Manual de Parasitologia

UNIVERSIDAD VERACRUZANA

FACULTAD DE QUMICA FARMACUTICA BIOLGICA

MANUAL DE PRACTICAS DE PARASITOLOGIA

M.E. Yolanda Medina Romero.

XALAPA -ENRIQUEZ, VER.

FEBRERO- 2009

MANUAL DE PRCTICAS DE PARASITOLOGIA

"Estudia el pasado y conocers el futuro"Proverbio chino

INDICEIntroduccin 8

Objetivos

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Reglamento de laboratorio Medidas 11 Recomendaciones Capitulo 1. Generalidades Capitulo 2. El laboratorio de parasitologa 12 14 18 de

10 bioseguridad

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Practica No. 1. Organizacin y funcionamiento de laboratorio de parasitologa. Capitulo 3. Mtodos Parasitolgicos Capitulo 4. Mtodos coproparasitoscopicos cualitativos Prctica No. 2. Examen directo en fresco Prctica No. 3. Identificacin de Balantidium coli Prctica No. 4. Mtodo de Willis Prctica No. 5. Mtodo de Faust Prctica No. 6. Mtodo de Ritchie Prctica No. 7. Mtodo de Sheather sugar Prctica No. 8. Mtodo de Charles Capitulo 5. Mtodos coproparasitoscopicos cuantitativos Prctica No. 9. Metodo de Stoll Capitulo 6. Mtodos especiales para el diagnstico de parasitosis del aparato digestivo Prctica No. 10. Amiba en fresco Prctica No. 11. Estudio citolgico de moco fecal Practica No. 12. Mtodo de Graham Prctica No. 13. Mtodo de Concentracin de larvas por Termotropismo e higrotropismo

25 29 34 35 38 41 44 48 52 55 60 61 66 67 70 72 75

Capitulo 7. Mtodos para el diagnstico de parsitos tisulares y de cavidades Prctica No. 14. Identificacin de Trichomonas vaginalis Prctica No. 15. Identificacin de Plasmodium Prctica No. 16. Identificacin de Trypanosoma y leishmania Practica No. 17. Bsqueda de Toxoplasma gondii Practica No. 18.Coprologico Vinculacin Conclusin

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Bibliografa Anexo A. Principales parsitos intestinales del hombre Anexo B. Algoritmos para el examen parasitolgico Anexo C. Micrometria Anexo D. Claves de identificacin de protozoarios Anexo E. Elementos que se pueden confundir con parsitos Intestinales Anexo F. Preparacin de reactivos Anexo G. Norma Oficial Mexicana 087

114 117 121 125 127 131 135 138

INDICE DE TABLASTabla1.Envo de muestras para parasitologa Tabla 2. Requisitos para remisin de muestras para examen Parasitolgico Tabla 3. Factores de correccin para el reporte del mtodo de Stoll Tabla 5. Diferencia entre larvas filariformes 21 22 63 78 6


INDICE DE FIGURASFigura 1. Mtodo de Ritchie Figura 2. Toma de muestra de raspado perianal Figura 3. Sistema de Baerman Figura 4. Dispositivo de Baerman modificado Figura 5. Diferencias entre larvas Rabditiformes Figura 6. Lamina para diagnstico de paludismo Figura 7. Interpretacin de resultados de Chagas 50 76 73 77 78 87 94

INTRODUCCINLas enfermedades parasitarias han producido a travs de los tiempos ms muertes y dao econmico a la humanidad que todas las guerras juntas. Generalmente en los pases con poco o nulo desarrollo socioeconmico, es en donde las enfermedades parasitarias y las parasitosis se presentan con mayor frecuencia, vindose favorecidos esto por las condiciones climticas calidas o templadas y por la falta de cultura medica. Ya que en los pases desarrollados social, medica, y econmicamente, las enfermedades parasitarias han sido erradicadas o tienen muy poca significacin.1 Un nmero considerable de parasitosis, entre las cuales se encuentra la amibiasis, malaria, trypanosomosis americana, leishmaniosis en sus diferentes formas, y la cisticercosis, persisten como problema de salud pblica en varias regiones de Mxico, se encuentran entre las enfermedades infecciosas y parasitarias con mayor morbi-letalidad, con dificultades para su 7


prevencin y control. Por otra parte, factores como la pandemia del sndrome de inmunodeficiencia adquirida, el incremento en el uso de medicamentos inmunosupresores y algunos de los avances logrados en el diagnstico y recursos teraputicos, han facilitado la aparicin de parasitosis nuevas o la reactivacin de otras que antes se consideraban de ocurrencia relativamente rara, como cryptosporidiosis, toxoplasmosis y strongyloidosis, entre otras. Lo anterior ha determinado que muchos de los padecimientos originados por parsitos sean motivo de consulta diaria en la medicina general, constituyndose en desafos desde el punto de vista de diagnstico, tratamiento y de medidas preventivas en el paciente individual, en el grupo familiar y en el mbito de la Salud Pblica. El Qumico Farmacutico Bilogo como parte del equipo de profesionales que proporcionan servicios para la salud, esta involucrado en el diagnstico de laboratorio de las enfermedades parasitarias. Por lo tanto durante su formacin profesional debe desarrollar las competencias bsicas conceptuales, procedimientos mentales y actitudinales que le permitan discernir sobre los diversos parsitos, las enfermedades que causan, las metodologas analticas, as como la aplicacin de criterios para interpretar los resultados obtenidos bajo una actitud de compromiso, responsabilidad y tica. Para estar en mejores posibilidades de participar en la solucin de los problemas respectivos. La Facultad de Qumica Farmacutica Biolgica regin Xalapa, incluye en su plan de estudios en el rea disciplinar la Parasitologa, siendo una experiencia educativa que los estudiantes deben cursar en el laboratorio y que le permitir desarrollar actividades de vinculacin con comunidades que presenten problemas de parasitosis, contempla la realizacin de prcticas en el laboratorio que requieren de un manual que contenga las diferentes tcnicas que aplicara cuando realice el anlisis parasitolgico. De acuerdo a la concepcin de los proyectos pedaggicos el desarrollo de prcticas de laboratorio como mtodos de aprendizaje en escenarios educativos no es una idea novedosa; sin embargo, con el propsito de que los estudiantes adquieran, amplen y verifiquen sus conocimientos es necesario contar con un conjunto ordenado de tcnicas y procedimientos que les permita realizar prcticas experimentales o de campo, sobre una o varias unidades del programa de una asignatura. Por lo antes expuesto, este manual presenta una serie de mtodos de laboratorio no solo para el Qumico Farmacutico Bilogo sino para todos aquellos interesados o involucrados en el anlisis parasitolgico; la mayora de los mtodos presentados es el resultado de una seleccin cuidadosa atendiendo los contenidos temticos del programa de estudios de esta experiencia educativa y de las propias necesidades de nuestra facultad. El manual de prcticas esta conformado por siete captulos; en el primero se presentan las generalidades sobre la parasitologa, en el segundo una introduccin al laboratorio, en el capitulo tres se abordan los mtodos parasitolgicos, en el cuatro, cinco, seis y siete las tcnicas coproparasitoscopicas cualitativas, cuantitativas, especiales y el diagnstico de parsitos tisulares y de cavidades respectivamente, en este mismo capitulo se incluye una prctica que permite diferenciar el examen coprolgico del coproparasitoscopico a travs del examen qumico de las heces, para finalizar un apartado sobre el trabajo de vinculacin entre los estudiantes que cursan 8


esta experiencia educativa con una comunidad rural o suburbana que presenten problemas de parasitosis intestinal, con la finalidad de conocer la incidencia de esta parasitosis en una poblacin escolar, as como promover la atencin de los servicios de salud para su tratamiento.

OBJETIVOSGeneral Realizar un manual para el laboratorio de la experiencia educativa de Parasitologa. Especficos 1. Compilar una serie de tcnicas vigente para identificar e investigar la presencia de parsitos que causan infecciones en el hombre. 2. Aplicar los fundamentos tericos de las diferentes tcnicas especializadas en el diagnstico de los parsitos. 3. Ejecutar las diferentes tcnicas utilizadas en el diagnstico parasitario coproparasitoscopico y coprologico. 4. Manejar normas bsicas de bioseguridad y control de calidad en el laboratorio de parasitologa 5. Interpretar correctamente los resultados obtenidos en las diferentes tcnicas de diagnstico parasitario 6. Aplicar control de calidad en el trabajo de laboratorio de Parasitologa. 7. Contribuir en el mejoramiento del proceso enseanza aprendizaje de los estudiantes de la Facultad de Qumica Farmacutica Biolgica a travs del desarrollo de un manual de prcticas para el laboratorio de parasitologa.

REGLAMENTO DE LABORATORIO1. El maestro y los estudiantes de esta experiencia educativa (EE) debern llegar con puntualidad a la hora indicada para la sesin de laboratorio. 2. Los estudiantes que cursan esta experiencia educativa, estn en la obligacin de realizar todas las prcticas establecidas en el programa de estudio; por representar una complementacin de los conocimientos tericos adquiridos en esta EE. 3. La inasistencia a una prctica de laboratorio debe ser justificada en el plazo mximo de 72 horas posteriores a la misma; presentando al maestro el documento correspondiente 4. Es imprescindible y obligatorio el uso de la bata, para todo trabajo en el laboratorio. 5. El uso de equipo de seguridad especificado para la realizacin de prcticas en este laboratorio ser obligatorio para estudiantes y maestros. 6. Queda estrictamente prohibido comer, beber y fumar dentro del laboratorio. 7. Los estudiantes debern presentarse a la prctica con todos los materiales necesarios para su realizacin. 8. Con respecto a los equipos, instrumentos, reactivos y materiales que se requieran para la prctica, los estudiantes deben solicitarlos al laboratorio a travs de un vale y con su credencial o arancel de inscripcin que los identifica como alumnos de esta Facultad. 9


9. Antes de realizar una prctica debe leerse detenidamente para adquirir una idea clara de su objetivo, fundamento y tcnica. 10. El uso de los equipos e instrumentos, que se utilicen durante la prctica debe reportarse en la bitcora de control y registro correspondiente. 11. Todos los equipos especialmente los aparatos delicados como microscopios, deben manejarse con cuidado evitando los golpes o el forzar sus mecanismos. 12. Todos los objetos personales debern colocarse fuera del rea de trabajo para evitar accidentes y contaminaciones. 13. Todos los estudiantes debern mantener un comportamiento acorde con su calidad de estudiante universitario, que no ponga en riesgo la integridad fsica de los ah presentes, la seguridad de las actividades que se realizan y el buen estado de materiales, reactivos, equipo e instrumentos del laboratorio. 14. Cualquier conducta inapropiada de los estudiantes dentro del laboratorio ser sancionada de acuerdo al estatuto de los alumnos vigente. 15. Antes de iniciar la prctica los estudiantes deben sanitizar su mesa de trabajo utilizando un desinfectante. 16. En caso de algn percance o accidente se debe comunicar inmediatamente al maestro. 17. No devolver nunca a los frascos de origen los sobrantes de los productos utilizados, a fin de evitar contaminaciones, asegurarse de que queden bien cerrados. 18. Todo material contaminado despus de inactivarse se depositara en los recipientes biolgicos infecciosos segn la Norma Oficial Mexicana. (NOM 087) 19. Es importante destacar que es de obligado cumplimiento las normas de bioseguridad que estn contempladas en el manual de seguridad de los laboratorios del rea de microbiologa. 20. Durante y al finalizar la prctica los estudiantes deben mantener y dejar limpia sus reas de trabajo. 21. Al concluir la prctica los estudiantes deben devolver a este laboratorio los materiales, equipo, reactivos utilizados. 22. Al finalizar el curso y como requisito para acreditar esta experiencia educativa los estudiantes deben desocupar incubadores, refrigeradores, estufas y gavetas que contengan material contaminado, as como no tener adeudos de material en este laboratorio.

