Nuevos Desarrollos Agilent en Técéc cas spect oscóp casnicas … · 2015-07-28 · Es unEs un...

Agilent TechnologiesAgilent TechnologiesThe measure of confidence

Nuevos Desarrollos Agilent en Técnicas Espectroscópicas éc cas spect oscóp cas

para la Industria Farmacéutica

Madrid, 25 de Octubre de 2011

Cristalografía RX

RMN/RMI

Microscopía FTIR

FluorescenciaCromatografía Preparativa

Caracterización estructural

C

Preparativa

ifica

ción

ació

n /Q

C

FTIRCromatografía FLASH

Pur

i

Iden

tific

a

GPC

Análisis elemental UV-Vis

ICP-MS ICP-OES

GPC

Huelva, 16 de Julio de 2010

Las técnicas de ICP-MS e ICP-OES son el nuevo Standard en el Análisis de Metales en MaterialesF é tiFarmacéuticos.

USP WebinarDec. 08, 2010

Análisis de metales traza en el sector farmaceutico

Las trazas de impurezas inorgánicas pueden disminuir la estabilidad y acortar la vida de los fármacos, además de suponer un riesgotoxicológico por si mismastoxicológico por si mismas.

El origen de las impurezas inorgánicas puede venir de:

– Catalizadores– Materias primas (plantas, proteínas animales, rDNA, etc.)– Excipientes (estabilizadores fillers binders agentes liberadores colores– Excipientes (estabilizadores, fillers, binders, agentes liberadores, colores,

recubrimientos, etc) – Equipos de producción como reactores, conductos, filtros, etc.

La U.S. Food and Drug Administration (FDA) y la British Pharmacopeia (BP) advierten fuertemente que estos problemas de contaminación(BP) advierten fuertemente que estos problemas de contaminacióndeben ser completamente investigados de forma periodica.


El método tradicional de análisis de metales es la USP<231>USP<231>La USP<231> es un test límite para metales pesados en las muestras

Es un ensayo cualitativo (o como máximo semicuantitativo) que indica elEs un ensayo cualitativo (o como máximo semicuantitativo) que indica el contenido de impurezas metálicas a través de precipitados de sulfuroscoloreados

• Los elementos para los que el método puede emplearse son; Ag, As, Bi, Cd, Cu Hg, Mo Pb, Sb y Sn.

- Método con más de cien años (circa 1905)- Método colorimétrico

- Ignición y calcinado de la muestra a 600°C (800°C EP)(800°C, EP)

- Ajuste de pH- Adición de H2S, tioacetamida- Se compara con un patrón de 0.001% (10 p p (

ppm) de Pb- Comparación visual (subjetiva) del color de

los sulfuros metálicos


USP<231> El paso de calcinación lleva a bajasrecuperacionesLa tabla muestra la pobre recuperación de algunos elementos debido a la alta temperatura de calcinación (600ºC) En algunos casos la pérdida es

recuperaciones

alta temperatura de calcinación (600 C). En algunos casos la pérdida escasi total Ej Hg y Sb. Esto puede mejorarse con digestiones ácidas.

Pharmacopeial Forum Stimuli Vol 34(6) [Nov Dec 2008]Pharmacopeial Forum Stimuli Vol. 34(6) [Nov.–Dec. 2008]


Cambios propuestos para la USP<231>

USP<231>USP<231> Al mismo tiempo la USP está desarrollandoUSP<231>USP<231> USP está desarrollandoun nuevo test parasuplementos dieteticos

USP<232> USP<233>USP<232> USP<233> USP<2232>USP<2232>USP<232> USP<233>USP<232> USP<233>Límite de impurezas Prodecimiento de análisis

elementales elemental

USP<2232>USP<2232>Contaminación elemental en suplementos dietéticos

ICP MSICP-MSICP-OESOtras técnicas tras validación

October 25, 2011

Límite de impurezas USP 232Además requieren especiación cuando losAdemás requieren especiación cuando los valores límite de As y Hg se sobrepasan

La USP<233> indica el procedimiento de preparación del ensayo.

