UNIVERSIDAD NACIONAL ABIERTA Y A DISTANCIA-UNAD-

ESCUELA DE CIENCIAS BASICAS TECNOLOGÍA E

INGENIERIA

GUÍA DE LABORATORIO DE BIOLOGÍA

2010

Carmen Eugenia Piña López1

Yurby Salazar Núñez2, Bibiana Ávila García3

_________________________ 1 M. Sc. Ciencias Biológicas; M.Sc. Docencia Universitaria; Especialista en Nutrición Animal

Sostenible; Especialista en Informática y Multimedia. 2 Bacterióloga Tutora José Acevedo y Gómez 3 Magistra en Educación. Especialista en planeación para la educación ambiental. Psicopedagoga Licenciada en Biología y química

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GUIAS PARA PRÁCTICAS DE BIOLOGÍA GENERAL

INTRODUCCION

Las prácticas de laboratorio de biología permite que estudiante confronte los conocimientos

teóricos básicos del curso, adquiera la habilidad y destreza en el manejo de equipos e

integre en su desarrollo aspectos de bioseguridad y ética.

Las guías para las prácticas de biología, son un importante dispositivo de ayuda pedagógica

y didáctica en el proceso de formación profesional que inician los estudiantes de los

programas de pregrado

Estas guías están descritas de manera clara y sencilla con el fin de que la ejecución

práctica pueda hacerse completamente.

Antes de realizar la parte práctica se recomienda ver cada uno de los videos presentados

en el curso de Biología en el link Multimedia,

http://www.unad.edu.co/curso_biologia/multimedia.htm para hacerse una idea del

material a utilizar y procedimiento a seguir lo cual le facilitará la comprensión y el

desarrollo de la práctica.

Quienes deseen descargar los videos en su computador pueden hacerlo ver orientaciones al

final de la guía.

Orientaciones para las actividades de Laboratorio

El componente práctico se desarrollará mediante laboratorios previamente apoyados en

vídeos didácticos introductorios y se complementará con observaciones en el laboratorio.

Los laboratorios se realizan de forma presencial en cada uno de los CEAD donde

estén matriculados, con un tutor asignado por el director del Cead para tal fin. La fecha de

realización la determinan en cada CEAD y saldrá publicada en el Foro Noticias del aula y

en cada CEAD, motivo por lo cual hay que estar pendiente " leer diariamente" las noticias

del foro, para que puedan hacer su inscripción. La realización de las prácticas de

laboratorio es obligatoria para aprobar el curso.

Los informes de laboratorio de los estudiantes virtuales deben ser entregados al tutor

de metodología tradicional con quien realicen el laboratorio. El Informe incluye las

respuestas a las preguntas sobre la observación de los videos de preparación previa, el

pre-informe y el desarrollo de las guías. El tutor tradicional con quien realizan el

laboratorio debe calificar su proceso y su informe, y envía la nota al tutor virtual

para sumarla con las notas obtenidas en las demás actividades y de esta manera se pueda dar la nota definitiva de su curso.

Las actividades en campus tienen un valor de 60% sobre la calificación del curso. El 60%

equivale a 300 puntos, de los cuales 90 puntos corresponden a la nota del laboratorio

enviada por el tutor tradicional, o sea un 30% de este componente práctico. La

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equivalencia es la siguiente por ejemplo para una nota de 4,5 enviada por el tutor tradicional:

Calificación de los laboratorios enviada por el

tutor tradicional Valor en

Puntos

5 90

4,5 X

X= (90 x 4,5) / 5= 81 puntos

El costo de los laboratorios está incluido en la matrícula

A continuación encontrarán una tabla con los nombres de las prácticas su duración y

porcentaje.

Sesiones de Práctica Duración Porcentaje

sobre el

100% curso

1. Normas de Seguridad en el laboratorio y

Microscopía

4 horas 6

2. La Célula y Tejidos Vegetales 4 horas 6

3. Mitosis y Meiosis 1 hora 4

4. Los Microorganismos 3 horas 6

Total 12 22

FORMATO PARA OBSERVACIÓN DE VIDEOS DE LABORATORIO.

Objetivos:

Identificar los temas, materiales, habilidades que podemos desarrollar con la observación

de los videos y prácticas de laboratorio.

Instrucciones:

Esta actividad no reemplaza los laboratorios nos prepara para la realización de los

mismos.

Observe detenidamente cada uno de los videos de laboratorio relacionados en el material

didáctico del curso de Biología.

Responda las preguntas que se realizan para cada video de las experiencias de

laboratorio.

Con los compañeros de su grupo colaborativo compare las respuestas.

3

Consolide en un solo documento los datos y preséntelos al tutor virtual

Recursos:

Videos de las experiencias:

1. Vídeo: Normas generales de uso del laboratorio

http://www.unad.edu.co/curso_biologia/videoseguridad.htm

2. Video:_El microscopio parte 1 ttp://www.unad.edu.co/curso_biologia/video_microscopio1.htm

Video: El microscopio parte 2 http://www.unad.edu.co/curso_biologia/video_microscopio2.htm

3. Video: Célula parte 1 http://www.unad.edu.co/curso_biologia/video_celula-1.htm

Video: Célula parte 2 http://www.unad.edu.co/curso_biologia/video_celula_2.htm

4. Video: mitosis y meiosis parte 1

http://www.unad.edu.co/curso_biologia/video_mitosis1.htm

Video: mitosis y meiosis parte 2 http://www.unad.edu.co/curso_biologia/video_mitosis2.htm

5. Video: biodiversidad microbiana parte 1

http://www.unad.edu.co/curso_biologia/biodiversidad1.htm

Video: biodiversidad microbiana parte 2

http://www.unad.edu.co/curso_biologia/biodiversidad_2.htm

6. Video: tejidos vegetales http://www.unad.edu.co/curso_biologia/video_Tej_vegetales.htm

Preguntas: RESPONDA PARA CADA VIDEO.

1. ¿Cuál es el objetivo de esta práctica?

2. ¿Qué materiales necesita? ¿Los conoce todos? ¿Cuáles desconoce?

3. ¿Qué temas del módulo puede relacionar con esta experiencia? Justifique su respuesta.

4. ¿Qué habilidades cree que se pueden desarrollar al realizar ésta práctica de laboratorio?

5. ¿Qué utilidad o aplicaciones prácticas puede derivar del conocimiento que se desarrolla

con estos laboratorios?

6. Después de observar el video ¿Cuál es la conclusión a la que llega?

Formato elaborado por:

Esp. Bibiana Ávila García.

Punto de contacto: 3004986704 – bibi.avila@gmail.com Tutora CEAD Barranquilla.

Nota: No olviden colocar en el informe a entregar al tutor tradicional de laboratorio el

número del grupo colaborativo, el nombre de su tutor virtual, además de sus datos nombre

apellidos y código.

Recomendaciones Generales

Implementos que deben llevar al laboratorio

Bata Blanca, Guantes.

Papel absorbente, Paños de cocina

Jabón

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Láminas y laminilla

Tapabocas.

Papel y lápiz para tomar apuntes

Antes de iniciar las prácticas usted debe haber leído el capítulo correspondiente en el curso

de biología, observado los videos de preparación previa y resuelto las preguntas sobre la observación de videos y lo que se solicite en cada práctica

Forma de Evaluación

La evaluación se llevará a cabo por medio de las siguientes actividades

1. Participación en el foro colaborativo con la presentación del pre-informe sobre los

laboratorios, el cual incluye las respuestas a las preguntas sobre observación de videos y las respuestas a los cuestionarios de cada práctica. Los puntos del pre-informe son:

Titulo

Objetivos

Resumen de la información teórica

Esquema o diagrama de flujo en orden riguroso por cada observación Respuesta a cuestionario que encuentre en la guía de práctica

2. Evaluaciones parciales presenciales al iniciar algunas prácticas

3. Presentación de informes de prácticas realizadas en el laboratorio, el cual incluye

también el pre-informe 4. Resolución de cuestionarios para medir el rendimiento después de las prácticas

Aspectos mínimos que debe llevar un informe final (que se entregará al tutor tradicional para su calificación)

1. Titulo

2. Objetivos

3. Resumen de la información teórica

4. Esquema de pasos para las observaciones en el laboratorio o diagrama de flujo en orden

riguroso por cada observación

5. Respuesta a cuestionario de cada práctica

5. Descripción detallada de las observaciones

6. Conclusiones

7. Referencias bibliográficas

A continuación encontrará una tabla con la descripción de la actividad a realizar y los productos a entregar

Laboratorio 1 Normas de seguridad en el laboratorio.

Vídeo: Normas generales de uso del laboratorio

Objetivo

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Conocer y cumplir las principales normas de seguridad e higiene que se deben seguir en el

laboratorio, con el fin de evitar posibles riesgos, tanto para las personas como para el

medio ambiente.

