Introducción al proyecto

General:

El sistema nervioso es una red de tejidos altamente especializada, que tiene como componente principal a las neuronas, células que se encuentran conectadas entre sí de manera compleja y que tienen la propiedad de conducir, usando señales electroquímicas, una gran variedad de estímulos dentro del tejido nervioso y hacia la mayoría del resto de los tejidos, coordinando así múltiples funciones del organismo. En el caso del humano, el sistema nervioso constituye el 70% del cuerpo, por lo general los nervios van conectados desde ligamentos hasta pequeñísimas arterias y conexiones. La neurona es la unidad funcional y estructural del sistema nervioso que produce y transmite el impulso nervioso. Esta se encuentra formada por tres partes: El cuerpo neuronal o soma, una prolongación larga y poco ramificada llamada axón y otras prolongaciones muy ramificadas alrededor del soma llamadas dendritas.

La sinapsis (del griego σύναψις, "enlace") es un

contacto, muy especializado, que se establece entre dos neuronas y a través del cual se transmiten las señales nerviosas de unas células nerviosas a otras.

La mielina es un sistema de bicapas fosfolipídicas y proteínas que se encuentra en el sistema nervioso, en concreto formando vainas alrededor de los axones de las neuronas en seres vertebrados y permite la transmisión de los impulsos nerviosos entre distintas partes del cuerpo gracias a su efecto aislante. En el sistema nervioso periférico, los axones de nervios craneales y raquídeos están rodeados por vainas de mielina producida por las células de Schwann. En cambio, la mielina que rodea los axones que se encuentran en el sistema nervioso central es producida por las células llamadas oligodendrocitos.

Nuestro estudio se centra en el SNP, por lo que ahora se informará sobre las células de Schwann: son células gliales periféricas que se originan en la cresta neural embrionaria y acompañan a la neurona durante su crecimiento y desarrollo. Recubren a las prolongaciones (axones) de las neuronas formándoles una vaina aislante de mielina.

Según el diámetro del axón, la célula de Schwann desarrolla una estructura diferente:

Acompañando a los axones neuronales de pequeño diámetro, se encuentran las células de Schwann no mielinizantes (sin mielina) y pueden alojar varios axones.

Por el contrario, los axones de mayor diámetro, son envueltos por células de Schwann mielínizantes, es decir que sí poseen mielina. A lo largo de los axones, en su envoltura mielínica se producen bandas circulares sin mielina, lo cual parece coincidir con el límite entre las células de Schwann. Estas bandas sin mielina se llaman nodos de Ranvier. La mielina se compone de capas concéntricas de la membrana de las células de Schwann que rodean de manera espiralada al axón de la neurona.

La mielina, que envuelve al axón, provoca que la señal eléctrica que lo recorre no pierda intensidad, facilitando que se produzca la denominada conducción saltatoria. El impulso nervioso puede ir a una mayor velocidad gracias a estas vainas de mielina, ya que el impulso va de nodo en nodo, salteándolos. De otra forma el impulso nervioso sería muy lento y cada señal en el organismo llegaría muy tarde.

También las células de Schwann ayudan a guiar el crecimiento de los axones y en la regeneración de las lesiones (neurapraxia y axonotmesis, pero no en la neurotmesis) de los axones periféricos.

El nervio ciático es el nervio más ancho y largo del cuerpo. Comienza en la pelvis, va hasta la parte superior de los muslos por los cuales continúa y se divide en dos pequeñas ramas detrás de la rodillas que van hasta los pies. Este nervio del SNP, se caracteriza por ser rico en mielina, es por ello que es utilizado como modelo de nervio periférico para el estudio de los procesos de desmielinización-remielinización nerviosa.

Para los estudios en seres humanos, el sistema nervioso se puede dividir en dos partes: el sistema nervioso central (SNC) y el sistema nervioso periférico (SNP). Nuestro estudio específico se centra en el SNP: Ala vez el sistema nervioso periférico esta compuesto por: El sistema nervioso somático (SNS) y el sistema nervioso autónomo.

