Instituto Tecnológico de Cd. Altamirano

Excelencia en Educación Tecnológica

SUBSECRETARÍA DE EDUCACIÓN SUPERIORDIRECCIÓN GENERAL DE EDUCACIÓN SUPERIOR TECNOLÓGICA

UNIDAD ll

MICROBIOLOGIA

LIC. EN BIOLOGÍA

ALUMNO:

JESUS HERRERA BELTRAN.

ERIKA OROPEZA BRUNO.

MAESTRA:

Semestre 4

Grupo : 506

ESTERILIZACIÓN.

Los procesos de esterilización o desinfección son diariamente llevados acabo, no solamente en el laboratorio, donde son fundamentales para evitar la contaminación de medios, cultivos, placas etc.

Se utiliza una temperatura adecuada para la destrucción de esos microorganismosLa temperatura aproximada es de 100 grados centígrados

Los métodos físicos utilizan técnicas como la microinyección con una fina aguja de cristal y la electroporación (exposición de las células aun choque eléctrico).  La microinyecciónresulta ser una técnica muy potente y eficaz, ya que 1 de cada 5 células consigue incorporar el DNA foráneo de forma permanente. El problema de esta técnica es que exclusivamente se puede inyectar una célula cada vez, y por tanto no es el más recomendable para una terapia médica debido a que es demasiado laboriosa como para obtener un número de células indicadas (suficientes, aproximadamente un millar o más) para que el tratamiento tenga éxito. 

Metodos fisicos.

El calor seco es un método térmico de esterilización y su efecto en los microorganismos es equivalente al horneado. El calor cambia las proteínasmicrobianas por las reacciones de oxidación y crea un medio interno árido, así quema a los microorganismos lentamente.1 Una simple analogía es la lenta carbonización de papel dentro de un horno caliente, aunque la temperatura permanezca por debajo del punto de ignición del papel.

El calor húmedo es un método térmico de esterilización y mata microorganismos por la coagulación de proteínas (desnaturalización), lo que es causado por la rotura de los puentes de hidrógeno que son los que mantienen a las proteínas en su forma tridimensional las proteínas por lo tanto regresan a su estructura secundaria, se coagulan y se convierten en proteínas no funcionales.

METODOS QUIMICOS.

Métodos químicos de esterilización son los que involucran el empleo de Sustancias letales para matar los microorganismos tales como el oxido de etileno y el perioxido

Ejemplos:

FormolEtanolAlcoholesOxido de etilenoaldehidosEsta forma de esterilizacion es

que algunas sustancias quimicas tienen la capacidad de Promover una o mas reacciones quimicas capaces de producir la muerte de algunos microorganismos.

Un medio de cultivo consta de un gel o una solución que cuenta con los nutrientes necesarios para permitir, en condiciones favorables de pH y temperatura, el crecimiento de virus, microorganismos, células, tejidos vegetales o incluso pequeñas plantas. Según lo que se quiera hacer crecer, el medio requerirá unas u otras condiciones. Generalmente se presentan desecados en forma de polvo fino o granular antes de ser preparados; ya preparados pueden encontrarse en estado sólido, semisólido o líquido. El objetivo último del cultivo es variado: antibiograma, identificación, multiplicación.

MEDIO DE CULTIVO.

SEGÚN SU COMPOSICION.

Se dividen en varios están los sintéticos, empíricos y semisinteticos.

Empíricos: su composición por contener sustancias orgánicas.

Sintéticos: por contener sustancias químicas definidas.

Semisinteticos: aparecen moléculas de naturales hidrolizadas.

COMPOSICIÓN DE LOS MEDIOS DE CULTIVO.

Los mas utilizados por sus contenidos y composición:

GelatinaAgarPeptonaSangre SueroExtracto de levadura Entre mas

PREPARACION Y CONTROL.

Pesar los reactivos necesarios para preparar 250 mL de medio (por equipo). Ponerlos en el matraz.2. Con la probeta, medir 250 mL de agua destilada y añadirla al matraz con el polvo. 3. Poner el matraz sobre el agitador con una mosca para que la suspensión se mezcle homogéneamente.4. Cuando la solución esté homogénea, retirarla del agitador, sacar la mosca y tapar con un pedazo de aluminio.5. La autoclave estará prendida previamente por la profesora. Con su ayuda, introduce tu matraz en el interior de la autoclave. Ciérrala siguiendo las indicaciones de la maestra.

