Parasitologia clinica

Introducción a la Parasitología Clínica

Técnicas de Laboratorio II 2014

cultativa

ción

Relaciones entre individuos

Ambos organismos se beneficianMutualismo

Sólo uno se beneficia, el otro noComensalismoSimbiosis se beneficia ni se perjudica

Parasitismo

Asocia entre 2Uno se beneficia Parásito

Ser vivo que temporal o permanentemente vive a expensas de otro organismo de ≠ especie, obteniendo

nutricion y morada al cual le puede ocacionar

daño. Posee dependencia

metabólica total y está en contacto íntimo con

el H

organismos de ≠ especieestrecha y perdurablecapaz de modificar el

comportamientofisiológico de uno oambos organismos

El otro puede osufrir daño

no

HospedadorOrganismo que

alberga y da alimento a otro organismo

Facultativa Obligatoria

o

o P

¿Es lo mismo parasitismo yparasitosis?

≠ ParasitosisParasitismo

Interacción entre 2

individuos donde uno de ellos se

beneficia y el otro puede o

no sufrirdaño

Enfermedad infecciosa producida por parásitos (protozoos, artrópodos y helmintos)

Tipo de parasitismo según…

>Obligatorio

>Facultativo

>Accidental

>Temporal

>Periódico

>Permanente

>Ectoparásito

>Endoparásito

Extracelular Intracelular

Organos o tejidos

Clasificaciónsimplificada

SarcodinaMastigosphora

SEUDOPODIOS

Sarcomastigosphora FLAGELOS

Protista CiliophoraProtozoa CILIASE

U K A R IO

T A

COMPLEJOAPICAL

Apicomplexa

Fungi

Aphasmidea

PhasmideaNematelmintos

Plantae

Cestodes

TrematodesPlatelmintos

Animalia MetazoaArachnida

InsectaCrustacea

Artrópodos

ucee en el H

sexual y/asexual

• P Cumpl ciclo evol formas i

• H Par excepcte

• P alcanza la madurezy se reproducesexualmente

• H de mayor evolución filogenética

• P no alcanza madurezSexual o se multiplicaasexualmente en el H

Cumple parte de su ciclo evolutivo dando formas infectivas

Definitivo Intermediario

Habitual Accidental

• Es el Hcomúnmenparasitado

H. PasitadoExcepcionalmente

No permite desarrollo del ciclo

Desarrolla igual que en

HD u HI

Ciclo de vida=Ciclo biológico=Cicloevolutivo

Conjunto de etapas y transformacionesdesarrollo

que experimenta un P en su

Directo o monoxénico Indirecto o heteroxénico

P requiere un solo H paracompletar su ciclo

P requiere más de un H paracompletar su ciclo

Transmisión del parasitismo

Conjunto de fenómenos a través de los cuales un P pasa de una fuente o

reservorio a un H susceptible

Depende de…

>Fuente de Infección

>Modo de transmisión

>Estadío infectivo

>Susceptibilidad del H

Tipos de transmisión

>Directa (vertical/iatrogénica)

>Indirecta

A partir de la cual un H susceptible adquiere el P. Por ej:otros individuos (contacto directo), autoinfestación, a partirFuentede objetos, suelos, agua, alimentos contaminados, animales,artropodos contaminados, etc.

Hábitat (lugar o ser viviente) donde el P vive se multiplica y/o crece permitiendo su sobrevida en la naturaleza. Sirve como fuente de infección para H susceptibles.GARANTIZA LA SUPERVIVENCIA DEL P.

≠

Reservorio

Transmisión del parasitismo

• Inhalación

Respiratoria

Cutánea

Vías:

Oral

Parenteral

Vertical

Fuente Modo de transmisión

• Vertebrado

• Transplante/ tranfusión

• Contacto con heces, mordidas,accidente de laboratorio

• Ingesta predación

• Transmisión placentaria/perinatal/lactancia

• Autoinfección

•Invertebrado

• Picadura• Ingesta• Contacto

•Elemento inerte

• Contacto con algún elemento como: SábanasUtensillos

• Ingesta de alimentos y agua

Transmisión del parasitismo Pasa por el medio ambienteAbiertaDispersión en la

naturalezaNo pasa por el medio ambienteCerrada

Busca a su H por medio de moléculasorientativas y receptores que las perciben

Llega mediante alimentos o picaduras

ActivaLocalización de un

nuevo HPasiva

Mecanismo

Vías de infección

Modo

Lugar

•Activa: llega por sus propios medios

F

A S ES

Contacto con el H

Penetración •Pasiva: P no realiza acción alguna•Ectoparasitos! No penetran, se FIJAN

Establecimiento deun ecotopo

específico en el H

Multiplicación y diferenciación/

reproducción sexual

Barreras bióticas Sistema Inmune

pH, PO2 …Barreras abióticas

Salida del P o susptos para supropagación

Vector Invetebradoartrópodo capaz de

transmitir P entre unvertebrado infectado y

otro sano

Es el HD u HI.Es la principal Mecánico

Artrópodos que transportanpasivamente al P. La

asociación es inespecífica, se debe a la contaminación del

artrópodo

Biológico Artrópodo

hematófago que transmite alP en su alimentación.