Introducción

La bioseguridad, es la aplicación del conocimiento, de las normas y técnicas en el desarrollo

de las prácticas que se realizan en el laboratorio para prevenir la exposición del personal y

del medio ambiente a cualquier riesgo. Los riesgos pueden estar relacionados con las

propias instalaciones, con las muestras de origen biológico, con los procedimientos y

manipulaciones que se realicen.

Marco Teórico: Principales Normas

Las principales normas a tener en cuenta para el desarrollo de prácticas en el laboratorio

de Biología son las siguientes:

en la zona de trabajo del laboratorio no se debe consumir alimentos ni bebidas para

evitar riesgos de contaminación.

está prohibido fumar en el área del laboratorio o sus alrededores. Recordemos que

se trabaja con gas y que algunos químicos generan vapores inflamables.

no se deben llevar a la boca lápices, etiquetas o cualquier otro material utilizado en

el laboratorio.

se debe mantener el laboratorio limpio y aseado. Por consiguiente al terminar la

práctica se debe descontaminar la superficie de trabajo.

las manos se deben lavar después de manipular material infeccioso, así como al

abandonar el laboratorio.

todo estudiante debe hacer uso de la bata blanca, esto le protegerá la ropa del

contacto con reactivos y colorantes empleados en el laboratorio.

sólo se debe permitir el paso a la zona de trabajo del laboratorio a las personas

autorizadas. Durante el trabajo se mantendrán cerradas las puertas del laboratorio.

no se debe pipetear con la boca.

debe utilizarse siempre un dispositivo de pipeteo

todas las pipetas deben tener tapones de algodón para reducir la contaminación de

los dispositivos de pipeteo.

todo el personal debe poner especial cuidado en evitar el contacto de la piel con

materiales potencialmente infecciosos. Con este fin deben usarse guantes. Los guantes

deben ser desechados antes de salir del área de trabajo. Jamás se debe salir de la misma

con los guantes puestos, ni con ellos se debe coger el teléfono.

marque y rotule adecuadamente las láminas. Deben llevar claramente escrito en un

lugar visible, el nombre o identificación del grupo de trabajo, practica realizada y fecha.

una vez concluida la práctica, proceda a organizar el sitio de trabajo, desinfectando

el mesón con toallas de papel humedecidas con hipoclorito de sodio o alcohol y dejando

tanto el material como el equipo utilizado limpio y en el lugar adecuado.

es importante conocer los agentes, sustancias y productos peligrosos que existen

en el laboratorio. Antes de utilizar un compuesto hay que fijarse en la etiqueta para

asegurarse de que es el que se necesita y de los posibles riesgos de su manipulación.

es necesario conocer el manejo de cada uno de los equipos existentes en el

laboratorio. Todo el material, especialmente los aparatos delicados, como lupas y

microscopios, deben manejarse con cuidado evitando los golpes o el forzar sus

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mecanismos. Cualquier material de vidrio no debe enfriarse bruscamente justo después de

haberlos calentado con el fin de evitar roturas.

en neveras que no posean un sistema de protección antideflagración no deben

almacenarse reactivos que contengan compuestos volátiles inflamables como éter etílico.

los productos inflamables como gases, alcohol, éter, entre otros deben mantenerse

alejados de la llama del mechero. Si hay que calentar tubos de ensayo con estos productos,

se hará al baño María, nunca directamente a la llama. Si se manejan mecheros de gas se

debe tener mucho cuidado de cerrar las llaves de paso al apagar la llama.

se debe lavar muy bien la cristalería que se utilice. Preste atención y cuidado al

manipular cristalería mojada.

en el laboratorio habrá un recipiente plástico, para cristalería rota y para plásticos

que hayan estado en contacto con cultivos de células o virus. Por favor, deseche cada cosa

en el envase apropiado.

mantenga despejadas las áreas. Trate de traer la menor cantidad posible de

pertenencias al laboratorio. Coloque sus pertenencias en un área designada o donde no

estorben.

Cuestionario para el pre-informe

1.1 ¿Que es bioseguridad?

1.2 ¿Cuáles serían para usted las normas básicas de bioseguridad en el laboratorio de

biología?

1.3 ¿Cómo puede usted evitar en el laboratorio daños a su salud? 1.4 Conclusiones

Procedimiento

Para el desarrollo de esta práctica el estudiante debe observar el video normas de

seguridad en el laboratorio y contestar las preguntas presentadas en el formato de

observación del video

LABORATORIO 2: MICROSCOPÍA

Autoría: Carmen Eugenia Piña L

video:_El microscopio parte 1

video:_EL microscopio parte 2

OBJETIVOS:

Señalar los componentes mecánicos y ópticos que constituyen el microscopio.

Realizar montajes húmedos

Comprobar las propiedades que posee el microscopio.

Realizar correctamente el manejo del microscopio óptico

Calcular el diámetro del campo de visión

Comprobar los principios en que se basa la microscopía óptica.

Desarrollar en trabajo colaborativo el informe de laboratorio

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Marco Teórico

Tipos de Microscopio

El Microscopio óptico simple

Constituido por una lente biconvexa única o lupa que hace converger los rayos luminosos

que la atraviesan en un punto denominado foco y a una distancia focal muy corta.

El Microscopio óptico Compuesto

El microscopio se define como un instrumento óptico formado por un sistema de lentes:

objetivos y oculares que amplían los objetos extremadamente pequeños para posibilitar su

observación. La lente del objetivo proporciona una imagen intermedia ampliada del objeto,

es decir, funciona como una lente simple, y la lente del ocular que recoge la imagen dad

por el objetivo y la aumenta.

El Microscopio electrónico

Este microscopio en lugar de una fuente de luz, utiliza un haz de electrones que se

desplazan en el vacío y en línea recta. Con el microscopio electrónico es posible observar

objetos muy pequeños como los virus que no pueden ser resueltos con el microscopio

óptico. En el microscopio óptico en lugar de lentes se emplean campos magnéticos que

enfocan los haces de electrones.

El Microscopio óptico Compuesto: componentes

A continuación se describen las partes que lo conforman:

Los objetivos: están localizados en la parte inferior del tubo insertados en una pieza

metálica, denominada revólver o portaobjetivos, que permite cambiarlos fácilmente.

Estos generan una imagen real, invertida y aumentada, esta imagen intermedia es captada

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y sufre una nueva ampliación por el ocular. .

Los objetivos más frecuentes son los de 4X,

10X, 40X y 100X aumentos. Este último de

100x se llama de inmersión ya que para su

utilización se necesita aplicar aceite de cedro

sobre la preparación. Y se utiliza para observar

láminas coloreadas completamente secas. El

poder de aumento de cada objetivo se indica en

el número grabado en la manga del lente.

Generalmente el objetivo de 4X se encuentra

marcado por un anillo rojo, el de 10X por un

anillo de color amarillo, el de 40=x con un anillo

de color azul y el de 100X con un anillo de color

blanco

La abertura numérica se encuentra (A.N.) se encuentra grabada en la manga del objetivo,

junto a la indicación del aumento.

0,30 En el objetivo de 10X

0,65 En el objetivo de 40X

1,30 En el objetivo de 100X

A medida que aumenta la A.N. disminuyen las dimensiones de la lente frontal, montada en

la base del objetivo. La lente del objetivo de 100x tiene el tamaño de una cabeza de alfiler

es mayor el poder de resolución. Además a medida que aumenta A.N. es mayor el poder de

resolución. Cuanto mayor sea el poder de resolución del objetivo, será más clara la imagen

y aumentará la capacidad de poner de manifiesto detalles adyacentes muy cercanos,

separándolos y aclarándolos. El poder de resolución máximo de un buen microscopio es

aproximadamente 0,25 nanómetros, el poder de resolución del ojo humano es de 0,25

milímetros.

Los oculares se denominan así porque están muy cercanos al ojo. Su

función es la de captar y ampliar la imagen formada en los objetivos. El

poder de aumento del ocular se encuentra marcado en el ocular. Un ocular

por 4 aumenta 4 veces la imagen que produce el objetivo. Un ocular por 6

la aumenta 6 veces. Un ocular por 10 la aumenta 10 veces Nunca se deben

tocar las lentes con las manos. Si se ensucian, se deben limpiar muy

suavemente con un papel de óptica

El tubo óptico: es una cámara oscura unida mediante una cremallera. Tiene el revolver

con los objetivos en su parte inferior y los oculares en el extremo superior.

El Brazo: es una columna perpendicular al pie. Puede ser arqueado o vertical y une al pie

con el tubo.

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Platina

Es una plataforma horizontal con un

orificio central, sobre el que se coloca la

preparación, que permite el paso de los

rayos procedentes de la fuente de

iluminación situada por debajo.