El sistema nervioso somático está formado por neuronas sensitivas que llevan información (por ejemplo, dolor) desde los receptores sensoriales (de los sentidos: piel, ojos, etc.) -fundamentalmente ubicados en la cabeza, la superficie corporal y las extremidades. Se encarga de obtener y transmitir la información detectada por los sentidos y de enviar instrucciones que permiten el movimiento voluntario de los músculos. El sistema nervioso autónomo, (también conocido como sistema nervioso vegetativo), a diferencia del sistema nervioso somático, recibe la información de las vísceras y del medio interno, para actuar sobre sus músculos, glándulas y vasos sanguíneos. A diferencia del sistema nervioso somático y central, es involuntario

activándose principalmente por centros nerviosos situados en la médula espinal, tallo cerebral e hipotálamo. También, algunas porciones de la corteza cerebral como la corteza límbica, pueden transmitir impulsos a los centros inferiores y así, influir en el control autónomo. El sistema nervioso autónomo es sobre todo un sistema eferente e involuntario que transmite impulsos desde el sistema nervioso central hasta la periferia estimulando los aparatos y sistemas de órganos periféricos. Estas acciones incluyen: el control de la frecuencia cardiaca y la fuerza de contracción, la contracción y dilatación de vasos sanguíneos, la contracción y relajación del músculo liso en varios órganos, acomodación visual, tamaño pupilar y secreción de glándulas exocrinas y endocrinas, regulando funciones tan importantes como la digestión, circulación sanguínea, respiración y metabolismo.

A su vez el sistema nervioso somático esta compuesto por los nervios espinales y los nervios craneales.

Los nervios espinales o también conocidos como nervios raquídeos son aquellos que se prolongan desde la médula espinal y atraviesan los orificios vertebrales para distribuirse en las distintas zonas del cuerpo. Se dividen en sensitivos y motores, los cuales entran y emergen a la medula respectivamente; los sensitivos por la cara posterior de la médula y los motores por la cara anterior de ésta y salen directamente de la sustancia gris que está cubierta por la sustancia blanca de la médula, al juntarse se forma un nervio mixto el cual tiene características de los dos tipos de fibras. Antes de formar el nervio la raíz sensitiva posee un ganglio sensitivo que es una acumulación de células.

Los nervios craneales o pares craneales son los que envían información sensorial procedente del cuello y la cabeza hacia el sistema nervioso central. Reciben órdenes motoras para el control de la musculatura esquelética del cuello y la cabeza. Está conformado por 12 pares de nervios.

El sistema nervioso autónomo esta dividido funcionalmente en:

Sistema simpático : usa noradrenalina como neurotransmisor, y lo constituye una cadena de ganglios. Está implicado en actividades que requieren gasto de energía. También es llamado sistema adrenérgico o noradrenérgico.

Sistema parasimpático : Lo forman los ganglios aislados y usa la acetilcolina. Está encargado de almacenar y conservar la energía. Es llamado también sistema colinérgico.

Rama entérica : regula la actividad gastrointestinal y coordina los reflejos peristálticos.

He aquí una imagen que representa al sistema nervioso autónomo:

Todos los tejidos y órganos de los animales vertebrados, incluyendo al hombre, regulan su crecimiento y mantenimiento a través de moléculas de señalización difusibles. Dichas señales son requeridas para la supervivencia de todas las células de los organismos multicelulares, y su ausencia provoca la muerte celular. Esas moléculas son los llamados factores tróficos. Estas proteínas ejercen su función a través de receptores situados en los órganos blanco (sea tejido periférico o perteneciente al sistema nervioso central). En muchos tejidos la expresión de estos factores es incrementada en respuesta a trauma, inflamación, infección o crecimiento tumoral.     

Existen fuertes evidencias que indican que la supervivencia de los precursores de las CS es absolutamente dependiente de señales axonales mediadas por la neuregulina. La supervivencia de las CS, sin embargo, debe ser regulada de una manera diferente, desde que la transección de un nervio adulto no lleva a la muerte de las CS (Grinspan y col 1996, Trachtenberg y col 1996). Las CS de la region distal de los nervios transectados sobreviven un tiempo considerable en ausencia de axones, aunque el número disminuye gradualmente y pierden algunas de las señales externas (Li y col 1998). Asimismo, las CS sobreviven bien sin la presencia de neuronas in vitro bajo condiciones normales de cultivo, por ejemplo cuando se siembran a una moderada y aún a alta densidad (Jessen y col 1994). Estas observaciones indican que hay cambios en el desarrollo de las CS: la supervivencia de precursores depende de señales axonales, mientras que la supervivencia de la CS maduras es axón independiente.