MEDIDAS DE BIOSEGURIDAD1. Los riesgos en el laboratorio de parasitologa, son escasos si se respetan las consignas de seguridad. Atendiendo la NOM 166 y NOM 087, tambin son intiles los consejos si no existe voluntad de cumplir con ciertas normas de conducta. 2. Tambin es importante considerar que el material biolgico que se maneja es potencialmente infectante, por eso se recomienda someter el material a la accin germicida enrgica. 3. Las precauciones que hay que tomar para evitar cualquier clase de contaminacin corresponden ms bien a una disciplina general de trabajo, que a unas reglas precisas. a) Es imprescindible que cuando se proceda al manejo de muestras de copro, el laboratorio este ventilado debido al mal olor que despiden. b) Evitar la entrada en el laboratorio de personas ajenas a l cuando se est trabajando. 1 0


c) Evitar entradas y salidas en el laboratorio con una frecuencia innecesaria. Mientras se realiza el anlisis, sobre todo en las fases ms delicadas del mismo. d) En cuanto a peligro de contaminacin se refiere, se evitara tocar con las manos la ropa, cara, cabello y objetos personales. e) Se evitara estrechar la mano a posibles visitas, abrir grifos, abrir y cerrar puertas, tocar el telfono y todo aquello que exija contacto manual ajeno al anlisis cuando se estn ejecutando fases delicadas de ste. f) El lavado de manos ser cuidadoso y frecuente. g) El secado se har con toallas desechables. h) Esta prohibido el uso de guantes, despus de procesar la muestra, sobre todo cuando se maneje el microscopio. i) Es indispensable el uso de mantel individual de papel para colocar las muestras ya preparadas y que sern revisadas en el microscopio. j) Cada estudiante debe llevar al laboratorio un recipiente de metal para depositar temporalmente los materiales de desecho que emplearon durante el procesamiento de la muestra (aplicadores de madera, algodn, papel desechable etc.,) k) Despus de la centrifugacin de un producto contaminado, la decantacin del centrifugado se har sobre un lquido antisptico y nunca sobre un fregadero. l) La rotura de placas o tubos que contengan parsitos, requiere que se proceda inmediatamente a recoger de forma cuidadosa, adecuadamente protegidos, y a depositar los restos en cubetas con antispticos, lavando a continuacin el lugar del accidente con desinfectante. m) Las muestras de copro se desechan colocando en el recipiente cal con la finalidad de inactivar este RPBI, despus se deposita en bolsa negra de acuerdo a la NOM 087 n) Terminado el trabajo, hay que procurar que no quede en la mesa ningn material ms que el estrictamente necesario para facilitar la limpieza y desinfeccin diaria. o) Evita llevar a la boca lapiceros, rotuladores, etiquetas etc., sobre todo si han estado en contacto con la mesa de trabajo. p) La bata se utilizara exclusivamente para el trabajo en el laboratorio. Nunca se llevara puesta para salir a la calle. q) Finalmente, es necesario resaltar que el trabajo en el rea de Parasitologa es eminentemente vocacional. r) El mal hacer de una sola persona puede conducir a resultados y consecuencias desfavorables.

RECOMENDACIONES1. Al tratar con el personal docente, tcnico, manual y compaeros de seccin, lo hars con respeto. 2. Demuestra en todo momento tu disciplina, orden y tolerancia. 3. Procura presentarte bien aseado y con ropa formal. 1 1


4. 5. 6. 7.

No distraigas a tus compaeros y evita las bromas que terminen en accidentes. Por tu propio beneficio cuida el material que uses en cada prctica. Cada grupo de prcticas se responsabilizar de su zona de trabajo y de su material. Concentra toda tu atencin en las indicaciones dadas por el maestro y en las actividades que desarrolles. 8. Respeta y cumple con las indicaciones dadas por los compaeros que desempeen alguna comisin asignada por el maestro para cada prctica. 9. Suspende tus actividades cuando se te indique, a fin de estar atento a los comentarios del maestro. 10. No olvides tus pertenencias al concluir la sesin de laboratorio. 11. Recuerda traer los materiales que se te soliciten para la siguiente prctica. 12. Que tu actitud en el laboratorio siempre sea optimista y de buen humor. 13. Si tienes algn problema, antes de entrar al laboratorio, trata de dejarlo afuera.

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CAPITULO 1GENERALIDADES

La Parasitologa es una disciplina que estudia a organismos eucariontes que viven a expensas de un husped, al que le pueden producir dao. Comprende agentes biolgicos de diferentes formas y tamao, los parsitos se dividen en tres grandes grupos: protozoos, helmintos y artrpodos. La importancia de la disciplina radica en la gran prevalencia de las infecciones en humanos y animales, en la cantidad y heterogeneidad de los agentes biolgicos, en la diversidad de los ciclos biolgicos, y en la distribucin geogrfica de stos agentes en el mundo.7 La presencia de una infeccin parasitaria se asocia en forma estrecha a factores geogrficos y climticos, as como a factores antropolgicos y sociales de las poblaciones humanas. Actualmente la importancia de las parasitosis ha aumentado con la presencia de inmunodeprimidos, y con el aumento de poblaciones migrantes y de viajeros. El diagnstico de las parasitosis es uno de los complementos necesarios para llevar a cabo en forma adecuada el tratamiento de las mismas. Algunas de las tcnicas utilizadas para tal objeto son aquellas en las que identifican los parsitos o sus fases en los productos biolgicos requeridos y que se conocen como diagnstico parasitolgico. No existe un solo mtodo adecuado para encontrar todos los parsitos intestinales, hepticos, pulmonares o sanguneos del humano, en este caso. De manera que se hace necesario contar con una variedad mnima de alternativas, de fcil ejecucin, sencilla, econmica, que utilizan materiales accesibles, probadas en varios laboratorios de diferentes pases. Los mtodos 1 3


demostrados aqu constan de un nmero variable de vistas o diapositivas, dependiendo de su facilidad o complejidad de ejecucin. Aunque cada profesional tiene su preferencia de mtodo o forma de ejecutarlo, se ha tratado de evitar desviaciones de las descripciones originales. Otros exmenes en los que se utiliza la materia fecal para poder efectuar los se describen a continuacin, aunque por el mtodo usado en cada caso no quedan dentro de los coproparasitoscopicos propiamente dichos, pues el diagnostico de las parasitosis se hace indirectamente con estas tcnicas, como la utilizacin del termo e higrotropismo para hacer una concentracin, el cultivo en papel filtro y las diversas tcnicas de tincin de frotis de heces. Los parsitos intestinales del hombre son protozoarios y/o helmintos, llamados comnmente gusanos intestinales .Estos helmintos o gusanos pueden ser cilndricos (nemtodos), anillados o segmentados (cestodos). Para observar los trofozotos, quistes u ooquistes de los protozoarios, as como las larvas y huevos de helmintos, se debe usar un microscopio; en cambio, la mayor parte de los gusanos o helmintos adultos son macroscpicos y su morfologa puede estudiarse directamente, con ayuda de un estereoscopio o una lupa. Los protozoarios intestinales eliminan con las heces sus formas evolutivas (trofozoto, quiste, ooquiste y espora), segn la especie involucrada. Los helmintos intestinales adultos (progltidos de Taenia sp., Enterobius vermicularis y Ascaris lumbricoides) pueden salir al exterior espontneamente o despus del tratamiento. Los gusanos intestinales se eliminan con las heces.

Los mtodos de diagnstico de los parsitos intestinales pueden ser: directo o por concentracin de los elementos parasitarios que se eliminan en las heces. En las heces podemos encontrar formas adultas y microscpicas (huevos, larvas, trofozoitos, quistes, ooquistes y esporas) de los parsitos intestinales; por ello, es importante obtener una buena muestra fecal, as como la conservacin ptima del espcimen.3 Protozoos De los protozoarios simbiontes con el hombre, las amiba, los ciliados y algunos flagelados se localizan, segn la especie, en la superficie de la mucosa del tubo digestivo, o en la de la vagina y uretra. Estos protozoarios requieren de un solo tipo de husped, se transmiten de persona a persona a travs del medio o por contacto directo. No presentan modificaciones morfolgicas significativas en su estadio vegetativo (trofozoito) todos ellos forman quistes para su transmisin excepto el flagelado trichomona que es el nico que parasita la vagina y uretra y se transmite por contacto sexual directo. Otros protozoarios parasitan los rganos y tejidos profundos del hombre incluyendo la sangre, desarrollan ciclos vitales complejos, generalmente en dos hospedadores de los que el parasito es estrictamente dependiente. 1 4


La trasmisin entre los hospedadores se hace a travs de artrpodos que son a la vez hospedador y vector, o a travs del medio libre, en este ltimo caso tambin se desarrollan formas qusticas de resistencia. Helmintos Los helmintos o gusanos son animales invertebrados de cuerpo alargado con simetra bilateral y rganos definidos, sin extremidades, con reproduccin sexuada durante el estadio adulto y con un tamao variable que oscila entre dcimas de milmetro a varios metros. Evolutivamente se sitan en los niveles inferiores del reino animal. Los helmintos pueden dividirse en dos grupos, los platelmintos o helmintos planos y los nematelmintos o helmintos redondos, de aparicin posterior y mayor complejidad. Se reproducen sexualmente formando huevos frtiles, que dan lugar a larvas de diversa morfologa y tamao variable, algunas de las cuales pueden presentar varios estadios muy diferenciados entre s en uno o diversos huspedes intermediarios hasta transformarse en adultos. Los helmintos pueden ser de vida libre o parasitaria, algunos se hallan extraordinariamente bien adaptados a este tipo de vida en uno o ms huspedes. Presentan grandes diferencias morfolgicas y fisiolgicas los distintos grupos parsitos entre s y con sus semejantes de vida libre, como consecuencia de la adaptacin a sus huspedes.

La localizacin de los parsitos humanos puede ser en la luz del tubo digestivo, las formas adultas, o en los rganos profundos, invadidos ya sea por las formas adultas o las larvarias. Las helmintosis son poco frecuentes en zonas desarrolladas y frecuentes en las zonas agrarias de los pases subdesarrollados debido a la falta de higiene para prevenir su transmisin y a la existencia de los huspedes intermediarios. En esas zonas algunos helmintos son muy importantes por la gran frecuencia y gravedad de la patologa que causan, en general procesos crnicos debilitantes. El diagnstico etiolgico de las enfermedades causadas por helmintos se hace por observacin macroscpica de las formas adultas o microscpicas de los huevos o larvas, cuya morfologa permite en general su identificacin a nivel de especie.5 Se recomienda tener a mano libros de texto o manuales de consulta que permitan aclarar dudas o asegurar la ejecucin y utilidad de los mtodos en el diagnstico de laboratorio.

