones salino!glucosadas.

"rote#nas."rote#nas.

$%S (&idroxietilalmidón).$%S (&idroxietilalmidón).






19


Crioprotectores coligativos previenen la deshidrataciónCrioprotectores coligativos previenen la deshidratación

y disminuyendo la cantidad de agua asorida por losy disminuyendo la cantidad de agua asorida por los

cristales de hielo.cristales de hielo.

El =#"H es ligeramente tó@ico.El =#"H es ligeramente tó@ico.

&ctualmente se utili)a =#"H al 7G con IE" al 8G y &ctualmente se utili)a =#"H al 7G con IE" al 8G yalBmina sérica humana al 6G.alBmina sérica humana al 6G.

/licerol y dimetilsulfó@ido 1=#"H3.






20


/lucosa manitol y soritol a concentraciones mayores/lucosa manitol y soritol a concentraciones mayores

de ?.4 molar de ?.4 molar

Estaili)an la memrana celular durante laEstaili)an la memrana celular durante la

congelación o deshidratación.congelación o deshidratación.

La glucosa protege contra la citoto@icidad celular aLa glucosa protege contra la citoto@icidad celular aaltas concentraciones de =#"H.altas concentraciones de =#"H.

"oluciones salinoDglucosadas.






21


&umentan la supervivencia de las células cuando se &umentan la supervivencia de las células cuando se

agregan a la solución crioprotectora.agregan a la solución crioprotectora.

#odifican la viscosidad y la temperatura de la#odifican la viscosidad y la temperatura de la

transición hialina de la solución crioprotectora.transición hialina de la solución crioprotectora.

La fuente puede ser autóloga.La fuente puede ser autóloga.

2rote,nas.






22

Soluciones crioprotectoras.Soluciones crioprotectoras.

"ustancia polimérica con cadenas de diferentes pesos"ustancia polimérica con cadenas de diferentes pesos

moleculares ue no penetra la célula de forma lire.moleculares ue no penetra la célula de forma lire.

2rotege a la célula formando una capa viscosa y2rotege a la célula formando una capa viscosa y

hialina ue retarda el movimiento de agua.hialina ue retarda el movimiento de agua.

Iidro@ietilalmidón 1IE"3.






23

Congeladores mecnicos.Congeladores mecnicos.

-4?MC a -:8MC.-4?MC a -:8MC.

Congelador de nitrógeno l,uido.Congelador de nitrógeno l,uido.

-458MC a -46MC.-458MC a -46MC.

Almacenamiento. Almacenamiento.






24

Almacenamiento. Almacenamiento.

&lmacenamiento de células criopreservadas es en &lmacenamiento de células criopreservadas es en

olsas de plstico de 2(CDpoliolefin y en frascos deolsas de plstico de 2(CDpoliolefin y en frascos de

polietileno.polietileno.

Las olsas se colocan en cassettes de aluminio.Las olsas se colocan en cassettes de aluminio.






25

Velocidad de con"elación controlada.Velocidad de con"elación controlada.

=#"H al 4? G.=#"H al 4? G.

Concentración celular 7?@4?Concentración celular 7?@4?88Dml.Dml.

(elocidad inicial de -4MCDmin.(elocidad inicial de -4MCDmin.

En -6?MC incrementar a -4?MCDmin.En -6?MC incrementar a -4?MCDmin.

En -:?MC colocar en la fase gaseosa de nitrógenoEn -:?MC colocar en la fase gaseosa de nitrógeno

l,uido hasta -468MC.l,uido hasta -468MC.






26

Velocidad de con"elación no controlada.Velocidad de con"elación no controlada.

=#"H al 7 G con IE" al 8 G.=#"H al 7 G con IE" al 8 G.

Concentración celular de 4?Concentración celular de 4?55Dml.Dml.

Colocan en olsas de almacenamiento en unColocan en olsas de almacenamiento en un

congelador mecnico a -:?MC.congelador mecnico a -:?MC.

En los -:?MC incrementar a 4?-48MCDmin la velocidadEn los -:?MC incrementar a 4?-48MCDmin la velocidadhasta -468MC.hasta -468MC.

&lmacenar en la fase gaseosa de nitrógeno l,uido. &lmacenar en la fase gaseosa de nitrógeno l,uido.






27

Velocidad de con"elación.Velocidad de con"elación.Controlada vs no controlada.

-47?KC

-458KC

-:?KC

-??

-47?

-4??

-7?

?

7?

? 4? ? <? 6? 7? 8? 9? :? 5?

Tiempo 1min3.

T e m p

. 1 K C 3 .

Aitrógeno 1gas3

Aitrógeno 1l,uido3

Congelador mecnico

-47?KC

-458KC

-:?KC

-??

-47?

-4??

-7?

?

7?

? 4? ? <? 6? 7? 8? 9? :? 5?