La supervivencia de las CS en ausencia de axones es crítica en el contexto de la regeneración nerviosa. Las CS se separan del axón en el segmento distal de la injuria nerviosa. Para que la reparación sea exitosa, los axones deben entrar en este segmento y crecer a través de él de manera de permitir el correcto direccionamiento a los blancos. Numerosos estudios han mostrado que el crecimiento del axón depende de la presencia de las CS existentes en el segmento distal del nervio injuriado, probablemente a raíz de que los axones requieren interacciones con las moléculas de adhesión de las CS tal como L1 y N-CAM, con moléculas de la matriz extracelular como laminina 2 y con

factores tróficos como NGF (factor de crecimiento nervioso), BDNF (factor nervioso derivado del cerebro) y NT3 (neurotrofina 3) (Fawvett y col 1990, Nadim y col 1990).

Los factores tróficos necesarios para la supervivencia de las neuronas, se denominan factores neurotróficos, dentro de los cuales existen varias familias. Las neurotrofinas constituyen una de dichas familias.     La supervivencia de la mayoría de las neuronas parece depender no solamente de una única molécula, sino de múltiples factores de la misma familia, o de distintas familias que pueden ser requeridos secuencialmente o simultáneamente. Las neuronas normalmente pueden cambiar su dependencia de uno a otro factor durante el desarrollo, y la ausencia de estos factores o de sus receptores, producen la muerte de todas las neuronas que dependen de él. Frecuentemente distintas poblaciones de neuronas responden al mismo factor de diversas formas, y la misma neurona puede responder en forma diferente al mismo factor, dependiendo del estadio del desarrollo en el que se encuentre.     Como los neurotransmisores, los factores tróficos actúan sobre distancias relativamente cortas como mensajeros químicos entre células, y pueden causar cambios transitorios rápidos en la actividad sináptica, como así también cambios a largo plazo en las neuronas. Actualmente se ha adoptado el nombre de citokinas para incluir varias familias de proteínas de secreción que median diversas respuestas biológicas, incluyendo cambios en el sistema inmune (interleukinas), citotoxidad tumoral (TNF: tumor necrosis factor), inhibidores de la replicación viral o del crecimiento celular (interferones), supervivencia y diferenciación neuronal (neurotrofinas, dentro de las cuales están: NGF: nerve growth factor, BDNF: brain derived neurotrophic factor, NT-3: neurotrofina 3, NT4/5: neurotrofina 4/5, NT6: neurotrofina 6), proliferación y diferenciación celular en diversos tejidos y órganos, y diferenciación de células IGFs: insulin-like growth factors, GDNF: glial cell-line derived neurotrophic factor, TGF: transforming growth factor, FGF: fibroblast growth factor, EGF: epidermal growth factor, etc).

La membrana de mielinaA medida que el sistema nervioso madura, la mielinización comienza primero en

ciertos sectores del SNP, luego la médula espinal y por último el cerebro. La mielina es una membrana presente en el sistema nervioso de todos los vertebrados y su función es facilitar la conducción del impulso nervioso en los axones. Se origina luego de una modificación de la membrana plasmática de las células de Schwann (CS) en el SNP y de los oligodendrocitos (OLG) en el SNC. Rodea a los axones en forma de espiral, constituyendo alrededor del 50% de su peso seco.

Organización de la mielina en el SNP Cada unidad CS-axón de una fibra mielinizada se llama internodo, esta región se

localiza entre dos nodos de Ranvier, que representan a segmentos de axón no recubiertos por mielina. Así, el componente glial de cada nodo de Ranvier está formado por regiones laterales no compactadas de dos CS adyacentes como se muestra en la figura 5.