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CAPITULO 21 6


El LABORATORIO DE PARASITOLOGIA

INTRODUCCIN El Laboratorio de Parasitologa es un lugar que cuenta con las reas de diagnstico parasitolgico coprolgico convencional, de muestras biolgicas, que llegan para descartar enfermedades parasitarias de una poblacin determinada. Para ello se cuenta con personal capacitado, equipamiento e infraestructura moderna que nos permiten hacer un trabajo de calidad. El adecuado manejo de las muestras biolgicas que se utilizan en el laboratorio resulta de especial inters, pues ya sea materia fecal (utilizada ms comnmente) y/o muestra sangunea se consideran potencialmente infecciosas, por lo que es importante que el alumno conozca el reglamento, organizacin y funcionamiento del laboratorio, ya que del comportamiento y cuidado con que se desempee dentro de este, dependern la precisin y exactitud de los resultados que obtenga.3 Condiciones Infraestructura correspondiente a un laboratorio Parasitologa. 1 7


Personal especializado Equipado con superficies e instalaciones adecuadas Normas de seguridad (Bioseguridad) Controles de calidad Normas de bioseguridad 80% infecciones en tareas rutinarias: Inoculaciones Manejo animales Manipulacin muestras 20% accidentes: Mal manejo de agujas, jeringas etc Derrames accidentales Rotura viales / frascos Pipeteado (aspirado por boca) Control de calidad Necesario en todo laboratorio Muy importante en laboratorios con funcin docente (normalizacin de tcnicas)

Control de calidad externo Participacin de diferentes laboratorios (comparacin resultados) Control de calidad interno Debe contemplar; Manual procedimientos o protocolos que incluirn detalles sobre: Toma, transporte, conservacin y manipulacin de las muestras clnicas Preparacin de diferentes soluciones y reactivos Metodologa empleada en cada caso

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El manual de protocolos estar al alcance de los profesionales del laboratorio, de los estudiantes y de los comits de evaluacin del laboratorio Revisiones peridicas de todas las actividades, (recepcin muestra informacin resultados) Calibracin y chequeo peridico de los equipos e instrumentos (baos, neveras, analizadores) Etiquetado o rotulado de los reactivos y soluciones, con detalles de su preparacin. Disponibilidad de material didctico (diapositivas, lminas fijas, atlas, CD. etc.) Coleccin de especmenes, manuales En el caso de pruebas de Serologa, disponibilidad muestras positivas y negativas, internacionales o no, debidamente estandarizadas Mantenimiento adecuado de autoanalizadores Realizacin de los controles que exija cada fabricante Empleo de reactivos comerciales seleccionados, independientes, de ser posible oficiales.9 Control de calidad en el examen de heces Para conseguir resultados precisos y fiables, debe controlarse la calidad de los procedimientos de laboratorio en el diagnostico de las parasitosis. Los controles deben comprender la toma de muestras, la preparacin de los reactivos, la ejecucin de las tcnicas y el examen de las preparaciones finales. Muestra para examen parasitolgico Comprende las siguientes muestras: heces, frotis perianal, bilis o jugo duodenal, esputo, secrecin, biopsia o preparaciones histolgicas, siendo heces, la ms frecuente. Toma de muestras Si las muestras no se recogen y manipulan adecuadamente antes de examinarlas, su valor para un diagnstico exacto ser escaso o nulo, sobre todo en el caso de los protozoos. Los trofozotos amebianos comienzan a degenerar al cabo de 1-2 horas de la defecacin y las alteraciones en el aspecto pueden dar lugar a confusiones en la identificacin. Los trofozotos de flagelados tambin pueden sufrir cambios que dificulten la diferenciacin. Los quistes se deterioran si las muestras fecales quedan sin tratar durante muchas horas o de un da para otro, especialmente a temperaturas elevadas. Aunque los huevos y las larvas de helmintos se ven menos afectaos por la edad de la muestra que los protozoos, pueden sufrir alteraciones que afecten a la identificacin. Por ejemplo, los huevos de anquilostomas pueden transformarse en embriones y nacer las larvas. Incluso los huevos de 1 9 probados por organismos


Ascaris lumbricoides pueden desarrollarse hasta las fases pluricelulares. Adems, es posible que las larvas degeneren en las muestras viejas impidiendo la identificacin de las especies. 9 Para cerciorarse de que se dispone de especimenes adecuados para el examen, debe prestarse atencin a los siguientes puntos. 1. La muestra debe obtenerse antes del uso de medicamentos antiparasitarios, o hasta 2 a 5 das despus de su administracin. 2. Utilcense recipientes limpios y secos para la recogida de las heces (La suciedad interfiere con el examen y puede introducir microorganismos de desarrollo libre procedentes del suelo que plantearan problemas a la hora de identificar las especies. La orina y el agua destruyen los trofozotos que pudieran existir.) 3. Procurar que la muestra llegue al laboratorio tan fresca como sea posible para evitar que se deterioren los protozoos y que se altere la morfologa de los protozoos y los helmintos. Antese en la muestra el nombre del paciente, la fecha y la hora de la defecacin. 4. Slo deben aceptarse muestras frescas para el examen. Nunca debe intentarse examinar especimenes antiguos o contaminados con suciedad agua u orina. Es preferible pedir al paciente que traiga una muestra reciente. 5. Las heces depositadas en el suelo no son las recomendadas para el diagnstico, debido a que pueden contaminarse con formas biolgicas, como por ejemplo: larvas similares a los enteroparsitos del hombre, larvas de nemtodes, huevos de caros o insectos, etc. 6. Si las muestras no pueden examinarse en cuanto llegan, colquese en el refrigerador (4-5C) o en la zona ms fresca y sombreada del laboratorio. Nunca dejarse al sol. 7. Si el paciente no es regular en la evacuacin de sus deposiciones y ha evacuado en la noche anterior al examen, se recomienda guardar la muestra en un refrigerador o en un lugar fresco no expuesto a la luz solar, para que no se alteren las formas parasitarias. Cuando la muestra va a tardar en llegar al laboratorio varias horas o das, se recomienda adicionarle lquido fijador y/o conservador (PAF, PVA, formalina 10%, SAF, acetato de sodio, etc.). 8. Examine en cuanto lleguen al laboratorio los excrementos diarreicos y los que contengan sangre y mucosidades.9 Rechazo de una muestra No indicar el tipo de muestra o procedencia. No indicar el examen requerido. Demora en el envo al laboratorio.

Muestra sin rotular o mal rotulada. Muestra que presente evidencia de haber sido derramada. Recipiente o contenedor inapropiado. Muestra con contaminacin. Muestra escasa o seca en el hisopo o contenedor. 2 0


Presencia de una sola muestra, a pesar de la presencia de varias rdenes. Volumen o cantidad inadecuada. En casos de rechazar una muestra, el personal de laboratorio debe explicar al solicitante las observaciones y motivos en la ficha de solicitud de diagnstico. Si no fuera posible la obtencin de otra muestra, revisar nuevamente los exmenes realizados.9 Tabla 1. Envo de muestras para parasitologa Muestras Endoparsitos Materia fecal fresca Hemoparsitos Frotis finos y gruesos de sangre perifrica. Improntas de rganos (bazo, rin, hgado, cerebro) Remitir en Recipientes de boca ancha Bolsa de Nylon sin aire Secos, envueltos en papel absorbente Forma de envo Refrigerado

Temperatura Ambiente

Protozoarios (Trichomonas) Raspados prepuciales

Medio de transporte para Trichomonas. Sol. De Sorensen sin formol Porta objetos

Temperatura Ambiente

Ectoparsitos Raspados de piel

Temperatura ambiente

Tabla 2. Requisito para la remisin de muestras para examen parasitolgico

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Preparacin de reactivos Los reactivos han de prepararse exactamente de acuerdo con la formula y las instrucciones. No deben modificarse los ingredientes, ni su cantidad, ni el mtodo de preparacin en modo alguno. Almacnense los reactivos como se recomienda en el procedimiento de preparacin. Algunos reactivos se conservan indefinidamente si se mantienen bien tapados y fuera de la luz del sol directa. Entre estos reactivos se encuentran las soluciones de formalina, la solucin salina isotnica, los fijadores y las soluciones alcohlicas (a menos que se produzca evaporacin). Otros reactivos duran muy poco tiempo y despus quedan inutilizados. La vida de cada solucin viene indicada en las instrucciones de preparacin.9 1. Rotlense todos los reactivos con su fecha de preparacin 2. Rellnese y consrvese una ficha para cada solucin. 3. Examnese una vez a la semana y trense las soluciones pasadas de fecha.

Ejecucin de las tcnicas

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No existe ningn procedimiento de examen de especimenes fecales que sea eficaz al 100%; los procedimientos no siempre recuperan todas las especies presentes y, si una especie en particular esta representada por unos pocos ejemplares, cabe la posibilidad de que la tcnica empleada no consiga ponerlo de manifiesto en una sola muestra. Dado que las tcnicas no son perfectas, deben aplicarse con todo el cuidado que sea posible para conseguir un resultado ptimo. Asimismo, es preciso velar por que se utilice la tcnica mas apropiada para el material que se esta examinando.9 Resultados Los resultados indicarn el(los) mtodo(s) empleado(s), el gnero o la especie del parsito observado y su estadio evolutivo. La densidad parasitaria puede expresarse como el nmero de formas parasitarias observadas por campo de microscopio con objetivo de 10X y 40X. Todo formato de respuesta de resultados debe contener los datos de identificacin: nombre, edad, sexo, fecha, las caractersticas organolpticas de las heces (consistencia, color, presencia de sangre y moco), datos de la observacin microscpica (presencia de leucocitos, eritrocitos, levaduras, fibras musculares no digeridas y parnquima de clulas vegetales en cantidad considerable), ya que esta informacin facilitar un mejor diagnstico clnico. Los resultados obtenidos deben registrarse en un libro de registros del laboratorio. En el caso de los laboratorios de la Red Nacional de Laboratorios de Salud Pblica, siguiendo las normas de control de calidad, el 10% de las muestras deben conservarse en el fijador, siendo mensual, trimestral y anualmente remitidas al laboratorio inmediato en jerarqua para establecer la concordancia de los resultados. Para la vigilancia de las infecciones parasitarias establecida por el Instituto Nacional de Salud llenar las fichas correspondientes. 9 Resultado positivo El informe debe contener el nombre del paciente, los agentes observados y su estadio o forma evolutiva: quistes (q), ooquistes (o), trofozotos (t), esporas (e), huevos (h) o larvas (l).9 La intensidad parasitaria puede expresarse cualitativa o semicuantitativamente: Cualitativamente: Escaso, regular o buena cantidad, segn sea el grado de facilidad o dificultad para ubicarlos. Semicuantitativamente: Contando las formas parasitarias: Si se observan 1 2 elementos en toda la lmina, escribir el nombre del agente y su estadio evolutivo (+) Si se observan de 2 a 5 elementos por campo microscpico 10x 40x. (++) Si se observan de 6 a 10 elementos por campo microscpico 10x 40x. (+++) Si se observan >10 elementos por campo microscpico 10x 40x. 2 3