En Microbiología se entiende como siembra al proceso mediante el cual se llevauna porción de una población de microorganismos (inóculo), de un cultivo crecido aun medio nutritivo para su crecimiento.

MÉTODOS DE SIEMBRA Y AISLAMIENTO

La siembra puede ser :▪ Por inoculación Por estrías simples ,Por dispersión o agotamiento, Por puntura, extensión.

Es lograr aislar colonias, por eso estas estrias se hacen con la misma cantidad de muestra que se tomo inicialmente con el asa, algunas personas acostumbran flamear el asa despues de hacer sus primeras estriasy se van haciendo de tal forma que la cantidad de muestra en cada estria va ser siempre menor, y eso nos garantizara el crecimiento de colonias.

ESTRIAS CRUZADAS.

TEMPERATURA..- Según su comportamiento frente a la temperatura, los organismos pueden ser térmofilos, mesófilos y psicrotrofos.

Congelación.- La congelación detiene el crecimiento de todos los microorganismos.

 RADIACION ULTRAVIOLETA.- La radiación ultravioleta produce una disminución exponencial en el número de células vegetativas o de esporas vivas con el tiempo de irradiación. Por tanto se pueden calcular los valores D para la irradiación.

TEMPERATURA:

El aumento de la temperatura aumenta el poderbactericida del agente, siempre que no lo desnaturalice.Así para temperaturas bajas, por lo general, por cada10ºC de incremento de esta, la tasa de mortalidad seDuplica.

LOS MICROORGANISMOS NECESITAN LA PRESENCIA DE

AGUA en una forma disponible, para crecer y llevar a cabo sus funciones metabólicas. La mejor forma de medir la disponibilidad de agua es mediante la actividad de agua (aw). La aw de un alimento se puede reducir aumentando la concentración de solutos en la fase acuosa de los alimentos mediante la extracción del agua o mediante la adición de solutos. Algunas moléculas del agua se orientan en torno a las moléculas del soluto y otras quedan absorbidas por los componentes insolubles de los alimentos. En ambos casos, el agua queda en una forma menos reactiva.

Varios métodos de conservación utilizan estos conceptos. La deshidratación es un método de conservación de los alimentos basado en la reducción de la aw (lo que se consigue eliminando el agua de los productos). También el agregado de solutos desciende la aw lo cual se da durante el curado y salado, así como en el almíbar y otros alimentos azucarados.La aw de un alimento o solución se define como la relación entre la presión de vapor

del agua del alimento (p) y la del agua pura (po) a la misma temperaturaA medida que una solución se concentra, la presión de vapor disminuye y la aw desciende a partir de un valor máximo de 1 para el agua pura (en ausencia de

capilares o fuerzas de adsorción). La aw está relacionada con el punto de congelación

y con el de ebullición así como con la humedad relativa en equilibrio (HRE) y la presión osmótica.

 la presión hidrostática es la fuerza por unidad de área que ejerce un liquido en reposo sobre las paredes del recipiente que lo contiene y sobre cualquier cuerpo que se encuentre sumergido, como esta presión se debe al peso del liquido, esta presión depende de la densidad(p), la gravedad(g) y la profundidad(h) del el lugar donde medimos la presión(P)P=p*g*h

PRECISIÓN HIDROSTÁTICA.

La acidez de una sustancia es el grado en el que es ácida. El concepto complementario es la basicidad.La escala más común para cuantificar la acidez o la basicidad es el pH, que sólo es aplicable para disolución acuosa

La acidez de una sustancia se puede determinar por métodos volumétricos. Ésta medición se realiza mediante una titulación, la cual implica siempre tres agentes o medios: el titulante, el titulado (o analito) y el indicador

Neutofilo: ph optimo de 7, bacterias patogenas

Acidofico: ph optimo de 7 menor hongos

Basofilo: ph optimo mayor 7 ejemplo suelos y aguas ricas en carbonatos.

PH:

Entre otras cosas determina el grado de ionización delagente, siendo en general la forma no disociada la que

atraviesa mejor las paredes del microorganismo

DE ACUERDO AL OXIGENO.

Algunas bacterias requieren de oxigeno y se clasifican en :

Aerobias: dependen del oxigeno para su crecimiento y desarrollo.

Anaerobias: facultativos no requieren de oxigeno ejemplo las levaduras.

Microaerofilos: solo se pueden desarrollar en una presencia baja de Tensiones de oxigeno menor de 12 % y altas tensiones de oxigeno.

