UNIVERSIDAD NACIONAL DE CAJAMARCA FACULTAD DE MEDICINA HUMANA Escuela Acadmico Profesional de Medicina Humana PRACTICAS DE LABORATORIO CLINICO TEMA: HEMOGRAMA

DOCENTE

: Mcblgo. QUIROZ CUEVA, Horacio : LOZADA PEREZ, Vanessa

ALUMNA

AO

: TERCERO VI CICLO

CAJAMARCA, SEPTIEMBRE DEL 2007

UNIVERSIDAD NACIONAL DE CAJAMARCA MEDICINA HUMANA PRACTICA N 5 HEMOGRAMA

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Erlich fue el primer en utilizar colorantes simples de anilina aunque sus preparados ya no se utilizan en la actualidad. Lenner en 1889 encontr que el precipitado obtenido por la mezcla de eosina y azul de metileno poda disolverse en alcohol metlico para formar un colorante til que combinaba algunas propiedades de los dos colorantes iniciales. Romanowsky (1890), encontr que al mezclar una solucin de azul de metileno madura con eosina (policroma) y disolviendo el precipitado en alcohol metlico, se obtena un colorante de uso ms amplio que poda teir los ncleos celulares y los grnulos de las plaquetas (a los que la mezcla de Lenner no coloreaba). Colorante ms modernos que el de Romanowsky, por ejemplo los colorantes de Wright, Leishman, etc. Son semejantes, en principio, al mtodo original de Romanowsky, la diferencia principal estriba en el mtodo de obtencin de la policroma del azul de metileno. El estudio citomrfico de extendidos coloreados de la sangre pone de manifiesto el producto final de una maravilloso y complicado proceso de maduracin que tiene lugar en el sistema hematopoytico y que se encuentra representado por los eritrocitos, los leucocitos y las plaquetas. Es necesario entrenarse y aprender a observar todos los elementos del frotis mientras lleva a cabo el recuento diferencial. Se debe verificar el tamao, forma y concentracin de hemoglobina en eritrocitos, adems si existe un grado importante de anisocitosis o poiquilocitosis, tipocroma, microcitosis, macrocitosis e hipercroma aparente, etc. En cuanto a plaquetas se debe tener en cuenta si se encuentran en cantidades aproximadamente normales (de 3 a 8 por 100 glbulos rojos), si son normales o si hay formas gigantes o extraas. As mismo, en cuanto a leucocitos se debe considerar si son maduros o atpicos, si su nmero es normal, aumentado o disminuido En los frotices muy gruesos, los leucocitos son pequeos, difciles de teir siendo imposible su reconocimiento. An en los mejores frotis, a causa de la diferencia de tamao, densidad, etc., los leucocitos muestran una distribucin particular. Los monolitos grandes y los polimorfonucleares (PMN) predominan en los bordes y al final de la extensin, mientras que los linfocitos ms pequeos se distribuyen en forma ms uniforme en la parte media. I. II. OBJETIVOS: Colorear extendidos de muestras de sangre Reconocer clulas sanguneas Establecer la frmula leucocitaria Hacer recuentos de leucocitos y plaquetas MATERIAL Y METODOS

Coloracin De Extendidos Sanguneos III. PROCEDIMIENTO

El frotis bien seco y rotulado se coloca sobre la gradilla de coloracin.

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Cubrir la lmina con un volumen de colorante y dejar por un minuto (4-5 gotas) Diluir el colorante con dos volmenes de agua tamponada pH 6.4, mezclar bien observndose la formacin de una escarcha metlica y dejar por 6 minutos Lavar con agua corriente y dejar secar colocando la lmina verticalmente. Los tiempos indicados pueden variar de acuerdo a la antigedad del colorante. IV. RECONOCIMIENTO DE CELULAS SANGUINEAS