Presenta asociación íntima yespecífica con el P. El P realiza

parte de su ciclo.

fuente del P

MultiplicativoEn él el P se diferencia y

divide

EvolutivoEn él el P sólo se

diferencia.

Especificidad Parasitaria

Restricción de desarrollo del P en ≠ H

Oligoxénica

≠ especies,=familia

Estenoxénica

≠ especies,=género

Eurixénica

≠ familias

Oioxénica

1 sola especie

Más definiciones…

Zoonosis • Enfermedad transmisible naturalmente entre animales vertebradosy el hombre, siendo = o ≠ el ciclo en ellos. Ambos parasitados!

• Condición en la cual el número y distribución geográfica de unaenfermedad permanecen estables con fluctuaciones dentro delímites esperables.

Endemia

Epidemia • Aumento del número de casos en una zona geográficadeterminada en un tiempo límitado.

Parasitosiscosmolpolitas

Parasitosisregionales

• Se encuentran distribuidas ampliamente ya que su existencia sehalla ligada a la presencia del humano (ciclo directo) o la presenciadel humano y sus otros hospedadores también cosmopolitas (cicloindirecto)

• Su existencia no depende sólo del hombre sino de la presenciatemporal o permanente de otros factores (físicos, biológicos osociales) que hacen posible la vida del P y la progresión en su ciclo.

Más definiciones…

• P que equivoca su hábitat dentro del H y se ubica en unsistema u órgano que no le permite desarrollarse.Parásito errático

Hiperparasitismo • Parásitos que parasitan otros parásitos

Multiparasitismo osuperparasitismo

• Cuando un H se encuentra parasitado por 2 o másespecies diferentes

Poliparasitismo • Presencia de gran carga de un P en un H

Seudoparásitos • Elementos de diversa naturaleza confundibles con P

• Helminto que requiere que su huevo pase por el medioambiente para madurar y ser infectivo (huevo larvado)Geohelminto

Protista Hongos Animalia Planta

Metazoa

Protozoos (heterótrofos)

Algas (autótrofos)

Mohos limosos (Quimio-heterótrofos:Digestión extracelular y/o absorción de sustancias del ambiente)

Procariotas(Monera)

Eucariotas

Seres vivos

PROTOZOOS

SARCOMASTIGOSPHORA APICOMPLEXACILIOPHORA

SARCODINA

MASTIGOSPHORA

METAZOA

FUNGIPLANTAEANIMALIAPROTISTA

SUPERREINO

REINO

SUBREINO

PHYLUM

CLASE

PROKARIOTA EUKARIOTA

Clasificación

Protozoarios

Definición: organismos eucariotas unicelulares que pueden replicarsepor mecanismos sexuales o asexuales.

64.000 especies de las cuales 30-40 son patógenas para el hombre

• Fagocitosis o pinocitosis

• Citostoma o peristoma• Difusión o transporte facilitado

Alimentación

• Flagelos

• Cilias• Pseudópodos

Locomoción

• Flagelados

• Amebas• Ciliados

Dimorfismo(trofozoito/quiste)

Pinocotosis ALIMENTACIÓN

Difusión facilitada

Cilias

Flagelo

Locomoción

Locomoción en Apicomplexa

Dimorfismo (flagelados)

TrofozoítoSe reproducen en el hospedadorSon lábiles en ambientes desfavorables Secretan pared muy resistente para generar quistes (supervivencia y diseminación)

QuisteInmóviles y no replicativosResistentes

Amebas tienen enquistamientoinducido por tasa reproducción

Dimorfismo (amebas)

Dimorfismo (ciliados)

Trofozoito Quiste

Reproducción

Sexualmaterial

genético de 2 ancestros diferentes

AsexualProgenie

recibe material genético de 1 solo ancestro

- Conjugación- Fisión binaria

- Fusión- Esquizogonia

PROTOZOOS

TREMATODA

ARTROPODOS

ARACHNIDA

INSECTA

CRUSTACEA

NEMATODES

APHASMIDEA

PHASMIDEA

PLATYHELMINTES

CESTOIDEA

METAZOA

FUNGIPLANTAEANIMALIAPROTISTA

SUPERREINO

REINO

SUBREINO

PHYLUM

CLASE

PROKARIOTAEUKARIOTA

Clasificación

Enteropárasitos

Amebas: Entamoeba histolytica, Entamoeba dispar, Entamoeba hartmanni, Entamoeba coli, Entamoeba polecki, Endolimax nana, Iodamoeba butschlii, Blastocystis hominis.