La norma especifica que el ensayo ha de hacerse por ICP-OES o ICP-MShacerse por ICP OES o ICP MS


USP 233 Disolución de la muestra

•Disolución acuosa directa- Simple solubilización en matriz acuosa

• Disolución directa en medio orgánico.- Simple solubilización en matriz orgánica

•Digestión en viales cerrados- Se recomienda la adición de 0.5% HCl para

estabilizarel Hg

- Deshidratar y predigerir 0.5 g de muestra en 5 mL de ácido fuerte- Dejar reposar soltando un poco la tapa- Añadir 10 mL ode ácido fuerte y digerir en MW.

• Directo (desolvatado)- Empleado en métodos alternativos a ICP-OES / ICP-MS


Procedimiento Analítico: ICP-MS y ICP-OES• La calibración debería estar equiparada en ácidos• La calibración debería estar equiparada en ácidos

- Blanco, 0.5J, y 2J• Lavar con ácido diluído• Comprobar la deriva instrumental con el patrón 2J antes y p p ydespues de los análisis.

Recuperación ±20%

• Sin indicación de ISTD• Añadir estabilizador para Hg a las disoluciones diluídas•Consultar al fabricante para el uso adecuado del equipo


Agilent 7700x ICP‐MS con Octopole Reaction System (ORS3) L t ió i Off i 3º generación

Entrada de gas de dilución del

Lentes iónicas Off‐axis Entrada del gas de celda

Detector simultáneo dual rápido (109

3 generación Octopole Reaction System (ORS3)

de dilución del kit HMI

Sistema de

p (intervalo dinámico lineal)

Sistema de introducción de muestra de bajo flujo

Cuadrupolo hiperbólico de lt f i

Cámara de nebulización refrigerada por

l

alta frecuencia (3MHz)

Peltier

Sistema de vacío de alto

Generador de RF de 27MHz de frecuencia variable

rendimiento

Interfase de extracción (alta transmisión, tolerancia a matriz)

Introducción de muestra – HMI estándar en el 7700x

Introducción de muestra es:• Bajo flujo (tipicamente• Bajo flujo (tipicamente 0.15mL/min)

• Temperatura estabilizada (cámara del aerosol enfriada por Peltier)

Ahora kit HMI (High Matrix Introduction) como estándar en l d l d lel modelo 7700, permitiendo la configuración automática del plasma y mucha mayor p y ytolerancia a la matriz

Interferencias poliatómicas en matrices complejasIsotope Principal Interfering Species (mixed matrix)p p g p ( )45Sc 13C16O2, 12C16O2H, 44CaH,

32S12CH, 32S13C, 33S12C

47Ti 31P16O, 46CaH, 35Cl12C, 32S14NH, 33S14N49Ti 31P18O, 48CaH, 35Cl14N, 37Cl12C, 32S16OH, 33S16O50Ti 34S16O, 32S18O, 35Cl14NH, 37Cl12CH51V 35Cl16O, 37Cl14N, 34S16OH

“Plasma‐based” – derivados de combinaciones de elementos presentes en el plasma y en el agua/nítrico de las 52Cr 36Ar16O, 40Ar12C, 35Cl16OH, 37Cl14NH, 34S18O

53Cr 36Ar16OH, 40Ar13C, 37Cl16O, 35Cl18O, 40Ar12CH54Fe 40Ar14N, 40Ca14N, 23Na31P55Mn 37Cl18O, 23Na32S, 23Na31PH56Fe 40Ar16O, 40Ca16O57F 40A 16OH 40C 16OH

el plasma y en el agua/nítrico de lasmuestras.

e.g. – ArO+, ArH+, Ar2+, CO2+

57Fe 40Ar16OH, 40Ca16OH58Ni 40Ar18O, 40Ca18O, 23Na35Cl59Co 40Ar18OH, 43Ca16O, 23Na35ClH60Ni 44Ca16O, 23Na37Cl61Ni 44Ca16OH, 38Ar23Na, 23Na37ClH63Cu 40Ar23Na 12C16O35Cl 12C14N37Cl 31P32S 31P16O2

“Matrix‐based” – provienen de la matriz de la muestra – en combinación con elementos

Cu Ar Na, C O Cl, C N Cl, P S, P O264Zn 32S16O2, 32S2, 36Ar12C16O, 38Ar12C14N, 48Ca16O65Cu 32S16O2H, 32S2H, 14N16O35Cl, 48Ca16OH66Zn 34S16O2, 32S34S, 33S2, 48Ca18O67Zn 32S34SH, 33S2H, 48Ca18OH, 14N16O37Cl, 16O2