MATERIAL Lminas con extendidos sanguneos coloreados Microscopio ptico PROCEDIMIENTO Colocar las lminas coloreadas al microscopio, colocar una gota de aceite de cedro y observar con inmersin. Reconocer los diversos tipos de clulas sanguneas y dibujar. V. RECUENTO DE GLOBULOS BLANCOS MATERIAL Hemocitmetro (Cmara de Neubauer) Pipeta de glbulos blancos (de Thoma) Diluyente; Lquido Turk (Acido actico 2-3% ms gotas de violeta de genciana: la solucin hipotnica del cido actico destruye los GR y la violeta de genciana hace observar mejor los GB, a los que tie ligeramente) PROCEDIMIENTOS Mezclar bien la sangre con el anticoagulante. Llenar con sangre la pipeta de GB hasta la marca de 0.5 y limpiar la punta. Introducir la pipeta en el diluyente de glbulos blancos y llenar la pipeta hasta la marca de 11. Hacer rotar para que se movilice la perla mezcladora. No permitir que ingrese aire ni se escape la sangre Tapar ambos extremos de la pipeta y mezclar manualmente por 1 minuto. Preparar la cmara de Neubauer con su laminilla cubre-cmara. Agitar la pipeta y descartar 3 a 4 gotas para luego colocar una gota pequea cerca de un extremo abierto de la cmara para que se llene por capilaridad. Dejar en reposo por 3 minutos. Enfocar la cuadrcula de glbulos blancos y luego con el objetivo de 40X contar en los cuatro cuadrados grandes angulares. La enumeracin incluye las clulas que cubren o tocan por dentro o por fuera las lneas limitantes superior e izquierdo en el cuadrado grande de recuento y no se consideran las de los lmites inferior y derecho. G. blancos contados en 4 cuadrados x mm3 N de leucocitos = Area contada x Altura de la cmara x Dilucin de sangre

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UNIVERSIDAD NACIONAL DE CAJAMARCA MEDICINA HUMANA Glbulos contados N de leucocitos = 4 x 1/10 x 1/20

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N de leucocitos = Glbulos contados x 50 VALORES NORMALES : de 5,000 a 10,000 x mm3

VI.

RECUENTO DE PLAQUETAS (Mtodo Indirecto) PROCEDIMIENTO

De la lmina de hemograma contar 20 campos con ms o menos 100 GR Hacer recuento de plaquetas en cada campo Sacar el promedio de plaquetas por campo que corresponde al nmero de plaquetas por 100 glbulos rojos. Confrontar con la Tabla de Relacin entre Hematocrito y Nmero de glbulos rojos y con dichos datos obtener el nmero de plaquetas por mm3 EJEMPLO: 1. Se observan 10 plaquetas por 100 glbulos rojos como promedio. 2. Si el paciente tiene 35% de Hematocrito, segn la tabla corresponde 3850,000 de glbulos rojos. 3. Por tanto el nmero de plaquetas se obtiene: 4. Si en 100 GR ----------10 plaquetas 5. 3850,000 GR x mm3 ----------X 6. X = 385,000 plaquetas x mm3 TABLA: RELACION ENTRE HEMATOCRITO Y NMERO DE GLOBULOS ROJOS (Para recuento de plaquetas)

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UNIVERSIDAD NACIONAL DE CAJAMARCA MEDICINA HUMANA HEMATOCRITO (%)28 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 45,5 46 47 48 49 50

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NUMERO DE GR3140 000 3330 000 3410 000 3520 000 3630 000 3740 000 3850 000 3960 000 4070 000 4180 000 4290 000 4400 000 4510 000 4620 000 4730 000 4840 000 4950 000 5000 000 5060 000 5170 000 5280 000 5390 000 5500 000 VII.

FORMUL A

LEUCOCITARIA Consiste en conocer y valorar los porcentajes relativos de las distintas variedades de glbulos blancos que se observan en los extendidos bien coloreados, despus del recuento de 100 200 leucocitos. Es indispensable para obtener el porcentaje de cada tipo de leucocitos, que stos se hallen distribuidos uniformemente en el extendido sanguneo. Como los granulocitos generalmente estn en los mrgenes del extendido y los linfocitos en el centro, se recomienda el mtodo utilizado por Schiling, que consiste en tomar cuatro puntos marginales distintos recorriendo el campo en zig-zag desde el borde hacia la parte central y contar 25 a 50 elementos en cada uno de los cuatro puntos. La frmula leucocitaria relativa en la sangre normal, segn diversos autores es aproximadamente la siguiente:

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UNIVERSIDAD NACIONAL DE CAJAMARCA MEDICINA HUMANA TIPO Granulocito Neutrfilo c/ncleo abastonado Granulocito Neutrfilo segmentado Granulocito Eosinfilo Granulocito Basfilo Linfocitos Monocitos % 2a5 45 a 65 1a4 0a1 20 a 45 4a8

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Estas cifras pueden variar por condiciones cismticas, alturas, raza, emociones, dolor, edad, etc. Conociendo la relacin numrica y la cantidad total de leucocitos por milmetro cbico, es fcil establecer la frmula absoluta de cada tipo celular de la siguiente manera:

Recuento global leucocitario x % variedad de clula Frmula = --------------------------------------------------------------------------------------100 VIII. RESULTADOS A.- COLORACION DE EXTENDIDOS SANGUINEOS Y RECONOCIMIENTO DE CLULAS SANGUNEAS NEUTRFILOS: clulas de 7-9 um con granulacin menos evidente que la de los eosinfilos, presentan ncleos polilobulados, contienen protenas de propiedades bactericidas (fagocitan y destruyen clulas bacterianas). Son el tipo ms frecuente de leucocito (58-70% de leucocitos). Tambin participan en la eliminacin de parsitos de gran tamao y en la modulacin de la respuesta inmune. NEUTROFILOS

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EOSINFILOS: clulas de 12 um, de forma oval o poligonal, con ncleo bilobulado (o arrionado) (0.5-4% de leucocitos). Los grnulos son de forma elptica, con presencia de un cristaloide en su interior.

EOSINOFILOS

BASFILOS: clulas de 11-12 um, con gran nmero de grnulos en su citoplasma y ncleo dbilmente lobulado, de menor afinidad cromtica que los ncleos de eosinfilos. BASOFILOS

LINFOCITOS: de ncleo intensamente heterocromtico, que ocupa ms del 90% del citoplasma. Participan en la generacin de la respuesta inmune humoral como clulas sintetizadoras de anticuerpos (linfocitos B) y en la respuesta inmune celular como clulas con propiedades fagocitarias (linfocitos T). Corresponden al 20-35% de los leucocitos. LINFOCITOS

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MONOCITOS: Presentan cromatina dispersa en forma de pequeos granos en toda la extensin del ncleo, y especialmente como heterocromatina constitutiva en la cara interna del ncleo. Se caracterizan por la presencia de gran nmero de vacuolas fagocticas y lisosomas primarios y secundarios. Corresponden al 4-8% de los leucocitos. MONOCITOS

Se puede obtener e importante informacin con el frotis sanguneo. Permite la determinacin de la morfologa celular (forma y arreglo de sus estructuras), lo cual puede identificar el origen celular y madurez, as como la relacin de varios tipos de clulas con respecto a otras. Estos datos algunas veces solos, pero con mayor frecuencia combinados con informacin sobre antecedentes, examen fsico y otras pruebas de laboratorio, proporcionan el diagnostico mdico, tanto como lo hara un corte de tejido histolgico. Se ha utilizado el colorante Wrigth en esta prctica para el examen de hemograma, se ha diluido sangre 1/20 con pipeta de thoma y solucin turck (acido actico 2%) que destruye totalmente los glbulos rojos. En la muestra de frotis sanguneo se obtuvo. Conteo Diferencial

Eosinfilos (3) Abastonados.(3) Basfilos.(0) Mielocitos. ( 0) Linfocitos.(22) Segmentados.( 63) Monocitos(5) Juveniles(5)

B.-RECUENTO DE GLOBULOS BLANCOS

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UNIVERSIDAD NACIONAL DE CAJAMARCA MEDICINA HUMANA Para el recuento de glbulos se utiliza la cmara de neubaver. Dilutos: Solucin de turk para visualizar los glbulos blancos

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Solucin DIACE para visualizar los glbulos rojos. Esta sustancia lisa los glbulos blancos Anticoagulante: EDTA Serie blanca: La ingestin de algunos alimentos, la actividad fsica y el estrs pueden aumentar el nmero