Fig. 5. Representación esquemática de un axón mielinizado (sección longitudinal). La parte de la izquierda del diagrama muestra una ampliación de la región de la mielina compacta para ilustrar la formación de la línea densa mayor y las líneas intraperiódicas. Para simplificar el esquema las proteínas de la mielina se omitieron de la bicapa de la membrana. (Garbay B, Progress in Neurobiology, 2000)

La formación de internodos consecutivos a través de la fibra mielinizada es la clave de la propagación del impulso nervioso (Stampfli y col 1981, Ritchie y col 1984, Waxman y col 1985, Ritchie y col 1987) que ocurre a través del proceso denominado "conducción saltatoria". Tiene una ventaja sobre los sistemas invertebrados más primitivos, con una rápida conducción basada en los axones más largos, ahorrando de esta manera espacio y energía durante la propagación del impulso.

Los estudios por microscopía electrónica permiten visualizar a la mielina como una superposición de diferentes capas de proteínas que aparecen como líneas alternadas oscuras y menos oscuras, separadas por cadenas de lípidos, sin tinción. La línea menos oscura o intraperiódica corresponde a las caras externas de la membrana citoplasmática que están en aposición cercana (pero no fusionada) con las proteínas que se encuentran insertas allí. La línea oscura o densa principal corresponde a las caras internas de la membrana fusionadas (Figura 6). La distancia repetida observada de este patrón de líneas densas e intraperiódica varía dependiendo de la especie a la que pertenece la muestra y si la toma de material corresponde a SNC o SNP.

Fig 6: Microscopía electrónica de una membrana de mielina. (Basic Neurochemistry, 6 edición, 1999)

línea densa principal

línea intraperiódica

Las incisuras de Schmidt-Lanterman son estructuras donde la superficie citoplasmática de mielina no ha sido compactada para formar la línea densa, y en su lugar contiene CS o citoplasma de células gliales. Estas regiones son comunes en SNP pero raras en SNC.

La composición de la mielinaUna de las características que distingue a la mielina de otras membranas

biológicas es su alta concentración de lípidos y proteínas. La mielina aislada contiene entre un 70 y 80% de lípidos y entre 20 y 30% de proteínas. La característica particular que presentan los lípidos de la mielina, es que proveen la propiedad de insulación eléctrica, requerida para la propagación por saltos del impulso nervioso:

Proteínas :Las proteínas en el SNP representan entre el 20 y 30% de la mielina total. Una

de las características de las proteínas de la mielina del SNP es que por lo menos un 60% son las glicoproteínas (estas se encuentran en mucha menor cantidad en el SNC), otro 20-30% lo representan las proteínas básicas y las restantes, 10-20%, incluyen diversas proteínas, en donde cada una representa menos del 1% del total de las proteínas de la mielina del SNP.

Fig 7: Esquema de la organización molecular de la mielina compacta en el SNP (Basic Neurochemistry, 6 edición, 1999)

Glicoproteínas:Hay 26 tipos distintos de glicoproteínas (4), pero de estas 26 glicoproteínas, sólo

4 pudieron ser visualizadas con Coomassie Blue o Silver Staining, indicando que las 22 restantes estaban presentes sólo en menor cantidad.

Las otras cuatro glicoproteínas son muy abundantes, estas son la P0 (o proteína 28-kDa) (5), La PMP22 (o 22-kDa glicoproteína o Pas II) (6), la Periaxina (o proteína 170-kDa) (7) y finalmente la MAG (glicoproteína asociada a mielina o 100-kDa) (8), esta última fue descripta por primera vez en la mielina del SNC (9). La Periaxina y la MAG se encuentran en menor cantidad que las otras dos. La cadherina epitelial fue descubierta posteriormente, se encuentra en pequeña cantidad en la mielina del SNP. (10).

P0:

Es la proteína mayoritaria en el SNP, representa entre el 50-70% del total de proteínas de mielina (11). Junto con la MBP (proteína básica de mielina) están involucradas en la formacion de la línea densa de la mielina.

El papel de la proteína P0 es participar en la adhesión de moléculas a la membrana para promover y mantener compacta la estructura de la mielina a través de interacciones homofílicas.