Flagelados: Giardia lamblia, Chilomastix mesnili, Dientamoeba fragilis, Trichomonas hominis, Enteromonas hominis, Retortamonas intestinalis

Ciliados: Balantidium coli

Coccidios, microsporidios: Cryptosporidium parvum, Cyclospora cayetanensis, Isospora belli, Sarcocystis hominis, S. suihominis

Nematodes: Ascaris lumbricoides, Enterobius vermicularis, Ancylostoma duodenale, Necator americanus, Strongyloides estercoralis, Trichostrongylus spp., Trichuris trichiura, Capillaria philippinensis

Cestodes: Diphyllobotrium latum, Dipylilium caninum, Hymenolepis nana, Hymenolepis diminuta, Taenia solium, Taenia saginata

Trematodes: Fasciola hepatica, Fasciolopsis buski, Echinostoma ilocanum, Heterophyes heterophyes, Metagonimus yokogawai

ProtozoosHelmintos

Enteropárasitos

Única muestra en SF que debe mantenerse refrigerada y seranalizada antes de las 3 hs.

Ventaja: Identificación de formas vegetativas de P

Desventajas. Debe ser procesada rápidamente.Protozooarios: fases negativas/descargacíclica de quistes -> falsos negativos

Recolección de 5 a 6 muestras, una muestra por día.

Formol 5% - 10% (formalina); PVA (alcohol polivinilico)(PVA+EtOH+MgCl2 o ZnSO4); SAF (solución amortiguada de formol) (sodium acetate–acetic acid-formalin); MIF (merthiolate-Iodo-formol); PAF (fenol-EtOH-formol); líquido de Schaudinn (HgCl2, EtOH, AcH).

Ventajas. No requiere procesado inmediato.Se cubre fases negativas de protozoarios.

Desventaja. No se detectan las formas vegetativas de losprotozoarios.

Seriada/fijada

Frescas

Muestras

Examen directo

Técnicas deenriquecimiento(centrifugación o

sedimentación; flotación;métodos bifásicos)

Métodos Especiales(Baerman; Harada-Mori;

Graham; eclosión de huevos;

rto de huevos; cultivo)Coloraciones permanentes(colorante tricrómico de

Gomori; hematoxilina férrica; Ziehl Nelsen; Ziehl Nelsen

modificada) Tinciones-coloracionestransitorias (lugol; solucióniodoidura de D’Antoni; MIF;

azul de metileno)

Técnicas

Identificación de P por su forma y motilidad Examen directo

Montaje húmedo directoFrotis del material disuelto en SF

Pero… para la identificación detallada hace falta técnicas de coloración

Coloraciones transitorias:Lugol; Sn de Iodo-iodurada de D’AntoniMIF

Permiten observar las formas parasitarias con mayordetalle

Hymenolepis nanaMueren los trofozoítos

Strongyloides stercoralis

Observación de trofozoítos (40x), quistes (40x), huevos (10x), larvas (10x)

Fijación de la muestra, tinciones…

Técnicas de enriquecimiento(centrifugación o sedimentación;

flotación; métodos bifásicos)

Test de sedimentación o centrifugación

Líquidos menos densos que los elementos parasitarios P quedan en el sedimento

Desventaja: queda mucho residuo con la muestra a analizar



Test de flotación

Líquidos más densos que los elementos P P quedan en la superficie de los líquidos

Variantes:** Faust : ZnSO4.** Willis: NaCl sat, dejando decantar 30–45 min.** Willis–Molloy: NaCl sat, llenando el tubo hasta el borde con la Sc sat y colocando un portaobjetos enla superficie del tubo, dejando decantar 30-45 min.** Sheather: Sc sat de sacarosa, centrifugando 1 min a 1500 rpm o siguiendo la técnica de Willis Molloy.