35Cl68Zn 32S18O 34S

presentes en el plasma y en el agua.

e.g. – Derivados de S (S2+, SO2+),

68Zn 32S18O2, 34S269Ga 32S18O2H, 34S2H, 16O2

37Cl70Zn 34S18O2, 35Cl271Ga 34S18O2H, 35Cl2H, 40Ar31P72Ge 40Ar32S, 35Cl37Cl, 40Ar16O273 40 32 40 33 35 37 40 16

poliatómicos con Cl (ClO+, ArCl+), con P (PO2

+, ArP+), derivados de C (ArC+, C2+)

73Ge 40Ar32SH, 40Ar33S, 35Cl37ClH, 40Ar16O2H74Ge 40Ar34S, 37Cl275As 40Ar34SH, 40Ar 35Cl, 40Ca 35Cl, 37Cl2H77Se 40Ar 37Cl, 40Ca 37Cl78Se 40Ar 38Ar80 40 40 40 40 32 16 32 16

Pueden ser variables en intensidad (en función de la matriz de la muestra), impredecibles si la matriz de la muestra es desconocida. 80Se 40Ar2, 40Ca2, 40Ar40Ca, 32S2

16O, 32S16O3matriz de la muestra es desconocida.


Principios del modo colisión con He y KED

ionespoliatómicos

Distribución de energías de analito

VoltajediscriminaciónElimina iones con baja energía(poliatómicos)

ionespoliatómicos

ionesanalito

e ion poliatómicointerferente con la misma masa

(poliatómicos)

ionesanalito

Energía Energy

La pérdida de energía en cada colisión con un átomo

A la entrada de la celda , analito y poliatómico tienenla misma energía.

A la salida de la celda, energías de los iones son distintas. Los poliatómicoscada colisión con un átomo

de He es la misma paraanalito y poliatómico, peropoliatómicos tienen mayor tamaño y sufren máscolisiones

La dispersión de energíasde ambos grupos de ioneses estrecha, debido al sistema ShieldTorch

distintas. Los poliatómicosson eliminados usando un voltaje de discriminación“escalón”.

CellEntrance

CellExit

colisiones.Iones analito tienensuficiente energía residual para superar el “escalón” de potencial; poliatómicos no (discriminación de enegías)(discriminación de enegías)*KED = Kinetic Energy Discrimination


Blanco de ácidos e IPA en modo No Gas

C l d l t i di t i i i d i t f t

2E5cps

Color del espectro indica que matriz origina cada interferente

Matriz mezcla de ácidos (5% HNO 5% HCl 1% IPA 1% H SO )cps Matriz mezcla de ácidos (5% HNO3, 5% HCl, 1% IPA, 1% H2SO4)

Todos los picos en modo NoGas son debidos a interferencias poliatómicas

Múltiples poliatómicos afectan a casi todas las masas–Interferencias son matriz-dependientes

45 50 55 60 65 70 75 80MassM d N GModo No Gas


Blanco de ácidos e IPA en modo He (Colisión)C l d l t i di t i i i d i t f t

2E5cps Matriz mezcla de ácidos (5% HNO3 5% HCl 1% IPA 1% H2SO4)

Color del espectro indica que matriz origina cada interferente

cps Matriz mezcla de ácidos (5% HNO3, 5% HCl, 1% IPA, 1% H2SO4)

TODAS las interferencias poliatómicas son eliminadas en modoHe (mismascondiciones de celda)

Y la sensibilidad?

Todas las interferencias poliatómicas son eliminadas en modo He

Y la sensibilidad?