Dos pinzas sirven para retener el

portaobjetos sobre la platina y un carro

con un sistema de cremallera guiado por

dos tornillos de desplazamiento que

permite mover la preparación de delante

hacia atrás o de izquierda a derecha y

viceversa. Está dotado de una escala

graduada para medir de forma precisa

las observaciones.

El condensador: es un sistema de lentes convergentes situadas bajo la platina, su

función es la de concentrar la luz generada por la fuente de iluminación hacia la

preparación.

Diafragma-iris Es una cortinilla que regula la cantidad de luz que entra en el

condensador, eliminando los rayos demasiado desviados. Se acciona mediante una perilla.

Esta situado debajo de la platina, inmediatamente debajo del condensador. La disminución

del diafragma permite visualizar partes de protozoos u hongos se utiliza en las

preparaciones frescas

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Tornillo Macrométrico: Se encuentra en la

parte inferior del microscopio. Sirve para alejar o

acercar el tubo y la platina moviéndola de arriba

hacia abajo y viceversa. Permite un enfoque

aproximado o grueso de la muestra

Tornillo micrométrico: Generalmente se

encuentra incorporado al tornillo macrométrico.

Sirve para dar claridad a la imagen al lograr un

ajuste fino y preciso, mediante movimiento de la

platina hacia arriba y hacia abajo de forma lenta.

Ambos tornillos llevan incorporado un mando de

bloqueo que fija la platina a una determinada

altura.

La fuente de iluminación: se trata de una lámpara halógena de intensidad graduable.

Está situada en el pie del microscopio. Se enciende y se apaga con un interruptor y en su

superficie externa puede tener una especie de anillo para colocar filtros que facilitan la

visualización.

Por último definimos el pie o base: sirve como base del microscopio y tiene un peso

suficiente para dar estabilidad al aparato. En él se integra la fuente luminosa.

Poderes o capacidades del

microscopio

Poder de aumento: Permite magnificar la imagen.

Corresponde al aumento (A) dado por la relación:

Tamaño de la imagen / tamaño del objeto. La

ampliación es igual al producto del aumento del lente

ocular por el del objetivo. Cada objetivo y cada ocular

tienen grabado el número de veces que aumentan la

imagen. Si la imagen del objeto, se hace aumentar 40

veces mediante el objetivo y enseguida 10 mediante el

ocular, su aumento total será 10X40= 400

¿Cómo se calcula el aumento de una muestra? Se

multiplica el aumento que señala el ocular por el

aumento del objetivo dando como resultado el aumento

total de la muestra o número de veces en que el objeto

se encuentra ampliado con respecto a su tamaño

original.

Aumento total = aumento del ocular X aumento del

objetivo

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Poder de definición Es la capacidad del microscopio

para formar imágenes nítidas y con contornos

definidos

Poder de penetración o

profundidad

Permite visualizar los

diferentes planos de una

preparación y está dado

por el ajuste de precisión

que se logra con el

tornillo micrométrico.

Poder de resolución es la capacidad de presentar dos puntos que se encuentran

muy cercanos entre sí como separados, lo cual permite observar detalles de los objetos que

con el ojo humano no se podrían ver. El ojo humano no puede ver separados dos puntos

cuando su distancia es menor a una décima de milímetro. Con el Microscopio óptico, el

poder separador máximo es de 0,2 décimas de micra. Mejora la visión unas 500 veces con

relación a la del ojo humano

En la imagen se observan espacios

blancos entre la tinta negra que a simple

vista no serían vistos

En la imagen se observan varias fibras de

hilo que a simple vista no serían vistos

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El poder de resolución depende de la longitud de onda

( λ ) y de la apertura numérica del objetivo (A.N.)

El Poder de resolución esta dado por la formula:

Poder de resolución= λ

2x A.N.

A.N: relaciona el ángulo de apertura de los rayos de

luz, que provienen de la muestra, con el índice de

refracción.

Principios generales de microscopía

Principios ópticos

Una lente sencilla (biconvexa) posee dos focos, uno a cada lado de la lente (F y F´).

Cuando los rayos luminosos pasan a través de la lente se concentran en el foco. La

distancia focal es la distancia entre el centro de la lente y el punto en donde convergen los rayos.

La distancia focal de una lente depende del índice de refracción del material del cual está

hecha, y del medio que envuelve la lente. Por eso, es diferente la distancia focal de una

lente en el agua, que esta misma en el aire. Como también es diferente la distancia focal de una lente de vidrio en comparación con una construida en plástico.

http://micro.magnet.fsu.edu/primer/java/lenses/simplethinlens/index.html

Cuanto más pequeña es la distancia focal de una lente tanto mayor es su aumento. Si el

objeto se coloca a distancia mayor del foco, se obtiene una imagen real invertida, mientras

que si el objeto se localiza a una distancia menor del foco la imagen será virtual. A medida

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que se aleja el objeto del foco, la imagen se percibe más pequeña. La distancia de trabajo

focal de un objetivo, es el espacio que existe entre la superficie de la lente del objetivo y la

laminilla, una vez se encuentre enfocada la preparación. A mayor aumento del objetivo la

distancia de trabajo disminuye.

Como determinar la posición de los objetos observados

Los objetos que se observan en el campo microscópico se pueden localizar en relación con

las manecillas del reloj. Los objetos que aparecen en la parte inferior del fondo del campo

microscópico se encuentran realmente en la parte superior. Los objetos en el lado izquierdo

del campo microscópico se encuentran realmente al lado derecho.

Desplazamiento del objeto

Si se mueve el portaobjetos hacia la derecha, el objeto examinado se desplazará hacia la

izquierda. Si se mueve el portaobjetos hacia usted, el objeto examinado se alejará.

Formación de la imagen real invertida

http://www.edumedia-sciences.com/a301_l3-microscope.html

Las imágenes se observan invertidas por las lentes.

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Refracción de la luz

La distancia focal de una lente depende del índice de refracción del material del cual esta

hecha y del medio que envuelve la lente. Cuando los rayos de luz se mueven en un medio

homogéneo como el aire, se propagan en línea recta, pero cuando caen sobre la superficie

de un medio de diferente densidad, a la del medio en el cual se venía propagando, cambian

de dirección y de velocidad a estos cambios se les conoce como refracción de la luz.

Los rayos de luz procedentes de los objetos sumergidos en el agua se desvían al atravesar

dos medios de diferente densidad (agua-aire), originando este efecto de refracción. Por

ejemplo si introducimos un lápiz en un vaso con agua, el lápiz se verá cortado al pasar del

agua al aire.

En la práctica de microscopía encontramos diferentes medios: aire, agua aceite de

inmersión y vidrio, cuyos índices de refracción son 1.0, 1.33, 1.51, .1.54 respectivamente.

Al observar una muestra a través del microscopio, los rayos de luz tienen que atravesar

estos medios y son refractados cambiando su dirección.

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Al aplicar el aceite inmersión se entre el preparado y la lente, aceite de inmersión, que

tiene un índice de refracción igual al de la lente y evita la refracción de los rayos luminosos.

Campo de Visión

El campo de visión de un microscopio es la zona circular que se observa al mirar la

preparación bajo un determinado aumento. Para medir el campo de visión de un

microscopio, se debe usar una unidad llamada micra. Una micra equivale a 0,0001 mm; en

otras palabras, hay 1000 micras en un milímetro. El diámetro de este campo es su

medida.

Para calcular el diámetro del campo de visión para un determinado aumento hay que seguir

los siguientes pasos:

a) Recortar un cuadrado de 1 cm de lado de papel milimetrado.

b) Ponerlo sobre la abertura central del portaobjetos

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c) Observando por el ocular y con el objetivo de 4X, mover la muestra hasta lograr que la

línea 0 mm quede en el borde izquierdo del campo visual

d) Enfocar con el objetivo de menor aumento 4X hasta que se

vea con claridad. Enfocar la preparación quiere decir situarla a la

distancia del objetivo que permite su observación nítida. Esta

distancia s e conoce como distancia de trabajo y es tanto menor

cuanto mayor es el poder de aumento del objetivo.

e) Medir el campo visual haciendo coincidir una de las líneas del

papel milimetrado con el borde del campo de visión.

f) Contar el número de milímetros que se ven (recuerde que la distancia

entre dos líneas es un milímetro) y estimar aproximadamente la fracción

sobrante, si la hay. El resultado será el diámetro del campo visual para

ese aumento (objetivo x ocular).

g) Si queremos calcular el diámetro del campo de visión para aumentos

mayores, hay que tener en cuenta que cuanto mayor sea el aumento, el

campo será menor, es decir, se verá menos de la muestra que estemos

observando. De forma que, si el aumento es el doble, el campo será la

mitad, si el aumento es el triple, el diámetro será la tercera parte, etc.

(inversamente proporcionales). Por tanto, bastará con realizar un sencillo

cálculo matemático para saber el nuevo diámetro.