Resultado negativo Informar que no se observaron quistes, trofozotos, ni huevos de parsitos. El diagnstico de una parasitosis no depende tan solo de la tcnica empleada, sino tambin de las precauciones que se observen al colectar la muestra, las cuales, deben ser colectadas en recipientes limpios y secos, de boca ancha, sin restos de detergente, o en un recipiente para muestras fecales (copropack), evitando se contamine con la orina, tierra u otra sustancia extraa. El recipiente debe ser etiquetado, anotando el nombre del paciente, la hora en que se colecto la fecha, el nmero de la muestra (si se est haciendo una serie de exmenes) e -indicar el tipo de examen que se desea, dado que la muestra puede ser empleada para varios propsitos. No se recomienda el uso de purgantes o supositorios. En nios con diarrea o disentera, es conveniente tomar la muestra con la cucharilla rectal Las heces diarreicas deben examinarse de inmediato, las dems antes de 34 hrs. refrigerarse para su conservacin9 Errores El que los reactivos no estn en condiciones ptimas (Frascos con fecha de elaboracin). Confusin de artefactos con formas parasitarias. Confusin de genero yo especie del parsito observado9

PRACTICA No. 12 4

MANUAL DE PRCTICAS DE PARASITOLOGIA TIEMPO DE PRCTICA: 2 H

Organizacin y Funcionamiento del Laboratorio de ParasitologaIntroduccin Los anlisis clnicos son una parte esencial para el diagnstico, tratamiento, prevencin e investigacin de las enfermedades, y por tanto de las ciencias de la salud. Los laboratorios de anlisis clnicos desarrollan funciones especficas como: la toma de muestras, su identificacin, transporte, almacenamiento, proceso analtico y el informe de resultados. Tambin debe incluir asesora preanaltica y consultora postanaltica, de tal forma que se asegure que la informacin suministrada por el laboratorio sea clnicamente til. Los laboratorios de Anlisis Clnicos juegan un papel esencial en el diagnstico, tratamiento y seguimiento de enfermedades, y por ello los mtodos aplicados en los mismos deben ser exactos, precisos, especficos y comparables con los de otros laboratorios. Se debe seguir una poltica de garanta de la calidad en todas las actividades tcnicas, metodolgicas y de gestin. Esto supone asegurar la calidad de cada una de las etapas del procedimiento analtico, desde la preparacin del paciente para la toma de muestra hasta la realizacin del informe de resultados, y adems asegurar que las actividades de Control de Calidad se llevan a cabo adecuada y eficazmente. As pues, se hace cada vez ms necesario, cambiar el sistema de gestin y se ha de introducir el concepto de Gestin de Calidad para que se coordinen adecuadamente todos los recursos del laboratorio. An es ms reciente el impulso que se ha dado a los laboratorios con la mejora contina de la calidad, cuyo propsito es alcanzar la idoneidad del resultado analtico a travs de una revisin contina de los procedimientos; la correccin de los problemas cuando se detectan (acciones correctoras) e incluso la prevencin de dichos problemas (acciones preventivas); as como un estudio de la eficacia de la informacin generada. La apuesta por la calidad implica una organizacin estructurada, con una secuencia cclica de decisiones y acciones basadas en una Poltica de Calidad. Los Sistemas de Calidad se implantan utilizando normas de calidad y tienen su pilar en la documentacin. En el laboratorio clnico, las actividades a implantar, documentar y realizar pueden clasificarse en dos bloques: Actividades tcnicas que incluyen tres fases: Fase preanaltica, analtica y postanaltica y Actividades de gestin.17, 18,19

Fundamento 2 5


Las buenas prcticas en el laboratorio y la aplicacin de la normatividad vigente, juegan un papel indispensable en la obtencin de resultados confiables y fidedignos que garantizan y dan seguridad al paciente. Objetivo Conocer y familiarizarse con el laboratorio de parasitologa, el equipo y materiales que se emplean para el diagnstico de las enfermedades parasitarias. Material El necesario para realizar la metodologa convencional para el diagnstico parasitolgico. Reglamentos, normatividad, manuales de seguridad, control de calidad, diapositivas etc. Equipo Refrigeradores Centrifugas Microscopios Tcnica 1. Identificacin de los materiales y equipos que encuentran en este laboratorio, as como el uso y los cuidados que debe proporcionarle a cada uno de ellos 2. Conocimiento del reglamento interno de laboratorio, el cual se aplicar para marcar la pauta de comportamiento dentro y fuera del mismo. 3. Identificacin de la Normatividad que rige a este laboratorio NOM 166, NOM 087. 4. Aplicacin de la Norma 087 sobre el manejo de los R. P. B. I. (Residuos Peligroso Biolgico Infecciosos). 5. Identificacin de los controles de calidad para este laboratorio. Observaciones Se realizara un cuadro sinptico, mapa conceptual o mapa mental que contenga la informacin generada durante esta prctica-terica, la cual es fundamental para el curso de laboratorio de esta experiencia educativa.

Resultados 2 6


Se realizar un listado de los materiales, reactivos, equipos con los que cuenta el laboratorio, as como una descripcin detallada de los recipientes que se emplearan para desechar los RPBI, los controles de calidad que se llevaran a cabo en cada prctica. Bitcora 1. 2. 3. 4. 5. Que me pareci el laboratorio? Cul es la normatividad que rige a este laboratorio? A que me comprometo en este laboratorio? Mis propuestas de mejoramiento al laboratorio serian? Cmo me sent en el laboratorio?

Bibliografa 1. Craig - Faust Parasitologa Clnica Edit. Salvat Barcelona, 1984 2. Brown, H. W. Parasitologa Clnica Edit. Interamericana. Mxico, 1985 3. Buenas Prcticas de Higiene en el Manejo de los RPBI,NOM-087-SEMARNAT-SSA12002 4. Organizacin y funcionamiento de los Laboratorios Clnicos, NOM-166-SSA1-1997 5. Programa de Aseguramiento de la Calidad PACAL.

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CAPITULO 3 MTODOS PARASITOLGICOS

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INTRODUCCINLos exmenes parasitolgicos se pueden clasificar segn diversos parmetros y si se toma en cuenta el tipo y procedencia del producto biolgico en: Coproparasitoscopico (CPS) mediante los que se diagnostican las parasitosis intestinales y cuyo producto biolgico es la materia fecal. Los de cavidades, en los que los productos biolgicos son exudados. Los tisulares, en los cuales los productos biolgicos pueden ser una biopsia, el raspado de una ulcera, sangre, secreciones de lesiones etc.3 Examenes coproparasitoscopicos (CPS) El conjunto de tcnicas para llevar a cabo estos exmenes se conocen desde el siglo pasado, no obstante siguen siendo de las herramientas ms adecuadas para diagnosticar las parasitosis del aparato digestivo. En general, son todas aquellas tcnicas en las que se utiliza la materia fecal para alcanzar su objetivo pueden clasificar segn los diversos aspectos: Por el momento de su realizacin. Pueden ser inmediatos, como los coproparasitoscopicos (CPS) en fresco. Mediatos son aquellos en los que se utilizan muestras con una solucin conservadora y los que se hacen con la muestra tal y como la entregan los pacientes. Por el tipo de proceso de la muestra. Pueden ser por examen directo macroscpico o microscpico. los de concentracin son aquellos en los que se aplica flotacin, sedimentacin y termotropismo. Otros ms son los de dilucin, por cultivo, por aclaramiento y por tincin Por su expresin numrica pueden ser cualitativos y cuantitativos, y por la aplicacin de colorantes, se clasifican en los que se utiliza una preparacin hmeda y en los que la tincin es ms elaborada, pues requieren usar agentes fijadores y deshidratantes de la muestra. Estas tcnicas son las ideales para material museogrfico y para confirmar diagnsticos dudosos.3 Los mtodos coproparasitoscopicos se dividen en: 1) Cualitativos: Son aquellos que solo nos informan si hay o no formas parasitarias en el producto estudiado. 2) Cuantitativos: Nos dan a conocer numricamente cuantas formas parasitarias estn presentes, las cuales se reportan por gramo o mililitro de heces, segn la tcnica que se utilice.

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3) Especiales: Son mtodos que consideran procedimientos que simplifican y favorecen la recoleccin de formas parasitarias, de sitios poco usuales, como por ejemplo la regin perianal.

El examen coproparasitoscpico comprende: A) Examen macroscpico o fsico B) Examen microscpico A) Examen macroscpico o fisico Es muy importante determinar la consistencia de la materia fecal (formada, semiformada, suave o lquida), ya que puede orientar hacia el tipo de organismos que pudiera estar presentes; los trofozotos se encuentran habitualmente en muestras blandas o lquidas, rara vez en heces formadas, lo contrario para las formas qusticas. Fundamento Permite observar directamente las caractersticas morfolgicas de los parsitos adultos, enteros o fraccionados, as como los cambios en las caractersticas organolpticas de las heces eliminadas, (Color, Presencia de sangre y/o moco, Consistencia, etc.). Observaciones Determinar las caractersticas organolpticas de las heces, tiles para el diagnstico (consistencia, color, presencia de moco, sangre, alimento sin digerir), as como la presencia de gusanos cilndricos, anillados o aplanados (enteros o parte de ellos). Cantidad y frecuencia: La cantidad debe de ser de 100 a 200 gr. y la frecuencia de cada 24hrs. Forma y consistencia: La forma debe de ser pastosa y de olor caracterstico o ftido y la consistencia blanda, liquida y slida. Color: El color normal es amarillo claro pero puede mostrarse en caf, verde, amarillo obscuro. Olor : Este se presenta de dos formas caracterstico (Suie generis) o ftido. Moco : La presencia de moco nos indica gastritis, ulcera o amibiasis. Sangre : La sangre nos indica hemorragia intestinal por ulceras perforadas intoxicacin con medicamentos o cidos, hemorroides y en ocasiones amibiasis. 3 0


Resultado En caso que la muestra no sea normal, es decir, contenga informacin til para el diagnstico (ejemplo: presencia de glbulos rojos, fibras musculares no digeridas, mucus, etc.), se debe adicionar al informe del examen parasitolgico las caractersticas macroscpicas de las heces. Color. El color normal del excremento es marrn, aunque vara segn la dieta del individuo o la administracin de medicamentos. Consistencia. Las heces pueden presentar tres consistencias bsicas: Pastosa o heces formadas Semidiarreica o heces liquidas Diarreicas o heces semilquidas o lquidas con presencia de moco y/o sangre Presencia de objetos o elementos macroscpicos. Pueden estar presentes en la matria fecal diversos elementos, tales como: sangre, moco, restos de tejido, clulas epiteliales, alimentos no digeridos, etc. Podemos observar adultos de helmintos. B) Examen microscpico Fundamento Buscar, principalmente en muestras frescas, la presencia de formas evolutivas mviles de parsitos de tamao microscpico (trofozotos, quistes de protozoos: Entamoeba histolytica, Giardia lamblia, Balantidium coli, etc.; as como larvas o huevos de helmintos: Strongyloides stercoralis, Ancylostoma duodenale, Necator americanus, Trichostrongylus sp., Paragonimus, Fasciola, etc.). Observaciones Parasitos: Estos pueden ser cestodos, nematodos y protozoarios, Dibujar y describir detalladamente las formas evolutivas de los parsitos encontrados en el examen microscpico. Restos alimenticios: Estas son fibras de carne residuos de grasas y restos vegetales. Eritrocitos : Estos se deben a ulceras y hemorragias en los intestinos. Bacterias : Estas por lo regular son Gram negativas y Gram positivas Resultado 3 1