45 50 55 60 65 70 75 80MassM d HModo He


Mezcla de ácidos adicionada (10ppb) en modo He

B ibilid d “ tt ” i tó i f t t d l l t

2E5cps Adición de 10 ppbs en 5% HNO3 5% HCl 1% IPA 1% H2SO4

Buena sensibilidad y “pattern” isotópico perfecto para todos los elementos

cps Adición de 10 ppbs en 5% HNO3, 5% HCl, 1% IPA, 1% H2SO4

Alta sensibilidad para todos los isótopos de todos los elementos en modo He

45 50 55 60 65 70 75 80MassM d HModo He


Cápsulas de gelatina

In‐sample spike levels Units Component Gel Capssa p e sp e e e slevels 0.5J J 1.5J

PPM As, Hg 0.75 1.5 2.25

Cd 0.25 0.5 0.75

Units Limit Gel Caps

75 As [He] µg/g 1.5 0.91111 Cd [NG] µg/g 0.5 0.011208 Pb [NG] µg/g 1 0.088

Pb 0.5 1 1.5

Cr‐V 5 10 15

Os‐Ir 1.25 2.5 3.75

[ ] µg/g

201 Hg [NG] µg/g 1.5 0.03952 Cr [He] µg/g 25 0.1363 Cu [He] µg/g 250 0.4355 Mn [He] µg/g 250 0 08

250X Dilutionlevels 0.5J J 1.5J

55 Mn [He] µg/g 250 0.0895 Mo [NG] µg/g 25 0.0360 Ni [He] µg/g 25 0.16105 Pd [NG] µg/g 10 0.012195 Pt [H ] / 10 0 000061

As, Hg 3 6 9

PPB Cd 1 2 3

Pb 2 4 6

195 Pt [He] µg/g 10 0.00006151 V [He] µg/g 25 0.095189 Os [NG] µg/g 10 0.064103 Rh [He] µg/g 0.000067

Cr‐V 20 40 60

Os‐Ir 5 10 1599 Ru [NG] µg/g 0193 Ir [NG] µg/g 0.017

J-Component Limit


7700x ICP-MS Calibrations for the “Big Four”

75As 111Cd

201Hg 208Pb

Recuperación de las adiciones en Cápsulas de Gelatina a nivel 1.0 J

80

100

120

GelCap 1 0J

20

40

60% RecoveryGelCap 1.0J

GelCap 1.0J

GelCap 1.0J

GelCap 1.0J

G lC 1 0J0

Analyte

GelCap 1.0J

GelCap 1.0J

Analyte

100

120

20

40

60

80

% RecoveryGelCap 1.0J

GelCap 1.0J

GelCap 1.0J

GelCap 1 0J

0

20 GelCap 1.0J

GelCap 1.0J

GelCap 1.0J

Analyte

USP Webinar

Amoxicilina (API)Average (n=3)

µg/gµg/day

Limitµg/day

Pass/Fail

Arsenic 0.075 0.075 15 Pass

Mercury 0.009 0.009 15 Pass

Lead 0.031 0.031 10 Pass

Cadmium 0.002 0.002 5 Pass

Avg (n=3) µg/g µg/day Limit (µg/day) Pass/FailAvg (n=3) µg/g µg/day Limit (µg/day) Pass/Fail

Chromium 0.194 0.194 250 Pass

Copper 0.032 0.032 2500 Pass

Manganese 0.014 0.014 2500 Pass

Molybdenum 0.013 0.013 250 Pass

Nickel 0.059 0.059 250 Pass

Palladium 0.002 0.002 100 Pass

Platinum 0 009 0 009 100 PassPlatinum 0.009 0.009 100 Pass

Vanadium 0.019 0.019 250 Pass

Rhodium 0.019 0.019

Total NMT 100

Pass

Ruthenium 0.001 0.001 PassTotal NMT 100

Iridium 0.005 0.005 Pass

Osmium 0.007 0.007 Pass

Serving size/day-1gCourtesy of Samina Hussain Exova CACourtesy of Samina Hussain, Exova CA


Arsenic Mercury Lead Cadmium Chromium Copper Manganese Molybdenum

Recuperaciones en Amoxicilina dopadaArsenic Mercury Lead Cadmium

Specification (J)(µg/g)

1.5 1.5 1 0.5

Avg. %Rec0 5J (n=3)

81RSD = 0 86

102RSD = 2 8

105RSD = 0 57

98RSD = 0 82

Chromium Copper Manganese Molybdenum

25“J” = 10

250“J” = 10

250“J” = 10

25“J” = 10

97RSD = 0 52

100RSD = 0 20

103RSD = 0 29

96RSD = 0 210.5J (n=3) RSD = 0.86 RSD = 2.8 RSD = 0.57 RSD = 0.82

Avg. %Rec1J (n=6)