Así se puede calcular los diámetros de objetos microscópicos, células, amibas, vistos.

Medida en mm (escala del

portaobjetos) Equivalencia en µm

Tamaño de las marcas

(divisiones)

1mm 1000 µm grandes

0.1 mm 100 µm medianas

0.01mm 10 µm más pequeñas

Recuerde que aunque la escala está marcando mm usted lo leerá en micras.

Preparaciones Las preparaciones pueden ser de varios tipos: a) Frescas: Son montajes

generalmente húmedos. La muestra se observa sin modificar, diluida o concentrada.

Permite observar la movilidad de los microorganismos vivos. Se utiliza también para

observar procesos como la mitosis, meiosis, la formación d esporas. Para realizar un

montaje húmedo se debe verter una gota de agua o del líquido que contiene los

microorganismos en el centro de una lámina portaobjetos y cubrirlo con una laminilla

cubreobjetos. Para evitar la evaporación se puede sellar el espacio que hay entre el

portaobjetos y el cubreobjetos con vaselina o alguna sustancia similar. Frescas ligeramente

modificadas: Las muestras se pueden diluir con agua o con agua con sal, esta última evita

que la presión osmótica del medio no sea demasiado baja. Se puede aplicar un colorante o

reactivo para observar mejor las estructuras. b) Fijadas y teñidas: Se coloca una

suspensión homogénea de microorganismos en una gota de agua sobre el portaobjetos y

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se fija (mediante calor o agentes químicos) y después se tiñen mediante diferentes

técnicas. Estas preparaciones se observan sin cubreobjetos y, habitualmente, con objetivos

de inmersión.

Cuestionario a resolver para el pre-informe

2.1 En la siguiente representación gráfica de un microscopio, reconozca y ubique cada una

de las siguientes partes y su función

Tubo

Oculares

Brazo

Objetivos de 4x, 10x, 40x y 100x

Platina

Condensador

Fuente de iluminación

Tornillo macrométrico y micrométrico

Pie

2.2 Clasifique en el cuadro las partes mecánicas y ópticas del microscopio.

Partes mecánicas Partes ópticas

2.3 Qué es un montaje húmedo.

2.4 Defina los tipos de montaje que se pueden hacer en el laboratorio.

2.5 Describa los pasos para la elaboración de un montaje húmedo.

2.6 ¿Qué debe hacerse para lograr una iluminación adecuada?

2.7 ¿Cómo se enfoca el microscopio al iniciar la observación?

2.8 ¿Al mover el portaobjetos de derecha a izquierda a qué lado se mueve la imagen?

2.9 ¿Con qué objetivo se logra un campo de visión más grande?

2.10 ¿Con qué objetivo se observan mejor los detalles de una imagen?

2.11 ¿Con el objetivo de mayor aumento se necesita menor o mayor iluminación de la que

se necesita con el de menor aumento?

2.12 ¿Qué función cumple el aceite de inmersión? ¿Con qué objetivo se utiliza?

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2.13 ¿Cuál es el poder de aumento cuando se estén utilizando cada uno de los objetivos de

4X, 10X, 40X y el ocular de 10X?

2.14 ¿Cuáles son las propiedades del microscopio?

2.15 Defina los siguientes poderes o capacidades del microscopio

a. Poder de Aumento

b. Poder de definición

c. Poder de Resolución

d. Poder de Penetración de Foco o Campo

PROCEDIMIENTO

MATERIALES QUE DEBEN LLEVAR AL LABORATORIO

Bata Blanca, Guantes.

Papel absorbente, Paños de cocina

Jabón

Tapabocas.

Papel y lápiz para tomar apuntes

Resueltas las preguntas sobre la observación de videos y las que se solicite en cada

práctica

Agua estancada o de solución de tierra de infusorios

Papel milimetrado

Hilos de colores

Tela de cuadros 2 centímetros

Recorte de periódico con la letra asimétrica: Pude ser la letra e o la letra a

Láminas portaobjetos, Laminillas (por grupo) papel absorbente

MATERIALES QUE LE SERÁN SUMINISTRADOS EN EL LABORATORIO

Lamina con extendido coloreada

Microscopio

Aceite de inmersión

Papel de Arroz o de óptica

Alcohol isopropílico

Realización de Montaje húmedo

Tome con una pipeta agua estancada o de solución de tierra de infusorios

Coloque la gota de agua estancada o de solución de tierra de infusorios sobre una lámina

porta-objeto

Tome una laminilla cubreobjetos, en posición oblicua, (45 grados) y apoyando una arista

sobre la lámina al lado de la gota, déjela caer suavemente.

Manejo del microscopio

Encienda el microscopio

Coloque el objetivo de menor aumento 4X

Baje la platina completamente girando el tornillo macrométrico.

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Si el microscopio se recogió correctamente en el uso anterior, ya debería estar en esas

condiciones

Tome la lámina con la preparación fíjese que esté completamente seca en la parte inferior

Coloque la lámina con la preparación sobre la platina sujetándola con las pinzas.

Procure que la preparación quede centrada, girando el tornillo para desplazamiento del

carro móvil

Gire el tornillo macrométrico en sentido contrario a las agujas del reloj para subir la platina

hasta el tope. Debe hacerlo mirando directamente y no a través del ocular, ya que se corre

el riesgo de incrustar el objetivo en la preparación.

Cierre o abra el diafragma hasta una posición intermedia, accionando su perilla en sentido

contrario a las agujas del reloj para que la luz no sea ni muy brillante ni demasiado tenue.

Inicie la observación con el objetivo de 4X.

Mirando a través de los oculares, separe lentamente el objetivo de la preparación con el

tornillo macrométrico en sentido de las agujas del reloj.

Hasta lograr observar la imagen

Cuando se observe algo nítida la muestra, gire el tornillo micrométrico hasta obtener un

enfoque fino

Gire el revolver

Coloque el objetivo de 10X

Visualice con el objetivo de 10X y detalle las estructuras

Gire el revólver y visualice con el objetivo de 40X enfoque con el tornillo micrométrico y

detalle las estructuras

Detalle como el campo se reduce y el alga y el protozoo se observan mejor.

Observación con el objetivo de inmersión 100X

Se utiliza para la observación de muestras fijadas, no para muestras frescas.

Coloque el objetivo de inmersión de manera que el orificio de la platina quede entre el

objetivo de 100X y el de 40X

Suba totalmente el condensador para ver claramente el círculo de luz que nos indica la

zona que se va a visualizar y donde habrá que aplicar el aceite

Coloque una gota de aceite de inmersión sobre la preparación en el círculo de luz

Coloque una lámina coloreada sobre la platina

Ubique el objetivo el objetivo de 100x

Suba la platina lentamente hasta que la lente toque la gota de aceite

Observe la imagen con aumento de 100X

En esta preparación se muestran eosinófilos un tipo de células sanguíneas coloreados con

colorante de Wright

Limpie el objetivo de inmersión con un papel especial para óptica y alcohol isopropílico

Deje el objetivo de menor aumento en posición de trabajo.

En la siguiente dirección encuentra un excelente ejercicio en línea sobre las partes del

microscopio y su función.

http://personales.ya.com/geopal/g-b_1bach/ejercicios/act10tema6.htm

Preguntas adicionales para el informe final

2.16 Observe y escriba cuál es el valor de los oculares_________________

2.17 Observe y escriba cual es el valor de cada uno de los objetivos_____,____,____,____

20

2.18 Calcule el aumento logrado para cada objeto observado en su práctica de laboratorio

(Al multiplicar el valor del ocular por el valor del objetivo se obtiene el aumento del

tamaño del objeto que observamos).

3. Uso del microscopio. Organización del proceso paso a paso

3.1. De la muestra de agua estancada tome una gota y colóquela en una lámina

portaobjetos, cubra con una laminilla.

3.2 Retire el exceso de agua por los bordes usando papel absorbente.

3.3 Observe el montaje realizado al microscopio con aumentos de 4x, 10x y 40x. En el

informe debe incluirse el siguiente cuadro que debe registrar las observaciones realizadas.

OBJETO

OBSERVADO

AUMENTO

UTILIZADO

DIBUJO ANÁLISIS Y

CONCLUSIONES

Agua

estancada

4X

10X

40X

3.4 ¿Qué organismos pueden observarse en la gota de agua estancada?

3.5 ¿Son todos de igual tamaño y forma?

3.6 ¿Se observan organismos móviles o estáticos?

4. Comprobación de los poderes o capacidades del microscopio óptico

4.1 Realice un montaje húmedo con la letra asimétrica y obsérvela al microscopio siguiendo

los pasos anteriores.

4.2 Calcule el aumento del tamaño del objeto observado para cada objetivo del microscopio

con el cual le correspondió trabajar.