Métodos bifásicos

Métodos bifásicos: Charles - Barthelemy (Ácido cítrico – formol – éter)

Métodos Especiales(Baermann; Harada-Mori; Graham;

eclosión de huevos; rto de huevos; cultivo)Baermann

Strongyloides stercolaris


eclosión de huevos; rto de huevos; cultivo)

Baermann

Se basa en el termotropismo de las larvas.

H2O 40-42°C1-3 hs

Separación de las larvas de las heces.

Recuperación de larvas vivas de nematodes(Strongyliodes spp. y fitoparásitos)

Strongyloides stercolaris – larva rhabditiode



Harada-Mori

Basada en el hidrotropismo de las larvas.

Cultivo de larvas filariformes: Strongyloides spp.,Necator spp., Ancylostoma spp.



Test de Graham

Detección de huevos de Enterobiusvermicularis (oxiurus).

Toma de muestra con cinta de celulosa ogasa, a la mañana antes de levantarse ehigienizarse.

Al menos 4 muestras seriadas.

Cinta: sobre portaobjeto.Gasa: en Sc fisiológica, recuperando elsedimento por centrifugación.



Test de eclosión de huevos

Schistosoma spp.



Test de eclosión de huevos

Determinar viabilidad de huevos de Schistosoma spp. (miracidios vivos)

Basada en el fototropismo positivo de los miracidios liberados por los huevos.

Muestra: orina o materia fecal.



Recuento de huevos

Seguimiento de la evolución de una infestación, eficacia de un tratamiento.

Estimación de la carga parasitaria en el caso de:Ascaris lumbricoidesTrichuris trichiuraUncinarias

StollKato

Deposiciones de 24 hs4g heces + 15 ml NaOHRecuento en 150 µl

Deposiciones de 24 hs50 mg en porta - cubrir con papel celofán cglicerina, agua y verde de malaquita.Dejar 1h para que se aclare# huevos contados x 100 =

#huevos/4 g de heces



Técnica de cultivo

Cultivo de larvas filariformes: Strongyloidesspp., Necator spp., Ancylostoma spp.

Imita las condiciones de la naturaleza.

Coloraciones permanentes(colorante tricrómico de Gomori;

hematoxilina férrica; Ziehl Nelsen; Ziehl Nelsen modificada)

Colorante tricrómico de Gomori

Tinción de muestras frescas y fijadas.Observaciones:Fondo: verde,Citoplasma de protozoarios: azul – púrpuraCromatina: rojo o rojo - púrpura

Entamoeba histolytica – dispar- quistes

Entamoeba histolytica –GR en el citoplasma - trofozoíto

Entamoeba coli - quiste

Coloraciones permanentes(colorante tricrómico de Gomori;

hematoxilina férrica; Ziehl Nelsen; ZiehlNelsen modificada)

Hematoxilina férrica deHeindenhain

Método largo y engorroso.Observaciones:Tinción azul grisáceaNúcleos e inclusiones más

oscuras.

Tinción de muestras frescas y fijadas. D. fragilis

* Hematoxilina 5% p/v, EtOH 50%v/v, sulfato de amonioferroso 5% p/v, sulfato de amonio férrico 5%p/v, HCl cc5%v/v.

D. fragilis trofozoítos deGiardia intestinalisQuistes de Entamoeba

histolyticaI. buetschlii trofozoíto

Tinciones-coloraciones transitorias(lugol; solución iodoidura de D’Antoni;

MIF; azul de metileno)

Lugol

Entamoeba histolytica - quiste

E. coli - quiste

Blastocystis hominis - quiste

Clasificación

Platelmintos

Nematelmintos

Trematodes

Cestodes

Nematodes

Helmintos

Cestodes• Los cestodes son gusanos platelmintos que tienen

forma acintada• Son hermafroditas y no poseen aparato digestivo• El alimento lo absorben a través de la cutícula

externa• La cabeza o Escolex es el órgano de fijación, poseen

ventosas y en ocasiones ganchos• Ciclofilideos: losproglotides no presentan orificios de

postura• Pseudofilideos: los huevos se eliminan al exterior en

forma inmadura, a través de un orificio de postura

Taenias spp

hymenolepis nana

CESTODE

Hymenolepis diminuta

Nematodes

• Son gusanos cilíndricos• Tienen sexo separados: Dioicos, en general los

machos son mas pequeños que las hembras• La parte posterior de los machos termina en

forma enrollada, las hembras en forma recta• El gusano adulto tiene cutícula• Tienen migración larval a través de los tejidos

corporales

Enterobius Vermicularis

necator americanus y ancylostoma duodenale

Ascaris Lumbricoides

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