86RSD = 2.4

102RSD = 0.83

105RSD = 0.27

99RSD = 1.7

Avg. %Rec 1 5J (n=3)

87RSD = 0 82

103RSD = 0 90

106RSD = 0 33

101RSD = 0 27

RSD = 0.52 RSD = 0.20 RSD = 0.29 RSD = 0.21

98RSD = 0.31

102RSD = 0.40

103RSD = 0.31

96RSD = 0.30

100RSD = 0 58

111RSD = 0 64

104RSD = 0 68

96RSD = 0 901.5J (n=3) RSD = 0.82 RSD = 0.90 RSD = 0.33 RSD = 0.27 RSD = 0.58 RSD = 0.64 RSD = 0.68 RSD = 0.90

Nickel Palladium Platinum Vanadium

Specification (J)(µg/g)

25“J” = 10

10 1025

“J” = 10

Rhodium Ruthenium Iridium Osmium

“J” = 2.5 “J” = 2.5 “J” = 2.5 “J” = 2.5

Avg. %Rec 0.5J (n=3)

99RSD = 0.40

99RSD = 0.20

100RSD = 1.4

93RSD = 0.43

Avg. %Rec 1J (n=6)

100RSD = 0.42

99RSD = 0.15

101RSD = 0.30

95RSD = 0.56

96RSD = 0.63

98RSD = 0.41

98RSD = 0.31

94RSD = 0.64

96RSD = 0.62

98RSD = 0.49

105RSD = 0.20

94RSD = 0.46

Avg. %Rec 1.5J (n=3)

102RSD = 0.51

105RSD = 0.19

102RSD = 0.32

95RSD = 0.54

102RSD = 0.22

98RSD = 0.38

106RSD = 0.47

95RSD = 0.30

Courtesy of Samina Hussain Exova CACourtesy of Samina Hussain, Exova CA


Análisis de especiación de Organo-Metálicos

Además de su empleo “directo” en el análisis de metales el ICP-MS puede ser utilizado como detector específico de una amplia gama de p p p gtécnicas de separación cromatográfica

• Electroforesis Capilar (CE)• Field-flow Fractionation (FFF)• Cromatografía iónica (IC)• Cromatografía Líquida (HPLC)• Cromatografía Líquida (HPLC)• Cromatografía de gases (GC)

Especiación de impurezas de elementos metálicos.Estudio de metaloproteínas.Análisis de las vías metabólicas, transporte, interaciones y degradaciónde fármacos organometálicos.


Análisis de impurezas por LC-ICP-MS en JM216

El LC-ICP-MS proporciona la sensibilidad y especificidad necesariospara analizar trazas de compuestos de Pt con el mayor rendimiento

JM216 La combinación de HPLC con ICP-MS

para analizar trazas de compuestos de Pt con el mayor rendimiento

JM216

permite la cuantificación de impurezas de Pt en el antitumoral JM216antitumoral JM216 hasta niveles de ng.

Junto con los picos de las

JM216impurezas se detectó el cis-amino-dicloro(ciclohexilamina) platino(II) a~165 ug/L (72 mg/g

Chromatogram for 2.29 mg/L of the main compound JM216 [Bis (acetato) amine-dichloro (cyclohexylamine) platinum (IV)], Agilent application P/N 5968-8185E

en el sólido).

Peter Galettis, University of Auckland, New ZealandOctober 25, 2011Agilent Restricted

Agilent ICP-OESThe world's most productive high performance simultaneous ICP-OESThe world s most productive high performance simultaneous ICP-OES

• El análisis simultaneo de hasta 73 elementosquímicos en cualquiera de sus líneas dequímicos en cualquiera de sus líneas de emisión

• Con una linealidad que va desde niveles de ppb o sub-ppb hasta %.

• Con tolerancia a todo tipo de matrices acuosas orgánicas acidos y sólidosacuosas, orgánicas, acidos y sólidos disueltos.