4.3 ¿Cómo se manifiesta el poder de aumento al observar la letra?

5. Realice un montaje húmedo con un centímetro cuadrado de papel milimetrado y

obsérvelo al microscopio

5.1 Calcule el diámetro del campo de visión para un aumento de 4x en un cuadrado de 1

cm de lado de papel milimetrado.

Tome una gota de la

muestra de agua estancada

Colóquela sobre una

lámina portaobjetos, y

cúbrala con una laminilla.

Retire el exceso

de agua por los

bordes, usando

papel

absorbente.

Observe el

montaje

realizado al

microscopio en

4x, 10x y 40x.

Dibuje sus

observaciones

anotando el aumento utilizado

21

Para calcular el diámetro del campo de visión para un determinado aumento hay que seguir

los siguientes pasos:

a) Recortar un cuadrado de 1 cm de lado de papel milimetrado.

b) Ponerlo sobre la abertura central del portaobjetos:

c) Observando por el ocular y con el objetivo de 4X, mover la

muestra hasta lograr que la línea 0 mm quede en el borde

izquierdo del campo visual como se observa en la gráfica

d) Enfocar con el objetivo de menor aumento 4X hasta que se

vea con claridad. Enfocar la preparación quiere decir situarla a

la distancia del objetivo que permite su observación nítida. Esta

distancia s e conoce como distancia de trabajo y es tanto menor

cuanto mayor es el poder de aumento del objetivo

e) Medir el campo visual haciendo coincidir una de las líneas del papel

milimetrado con el borde del campo de visión.

f) Contar el número de milímetros que se ven (recuerde que la

distancia entre dos líneas es un milímetro) y estimar

aproximadamente la fracción sobrante, si la hay. El resultado será el diámetro del campo visual para ese aumento (objetivo x ocular).

g) Si queremos calcular el diámetro del campo de visión para aumentos mayores, hay que

tener en cuenta que cuanto mayor sea el aumento, el campo será menor, es decir, se verá

menos de la muestra que estemos observando. De forma que, si el aumento es el doble, el

campo será la mitad, si el aumento es el triple, el diámetro será la tercera parte, etc.

(inversamente proporcionales). Por tanto, bastará con realizar un sencillo cálculo

matemático para saber el nuevo diámetro.

Así se puede calcular los diámetros de objetos microscópicos, células, amibas, vistos.

5.2 Calcule el diámetro del campo de visión para aumentos de 10X, 40X del mismo

cuadrado de 1 cm de lado de papel milimetrado.

5.3 Compare la anchura del campo visual con cada uno de los tres objetivos

5.4 ¿Con cuál objetivo el campo de visión es mayor con el de mayor o menor aumento?

6. Realice un montaje húmedo con tres hebras de hilo superpuestas y obsérvelas al

microscopio

6.1 Para las muestras de la letra, la hebra de hilo observadas determine:

22

a. ¿Cómo se manifiesta el poder de resolución?

b. ¿Cómo se manifiesta el poder de aumento?

c. ¿Cómo se manifiesta el poder de definición?

d. ¿Cómo se manifiesta el poder de penetración o profundidad?

6.2 ¿Cuál es la utilidad del microscopio?

6.3 ¿En qué montaje se observó mejor el poder de penetración?

7. Comprobación de los principios ópticos del microscopio

Después de observar la letra asimétrica, Conteste las siguientes preguntas:

7.1 ¿Al observar la letra asimétrica: ¿Se ve invertida, o en la misma posición en que estaría

si se viera a simple vista? ¿Parece como si se viera por un espejo?

7.2 ¿Al mover la preparación hacia la derecha. ¿Hacia dónde se mueve la imagen?

7.3 ¿Al alejara el portaobjeto o la muestra de usted hacia donde se nueve la imagen?

7.4 ¿Si la distancia focal es mayor el tamaño del objeto es mayor o menor?

8. Tome la lámina con el extendido coloreado y obsérvela en el microscopio enfocando

primero con el objetivo de 10x, luego ponga una gota de aceite de inmersión sobre el

extendido y ubique el objetivo de 100x.

Describa los detalles observados con cada objetivo.

Al finalizar el trabajo deje el microscopio en su correcta posición, limpie los objetivos,

colóquele la funda y guarde en su puesto. Al terminar de desarrollar las prácticas

usted debe ingresar al foro colaborativo del curso y participar con sus 4

compañeros de grupo colaborativo en la elaboración del informe de laboratorio

respondiendo a las anteriores preguntas compare las respuestas de los 5

integrantes y consolídelas en un solo documento que enviarán al foro para la

retroalimentación y calificación por parte de su tutor.

Laboratorio 3: La Célula

vídeo Célula parte 1

Vídeo Célula parte 2

OBJETIVOS:

Describir las diferentes formas y tamaños de las células

Identificar las diferentes estructuras y organelos que posee una célula, con base en

la capacidad de ampliación del microscopio óptico.

Describir las diferentes formas y tamaños de una célula

Señalar las diferencias fundamentales entre una célula animal y una vegetal

Reconocer que una célula puede constituir un organismo.

Marco Teórico: Módulo de Biología, Unidad 1, lecciones 7 a 10

MATERIALES QUE DEBEN LLEVAR:

23

Bulbo de cebolla Allium cepa

Papa

Tomate

Hojas de Elodea

Laminas portaobjetos y Laminillas

Cuchilla o bisturí

Pinza

Tijeras pequeñas

hisopos

MATERIALES QUE LE SERÁN SUMINISTRADOS EN EL LABORATORIO:

1 caja de petri

Aguja o asa recta

Algodón

Alcohol

Lancetas

Lugol

Solución salina

Acetocarmin

Azul de metileno

Safranina

Colorante de Wright

Microscopio

Cuestionario a resolver para el pre-informe

Establezca claramente y de forma gráfica las diferencias entre célula procariota y

eucariota, entre una célula animal y vegetal. (la representación gráfica puede realizarla de

manera creativa)

Defina el concepto de tejido, y explique la función del tejido Epidérmico, Parenquimático,

Epitelial, Sanguíneo

Para cada una de las observaciones realice un esquema o diagrama de flujo en orden

riguroso

PROCEDIMIENTO

Observación de tejido epidermal de cebolla

Elabore un montaje de tejido epidermal de bulbo de cebolla y obsérvelo al microscopio.

Responda como mínimo las preguntas consignadas en la orientación para descripción

análisis y conclusiones.

1. Tome la cebolla y corte con el bisturí un pedazo de bulbo, levante suavemente con una

pinza una capa delgada y transparente de la parte interna, este es el tejido epidermal.

2. Levante suavemente con la pinza una capa delgada y transparente de la parte interna,

éste es el tejido epidermal. Divida el tejido que obtuvo en dos partes de 3-4 mm.

3. Coloque una gota de agua sobre la lámina portaobjetos y con ayuda de una aguja de

disección extienda sobre ella una parte de la epidermis, teniendo cuidado que la cara

externa quede hacia arriba y sin dobleces. Cubra el preparado con una laminilla.

24

4. Coloque sobre en otra lámina una gota de lugol y la otra parte del tejido epidermal. Deje

actuar el colorante lugol durante 5 minutos. Acerque una laminilla, en posición oblicua, y

apoyando una arista sobre la lámina al lado de la gota, déjela caer suavemente sobre la

gota.

7. Enseguida proceda a la observación de las preparaciones con pequeño aumento de 10x.

8. A continuación revise las preparaciones con el objetivo de 40x.Tenga en cuenta que las

propiedades ópticas de los organelos son similares, por lo tanto se hace difícil distinguir

unos de otros. Sin embargo las propiedades químicas de los organelos son diferentes, por

esto, reaccionan de distinta forma ante determinados colorantes. Al utilizar Lugol se

pueden distinguir mejor algunas estructuras celulares.

9. Anote y dibuje sus observaciones. Tenga en cuenta las diferencias observadas en la

lámina con agua y la lámina con lugol.

Orientación para la descripción, análisis y conclusiones de las observaciones

1. Dibuje en su formato 2 o 3 de las células que forman el tejido epidermal de la

cebolla. Reconozca sus partes y señálelas mediante flechas con nombres, conteste las

siguientes preguntas

a. ¿Qué forma tiene las células de este tejido?

b. ¿Qué estructuras se observan en el montaje húmedo (agua) en 40X?

c. ¿Qué conclusiones puede sacar de la utilización de diferentes aumentos?

d. ¿Al hacer el montaje con tinción (lugol), que sucede, qué organelos se colorean?

e. ¿Qué ventajas tiene el utilizar colorante? ¿Qué desventaja?

f. ¿Qué función cumple el tejido epidermal?

Observación de tejido parenquimatoso en un corte transversal de papa

Elabore un montaje para observación del tejido parenquimatoso en un corte transversal

de papa:

1. Tome el bisturí y haga un corte transversal de la papa, este corte debe ser tan fino que

la apariencia de la porción que obtenga sea transparente.