PMP22:Representa entre el 2-5% de las proteínas de la mielina del SNP (12)

MAG:Representa el 0.1% de las proteínas en la mielina del SNP (13), aunque algunas evidencias indicarían que estas cifras pueden ser mas altas (14).

Está ubicada en la zona periaxonal de la membrana de la CS, en los mesaxones internos y externos, en los nodos de Ranvier y las incisuras de Schmidt –Lanterman (15).

Se cree que la MAG participa en el reconocimiento y en la adhesión axonal, en el espaciamiento entre membranas, en la transducción de señales durante la diferenciación de la célula glial y en el mantenimiento del axón mielinizado(16).

La MAG pesa aproximadamente 100 kDa, de los cuales el 30% corresponde a glúcidos (17). También se propone que esta proteína juega un papel dinámico en el proceso de mielinización y manteniendo la estructura integral de la membrana de mielina.

Periaxina:Esta proteína es específica del SNP, representa el 5% de las proteínas de la mielina (18).

Cadherinas Epiteliales (E-CADHERINA). Las cadherinas componen una superfamilia de proteínas de adhesión calcio dependiente. Juegan un papel muy importante en las interacciones intercelulares, la regulación de la morfología de la célula y la supresión de tumores.

Las E-cadherinas son consideradas las glicoproteínas adhesivas más presentes en las regiones no compactadas de la banda de mielina.(19). En las CS, se encargan de estabilizar las redes gliales requeridas para la buena formación de mielina.

Proteínas Básicas

Estas proteínas son el segundo grupo más abundante de la mielina del SNP. Hay dos clases proteínas básicas, las proteínas básicas de la mielina (MBP) y la proteína P2.

La MBP: Esta proteína se encuentra en el SNP y en el SNC. Representa entre el 20-30%

de las proteínas del SNP y se cree que junto con la glicoproteína P0 participan en la manutención del sector más denso y en la compactación de la vaina de mielina del SNP.

P2:Esta proteína sólo es expresada en el SN y esta ubicada en el lado citoplásmico de la membrana de mielina (20). No pertenece a la familia de la MBP, sino que pertenece a la familia de las proteínas ligadoras de ácidos grasos, con una gran afinidad por el ácido oleico, ácido retinoico y el retinol (21).

A diferencia del resto de las proteínas de la mielina, la cantidad de P2 varía considerablemente según la especie (en el ser humano es entre el 5-15%)(22). Esta proteína no es detectada en todas las vainas de mielina del SNP.

El papel de la P2 es el de tomar y transportar los ácidos grasos hasta las organelas intercelulares, dirigirlos hacia procesos metabólicos específicos y mantener la acumulación intracelular de los ácidos grasos.

Las proteínas restantes:Representan más de un 0.5% del total de las proteínas del SNP.

Proteína del proteo lípido (PLP): Es la mayor proteína del SNC adulto, tiene una función estructural (23)

Degeneración – Regeneración de la mielina

Se sabe que para que la síntesis de mielina ocurra, se deben expresar sus genes (96). Por esto, es de vital importancia el contacto, la comunicación, entre los axones y sus CS.La pérdida de este contacto, se debe a una injuria causada al nervio, que recibe el nombre de Degeneración Walleriana ():

Los nervios ciáticos están unidos a unos ganglios en la médula espinal, que contienen cuerpos neuronales. Estos cuerpos tienen factores de crecimiento y maduración necesarios para que las CS expresen las proteínas de mielina (sin el contacto, no mielinizan). Hay dos nervios que salen uno a la derecha y otro a la izquierda de la médula espinal. Uno de ellos va a ser dañado, y se lo va a llamar Nervio Ipsilateral. El nervio sano va a ser un control y se lo va a llamar Nervio Contralateral. El nervio Ipsilateral luego de causarle la injuria, se va a dividir en dos fragmentos: a) La parte Proximal: ésta zona, más próxima a los cuerpos de las neuronas en los ganglios, puede sufrir cambios más lentamente ya que el contacto de las CS con los cuerpos neuronales no se va a alterar; y b) La parte Distal: zona luego de la injuria, lejana a los ganglios, si se va a ver afectada ya que no tiene más contacto. Esta interrupción trae como consecuencia la degeneración axonal, la proliferación de las células de Schwann (se desdiferencian y vuelven a un estado inmaduro) y la fagocitosis de la vaina de mielina producida por las CS mielinizantes.Figura 11