En un formato y en el cuaderno de registro correspondiente, se anotar el nombre de la especie del parsito y su estadio evolutivo, indicando la densidad (nmero de formas parasitarias por campo microscpico) expresado en cruces. Clasificacin de tcnicas coproprarasitoscopicas: Para efectuar este examen existen numerosas y diferentes tcnicas coproparasitoscpicas (CPS) con indicadores precisos segn el tipo, especie y fase del parsito que se pretende detectar, as como, el manejo de la muestra desde que se recibe hasta que se entrega el resultado.3 Tcnicas coproparasitoscpicas cualitativas: Examen Directo De flotacin con solucin de sacarosa Mtodo de la salmuera de Willis De concentracin por centrifugacin flotacin (Faust y Charles) De concentracin por sedimentacin con centrifugacin (Ritchie) Mtodo de sedimentacin simple en copas De concentracin por sedimentacin de muestras preservadas con MIF

Tcnicas coproparasitoscpicas cuantitativas Por dilucin de Stoll De Ferreira Mtodo de frote grueso de Kato y Miura Directo cuantitativo

Tcnicas coproparasitoscpicas especiales Amiba en fresco Mtodo de Graham Examen de contenido duodenal Mtodo de concentracin con el dispositivo de Baerman Tamizado de heces Cultivo de Harada Mori

Exmenes para el diagnstico de parasitosis tisulares y de cavidades Los parsitos tisulares son los que habitan en tejidos y cavitaros viven en cavidades del organismo como: intestino, vagina, boca, vasos sanguneos. Los parsitos tisulares dada sus mltiples ubicaciones y migraciones por los rganos y tejidos del cuerpo, pueden afectar,segn la especie, invadiendo y destruyendo las clulas (citolisis) como en el caso de Trypanosoma cruzi, o por la accin txica y/o enzimtica sobre los tejidos (histolisis.) los exmenes para el diagnstico pueden ser directos e indirectos.28 3 2


CAPITULO 4 METODOS COPROPARASITOSCOPICOS CUALITATIVOS

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INTRODUCCINComo ya se menciono los mtodos cualitativos son aquellos que nos informan si hay o no formas parasitarias en la muestra estudiada. Dentro de estos mtodos se emplean procedimientos que favorecen que los trofozotos, quistes, ooquistes, larvas y huevos, puedan concentrarse por diversas formas, lo cual permite corroborar el hallazgo del mtodo directo y conocer la intensidad del enteroparasitismo. Mtodos de concentracin. Estos procedimientos de concentracin pueden ser; de flotacin, sedimentacin, o por combinacin de ambos mtodos. La eleccin de cada procedimiento depender de las facilidades del laboratorio, el adiestramiento del personal, la procedencia de la muestra (zona geogrfica), el conocimiento de la prevalencia de los parsitos (zona costea, andina y selvtica o rea rural o urbana), y la especie del parsito que se desea investigar. Los mtodos de concentracin, que se realizan cuando los parsitos son escasos o no se encuentran en las preparaciones hmedas. Pueden aplicarse para huevos y larvas de helmintos y quistes de protozoarios. Las tcnicas de concentracin se dividen en mtodos de flotacin y de sedimentacin.1,3 Mtodos de concentracin por sedimentacin Se basa en la gravidez que presentan todas las formas parasitarias para sedimentar espontneamente en un medio menos denso y adecuado como la solucin fisiolgica. Para las tcnicas de sedimentacin las soluciones deben permitir que dichos elementos se renan en el fondo del tubo, en este mtodo es posible la deteccin de quistes, trofozotos de protozoarios, huevos y larvas de helmintos. Mtodos de concentracin por flotacin Para las tcnicas de flotacin las soluciones deben tener densidad mayor que los huevos, larvas quistes, as estos flotaran en la superficie de la solucin.

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PRACTICA No. 2 Examen directo en frescoTIEMPO DE PRCTICA: 2 H

Introduccin El examen CPS directo en fresco se hace en dos variantes. En una de ellas se utiliza la solucin salina isotnica, y se recomienda para todos aquellos casos en que se desea investigar trofozoitos de protozoos como los de, Entamoeba histolytica, o larvas de Strongyloides stercoralis. No obstante se pueden identificar tambin otras formas parasitarias, aunque se requiere cierta experiencia. En la otra se usa solucin yodo-yodurada (lugol).esta es una excelente tcnica para identificar cualquier forma de parsitos intestinales, siempre y cuando se haga una buena homogenizacin de la materia fecal antes de tomar la muestra.3 Objetivo Realizar el mtodo directo en fresco con solucin salina y lugol para observar la presencia de parsitos intestinales. Fundamento Este examen se basa en utilizar cantidades pequeas de materia fecal y analizarla con solucin salina isotnica, la cual tiene la propiedad de considerarse el medio ideal para conservar todo tipo de parsitos y en cualquier fase de su desarrollo. El lugol permite la observacin de sus caractersticas y coloracin de los ncleos. Material biolgico Materia fecal humana Equipo Microscopio compuesto Material Porta objetos Cubre objetos Papel seda 3 5


Aplicadores de madera Toallas de papel Mantel individual de papel Reactivos Solucin salina isotnica Lugol parasitolgico Hipoclorito de sodio Tcnica 1. Colocar en un porta objetos, separadamente una gota de lugol y una de solucin salina. 2. Con el aplicador de madera, tomar una pequea porcin de la muestra (1-4 mg) y mezclar con la solucin salina. 3. Con el mismo aplicador, retirar las fibras y otros fragmentos gruesos. 4. Colocar el cubre objetos. 5. Realizar lo mismo en la gota de lugol 6. Observar al microscopio a 10x y 40x. Observaciones Dibujar los parsitos y los elementos no parasitarios observados durante la realizacin de esta prctica individual o grupal, as como las preparaciones permanentes mostradas por el profesor. Reporte Protozoarios: 1a4 Trofozoitos por campo (+) 5a8 Trofozoitos por campo (++) 9 o ms Trofozoitos por campo (+++) Helmintos: 1 a 5 Huevos en la preparacin (+) 9 a 15 Huevos en la preparacin (++) 15 o ms Huevos en la preparacin (+++) Limites de reporte 1. Estadio del parsito. 2. Gnero del parsito 3. Especie del parsito 1 a 4 Quistes por campo (+) 5 a 8 Quistes por campo (++) 9 o ms Quistes por campo (+++)

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ResultadoUniversidad Veracruzana Facultad de Qumica Farmacutica Biolgica Laboratorio de Parasitologa Nombre del paciente: ________________________________________________________________________ Sexo: ___________________Edad:___________Localidad:_________________________________________ Mtodo empleado: ___________________________________Fecha de recepcin de la muestra__________ Examen macroscpico: Olor: Color: Aspecto: Consistencia: Restos de alimentos y parsitos: Examen microscpico:

Fecha del examen_____________________________Responsable__________________________________

Bitcora 1-Qu me pareci la tcnica? 2- Qu sent al trabajar con este tipo de muestra biolgica? 3- Hubo alguna actividad con la que me haya costado trabajo involucrarme? 4.- Cmo considero que fue m desempeo en esta prctica? Conclusin Bibliografa 1. Rodrguez Prez Elba, Manual Ilustrado de Parasitologa Mdica, Edit. Cuellar, Mxico D.F. 1998 2. De Haro Irene, Salazar Paz Mara, Diagnstico Morfolgico de las Parasitosis, Edit. Mndez Editores Mxico D.F.1995 3. Romero Cabello Ral, Microbiologa y Parasitologa Humana, Bases Etiolgicas de las Enfermedades infecciosas, Edit. Panamericana, Mxico D.F. 1993 4. http://www.cecyt15.ipn.mx/polilibros/parasit/documentos/programa.htm 3 7


PRACTICA No. 3 Identificacin de Balantidium coliTIEMPO DE PRCTICA: 2 H

Introduccin La balantidiosis es una protozoosis cuyas manifestaciones clnicas son muy similares a las que se presentan en la amibiasis, shigelosis y otras, por lo que debe recurrirse a exmenes de laboratorio para demostrar el agente etiolgico: Balantidium coli. Esta protozoosis es quiz la ms fcil de diagnosticar con exmenes de laboratorio que son sencillos, rpidos y baratos. El tipo de examen depender de la consistencia de la materia fecal que es el producto que debe examinarse; si es lquida o pastosa debe recurrirse al examen microscpico directo en fresco. En el que se debern buscar trofozotos grandes (58-120 m) de forma ovoidal, rodeados de cilios. En su citoplasma es posible observar vacuolas alimenticias y contrctiles, as como un macroncleo en forma de rin. Si la materia fecal es formada, deber estudiarse por mtodos de concentracin para buscar quistes. stos presentan forma esfrica o ligeramente ovoidal y miden de 40 a 65 m y se encuentran rodeados por una pared qustica gruesa transparente en el interior de la cual se observa al macroncleo y una hilera de cilios. 1 Objetivo Identificar protozoarios ciliados intestinales a partir de heces fecales de porcino. Fundamento Este mtodo se basa en la accin que presenta el lugol, reteniendo el colorante en los ncleos y al mismo tiempo establecer su nmero en los quistes de protozoarios, as mismo la solucin salina hace que estos aparezcan como cuerpos refringentes. Equipo Microscopio compuesto Material biolgico Muestra de material fecal de porcino. Material Portaobjetos Cubreobjetos Aplicadores de madera Mantel individual de papel 3 8


Reactivos Solucin salina normal. Solucin de lugol. Hipoclorito de sodio Tcnica 1.- Colocar una gota de solucin salina en un portaobjetos. 2.- Agregar 1 mg. de materia fecal y homogeneizar bien. 3.- Colocar el cubreobjetos procurando que no queden burbujas. 4.- Hacer lo mismo con una gota de lugol. 5.- Observar al microscopio con objetivo 10x y 40x. Observaciones Dibujar los parsitos observados durante esta prctica individual o grupal, as como las preparaciones permanentes mostradas por el profesor, en particular Balantidium coli Limites de reporte 1. Estadio del parsito. 2. Gnero del parsito 3. Especie del parsito ResultadoUniversidad Veracruzana Facultad de Qumica Farmacutica Biolgica Laboratorio de Parasitologa Examen macroscpico: Olor: Color: Aspecto: Consistencia: Examen microscpico:


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Bitcora 1. 2. 3. 4. Qu aprend en esta prctica? Cmo fue mi actitud en cuanto a las actividades que realice? En que actividades me compromet? Cules fueron las dificultades para obtener la muestra?