2. En una caja de petri con agua, enjuague el corte para sacar el exceso de almidón,

contenido en las células de los tejidos de la papa.

3. Elabore dos montajes húmedos uno con una gota de agua y otro con una gota de lugol.

4. Observe con el objetivo de 10x. Anote y dibuje sus observaciones

5. Observe el montaje con el objetivo de 40x.

Observación, descripción, análisis y conclusiones

2. Dibuje en su formato 2 o 3 de las células que forman el parénquima de la papa.

Reconozca sus partes y señálelas mediante flechas con nombres, conteste las siguientes

preguntas

a. ¿Qué forma tiene las células de este tejido?

b. ¿Qué estructuras se observan en el montaje húmedo (agua) en 40X?

c. ¿Al hacer el montaje con tinción (lugol), que sucede, qué organelos se colorean?

¿De qué color? ¿Por qué?

d. ¿Qué función cumple este tejido?

Observación de tejido epidermal y parénquima clorofílico en hoja de Elodea

25

Para observación de tejido epidermal y parénquima clorofílico utilice una hoja de Elodea:

1. Tome con la pinza una ramita de Elodea y corte con las tijeras una hojita.

2. Extiéndala sin invertirla sobre una lámina portaobjetos, adicione una gota de agua y

cúbrala con una laminilla.

3. Observe detenidamente a través del microscopio con aumento 10x, 40x. Ponga

atención al movimiento del citoplasma. Anote y dibuje sus observaciones

Observación, descripción, análisis y conclusiones

Dibuje en su formato 2 o 3 de las células que forman el tejido. Reconozca sus partes y

señálelas mediante flechas con nombres. Indique mediante Flechas el movimiento del

citoplasma. Conteste las siguientes preguntas

a. ¿Qué forma tiene las células de este tejido?

b. ¿Qué estructuras se observan con el objetivo 40X?

c. ¿Qué función cumplen los cloroplastos?

d. ¿Qué es Ciclosis? ¿Por qué se realiza?

e. ¿Qué es presión de turgencia?

f. ¿Qué es ósmosis?

Observación de cromoplastos en pulpa de tomate

Para continuar realice un montaje con pulpa de tomate e identifique los cromoplastos:

1. Con una hoja de afeitar o bisturí, haga una incisión y separe la cáscara.

2. Extraiga una pequeña porción de pulpa con el extremo de una aguja y espárzalo sobre

un porta objetos seco. No adicione agua.

3. Coloque encima un cubreobjetos y comprima suavemente con los dedos hasta obtener

un completo aplastamiento del fragmento de pulpa de tomate.

4. Identifique las células con el objetivo de 10X

5. Seleccione el mejor grupo de células y luego pase al objetivo de 40x.

Anote y dibuje sus observaciones

Observación de células escamosas epiteliales

1. Coloque una pequeña gota de solución salina en el centro del portaobjetos.

2. Con un palillo raspe suavemente el interior de su mejilla, de abajo hacia arriba.

3. Coloque el producto de este raspado en la gota de solución salina.

4. Coloree con una gota de acetocarmin, azul de metileno o safranina.

6. Coloque el cubre objetos y observe al microscopio con objetivo de 10x y 40x e

identifique las células de forma irregular. ¿Qué forma tiene estas células? ¿Qué

organelos se observan con el aumento de 10X y 40X?. Al aplicar colorante qué

organelos se observan mejor? ¿Cuál es la función del tejido epitelial? Anote y dibuje sus

observaciones

Observación de células sanguíneas

A continuación realice un extendido para observación de células sanguíneas:

1. Desinfecte con un algodón humedecido en alcohol la punta del dedo anular o índice,

deje secar el alcohol y con la lanceta, haga una punción en la yema del dedo.

26

2. Coloque una pequeña gota en una lámina portaobjetos limpia y seca.

3. Coloque otra lámina en ángulo agudo sobre la primera, acérquela a la sangre y deslice

suavemente en forma continua hasta formar una capa o frotis delgado.

4. Deje secar la preparación al medio ambiente.

5. Una vez seca la lamina aplique sobre el frotis el colorante de Wright y déjelo actuar

durante cuatro minutos. Con este procedimiento el colorante fijará la preparación.

6. Lave el exceso de colorante con agua de la llave y deje secar la lámina verticalmente.

7. Observe al microscopio con el objetivo de pequeño y mediano aumento e identifique los

glóbulos rojos, leucocitos y plaquetas.

8. Posteriormente observe la preparación con el objetivo de 100X y detalle la forma de los

eritrocitos, plaquetas y neutrofilos. ¿En cuáles de estas células no se encuentra

núcleo? ¿Cuáles aparecen más frecuentemente? Identifique las células sanguíneas

teniendo en cuenta la forma, ausencia o presencia de gránulos en el citoplasma,

coloración que toman los gránulos y forma del núcleo. ¿Qué función cumplen cada una

de estas células? Anote y dibuje sus observaciones

Formato de observaciones

OBJETO OBSERVADO

AUMENTO UTILIZADO

DIBUJO ANÁLISIS Y CONCLUSIONES

Conclusiones:

Deben estar relacionadas con la diferencia entre las células epidérmicas vegetales y

parenquimatosas vegetales; diferencias entre las células animales y vegetales, (forma

tamaño, distribución, entre otros)

Laboratorio 4: Mitosis y Meiosis

Video: mitosis y meiosis parte 1

http://www.unad.edu.co/curso_biologia/video_mitosis1.htm

Video: mitosis y meiosis parte 2 http://www.unad.edu.co/curso_biologia/video_mitosis2.htm

OBJETIVOS:

Manejar correctamente los materiales y reactivos específicos de la práctica.

Identificar cada uno de los periodos que comprende el ciclo celular

Relacionar cada cambio presente en las células meristemáticas, con las diferentes

fases de la mitosis.

Reconocer los procesos de la meiosis con base en el material suministrado.

Marco Teórico Unidad 1 Capítulo 2 Lecciones 12 a 14

MATERIALES QUE DEBEN LLEVAR

bulbo de cebolla Allium cepa

27

Bisturí

Pinzas

vaso desechable

Palillos grandes

Tijeras

Papel de filtro

Portaobjetos

Cubreobjetos

Lanceta

Esmalte transparente

MATERIALES QUE LE SERÁN SUMINISTRADOS EN EL LABORATORIO

Pipeta Pasteur, Vaso de precipitado

Cubeta de disección

Aceto orceina

Eosina

Metanol

Bisturí

Preinforme Defina y explique de manera grafica la mitosis y meiosis, detallando sus

etapas y las células en las que se presenta este proceso.

PROCEDIMIENTO:

Para el desarrollo de esta práctica utilice bulbos de cebolla, Allium cepa y realice

preparaciones con la raíz de material fijado y teñido, una vez obtenidos los extendidos de

células obsérvelos al microscopio óptico.

1. Con ayuda de una pinza retire la capa externa marronacea o rosácea y lave con

abundante agua, esto se realiza para eliminar restos de sustancias con las que

frecuentemente han sido tratadas para inhibir o retardar la germinación de las raicillas.

2. Llene un vaso de precipitados con agua y coloque un bulbo de cebolla sujeto con dos o

tres palillos de manera que la parte inferior quede inmersa en el agua.

3. Póngalo a germinar a 25°C o a temperatura ambiente durante 3 días, al cabo de estos

aparecerán numerosas raicillas en crecimiento de unos 3 o 4 cm. de longitud.

4. Revise diariamente y procure que la corona no se deseque para lo cual es necesario

rellenar con agua cada 24 horas.

5. Cuando las raíces tengan entre 0.5 y 1 cm de longitud, realice cortes de raíz de

aproximadamente 2 – 3 mm a partir del ápice.

6. colóquelas en una lámina portaobjetos. Adiciona una gota del colorante aceto orceina o

eosina.

7. Coloque el cubreobjetos con mucho cuidado sobre la raíz. Con ayuda de la punta de una

lanceta, de unos golpecitos sobre el cubre objetos sin romperlo, de modo que la raíz

quede extendida.

8. Use papel de filtro para retirar el exceso de colorante realice una suave presión,

evitando que él cubre objetos resbale. Si la preparación está bien asentada no hay peligro

de rotura por mucha presión que se realice.

9. Selle todos los bordes del cubre objetos con esmalte transparente, para evitar que se

seque y de esta manera conservar la preparación durante varios días.

10. Coloque la preparación al microscopio e inicie la observación con el objetivo de 10x e

identifique las células.

28

11. Cambie al objetivo de 40X para detallar las células. Observe los núcleos y cromosomas

en color rosáceo – morado.