Tiempo 1min3.

T e m p .

1 K C 3 .

Aitrógeno 1gas3

Aitrógeno 1l,uido3

Congelador mecnico

Tolerancia de

la congelación

no controlada.

Congelación con

velocidad controlada.






28

Ventajas de la con"elación no controlada.Ventajas de la con"elación no controlada.

#enor costo.#enor costo.

#enor tiempo técnico.#enor tiempo técnico.

El IE" previene la lisis de granulocitos durante elEl IE" previene la lisis de granulocitos durante el

descongelamiento.descongelamiento.

%sando =#"H al 7G disminuyen las reacciones%sando =#"H al 7G disminuyen las reaccionestó@icas durante la infusión.tó@icas durante la infusión.

"encillo."encillo.

#enos espacio en el congelador.#enos espacio en el congelador.






29

'escon"elamiento.'escon"elamiento.

=escongelamiento rpido.=escongelamiento rpido.

(elocidad N4??KCDmin a <9KC en año #ar,a.(elocidad N4??KCDmin a <9KC en año #ar,a.

"e tiene me'or tasa de supervivencia celular con"e tiene me'or tasa de supervivencia celular con

descongelamiento rpidodescongelamiento rpido 1N4??KCDmin31N4??KCDmin3 ue conue con

descongelamiento lentodescongelamiento lento 1J7KCDmin31J7KCDmin3..






30

5LG

99G

94G89G

87G 86G84G

6<G 6<G<5G

<8G

48G 47G 46G

?

4?

L?

<?

6?

7?

8?

9?

:?

5?

4??

I e m o g l o i n u r i a

A a B

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* i e r e

E s c a l o f r , o s

( ó

m i t o

T a u i c

a r d i a

T a u i

p n e a

O i l i r r u

. s é r .

T o s

= i a

r r e a

! u o r i )

a c i ó n

O c r e a t . s é r .

C e f a l e a

* r e c u e n c i a

1

5LG

99G

94G89G

87G 86G84G

6<G 6<G<5G

<8G

48G 47G 46G

?

4?

L?

<?

6?

7?

8?

9?

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5?

4??

I e m

o g l o

i n u r i a

A a B s e a s

O T &

*

i e r e

E s c a

l o f r , o s

(

ó m i t o

T a u i c a r d i a

T a u

i p n e a

O i l i r r u

.

s é r .

T o s

= i a r r e a

! u o r i ) a c i ó n

O c r e a

t . s é r .

C e

f a l e a

*

r e c u e n c i a

1

#ectos asociados a la in#usión de PBSC.#ectos asociados a la in#usión de PBSC.






31

#ectos asociados a la in#usión de PBSC.#ectos asociados a la in#usión de PBSC.

Los efectos colaterales de la infusión de 2$"C seLos efectos colaterales de la infusión de 2$"C se

minimi)an reduciendo el volumen total y las célulasminimi)an reduciendo el volumen total y las células

ro'as infundidas.ro'as infundidas.

Los métodos de selección celular disminuyen losLos métodos de selección celular disminuyen los

efectos colaterales y me'oran la velocidad deefectos colaterales y me'oran la velocidad derespuesta del in'erto.respuesta del in'erto.






32

Control de calidad de la criopreservación.Control de calidad de la criopreservación.

Conteo 1citometr,a3Conteo 1citometr,a3 (tasas de recuperación de células(tasas de recuperación de células

mononucleares' D*mononucleares' D*++' eritrocitos , "M-)' eritrocitos , "M-)..

Ensayos metaólicos.Ensayos metaólicos.

2ruea de viailidad por e@clusión de tinción2ruea de viailidad por e@clusión de tinción (con aul(con aul

de tr#pano o ,oduro de propidio)de tr#pano o ,oduro de propidio).. Cultivo de C*%-/#Cultivo de C*%-/# (con dilución seriada de DMS , adición(con dilución seriada de DMS , adición

de sorbitol)de sorbitol)..

(aloración in vitro.






33

Indicaciones.Indicaciones.

Aeoplasias.Aeoplasias.

!escate medular posterior a radioterapia o uimioterapia de!escate medular posterior a radioterapia o uimioterapia de

altas dosis.altas dosis.

Tumores sólidos.Tumores sólidos.

/eucemias' linfomas , mielomas./eucemias' linfomas , mielomas.

Iipoplasias medulares.Iipoplasias medulares. 0nemia apl1stica' transtornos genéticos. 0nemia apl1stica' transtornos genéticos.

Las mismas indicaciones ue el $#T.Las mismas indicaciones ue el $#T.

%sos del 2$"CT.






34


rradiación pélvica.rradiación pélvica.

nfiltración neoplsica de la médula ósea.nfiltración neoplsica de la médula ósea.

Iipoplasia de médula ósea.Iipoplasia de médula ósea.