Conclusin Bibliografa 1. De Haro, A. l., Salazar, S. P. M. Cabrera, B. M. Diagnstico Morfolgico de las Parasitosis. Mndez Editores, S. A. de C. V. Mxico, 1995. 2. Tood - Sanford - Davidsohn. Diagnstico y tratamiento clnico por el laboratorio. Edit. Salvat. Espaa, 1984. Tay Lara, Velazco Gutirrez, Parasitologa Mdica, Edit. Mndez Editores, Mxico D.F. 1999. 3. Faust, E. Parasitologa Clnica, Edit. Salvat Mexicana, Mxico D.F. 1998 4. Rodrguez Prez Elba, Manual Ilustrado de Parasitologa Mdica, Edit. Cuellar, Mxico D.F. 1998

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PRACTICA No. 4 Mtodo de WillisCPS de concentracin por flotacin simpleTIEMPO DE PRCTICA: 2 H

Introduccin Esta tcnica es cualitativa de concentracin; se conoce como flotacin de Wills. Es muy antigua, ya que se utiliza desde 1921 y, adems, es ideal para trabajo de campo, pues la solucin saturada de NaCl (sal comn o de mesa) se puede hacer en cualquier recipiente el mtodo indicado para cualquier forma parasitaria, excepto para trofozoitos. La lectura se debe tomar pasado el tiempo sealado para evitar deformaciones de las fases de parsitos. La materia fecal se puede utilizar con soluciones conservadoras o sin ellas. 3 Objetivo Realizar una tcnica coproparasitoscpica para observar helmintos y algunos protozoarios que por flotacin simple se hacen presentes, utilizando cloruro de sodio. Fundamento Este mtodo se basa en un principio de flotacin simple utilizando una solucin de cloruro de sodio de una densidad alta de 1.200 y 1.250 B en la cual los quistes, huevos y larvas de los parsitos menos densos flotan. Equipo Microscopio compuesto Densmetro Material biolgico Heces fecales humanas Material Portaobjetos Cubreobjetos Tubos de ensaye 13 x 100 Aplicadores de madera Mantel individual de papel 4 1


Reactivos Solucin sobresaturada de cloruro de sodio(salmuera) Lugol parasicolgico Hipoclorito de sodio Tcnica 1. 2. 3. 4. Colocar de 2 a 3 gr. Aproximadamente, de heces fecales en un tubo de ensaye 13 x 100 Agregar 5 ml. De cloruro de sodio, se homogeniza con el aplicador de madera. Se aade ms salmuera y se sigue agitando hasta que se llene al tope. Colocar un portaobjetos sobre la boca del tubo de ensaye, de tal manera que quede en contacto con la suspensin y se deja reposar de 15 a 30 min. 5. Se toma el portaobjetos, se agrega una gota de lugol y se coloca el cubreobjetos 6. Observar al microscopio en objetivo 10x y 40 x Observaciones Dibujar las estructuras parasitarias y elementos no parasitarios observados durante esta prctica individual o grupal, as como las preparaciones permanentes mostradas por el profesor. Limites de reporte 1. Estadio del parsito. 2. Gnero del parsito 3. Especie del parsito Reporte Protozoarios: 1a4 Trofozoitos por campo (+) 5a8 Trofozoitos por campo (++) 9 o ms Trofozoitos por campo (+++) Helmintos: 1 a 5 Huevos en la preparacin (+) 9 a 15 Huevos en la preparacin (++) 15 o ms Huevos en la preparacin (+++) 1 a 4 Quistes por campo (+) 5 a 8 Quistes por campo (++) 9 o ms Quistes por campo (+++)

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ResultadoUniversidad Veracruzana Facultad de Qumica Farmacutica Biolgica Laboratorio de Parasitologa Nombre del paciente: _______________________________________________________________________ Sexo: ___________________Edad:___________Localidad:_________________________________________ Metodologa empleada: _________________________________Fecha recepcin de la muestra___________ Examen macroscpico: Olor: Color: Aspecto: Consistencia: Restos de alimentos y parsitos: Examen microscpico:


Bitcora 1. 2. 3. 4. 5. Qu aprend en esta prctica? Cmo fue mi actitud en cuanto a las actividades que realice? Se como preparar el reactivo que emplee? Le la prctica antes de llegar al laboratorio? Qu dificultades se presentaron durante la prctica?

Conclusin Bibliografa 1. Rodrguez Prez Elba, Manual Ilustrado de Parasitologa Mdica, Edit. Cuellar, Mxico D.F. 1998 2. De Haro, A. L Salazar, S. P. M. cabrera, B. M. Diagnstico Morfolgico de las Parasitosis. Mndez Editores, S. A. de C. V. Mxico, 1995 4 3


3. Craig - Faust Parasitologa Clnica Edit. Salvat Barcelona, 1984

PRACTICA No. 5 Mtodo de FaustCPS de Concentracin por Centrifugacin y FlotacinTIEMPO DE PRCTICA: 2 H

Introduccin El coproparasitoscopico de concentracin por centrifugacin por flotacin, se conoce como tcnica de Faust, ya que fue l quien la diseo en 1938. Es una de las ms populares; se utiliza prcticamente en todos los laboratorios de sector salud y privados. Debido a que concentra una buena cantidad de quistes huevos y larvas, estas formas parasitarias son encontradas con facilidad, debido a que las preparaciones quedan con pocos artefactotes, es poco eficaz para huevos pesados como los de Taenia spp., Faciola hepatica y ovulos de A. lumbricoides. El sulfato de zinc en solucin con una densidad de 1.10 B, adems de tener mayor peso que algunos parsitos, no produce deformacin de los mismos cuando se suspenden heces en esta solucin, los huevos, quistes y larvas flotan sin sufrir alteraciones morfolgicas.1,7 Objetivo Realizar la tcnica cualitativa de centrifugacin por flotacin de Faust para la bsqueda de quistes, huevos y larvas de menor peso que el sulfato de Zinc. Fundamento Este mtodo se basa en una combinacin de los principios de flotacin y gravitacin, ya que permite una mejor separacin de los parsitos. En los mtodos de flotacin los parsitos existentes son recogidos en la pelcula superficial, debido a que presentan menor peso que la solucin empleada. Equipo Microscopio compuesto Centrfuga Material biolgico Heces fecales humanas Material Tubos de ensaye 13 x 100 4 4


Porta objetos Cubre objetos Pipeta Pasteur tallo corto Bulbo de goma Pizeta Papel seda Densmetro Aplicadores de madera Gradilla metlica Embudo tallo corto Gasa o manta de cielo Toallas de papel Mantel individual de papel.

Reactivos Sulfato de zinc al 33 % ( 1.180 B) Lugol parasitolgico Agua destilada Hipoclorito de sodio

Tcnica 1. Colocar en un recipiente adecuado, la materia fecal y homogenizar con agua. 2. Pasar a un tubo de 13 x 100 una parte de muestra homogenizada en proporcin 1:10 con agua. 3. Centrfugar a 2500 rpm. Durante un minuto. 4. Decantar y resuspender con agua. 5. Centrifugar a 2500 rpm. Durante un minuto. 6. Decantar. 7. Colocar cuidadosamente el tubo en la gradilla y agregar el Sulfato de Zinc hasta 1 cm antes del borde. 8. Centrifugar a 2500 rpm. durante un minuto. 9. Colocar cuidadosamente el tubo en la gradilla y agregar el Sulfato de Zinc hasta el borde, de modo que forme un menisco que sobresalga ligeramente del tubo. 10. Dejar reposar por 3 minutos. 11. Colocar en un portaobjetos limpio una gota de lugol. 12. Tomar por oposicin, la superficie del menisco con un cubre objetos y colocarlo sobre la gota de lugol en el porta objetos. 13. Observar al microscopio a 10x y 40x. Observaciones Dibujar las estructuras parasitarias y elementos no parasitarios observados durante esta prctica de forma individual o grupal, as como las preparaciones mostradas por el profesor. 4 5


Limites de reporte 1. Estadio del parsito. 2. Gnero del parsito 3. Especie del parsito Reporte Protozoarios: 1a4 Trofozoitos por campo (+) 5a8 Trofozoitos por campo (++) 9 o ms Trofozoitos por campo (+++) Helmintos: 1 a 5 Huevos en la preparacin (+) 9 a 15 Huevos en la preparacin (++) 15 o ms Huevos en la preparacin (+++) ResultadoUniversidad Veracruzana Facultad de Qumica Farmacutica Biolgica Laboratorio de Parasitologa Nombre del paciente: _______________________________________________________________________ Sexo: ___________________Edad:___________Localidad:_________________________________________ Metodologa empleada: _________________________________Fecha recepcin de la muestra___________ Examen macroscpico: Olor: Color: Aspecto: Consistencia: Restos de alimentos y parsitos: Examen microscpico:

1 a 4 Quistes por campo (+) 5 a 8 Quistes por campo (++) 9 o ms Quistes por campo (+++)

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Bitcora 1. 2. 3. 4. 5. Qu habilidades desarrolle en esta prctica? Cul fue mi actitud ante los problemas que se me presentaron? Cmo fue mi participacin en las actividades que realice? Con qu actividades me compromet? Qu es lo que ms me distrae en el laboratorio?

Conclusin Bibliografa 1. Tay Lara, Velazco Gutirrez, Parasitologa Mdica, Edit. Mndez Editores, Mxico D.F. 1999. 2. Tood - Sanford - Davidsohn. Diagnstico y Tratamiento Clnico por el Laboratorio. Edit. Salvat. Espaa, 1984. 3. Faust, E. Parasitologa Clnica, Edit. Salvat Mexicana, Mxico D.F. 1998 4. De Haro, A. L Salazar, S. P. M. cabrera, B. M. Diagnstico Morfolgico de las Parasitosis. Mndez editores, S. A. de C. V. Mxico, 1995. 5. Rodrguez Prez Elba, Manual Ilustrado de Parasitologa Mdica, Edit. Cuellar, Mxico D.F. 1998

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PRACTICA No. 6 Mtodo de RitchieCPS de Concentracin por Centrifugacin y SedimentacinTIEMPO DE PRCTICA: 2 H

Introduccin Se le conoce en los laboratorios de diagnstico como la tcnica del formol ter. Se utiliza una solucin de formalina al 10%, la cual sirve para fijar las formas parasitarias y el ter para liberarlas. Se recomienda la utilizacin de tubos de centrifuga cnicos, lo que hace que la tcnica no sea muy popular por la carencia de los mismos. No obstante, es posible utilizar los tubos de 13X 100 mm. con resultados satisfactorios.1,3 Objetivo Desarrollar la tcnica de Ritchie, para demostrar la importancia que tiene en la mayora de los casos el anlisis del sedimento en un examen de este tipo. Fundamento El empleo de ter, permite que las formas parasitas se separen de las grasas por disolucin de las mismas, y con el formol se fijan y conservan. Hacindose la concentracin por centrifugacin sucesiva Esto debido a que a veces las formas parasitarias son un poco ms pesadas y no flotan, por lo tanto en el sedimento las podemos localizar. Equipo Microscopio compuesto Centrifuga Material biolgico Heces fecales humanas Material Tubos de ensaye Porta objetos 4 8