12. Ubique el objetivo de 100 x y anote sus observaciones anotando las diferencias en

cada uno de los aumentos mencionados.

13. Trate de observar detenidamente las preparaciones y distinga células en interfase y

células en división y dentro de estas, las diferentes etapas de la mitosis

Realice dibujos de lo observado.

Para la observación de las diferentes fases de la meiosis trabaje con micropreparados con

células en proceso de meiosis

Trate de observar detenidamente las preparaciones y distinga células en interfase y células

en división y dentro de estas, las diferentes etapas de la mitosis

Realice dibujos de las fases que distinga, tenga en cuenta la posición de los cromosomas

para identificar las fases.

INFORME.

OBJETO

OBSERVADO

AUMENTO

UTILIZADO

DIBUJO ANÁLISIS Y

CONCLUSIONES

1. Dibuje en su formato 2 o 3 de las células observadas, señalando en el dibujo a qué

tipo de tejidos pertenecen e identifique lo siguiente.

¿Qué etapas de la meiosis y mitosis observo?

¿Qué proceso se está desarrollando en las etapas observadas?

¿Qué tipo de células se están observando?

¿Cuántos cromosomas poseen las células en mitosis?

¿Cuántos cromosomas poseen las células en meiosis?

Laboratorio 5: Diversidad de Microorganismos

Video: biodiversidad microbiana parte 1

http://www.unad.edu.co/curso_biologia/biodiversidad1.htm

Video: biodiversidad microbiana parte 2 http://www.unad.edu.co/curso_biologia/biodiversidad_2.htm

Descripción

A través de esta práctica el estudiante podrá realizar una descripción macroscópica de las

colonias bacterianas y de hongos, de microorganismos como protozoos y microalgas,

además de adquirir destrezas en técnicas de tinción.

OBJETIVOS:

29

Reconocer en placas de cultivo diferentes tipos de microorganismos, en especial

Colonias de bacterias y hongos.

Conocer y aplicar la técnica de tinción de Gram

Identificar bacterias Gram positivas y Gram negativas

Observar microscópicamente bacterias con endosporas (Bacillus)

Observar microscópicamente hongos.

Observar microscópicamente levaduras.

Observar microorganismos de fermentación ácido láctica y fermentación alcohólica

a partir del kumis o yogurt.

Observar protozoarios y algas en muestras de agua

Marco Teórico: Unidad Capitulo 4 Lecciones 22 a 26

MATERIAL SUMINISTRADO

Cultivos de diversos hongos

bacterias en cajas de petri

Solución salina

Agua destilada

Mechero

Escobillones

Gotero

Papel de filtro

Tubo de ensayo

Varilla de vidrio

Microscopio

Coloración de Gram ( cristal violeta, lugol, alcohol

acetona y safranina)

Verde de Malaquita

Safranina 0.5%

Lactofenol

Azul de Metileno

Rojo neutro

Alcohol o Metanol

MATERIAL QUE SE DEBE

TRAER

Levadura de panadería

Yogur casero o probiótico

Agua estancada

Laminas portaobjetos Laminillas

Agua azucarada

Tajada de pan

Asa recta y de argolla

Cinta adhesiva

Preinforme

1. Defina los principales linajes los organismos. Enriquezca gráficamente su

explicación.

2. Complete el siguiente cuadro conceptual.

Organismo

Tipo de Célula

Principales Características Morfológicas y

Fisiológicas

Hábitat

Impacto

Ecológico

Bacteria

Protozoario

30

Hongos

Algas

PROCEDIMIENTO:

Entre los principales grupos de microorganismos se encuentran: bacterias, hongos, algas y

protozoarios.

Observación macroscópica de colonias

1. Realice una descripción macroscópica de las colonias bacterianas y de hongos

entregadas en las cajas de Petri. Haga un cuadro donde describa la forma (puntiforme,

circular, rizoide, irregular y filamentosa), el borde (entero, ondulado o filamentoso), la

elevación (plana, elevada, convexa, crateriforme y acuminada) y la superficie (lisa o

rugosa, mate o brillante, seca o cremosa, invasiva o superficial).

Dibuje en su formato 2 o 3 de las colonias observadas, señalando en el dibujo a que tipo de

organismo pertenece e identifique lo siguiente.

¿Qué forma tienen las colonias célulares observadas? ¿Cuál es su color?

¿Qué forma tienen las colonias observadas (puntiforme, circular, rizoide, irregular y

filamentosa), ¿Cómo es el borde de la colonia (entero, ondulado o filamentoso)

¿Cómo es la elevación (plana, elevada, convexa, crateriforme y acuminada)

¿Cómo es la superficie (lisa o rugosa, mate o brillante, seca o cremosa, invasiva o

superficial)

Colonia Forma Borde Elevación Superficie

COLORACION DE GRAM

A partir de una de las colonias de los cultivos dados realice un frotis de la siguiente

manera:

1. Tome una lamina portaobjetos limpia y en ella coloque una gota de solución salina.

2. Con un asa previamente esterilizada a la llama del mechero, obtenga una pequeña

muestra de las colonias observadas. Mézclela en la gota de solución salina que coloco en

el portaobjetos.

3. Déjela secar al aire libre y fíjela pasándola por la llama del mechero.

Posteriormente proceda a colorear con la tinción de gram de la siguiente manera:

4. Cubra la preparación con cristal violeta y déjela actuar por 1 minuto. Lave con agua

corriente.

5. Cubra la preparación con lugol y déjelo actuar por 1 minuto. Lave con agua corriente.

31

6. Agregue alcohol acetona y déjelo actuar por 5 segundos. Lave con agua corriente.

7. Adicione safranina y déjela actuar por 30 segundos. Lave con agua corriente y ponga a

secar la lámina.

8. Ubique la lámina en el microscopio, localice las bacterias con el objetivo de menor

aumento y observe en detalle a mayor aumento.

9. Identifique las células observadas. Anote sus observaciones.

BACTERIAS DE LA CAVIDAD BUCAL

1. Prepare una lámina portaobjetos limpia y sin grasa.

2. Tome un escotillón desechable, páselo por el borde de la encía en la parte que hace

contacto con los dientes.

3. La muestra extraída con el escotillón colóquela sobre una lámina portaobjetos.

4. Deje secar por sí sola la lámina durante unos minutos con el fin de definir el frotis.

5. Pase lentamente el portaobjetos a través de la llama del mechero, con esto se fija el

frotis.

6. Deje enfriar y coloree con la tinción de Gram como se indicó anteriormente.

7. Deje secar la lámina y ubique las células con el objetivo de menor aumento y luego

observe con el objetivo de inmersión.

8. Tenga en cuenta que las bacterias Gram positivas toman coloración violeta y las Gram

negativas coloración roja. Anote sus observaciones.

BACTERIAS DEL YOGUR

1. Tome una lámina portaobjetos y en ella coloque una gota de agua destilada.

2. Con un asa de argolla, obtenga una gota de yogur y mézclela con la gota de agua

colocada en el portaobjetos.

3. Deje secar completamente la lámina. Pásela 3 veces por la llama del mechero. Tenga

cuidado de no sobre calentar la muestra.

4. Cubra la preparación con alcohol o metanol por unos segundos para eliminar la parte

grasa.

5. Escurra el alcohol y deje secar al aire. Luego cubra el extendido con azul de metileno

durante 2 minutos. Lave el exceso de colorante y deje secar.

6. Enfoque el microscopio con el objetivo de mayor aumento e identifique los estreptococos

y los lactobacilos. Anote sus observaciones.

Dibuje en su formato 2 o 3 de las células observadas, señalando en el dibujo a qué tipo de

organismo pertenece e identifique lo siguiente.

a. ¿Qué tipo de microorganismos se observan?

b. ¿Cómo se denominan las bacterias según su forma?

c. ¿Cómo se clasifican las bacterias según la manera de agruparse?

d. ¿Qué color toman las bacterias de acuerdo a la coloración de gram?

OBSERVACION DE MOHOS

1. Prepare una solución de agua azucarada y agregue 20 gotas de esta a una tajada de

pan, déjela por espacio de media hora al aire libre.

2. Almacénela en una bolsa plástica y ciérrela. Guárdela en un lugar oscuro a 30°C y

obsérvela diariamente.

32

3. Cuando el pan esté enmohecido, coloque en un portaobjetos una pequeña gota de

solución de lactófenol.

4. Luego con un trozo de cinta adhesiva transparente de aproximadamente 2 cm toque la

superficie del pan enmohecido.

5. Pegue la cinta adhesiva sobre la gota del portaobjetos.

Elimine el colorante sobrante con un papel de filtro.

6. Observe al microscopio con objetivo de 40X e identifique el micelio y las hifas.

El procedimiento anterior también puede hacerlo con frutas u hortalizas dañadas que

presenten en su superficie mohos. Anote sus observaciones.