La degeneración Walleriana puede realizarse de dos maneras distintas:- Ligadura del nervio (Degeneración Walleriana Permanente): Su realización

consiste en exponer uno de los nervios ciáticos y ligarlo totalmente. Luego se deja vivir al animal por un tiempo (con el nervio ligado), y finalmente se lo sacrifica, para extraerle ambos nervios ciáticos. Esta lesión es permanente, por lo que el nervio no va a poder regenerarse posteriormente.

- Compresión del nervio (Degeneración Walleriana Reversible): Su realización consiste en exponer el nervio ciático y comprimirlo durante 10 segundos. Así se produce una degeneración pero luego de un tiempo va a ocurrir otro fenómeno llamado Regeneración espontánea.

En ambos casos, la injuria interrumpe el contacto de las CS con el axón.Por otro lado vamos a aclarar que hay otra forma de causar una degeneración axonal y por ende la desdiferenciación de las células de Schwann, y es mediante la inyección de una sustancia llamada Colchicina. Su función es evitar la polimerización de la red microtubular. El citoesqueleto del axón esta compuesto por polímeros llamados Microtúbulos, que actúan favoreciendo la transmisión de las señales nerviosas. Si se evita la formación ó mantenimiento de los mismos (debido a la presencia de la colchicina), se produce una neuropatía que conlleva a la degeneración y alteración de los estímulos nerviosos ().

Una vez causado el daño, el nervio ciático tiene la característica de regenerarse salvo que el contacto axonal haya estado interrumpido durante mucho tiempo como pasa en el caso de la ligadura del nervio.

Cuando el nervio se degenera, la mielina que recubre al axón es fagocitada por las CS y luego por macrófagos. Esto que parece algo “malo”, ya que sin mielina se perjudica la transmisión de impulsos nerviosos, crea las condiciones favorables para una Regeneración de mielina, porque para que la remielinización se realice, se necesita tener la zona axonal 100% limpia de mielina. (1-5 B)..

Frente a este tipo de degeneración en particular se observa el fenómeno de una migración de células de medula ósea a la zona de la injuria unos días luego de haber sido realizada.

Recientemente se a demostrado la presencia de ARNm de globina por ensayo de protección de las RNAasas, northern blot y PCR en tiempo real en el nervio contra lateral y en las zonas proximal y distal del nervio ipsilateral. Estos resultados sugieren la

presencia de células inmaduras de la serie hematopoyetica o de macrófagos en el nervio ciática, cuyos niveles aumentan en el nervio injuriado. Se evaluó entonces la posibilidad que las células estromales de medula ósea (CEMO) migren espontáneamente a la zona injuriada. Estudios de inmunocitoquimica demuestran la presencia de ED1 (marcador de macrófagos) en la zona proximal, ausente en el nervio contra lateral y de CD34 (marcador de células progenitoras) en la zona proximal y distal, siendo mayor el número en esta ultima zona.

Los resultados descriptos podrían sugerir la migración espontánea de células de medula ósea (CMO) a la zona de la injuria, con el objetivo de participar en el proceso de regeneración. Los estudios hechos por nuestra investigadora, Patricia Setton-Avruj han demostrado la migración espontánea de células mononucleares de medula ósea (CMMO) exclusivamente al nervio ciático ligado junto con la migración de los macrófagos. El hecho que las células mononucleares de medula ósea marcadas con un fluoróforo inyectadas intraarterialmente migren solo a la zona de la ligadura, sin instalarse en el nervio contra lateral, así como que en la inyección intraneural las CMMO solo permanecen en al zona distal del nervio ipsilateral debe destacarse. la migración de las CMMO a la zona distal del nervio ligado podría ser relevante para la eliminación de los restos de mielina producidos durante la regeneración walleriana, ya sea a través de una actividad fagocítica o eventualmente colaborando en la reparación del nervio dañado.