Aeoplasia pélvica paramedular.Aeoplasia pélvica paramedular.

%sos espec,ficos del 2$"CT.






35


Leucemias crónicas.Leucemias crónicas.

Leucemias agudas.Leucemias agudas.

Linfomas no IodgFin.Linfomas no IodgFin.

Linfomas IodgFin.Linfomas IodgFin.

#ielomas mBltiples.#ielomas mBltiples.

Ca de mama.Ca de mama.

Ca de ovario.Ca de ovario.

"arcoma de te'idos landos."arcoma de te'idos landos.

Ca. de pulmón de célulasCa. de pulmón de células

peueñas.peueñas.

Aeurolastoma.Aeurolastoma.

Tumor de Pilms.Tumor de Pilms.

Htros tumores sólidos.Htros tumores sólidos.

Aeoplasias tratadas con 2$"CT autólogo.






36

$ecuperación.$ecuperación.

%so de movili)ador.%so de movili)ador.

%so de selección y e@pansión celular%so de selección y e@pansión celular ex vivoex vivo..

Leucoféresis.Leucoféresis.

Tiempo de almacenamiento.Tiempo de almacenamiento.

Hrigen alogénico o autólogo.Hrigen alogénico o autólogo.

"oporte mieloestimulante post-transplante."oporte mieloestimulante post-transplante.

#ielofirosis.#ielofirosis.

*actores de recuperación después del 2$"CT.






37

$ecuperación.$ecuperación.2armetros de é@ito del 2$"CT.

&AC &AC ≥≥ 7?? célulasD7?? célulasDµµL.L.

2LT2LT ≥≥ 7???? plauetasD7???? plauetasDµµL.L.






38


To@icidad del criopreservador.To@icidad del criopreservador.

Iemorragia.Iemorragia.

nfecciones 1hongos C#(nfecciones 1hongos C#( p. carinii p. carinii 3.3.

*alla del transplante.*alla del transplante.

!echa)o del transplante.!echa)o del transplante.

/(I= aguda y crónica./(I= aguda y crónica.

2rolemas psicológicos.2rolemas psicológicos.

Htros asociados al tratamiento radio- yDoHtros asociados al tratamiento radio- yDo

uimioterapéutico.uimioterapéutico.

Complicaciones posteriores al 2$"CT.






39


?

7

4?

47

L?

L7

<?

"in movili)ación Citoc. o QmT@. Citoc. y QmT@. $#T $#T con QmT@.

= , a s

ANC

PLT

?

7

4?

47

L?

L7

<?

"in movili)ación Citoc. o QmT@. Citoc. y QmT@. $#T $#T con QmT@.

= , a s

ANC

PLT

!ecuperación posterior al 2$"CT autólogo vs $#T autólogo.






40

Técnicas en desarrollo.Técnicas en desarrollo.

"elección celular mBltiple."elección celular mBltiple.

Auevos mieloestimulantes post-transplante.Auevos mieloestimulantes post-transplante.

E@pansiónE@pansión ex vivoex vivo..

Terapia genéticaTerapia genética ex vivoex vivo..

&plicación en enfermedades autoinmunes. &plicación en enfermedades autoinmunes. 2$"CT alogénico sin compatiilidad IL&.2$"CT alogénico sin compatiilidad IL&.

(itrificación como método criopreservador.(itrificación como método criopreservador.

2rotocolos de 2$"CT y uimioterapia seriados.2rotocolos de 2$"CT y uimioterapia seriados.






41

Conclusiones.Conclusiones.

El 2$"CT es superior al $#T en todas lasEl 2$"CT es superior al $#T en todas lasaplicaciones si se utili)a selección celular.aplicaciones si se utili)a selección celular.

El uso de =#"HDIE" con velocidad de congelaciónEl uso de =#"HDIE" con velocidad de congelación

no controlada es el me'or método criopreservador.no controlada es el me'or método criopreservador.

Las nuevas técnicas de selección y e@pansión celularLas nuevas técnicas de selección y e@pansión celularampliarn la aplicación del 2$"CT.ampliarn la aplicación del 2$"CT.

#uchos protocolos y agentes uimioterapéuticos#uchos protocolos y agentes uimioterapéuticos

antes imposiles podrn aplicarse con el 2$"CT.antes imposiles podrn aplicarse con el 2$"CT.

El 2$"CT est sustituyendo al $#T tanto elEl 2$"CT est sustituyendo al $#T tanto el

autólogo como el alogénico.autólogo como el alogénico.






42mario alberto valdez ramirez ramírez mavr ilinium interactive bureau iab ibs uanl histología histologia medicina medicine mariovaldez mvaldez desarrollo,

development, edicion edicion editing biomedicina biomedical medical ciencia, ciencias, histology, Spanish Mexico Microsoft MVP traducción traduccion

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