RADIACIÓNLas radiaciones ultravioleta (uv), Rayos X y radiación g producen efectos esterilizan tés (destrucción de microorganismos) al alterar las proteínas, membranas, ácidos nucleídos y al generar radicales libres del tipo OH· y H·. El tratamiento matemático de la destrucción de microorganismos por estos procedimientos es similar al descrito para el uso de altas temperaturas. Hay que considerar, sin embargo, los poderes de penetración de los diferentes tipos de radiación. Así, por ejemplo, la radiación uv tiene un poder de penetración muy bajo y, por consiguiente, se utiliza para esterilizar superficies, mientras que la radiación X o log tiene poderes de penetración mucho mayores.

Generalmente se reporta la morfología colonial tal como uno la percibe, por ejemplo si se ves que las colonias bacterianas son como puntitos, pues reportan que son puntiformes, si son lisas pues reportan que son lisas, si observas que están como moco, pues reportan que están mucosas, si su color es amarillento pues reportan que son de color amarillento,  y así sucesivamente., también puedes agregar características que consideres importante para identificarlas, por ejemplo el olor., Aun así checa las siguientes imágenes para orientarte.

MORFOLOGIA COLONIAL.

MORFOLOGIA MICROSCOPICA.

unque existe un enorme número de bacterias implicadas en procesos infecciosos todas ellas se parecen mucho entre si desde el punto de vista morfológico. Su forma individual y su agrupación sólo en raras ocasiones generan un diagnóstico definitivo.

La tinción de gram es muy frecuentemente el primer paso del esquema de identificación bacteriana, y por eso se realiza muchísimo. Cabe destacar que no siempre es fácil ubicar los aislamientos bacterianos en la clasificación de gram. Algunas bacterias no presentan una forma constante (pleomorfismo) y otras pueden cambiar sus propiedades de tinción según la antigüedad del cultivo.

Tinción Simple

Se utiliza un solo colorante, por lo que todas las estructuras celulares se tiñen con la misma tonalidad (Tinta china, Azul Metileno de Loeffler, Azul de lactofenol).El Hidróxido de potasio al 10% (solución de KOH) permite ver elementos de hongos ya que el KOH digiere parcialmente los componentes proteicos, por ejemplo de la célula huésped, pero no actúa sobre los polisacáridos de las paredes celulares de los hongos.

Tinción Diferencial

Se utilizan varios colorantes combinados. Las estructuras celulares se diferencian en función de los diferentes colorantes que fijan de acuerdo con su propia constitución química.Los ejemplos clásicos sería la tinción de GRAM o la de Ziehl-NeelsenEn la imagen: BGN y levaduras en una tinción GRAM

Sin Tinción No se utiliza ningún tipo de colorante.Es el montaje directo húmedo o examen en fresco: las muestras se extienden directamente sobre la superficie de un portaobjetos para su observación. El material que es demasiado espeso para permitar la diferenciación de sus elementos puede diluirse con igual volumen de solución salina fisiológica estéril. Se deposita suavemente un cubreobjetos sobre la superficie del mate

METODOS DE TINCION.

TÉCNICAS DE FIJACIÓN:

Se puede entender por técnicas de fijación dos conceptos: 1º la conservación de los tejidos, células y estructuras en el estado más aproximado posible a la materia viva; 2º la fijación de los colorantes con otras sustancias, para que sean estables, longevos, que penetren y tengan un poder cromógeno adecuado para el uso que se persigue. Al empleo de estas sustancias se le llama comúnmente, utilización de mordiente, aunque la palabra ‘mordiente’ tiene otra acepción radicalmente distinta, generando cierta confusión. Mordiente, también es el punto en que algunas sustancias, muy cercanas al secado, están ligeramente pringosas al tacto, pero no manchan, por ejemplo en la técnica del Mixtión.

LA TINCIÓN SIMPLE se basa en la afinidad del colorante por los componentes celulares. La tinción puede ser uniforme o presentar algunos gránulos en su interior. Utiliza un solo colorante (violeta de genciana, azul de metileno, fuscina diluida).La tinción simple se utiliza para destacar el microorganismo completo para que se vean las formas y las estructuras celulares básicas. En las tinciones simples se usa un único reactivo, que preferentemente es de tipo básico y contiene un cromógeno (compuesto que da color al tinte) con carga positiva, ya que la pared celular de las bacterias posee componentes con carga negativa que atraen y enlazan el cromógeno. Se utilizan solamente para incrementar el contraste; todas las células absorberán el colorante y quedarán teñidas del mismo color.