Referencias de la literatura siempre reportan el efecto de células de medula ósea trasplantadas en el nervio ciática lesionado o en ciertas zonas del sistema nervioso central, mostrando la habilidad de dichas células par contribuir con la recuperación de la funciono o en al remielinizacion de un área limitada. la realización de nuestro proyecto junto con los resultado previos podría sugerir que las CMMO podrían también participar en un mecanismo endógeno de defensa durante el proceso de DW que podría actuar en la remoción de los restos de mielina. Mas un podrían participar en al remielinizacion del área, a través de su transdiferenciacion a CS o su fusión con CS preexistentes en la zonda distal del nervio lesionado.

Las CS son conocidas como gran soporte para la regeneración nerviosa tanto como el SNP como en el SNC. La regeneración del SNP depende fundamentalmente de una serie de reacciones producidas por el CS activadas, pero el SNC a pesar de su desfavorable condición intrínseca para la regeneración muestra un nuevo crecimiento de fibras nerviosas cuando son provistas de CS a través del transplante (Dezawa y col. Prog Retin. Eye Res. 19:171-204, 2000). Para su uso en la clínica, sin embargo, es dificultoso obtener un número elevado y suficiente de células. Una posibilidad sería favorecer la diferenciación de otras células “in vitro” a CS y luego utilizar a éstas para el transplante. Las CMMO representan una promisoria fuente de células para tal fin, a juzgar por su fácil accesibilidad y su alto potencial de crecimiento, que podría ayudar a que obtengan un fenotipo de CS y de esta forma actuar como soporte del nervio en regeneración. A su vez, las CMMO se pueden expandir fácilmente en cultivo y de esta forma realizar transplantes antólogos. Por lo tanto, las CMMO diferenciadas o indiferenciadas son uno de los candidatos más fuertes para ser utilizados en el transplante de células para la regeneración del sistema nervioso. Este punto es de fundamental importancia porque hasta el momento no se han realizado experimentos de ese tipo en el SNP y en general en el SNC y en el SNP se ha demostrado que las CMMO inyectadas como tales en la zona de lesión o diferenciadas “in vitro” a CS tienen capacidad de remielinizar la zona injuriada.

Durante el año 2007 nos dedicamos a buscar la ventana temporal en la que evidencia la presencia de la α- globina en un modelo de degeneración Walleriana reversible como es la compresión del nervio ciático, que en sus etapas tempranas manifiesta el proceso de desmielinización seguido por el proceso de remielinizacion a sobrevidas más prolongadas. En una segunda instancia se caracterizaron las CMMO recién aisladas o en cultivo para identificar la población celular que migra a la zona dañada del nervio ciático durante el proceso de degeneración Walleriana.

Estas características son coincidentes con las de las células que migran espontáneamente a la zona proximal y distal del nervio ligado.

Resultados preliminares de transplante de CMMO marcadas con el fluoróforo 5-(y 6)-(((4-clorometil) benzoil) amino) tetrametilrodamina a través de la vía arterial, muestran la migración de dichas células a la zona distal del nervio ciático sometido a compresión.

En base a estos resultados se sugiere que aparte de los macrófagos, otras células precursoras hematopoyéticas y/ o estromales migran hacia la zona distal del nervio ciático sometido a compresión. La continuación del proyecto nos permitirá evaluar si su participación es favoreciendo la remielinizacion a través de su transdiferenciacion a células de Schwann.

Los objetivos específicos del proyecto son:a) Evaluar la migración de células estromales de médulas ósea (CEMO) al nervio

lesionado.

b) Caracterizar los marcados de las CEMO con el objeto de observar si conservan el fenotipo original o si han sufrido el fenómeno de transdiferenciacion.

c) Determinar la función de las CEMO en el nervio dañado para evaluar si participan en la remoción de la mielina degradada y la posterior remielinizacion del nervio lesionado o si quizás actúan exclusivamente como agentes fagocíticos acelerando la degradación de la mielina y los axones degradados permitiendo de esta forma la remielinizacion de la zona distal del nervio.

d) Determinar que tipo de población de las CEMO están involucradas en la migración.

e) Determinar la/s señal/es biológicas involucradas en dicha migración e instalación en la zona injuriada del nervio.