de leucocitos. Durante el ltimo mes de embarazo y en el parto, puede aumentar la cifra de leucocitos. Las personas a las que se les ha extirpado el bazo pueden tener una elevacin leve y persistente de la cifra de leucocitos. En la prctica se analizo la dilucin en 50ul de sangre y el dilutor 1/20. El rea total que se ve en el campo es de 9mm2 son nueve cuadrados de 1mm2. En el recuento de glbulos hay una variacin de + - 200 clulas. FORMULA LEUCOCITARIA Una cuenta de leucocitos calcula el nmero total de glbulos blancos presentes en un mm 3 de sangre. Para contar los leucocitos se diluye la sangre con una solucin cida dbil, que destruye los eritrocitos, quedando los leucocitos para ser contados. Se usa la cmara contadora o la retcula de un ocular cuando se utiliza el microscopio McArthur. CUENTA LEUCOCITARIA La cuenta total de leucocitos es una de las pruebas de rutina efectuadas para diferenciar los transtornos leucocitarios. La evaluacin de las otras clulas mieloides (eritrocitos y plaquetas) tambin se ordena rutinariamente con esta prueba debido a que los transtornos leucocitarios rara vez se presentan solos, pues con frecuencia se relacionan con cambios en las clulas mieloides. La cuenta leucocitaria se efecta en casi todos los pacientes que se admiten en el hospital, independientemente de su enfermedad. Por s misma es de poco valor como ayuda diagnstica, por lo que debe correlacionarse no solo con otras pruebas, sino tambin con las condiciones clnicas del paciente. Caractersticas generales de los leucocitos: La sangre contiene en condiciones normales seis tipos de leucocitos: Los polimorfonucleares neutrfilos Los polimorfonucleares eosinfilos Los polimorfonucleares basfilos Los monocitos Los linfocitos Las clulas plasmticas (en ocasiones).

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LOS RESULTADOS OBTENIDOS EN LA PRCTICA FUERON LOS SIGUIENTES: Recuento De Leucocitos: CAMPO N. 1: 35 CAMPO N. 2: 22 CAMPO N3: 58 CAMPO N4: 28 1litro= N leucocitos x 50 x106

El nmero de clulas en 1mm3es 143x50 (factor) x 106 resultando el valor de 7150/ mm3 x106 Segn el resultado obtenido hay 7150 millones de leucocitos. Recuento De Eritrocitos: El nmero de clulas en 1mm3es 393,3. Los resultados se notifican como el N eritrocitos x 1012 L. el resultado final es de 3933000/ul. IX. COMENTARIOS

En una persona normal sana, el 45% del volumen de su sangre son clulas, glbulos rojos (la mayora), glbulos blancos y plaquetas. Un fluido claro y amarillento, llamado plasma, constituye el resto de la sangre. El plasma, del cual el 95% es agua, contiene tambin nutrientes como glucosa, grasas, protenas, vitaminas, minerales y los aminocidos necesarios para la sntesis de protenas. La prctica se desarrollo con mucho cuidado por parte de los alumnos pero si me hubiera gustado que se analice ms a fondo con casos clnicos para comprenderlo mejor el tema.X. CUESTIONARIO

1.

Fundamento de la coloracin Wrigth El frotis de sangre perifrica obtenido por puncin capilar y coloreada con Wrigth o Giemsa,

suministra un medio para estudiar la sangre y determinar las variaciones y anormalidades de estructura forma y tamao de los eritrocitos; su contenido de hemoglobina y sus propiedades de coloracin. Es til en el estudio de algunas alteraciones hematolgicas y como indicador de la respuesta y los efectos deletreos de diferentes tratamientos. Permite adems observar agrupaciones de plaquetas y los glbulos blancos, cada uno con su morfologa caracterstica. Dado que es un examen fcil de practicar, y que est al alcance de cualquier mdico, hasta en el lugar ms remoto, ste debe familiarizarse con l, para tenerlo como arma diagnstica cuando las posibilidades de laboratorios ms sofisticados no estn a su alcance. Caractersticas De Funcionamiento LABORATORIO CLINICO

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Los ncleos se teirn en diferentes tonos de prpura. El citoplasma se teir en diferentes tonos de azul a rosa claro. El citoplasma de algunas clulas puede presentar grnulos finos de rojizos a lila. Los basfilos demostrarn grnulos azul oscuro-negros en el citoplasma. Los eosinfilos demostrarn grnulos naranja en el citoplasma. Los hemates deben mostrar un color de rosa a naranja. 2. Cmo hara el recuento de GB si no cuenta con la pipeta de Thoma?

Se deba usar la pipeta antigua con bulbo, pues la dificultad de esta es que no se puede mezclar bien la sangre por lo que dificultara la cuenta de leucocitos. Se coloca en otro recipiente para mantener la misma concentracin de glbulos blancos. Para realizar este anlisis no se precisa estar en ayunas. Se precisa localizar una vena apropiada y, en general, se utilizan las venas situadas en la flexura del codo. La persona encargada de tomar la muestra utilizar guantes sanitarios, una aguja. Le pondr un tortor en el brazo para que las venas retengan ms sangre y aparezcan ms visibles y accesibles. Limpiar la zona del pinchazo con un antisptico y mediante una palpacin localizar la vena apropiada y acceder a ella con la aguja. Le soltarn el tortor. Cuando la sangre fluya por la aguja el sanitario realizar una aspiracin (mediante la jeringa o mediante la aplicacin de un tubo con vaco). Al terminar la toma, se extrae la aguja y se presiona la zona con una torunda de algodn para favorecer la coagulacin. 3. Para qu sirven los extendidos sanguneos en las lminas portaobjetos?