Cubre objetos Pipeta Pasteur tallo corto Bulbo de goma Pizeta Densmetro Papel seda Aplicadores de madera Gradilla metlica Embudo tallo corto Gasa o manta de cielo Toallas de papel Mantel individual de papel

Reactivos ter sulfrico o ter de petroleo Solucin de formaldehdo 10% Solucin salina isotnica Lugol parasitolgico Hipoclorito de sodio Jabn

Tcnica 1. Colocar en un recipiente adecuado, una pequea porcin de materia fecal (1a2g aproximadamente). 2. Aadir 10 ml de solucin salina isotnica y homogeneizar. 3. Tamizar la suspensin y recibir el contenido en tubo. 4. Centrifugar a 2000 rpm durante 1 minuto. 5. Decantar el sobrenadante y resuspender el sedimento con solucin salina, centrifugar y decantar nuevamente (lavar). 6. Agregar al sedimento 3 ml de solucin de formaldehdo al 10%, mezclar y dejar reposar durante 5 minutos. 7. Aadir 2.5 ml de ter, tapar el tubo con el tapn y agitar por inversin durante 30 seg. 8. Destapar con cuidado. 9. Centrifugar a 1500 rpm. durante 2 minutos. 10. Despus de centrifugar se observan 4 capas: ter en la superficie Un tapn de restos fecales Formaldehdo Sedimento conteniendo los elementos parasitarios 1. En un porta objetos colocar una gota de lugol. 2. Introducir una pipeta Pasteur a travs de las primeras capas hasta llegar al sedimento extraer con cuidado una gota del mismo 3. Colocar la gota de sedimento sobre la de lugol y un cubre objetos sobre ellas. 4 9


4. Observar al microscopio a 10x y 40x.

Fig. 1. Mtodo de Ritchie

Observaciones Dibujar las estructuras parasitarias y elementos no parasitarios observados durante esta prctica de forma individual o grupal, as como las preparaciones mostradas por el profesor. Limites de reporte 1. Estadio del parsito. 2. Gnero del parsito 3. Especie del parsito Reporte Protozoarios: 1a4 Trofozoitos por campo (+) 5a8 Trofozoitos por campo (++) 9 o ms Trofozoitos por campo (+++) Helmintos: 1 a 5 Huevos en la preparacin (+) 5 0 1 a 4 Quistes por campo (+) 5 a 8 Quistes por campo (++) 9 o ms Quistes por campo (+++)


9 a 15 Huevos en la preparacin (++) 15 o ms Huevos en la preparacin (+++)



Bitcora 1. 2. 3. 4. Qu me pareci esta prctica? Qu opino de los resultados obtenidos? En que actividades me compromet? Cules fueron las dificultades durante el desarrollo del mtodo?

Conclusin Bibliografa

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1. Rodrguez Prez Elba, Manual Ilustrado de Parasitologa Mdica, Edit. Cuellar, Mxico D.F. 1998 2. De Haro, A. L Salazar, S. P. M. cabrera, B. M. Diagnstico Morfolgico de las Parasitosis. Mndez Editores, S. A. de C. V. Mxico, 1995 3. Craig - Faust Parasitologa Clnica Edit. Salvat Barcelona, 1984

PRACTICA No. 7TIEMPO DE PRCTICA: 2 H

Mtodo de Sheather SugarTcnica de concentracin por flotacin Introduccin Otra tcnica muy utilizada, es la de flotacin simple en solucin saturada de sacarosa (azcar de mesa). Algunos parasitlogos recomiendan una densidad de la solucin sacarosa de 1.200B. Esta tcnica, como la Willis, tambin puede provocar la deformacin de las formas parasitarias, por lo que la lectura se debe de hacer 15 a 20 minutos despus de hacer el homogeneizado. Tambin es posible utilizar muestras con diversos conservadores. Este examen es apropiado para la observacin y registro de ooquistes de Isospora, Cryptosporidium, Cyclospora y Sarcocystis.1,3 Objetivo Realizar un mtodo de concentracin por flotacin con centrifugacin en una solucin de azcar. Fundamento Se basa en la flotacin de quistes, ooquistes y huevos de parsitos en una solucin de azcar que posee mayor densidad que ellos. Esta tcnica es til para la concentracin de quistes y ooquistes de protozoos y huevos de helmintos y se usa como mtodo preferencial en el diagnstico de los coccidios; Cryptosporidium, Cyclospora, Isospora, etc. Material biolgico Heces fecales humanas Materiales Tubos de ensayo 13 x 100. Portaobjetos. Cubreobjetos. Aplicadores de madera Asa de platino. Gradilla para tubos de ensayo. 5 2


Embudo de vidrio. Gasa. Toallas desechables Manteles individuales de papel. Reactivos Solucin sobresaturada de azcar Solucin salina Lugol parasitologico Tcnica 1. Homogeneizar 1 a 2 g de materia fecal en suero fisiolgico. 2. Colocar un embudo de vidrio con una gasa doblada en la abertura del tubo de ensayo y filtrar el material homogeneizado. 3. Centrifugar el tubo con el material homogeneizado a 1 500 r.p.m. durante 2 a 5 minutos. 4. Eliminar el sobrenadante, y agregar la solucin de azcar hasta 1 cm del borde del tubo, agitar hasta disolver el sedimento, centrifugar como en el paso anterior, completar con la solucin de azcar hasta el borde y esperar de 2 a 5 minutos la formacin de un menisco. 5. Con la ayuda del asa de platino, tomar una muestra de la superficie del menisco y colocarla en una lmina portaobjeto, agregar lugol, cubrir con una laminilla y observar al microscopio. 6. Si se observan coccidios, de la superficie del preparado, tomar con la asa de platino o con una pinza curva, una muestra para preparar un frotis para teir por el mtodo de ZiehlNeelsen modificado. Observaciones Dibujar las estructuras parasitarias y elementos no parasitarios observados durante esta prctica individual o grupal. Limites de reporte 1. Estadio del parsito. 2. Gnero del parsito 3. Especie del parsito Reporte Protozoarios: 1a4 Trofozoitos por campo (+) 5a8 Trofozoitos por campo (++) 9 o ms Trofozoitos por campo (+++) Helmintos: 5 3 1 a 4 Quistes por campo (+) 5 a 8 Quistes por campo (++) 9 o ms Quistes por campo (+++)


1 a 5 Huevos en la preparacin (+) 9 a 15 Huevos en la preparacin (++) 15 o ms Huevos en la preparacin (+++)



Bitcora 1. 2. 3. 4. Cules fueron las dificultades durante el desarrollo del mtodo? Qu aprend en esta prctica? Cmo fue mi actitud en cuanto a las actividades que realice? Qu ventajas ofrece el mtodo con otras tcnicas de este tipo?

Conclusin Bibliografa 5 4


1. De Haro, A. L Salazar, S. P. M. cabrera, B. M. Diagnstico morfolgico de las parasitosis. Mndez Editores, S. A. de C. V. Mxico, 1995 2. Becerril Flores, Romero Cabello. Parasitologa Medica de las Molculas a la Enfermedad Edit. Mc. Graw Hill 2004 3. Rodrguez Prez Elba, Manual Ilustrado de Parasitologa Mdica, Edit. Cuellar, Mxico D.F. 1998

PRACTICA No. 8 Mtodo de CharlesCPS de Concentracin por Centrifugacin y SedimentacinTIEMPO DE PRCTICA: 2 H

Introduccin Es una tcnica utilizadas con frecuencia en los laboratorios El mtodo se usa para huevos, quistes y larvas, no importa la densidad que tengan, hace muy buena concentracin de estas formas parasitarias, pues eliminan bastantes detritus orgnicos con el ter; el motivo por el cual se utiliza formol es para mantener la integridad de las formas parasitarias que concentra, por sus caractersticas de fijador. Una desventaja de esta tcnica es que las preparaciones quedan con muchos artefactos que sedimentan e interfieren con la lectura.6, 10 Objetivo Realizar la tcnica de Charles para la bsqueda de formas parasitarias. Fundamento Mtodo basado en la propiedad que tienen las soluciones de densidad baja, de precipitar objetos ms densos, lo que hace que muchas formas parasitarias sedimenten. Equipo Microscopio compuesto Centrfuga Material biolgico Heces fecales humanas Material 5 5


Tubos de ensaye Porta objetos Cubre objetos Pipeta Pasteur tallo corto Bulbo de goma Tapn de hule Pizeta Papel seda Aplicadores de madera Gradilla metlica Embudo tallo corto Gasa o manta de cielo Manteles individuales de papel

Reactivos Charles I Charles II ter sulfrico Lugol parasitolgico Hipoclorito de sodio

Tcnica 1. 2. 3. 4. 5. 6. Colocar en un recipiente adecuado una pequea cantidad de materia fecal (1 a 2gr.). Agregar reactivo de Charles I, en porcin 1:10 y homogeneizar. Colar la suspensin y recoger en tubo de ensaye. Centrifugar a 2000 rpm. durante un minuto. Decantar. Agregar al sedimento, reactivo de Charles II hasta la mitad del volumen del tubo y homogeneizar. 7. Agregar 0.5 ml de ter sulfrico, colocar un tapn de hule y agitar por inversin. (Precaucin: el ter es muy voltil) 8. Quitar el tapn y centrifugar a 2000 rpm. durante 30 seg. 9. Romper, con un aplicador, el tapn de grasas y heces que se forme. 10. Centrifugar a 2000 rpm. durante 20 seg. 11. Decantar 12. Tomar con pipeta Pasteur una gota del sedimento, agregar una gota de lugol, cubrir con cubreobjetos. 13. Observar al microscopio a 10x y 40x Observaciones Realizar dibujos de todas las fases parasitarias observadas durante la prctica. 5 6


Limites de reporte 1. Estadio del parsito. 2. Gnero del parsito 3. Especie del parsito

Reporte Protozoarios: 1a4 Trofozoitos por campo (+) 5a8 Trofozoitos por campo (++) 9 o ms Trofozoitos por campo (+++) Helmintos: 1 a 5 Huevos en la preparacin (+) 9 a 15 Huevos en la preparacin (++) 15 o ms Huevos en la preparacin (+++) ResultadoUniversidad Veracruzana Facultad de Qumica Farmacutica Biolgica Laboratorio de Parasitologa Nombre del paciente: _______________________________________________________________________ Sexo: ___________________Edad:___________Localidad:_________________________________________ Metodologa empleada: _________________________________Fecha recepcin de la muestra___________ Examen macroscpico: Olor: Color: Aspecto: Consistencia: Restos de alimentos y parsitos: Examen microscpico:

1 a 4 Quistes por campo (+) 5 a 8 Quistes por campo (++) 9 o ms Quistes por campo (+++)

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Bitcora 1. 2. 3. 4. Qu ventajas ofrece este mtodo? Qu desventajas presenta esta tcnica? Cmo fue mi actitud en cuanto a las actividades que realice? Qu problemas se me presentaron en esta Prctica?

