Metodos de Diagnostico Infecciones Virales 2012

8/3/2019 Metodos de Diagnostico Infecciones Virales 2012

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METODOS DE DIAGNOSTICODE LAS

AFECCIONES VIRALES

Prof. Aurico Sousa Fonseca

Ctedra de Microbiologa e Inmunologa FCV-UCV


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CUANDO?

Pronostico y tratamiento en clnica

Certificacin de zona libre

Aplicacin de tecnologa: Inseminacin Artificial

Transplante de embriones

Transplantes de tejidos, etc.

Programas de erradicacin

Control de zoonosis


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ESPCIMEN

Tejido, liquido o secrecin deinters

Utilizar: Hisopados, jeringas oenvases estriles

Sangre para serologa

En ocasiones, medios de transporteespecial


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ALMACENAMIENTO Y TRANSPORTE

Envo inmediato

Protegido

Refrigerado (4C) Internacional: Hielo seco y bien

protegido

Historia clnica completa


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PROCESAMIENTO INICIAL


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LOS MTODOS DEBEN SER:

Rpidos

Simples

Sensibles

Especficos Bajos costo


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MTODOS DE DIAGNSTICOS


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DETECCIN DEL VIRUS,SUS CONSTITUYENTES OSU CIDO NUCLEICO


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AISLAMIENTO Medios de cultivo:

Huevos embrionados

Animales de laboratorio

Cultivo de tejidos


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Cultivos celulares Efecto citoptico Deteccin por IF

y otras pruebas

Animales de laboratorio

Enfermedad

ParlisisEncefalitis

Muerte

Otros efectos

Identificacin

por pruebasserolgicas

con antisueros

especficos

Huevos embrionados

Deteccin por Microscopa

Electrnica y/o otras

Pruebas serolgicas


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HUEVOS EMBRIONADOS

Embriones 5-14 das

Muy utilizados en virus aviares

Varias vas de inoculacin


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HUEVOS EMBRIONADOSInoculacin corioalantoidea

Inoculacin Amnitica

Inoculacin Saco Vitelino

Inoculacin Alantoidea

MembranaCorioalantoidea

Saco Vitelino

CavidadAlantoidea

Albumina

CscaraCavidad Amnitica

Saco de aireo

Membrana de la Cscara


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Animales

Poco tiles en diagnostico

Manejo costoso y engorroso

Se utilizan en investigacin,produccin de antisueros yanticuerpos monoclonales


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Cultivo de Tejidos

Ideales para:

Aislamiento viral

Desarrollo de vacunas

Estudio de replicacin y morfologa

Se emplean desde 1949


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Cultivo de Tejidos


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EVIDENCIA DEL CRECIMIENTO VIRAL


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Deteccin del Virus

Microscopia Electrnica

Tcnicas Inmunolgicas

Tcnicas de deteccin del genomaviral


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Microscopia Electrnica

Mtodo obvio de identificacin

Reconoce morfologa tpica

Baja sensibilidad

107 viriones por ml

Solo laboratorios de referencias yde investigacin.


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Deteccin del Genoma


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Hibridacin

Se basa en el proceso natural deapareamiento de basescomplementarias

Se forman estructuras de doblehebra de gran estabilidad quepueden ser: Hbridos homodplex

ADN-ADN o ARN-ARN

Hbridos heterodplex ADN-ARN


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Amplificacin del Genoma Viral

Mtodo: Reaccin en Cadena de laPolimerasa (PCR)

Objetivo: Amplificar un gen ofragmentos de ADN presente en unamuestra sin purificacin previa delespcimen.

Permite: Detectar virus donde antes era imposible Altamente sensible y especifico. Utiliza cantidades mnimas de muestras Requiere porciones mnimas de genoma

(< 100pb)


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PCR


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Serologa Viral

Deteccin del Virus a travs de laRespuesta Inmune Determinacin indirecta de infeccin

viral por determinacin de presencia de

anticuerpos Tcnicas empleadas:

Elisa Western inmunoblot

Neutralizacin viral Hemaglutinacin e inhibicin de la

hemaglutinacin Inmunoflorescencia

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