Es importante porque nos proporciona un medio de fijacin para las clulas sanguneas a la vez para poder precisar al microscopio las diferentes patologas que se pueden encontrar en estas.Permite la determinacin de la morfologa celular (forma y arreglo de sus estructuras), lo cual puede identificar el origen celular y madurez, as como la relacin de varios tipos de clulas con respecto a otras. Para un trabajador de laboratorio, el frotis perifrico puede darle una indicacin exacta de la hemoglobina presente, as como el nmero de eritrocitos. Este anlisis cuantitativo ayuda a caracterizar muchos trastornos como la anemia hemoltica microangiopatica, anemia por deficiencia por deficiencia de hierro, la anemia perniciosa, anemia de las clulas falciformes y la esferocitosis hereditaria. 4. Qu precauciones debe tenerse en cuenta en relacin al uso de las lminas portaobjetos para frotis sanguneo? Que estn completamente limpias y sin grasa. Para poder reconocer las clulas sanguneas y efectuar con precisin un conteo diferencial Es esencial un frotis de sangre bien extendido y bien teido. Un frotis delgado de sangre se prepara extendiendo uniformemente una gota de sangre sobre una laminilla una de las partes ms importantes del cuadro hemtico

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Se coloca una gota de sangre anti coagulada en una lmina que debe ser preferiblemente nueva o en su defecto lminas completamente desengrasadas y con una lmina (Extensora) en un ngulo de 30 - 45 grados sobre la primera de forma tal que la sangre se extienda por capilaridad a lo largo del ngulo agudo formado por dos lminas y se deja secar. El extendido de sangre debe hacerse mximo una hora despus de que se tome la muestra. Cubrir la lmina con Wright por cinco minutos, luego se le agrega una solucin tampn (Agua destilada) y se deja por dos minutos, se lava la lmina con agua de chorro. Tener en cuenta que cada vez que se empiece un colorante nuevo se debe estandarizar los tiempos de coloracin, y filtrar los colorantes cada vez que sea necesario. Es importante porque nos proporciona un medio de fijacin para las clulas sanguneas a la vez para poder precisar al microscopio las diferentes patologas que se pueden encontrar en estas.

5.

Cul es la funcin de los componentes del lquido de Turk?

Acido actico 2-3% ms gotas de violeta de genciana: la solucin hipotnica del acido actico destruye los glbulos rojos y la violeta de genciana hace observar mejor los glbulos rojos, a los que tie ligeramente. La observacin en la cmara de Newbawer es localizar clulas leucocitarias se observan refringentes. (Parecen pequeos puntos luminosos) para ello se utiliza la coloracin de Turk. Los Linfocitos previamente teidos con anticuerpos monoclonales para linfocitos se observan de la siguiente manera: CD 45 clulas nucleadas (linfocitos T y B) de color azul. CD 30 clulas nucleadas (linfocitos T) de color azul CD 20 clulas nucleadas (linfocitos B) de color azul con caf. XI. CONCLUSIONES

Los leucocitos son la principal defensa con la que cuenta el organismo contra los agentes patgenos (microorganismos). Los monocitos son los grandes macrfagos de la sangre perifrica. Las plaquetas son fragmentos citoplasmticos celulares de los megacariocitos, estos circulan como pequeos discos en a la sangre perifrica.

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UNIVERSIDAD NACIONAL DE CAJAMARCA MEDICINA HUMANA XII. VI. REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS

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ALFONSO, Balcells2002, La clnica y el laboratorio. 19 edicin. Edictorial Masson Barcelona Guyton H.Tratado de Fisiologa Medica " 10 edicin. Editorial McGraw - Hill. Interamericana. Mxico 2003. Ganong; Fisiologa Medica 17 edicin. Editorial El Manual Moderno. Mxico 2002. Morrison K. Laboratorio Clnico y Pruebas Diagnostico 1 Edicin. Editorial El Manual moderno. Mxico 1998.

Pginas de Internet.

http://www.uam.es/departamentos/medicina/anesnet/agenda/hematologia.htm http://escuela.med.puc.cl/publ/manualhet/hetsang.html

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