Conclusin Bibliografa 1. Craig - Faust Parasitologa clnica Edit. Salvat Barcelona, 1984 2. Brown, H. W. Parasitologa clnica. Edit. Interamericana. Mxico. 1985 3. De Haro, A. L Salazar, S. P. M. cabrera, B. M. Diagnstico Morfolgico de las Parasitosis. Mndez Editores, S. A. de C. V. Mxico, 1995

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CAPITULO 5METODOS COPROPARASITOSCOPICOS CUANTITATIVOS

INTRODUCCIN5 9


Los exmenes coproparasitoscopicos cuantitativos son utilizados para hacer una evaluacin de la intensidad de ciertas helmintosis como Ascarosis, Tricocefalosis, Uncinariosis, Himenolepiosis y Estrongiloidiosis Algunos mtodos que se utilizan para relacionar la eliminacin de huevos de un helminto con la masividad de la parasitosis, la cual se entiende como aquella en la que los signos y sntomas son muy especficos de la misma. Cuando se describi el CPS directo en fresco, se trato tambin la variable cuantitativa. Debido a que solo se evala masividad en las helmintiasis, las tcnicas cuantitativas son las mejores para las mismas. Existen diversas tcnicas como se menciona en la clasificacin de los exmenes coproparasitoscopicos en este capitulo se incluyeron dos; el Mtodo de Stoll uno de los ms frecuentemente usados y el examen directo. Una aplicacin ms del CPS directo en fresco es que se puede utilizar para informes cuantitativos, siempre y cuando se estandarice la cantidad de materia fecal necesaria para efectuar la tcnica, y mediante una regla de tres simple se obtiene el nmero de huevos por gramos de heces que contiene la muestra. Por lo regular, la cantidad necesaria para aplicar un mtodo como este es de 2 a 3 mg. de materia fecal para un cubre objetos. Estas tcnicas cuantitativas para el recuento de parsitos permiten obtener datos en los casos de que se sospeche un parasitosis significativa. La produccin de huevecillos estar en relacin directa con el nmero de hembras fecundadas que deponen huevos. Este mtodo es una simplificacin del mtodo estndar de Beaver. La simplificacin deriva del conocimiento que las preparaciones directas que se utilizan en la rutina para el examen de heces contienen entre 1.5 mg y 2.5 mg. El Mtodo consiste en colocar 1-2 gotas de solucin salina en cada extremo del portaobjeto. Con un aplicador de madera, tomar un proporcin de heces y emulsificar en cada una de las gotas de la solucin salina. Cubrir cada preparacin con cubreobjetos. Contar de forma individual los huevos de scaris, Trichuris y/o uncinaria presentes en cada preparacin. Sacar la media. Los Resultados se reportan como: nmero de huevos por frotis de heces o bien multiplicar este resultado por 500 y multiplicar por 500 e informar como nmero de huevos/gramo de heces.1, 3,22

PRCTICA No. 96 0


Mtodo Coproparasitoscopico de StollTIEMPO DE PRCTICA: 2 H

Introduccin El examen coproparasitoscopico por dilucin se conoce en todo el mundo como tcnica de Stoll. En ella se emplea una solucin de hidrxido de sodio 0.1 N (dcimo normal). Originalmente se ideo y se diseo para cuantificar huevos de Ancylostoma duodenale y Necator americanus; despus se popularizo y desde 1923, en que se publico la tcnica original, hasta la actualidad se sigue utilizando. Este mtodo requiere de probetas y pipetas calibradas, pues se debe hacer una suspensin de materia fecal-solucin de hidrxido de sodio 1:15; de esta dilucin se obtiene un factor por el que se multiplica el nmero de huevos encontrados para reportarlos como h/ml/h (huevos por mililitro o gramos de heces). Debido a que la cantidad de muestra para hacer la dilucin es pequea en comparacin con el relativamente grande de la solucin de hidrxido de sodio, las posibilidades de valuar con xito las helmintosis moderadas estn disminuidas, pues todava se manejan volmenes de materia fecal ms pequeos que los que se utilizan en el examen directo. Por el hecho de no utilizar tincin temporal, no se observan los quistes, pues se aclaran con el hidrxido de sodio, por tanto es un mtodo especifico para helmintosis.1, 3 Objetivo Realizar una tcnica cuantitativa por dilucin que nos permita determinar especficamente helmintosis masiva, que se presentan con manifestaciones severas. Fundamento Su fundamento es bsicamente aritmtico, los clculos son muy simples se basan en las diluciones empleadas y en los principios de saponificacin, homogeneizacin y aclaramiento producido por el uso del hidrxido de sodio. Material Biolgico Muestra de materia fecal humana Material Probeta graduada con tapn esmerilado de 100 ml. Pipeta graduada de 1 a 2 ml en 0.01 ml. Portaobjetos Cubreobjetos Varilla de vidrio de 20 cm. de longitud

Reactivos 6 1


Hidrxido de sodio al 0.l N Luqol parasitologico Equipo Microscopio compuesto Tcnica 1. Colocar 56 ml. de NaOH al 0.1 N en una probeta de 100 ml. 2. Aadir 4 grs. de materia fecal con la varilla de vidrio, o hasta aforar a 60 ml. procurando no ensuciar la boca de la probeta, pues esto aumentara la cantidad de heces contenidas en la deteccin. 3. Esperar un tiempo a que las heces fecales reblandezcan si son duras. 4. Agregar las perlas de vidrio. 5. Tapar la probeta con el tapn esmerilado o de hule y agitar fuertemente, de arriba abajo, durante 1min., hasta formar una suspensin homognea. 6. Tomar inmediatamente 0.150 ml. o 0.075 ml. de la suspensin en cuanto haya cesado la agitacin y los restos fecales y huevos comiencen a bajar al fondo; con una pipeta colocarlos en un portaobjetos. 7. Aadir una gota de lugol, asegurando una tincin uniforme colocar el cubreobjetos procurando no hacer vaco. 8. Observar la preparacin al microscopio en 10 x y 40 x. Recomendaciones Dada la dilucin de las muestras tomar de preferencia 0.150 ml de la suspensin y verificar que el pipteo sea exacto, para no alterar el factor de dilucin. Observaciones Dibujar los elementos parasitarios y artefactos encontrados en la preparacin de forma individual y grupal.

Limites de reporte 1. Estadio del parsito. 2. Gnero del parsito 3. Especie del parsito

Forma de reportar 6 2


El nmero de huevos o larvas contados en todos los campos de la preparacin se multiplica por los siguientes factores, segn se hayan tomado 0.075 0.15 ml de la suspensin, y tambin en consideracin a la consistencia de la muestra de materia fecal. Tabla 3. Factores de correccin para el reporte del Mtodo de Stoll heces Duras Pastosas Lquidas Duras Pastosas Lquidas muestra 0.75 0.75 0.75 0.150 0.150 0.150 factor 200 400 800 100 200 400

El resultado se expresa en huevos o larvas por mililitro de heces (h/ml/h). Por ejemplo, si la materia fecal es pastosa y se encontraron en todos los campos 4 huevos de Uncinaria 4 x 200 = 800 Se reportara as: 800 h/ml/h de uncinarias. ResultadoUniversidad Veracruzana Facultad de Qumica Farmacutica Biolgica Laboratorio de Parasitologa Nombre del paciente: _______________________________________________________________________ Sexo: ___________________Edad:___________Localidad:_________________________________________ Metodologa empleada: _________________________________Fecha recepcin de la muestra___________Examen macroscpico: Olor: Color: Aspecto: Consistencia: Restos de alimentos y parsitos:

Examen microscpico: Fecha del examen_____________________________Responsable__________________________________

6 3


Bitcora 1. 2. 3. 4. Qu aprend en esta prctica? Cmo fue mi actitud en cuanto a las actividades que realice? En que actividades me compromet? Cules fueron las dificultades durante el desarrollo del mtodo?

Conclusin Bibliografa 1. Craig - Faust Parasitologa Clnica Edit. Salvat Barcelona, 1984 2. Brown, H. W. Parasitologa Clnica. Edit. Interamericana. Mxico. 1985 3. De Haro, A. L Salazar, S. P. M. cabrera, B. M. Diagnstico Morfolgico de las Parasitosis. Mndez Editores, S. A. de C. V. Mxico, 1995 4. Dreyer, G., Fernndez-Silva, E, Alves, S., Rocha, A, Albuquerque, R. and Addiss, D. 1996. Patterns of detection of Strongyloides stercoralis in stool specimens: implications for diagnosis and clinical trials. J. Clin. Microbiol. 5. Giovanni J. Xool Castellanos, Responsable de rea de coproanalisis Universidad Autonoma de Yucatn. Instructivo para el procesamiento de muestras del rea de coproanlisis. 2009

6 4


CAPITULO 6 METODOS ESPECIALES PARA DIAGNOSTICO DE PARASITOS DEL APARATO DIGESTIVO

6 5


INTRODUCCINEn este grupo de exmenes se encuentran todas aquellas tcnicas que auxilian para establecer el diagnstico de parasitosis cuyas formas parasitarias requieren de tcnicas especiales para lograrlo. Por ejemplo en los casos de Fasciolosis, Giardiosis y Estrongiloidosis, para asegurar su diagnstico se requerirn, adems de los coproparasitocopicos, otras tcnicas. En este grupo de mtodos se consideran procedimientos que simplifican y favorecen la recoleccin de formas parasitarias, de sitios poco usuales como la regin perianal. Tambin la recoleccin de parsitos adultos, progltidos o estrbilos de cstodos ameritar el uso de mtodos adicionales. En este capitulo se incluyen el mtodo de amiba en fresco, estudio citolgico de moco fecal, mtodo de Graham los cuales en seguida se describirn.

6 6


PRACTICA No. 10 Amiba en frescoTIEMPO DE PRCTICA: 2 H

Introduccin Una de las protozoosis intestinales con las que se enfrenta el mdico con cierta frecuencia es la amibiasis. Desde el punto de vista clnico esta parasitosis es similar a otras entidades por lo que es muy importante recurrir a diferentes exmenes de laboratorio, que permitan poner en evidencia al agente etiolgico que es E. histolytica. Ahora bien, es relativamente fcil la bsqueda de trofozotos y quistes de este protozoo, en la materia fecal. Los trofozotos miden de 10 a 65 micrmetros de dimetro. En su citoplasma se puede diferenciar el ectoplasma hialino hacia la periferia, as como un endoplasma granuloso con aspecto de vidrio molido. Su ncleo, localizado hacia el centro muestra un endosoma central, con grnulos de cromatina pequeos adosados a la membrana nuclear. Los trofozotos poseen movimiento activo, resultante de la formacin de seudpodos (prolongaciones digitiformes de endoplasma) Los quistes de E. histolytica miden de 5 a 20 micrmetros con una forma ovoide o esfrica dada por su pared qustica. En los quistes maduros se pueden observar cuatro ncleos con cariosoma central y cromatina fina perifrica. 20, 5,7,2

Recomendaciones Cuando se trata

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