OBSERVACION DE LEVADURAS

1. Tome un poco de levadura de panadería y colóquela en un tubo de ensayo que

contenga agua con azúcar.

2. Incube a 37°C durante 15 minutos esto producirá el desarrollo de las levaduras.

3. Con una varilla de vidrio tome una gota del cultivo anterior y extiéndala en el

portaobjetos. Deje secar al aire

4. Adicione dos gotas de azul de metileno y deje actuar durante tres minutos

5. Coloque una laminilla y elimine el exceso de colorante con papel de filtro.

6. Observe al microscopio e identifique las levaduras por su forma ovalada.

Observe que algunas presentan gemaciones. Anote sus observaciones.

BACTERIAS DEL SUELO

1. Entierre horizontalmente un portaobjetos en la tierra de una maceta o de un jardín,

déjela allí durante 5 días.

2. Transcurrido este tiempo saque la lamina y fíjela pasándola tres veces por la llama del

mechero.

3. Limpie los bordes del portaobjetos y la parte que no va a teñir.

4. Luego coloree la lamina con safranina al 0.5% durante 1 minuto. Lave el exceso de

colorante y deje secar.

5. Observe al microscopio con el objetivo de mayor aumento y anote sus observaciones.

ALGAS Y PROTOZOOS

1. Tome una muestra de agua estancada con un cuentagotas y deposítela en el centro de

un portaobjetos. Coloque un cubreobjetos.

2. Observe la preparación al microscopio. Mueva lentamente la preparación, e identifique

las algas y los protozoos.

3. Añada unas gotas de rojo neutro por el borde del cubre para que penetre en la

preparación y puedas ver los microorganismos, que por su transparencia son difíciles de

observar.

4. Anote sus observaciones.

CONTENIDO DEL INFORME:

portada

33

objetivos

diligenciamiento de los formatos para cada uno de los diagramas:

FORMATO #1

bacterias tinción

Enfoque

40X

Enfoque

100X

forma Gran

(-)

Gram

(-)

Observaciones

FORMATO #2

FORMATO #3

levaduras tinción

Enfoque

40X

Enfoque

100X

Reproducción Observaciones

(Utilice lápices de colores)

Análisis de resultados

conclusiones

bibliografía

OBSERVACION DE ESPORAS

A partir del cultivo en caja de petri marcado como Bacillus, prepare un extendido del

microorganismo.

1. Fije por calor y cubra todo el portaobjetos con una solución de verde de Malaquita.

2. Caliente hasta emisión de vapores y siga dicho calentamiento durante 3 minutos.

3. Lave con agua y cubra con solución de safranina. Deje actuar 30 segundos. Lave con

agua y deje secar la lámina.

4. Enfoque con el objetivo de inmersión y observe los bacilos y en su interior las esporas

ubicadas en un extremo. Anote sus observaciones

Laboratorio 6: Tejidos Vegetales

Laboratorio 6: Tejidos Vegetales

hongos tinción

Enfoque

40X

Enfoque

100X

Estructuras nombre Observaciones

34

º Vídeo: tejidos vegetales

Descripción

Esta práctica permite a los estudiantes comprobar la diversidad y especuialización de los

tejidos vegetales , además de adquirir la habilidad para realizar cortes a mano alzada

OBJETIVOS:

Comprobar la diversidad y especialización de las células vegetales y sus

agrupaciones en tejidos.

Adquirir habilidad en la elaboración de cortes a mano alzada y en coloración

Agudizar el sentido de la observación de las estructuras vegetales, aspecto

importante para comprender la morfología vegetal.

MATERIALES QUE DEBEN LLEVAR

Hoja de lirio

Hoja de olivo

Hoja de Elodea

Rama de hiedra

Bulbo de cebolla

Tomate

Papa

Pera

Raíces de cebolla

Lápiz de madera de cedro

Bisturí o cuchilla

Pinza

Láminas portaobjetos y Laminillas

MATERIAL SUMINISTRADO

Fluoroglucina

Acido clorhídrico

Verde brillante

Microscopio

35

PROCEDIMIENTO:

En esta práctica observe a través del microscopio la morfología de los distintos tejidos

vegetales.

TEJIDO PROTECTOR

1. Tome una hoja de lirio y con un bisturí haga una pequeña incisión en el limbo

2. Con ayuda de una pinza levante la capa externa para obtener una lámina fina.

3. Coloque la lámina fina obtenida en el portaobjetos y agregue una gota agua.

4. Enfoque al microscopio con objetivo de 10x y 40x. Identifique los ostiolos y los

cloroplastos. Anote sus observaciones.

Observe otro ejemplo de tejido epidérmico realizando un montaje con cebolla como se

explico en la práctica de la célula.

Observe al microscopio con el objetivo de menor aumento e identifique la forma de las

células epiteliales. Con el objetivo 40X identifique los nucleolos.

Otro ejemplo de tejido protector puede observarlo en la hoja de olivo.

Raspe el envés de una hoja de olivo.

Coloque el raspado en una lámina y adicione una gota de agua.

Observe los pelos escamiformes con forma de sombrilla. Anote sus observaciones

TEJIDO PARENQUIMÁTICO DE ALMACENAMIENTO.

Realice un montaje con pulpa de tomate como se explicó en la práctica de la célula.

Observe al microscopio y anote sus observaciones.

Realice un montaje con el raspado de papa como se indico en la práctica de la célula.

Observe al microscopio y anote sus observaciones.

Realice un montaje con la hoja de Elodea como se indico en prácticas anteriores. Observe

al microscopio y anote sus observaciones.

TEJIDOS MECÁNICOS O DE SOSTÉN.

Raspe con un cuchillo o bisturí una parte pequeña de mesocarpio de pera y colóquela en

un portaobjetos.

Cubra la muestra con fluoroglucina durante 2 minutos.

Elimine el exceso y cubra con ácido clorhídrico.

36

Coloque una lámina portaobjetos y observe el microscopio con objetivo de 40x. Anote sus

observaciones.

TEJIDOS CONDUCTORES

Realice un corte longitudinal y fino de un lápiz de madera de cedro. Coloque las virutas en

un portaobjetos, adicione agua. Coloque una laminilla y observe al microscopio.

Realice finos cortes perpendiculares del pecíolo de la hiedra, a la dirección del tallo;

mínimo cuatro cortes.

Deposítelos en una lámina y adicione verde brillante durante 5 minutos. Lave con agua

corriente.

Cubra la lámina con fluoroglucina durante 2 minutos.

Transcurridos los 2 minutos elimine el exceso de colorante.

Cubra con ácido clorhídrico, coloque un cubreobjetos y observe al microscopio. Anote sus

observaciones.

TEJIDO MERISTEMATICO

Realice un montaje con la raíz de la cebolla como se indico en la práctica de mitosis.

Observe las células que se encuentran en mitosis.

37

Anexo

Orientaciones para la descarga de los videos

Apreciados estudiantes para que no tengan dificultades para ver los videos en línea, los he

subido a un sitio Web desde el cual los pueden descargar y guardar en su computador y

así los pueden observar sin necesidad de internet. Solo deben tener flash que ya todos los

computadores lo traen.

1. Para descargar el video de normas de seguridad en el laboratorio deben entran a esta

dirección http://www.4shared.com/file/N9heZ5gz/NORMASB.html

2. dar clic en descargar ahora (ver pantallazos)

3. Dar clic para descargar este archivo ahora

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4. Guardar el archivo del video en su computador

2. A continuación las direcciones para descargar los demás videos:

Microscopio parte 1 http://www.4shared.com/file/QLGjS_x3/MICROSCOPIO1.html

Microscopio parte 2 http://www.4shared.com/file/a5V8jaL-/MICROSCOPIO2.html

La célula parte 1 y 2 http://www.4shared.com/file/cjFouFzX/CELULA3F.html

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Los microorganismos parte 1 y 2

http://www.4shared.com/file/srcfinxo/MICROORGANISMOS.html

Mitosis 1 parte http://www.4shared.com/file/5SjzDkSJ/MITOSIS_1.html

Mitosis 2 parte http://www.4shared.com/account/file/__h3_PdC/MITOSIS_2.html

Tejidos vegetales http://www.4shared.com/file/e_Gw7Jl7/TEJIDOSV.html

Quienes quieran descargar el simulador de microscopía y practicar en él pueden hacerlo en

esta dirección:

http://www.4shared.com/file/D4dxxdnY/Simulador_microscopa.html

Este archivo está comprimido con Winrar deben descargarlo, guardarlo en su PC y luego

descomprimirlo.

Si quieren descargar el curso completo con videos y animaciones pueden hacerlo desde

esta dirección

http://www.4shared.com/file/H7lcGfwu/sitiocursohipermedia.html

No deben borrar ningún archivo abren la carpeta sitiocursohipermedia y dan clic en el

archivo index