• Con tiempos de análisis desde los 35 segundos a los 3 minutos por muestra paraun análisis elemental completo

• Con todos los sistemas necesarios para• Con todos los sistemas necesarios paraevitar las interferencias y asegurar la exactitud de los resultados


AgilentAgilent 720720 ESES SIMSIMRobustez en las determinaciones

Red de Difracción

AgilentAgilent 720720--ES ES SIMSIM

Todos los componentes ó i fij h Antorcha

Prisma CaF2

ópticos son fijos, no hay componentes móviles.Elevada resolución (7pm)

Chip CCDEl sistema óptico está termostatizado a 35ºC +-0.1ºC para evitar derivas por0.1 C para evitar derivas por dilatación.

Detector sin sustancias

Policromador

orgánicas. Solo Silicio. Mantiene la sensibilidad de su respuesta durante toda la vida del equipo “Echelle”vida del equipo.Integración adaptativa Corrección simultanea del fondo

Gran Intervalo Dinamico Lineal en Axial

Interfase CCI Patentada

Interfaz de cono refrigerado

Apertura de la cola del plasma

FACT - Multicomponent Spectral FittingL lib í d i t f i d l ét d i f d l i ió• La librería de interferencias del método informa de la posición e intensidad de las posibles interferencias espectrales.

• El modelado FACT modelling puede desarrollarse antes o despues de los análisis. Mejora matemátocmente la resolución del equipo más allá de sus límites ópticos.

• El Ru 245.657 nm es típicamente la mejor línea para esta aplicación.Intensität

3000 Measured spectrumCalculated Cr

p j p p

2000

2500 Calculated Ru

1500 Cr 267.879Ru 267.876

700

1000

267.833 267.921267.860 267.880 267.900Wellenlänge (nm)

S: 1128 B: -1 SUV: -1268.773


FACT - Multicomponent Spectral FittingEuropean Pharmacopeia 6 0European Pharmacopeia 6.02.2.57. Inductively coupled plasma-atomic emission spectrometryDescribe las ventajas del spectral fittingDescribe las ventajas del spectral fitting


Valores límite de impurezas

Element Component Adjusted for 50x Prep DilutionLimit (µg/g) Limit (µg/g)

J .5J J 1.5JAs 1.5 0.015 0.03 0.045

Cd 0.5 0.005 0.01 0.015

Pb 1 0.01 0.02 0.03

Hg 1.5 0.015 0.03 0.045

Cr 25 0.25 0.5 0.75Cr 25 0.25 0.5 0.75

Cu 250 2.5 5 7.5

Mn 250 2.5 5 7.5

Mo 25 0 25 0 5 0 75Mo 25 0.25 0.5 0.75

Ni 25 0.25 0.5 0.75

Pd 10 0.1 0.2 0.3

Pt 10 0.1 0.2 0.3

V 25 0.25 0.5 0.75

Os,Rh,Ru,Ir NTE 10 total 0.025 0.05 0.075


Datos de recuperaciones


Repetitividad de las medidas de Amoxicilina

Element % RSDAs 3.73Cd 0.77Cr 0.69Cr 0.69Cu 0.48Hg 1.07Ir 0.43

Mn 0.44M 0 47Mo 0.47Ni 0.43Os 0.96Pb 2.15Pd 0.50Pt 0.40Rh 0.58Ru 0.34V 0.43


Sistemas Agilent-DUO

DOS Plataformas que combinan SIMULTANEAMENTE:ÓATOMIZACIÓN POR LLAMA

CORRECTOR DE FONDO POR DEUTERIOATOMIZACIÓN POR CÁMARA DE GRAFITOCORRECTOR DE FONDO POR EFECTO ZEEMAN

34

ICP-MS/OES/AA todas cumplen con la normativa21 CFR Part 11La solución Agilent es completa y asegura:• La seguridad de los datos• La seguridad de los datos

– Almacenamiento central seguro de los datos– Acceso de usuarios limitado a solo auttorizados

Soporte completo paratodos los requistos de

la 21 CFR Part 11

• Integridad de los datos– Almacenamiento automático y versionado

en un sistema cerrado

– Control completo de las versiones incluyendo los resultados de los informes originales

– Archivo integrado y almacenamiento a largo plazo en el sistema de g y g porganización integrado

• Trazabilidad de los datosAudit trail automatico independiente del usuario user independent– Audit trail automatico independiente del usuario user-independent

– Firma electrónica• Validacion (IQ/OQ) para todos los sistemas.a dac o ( Q/OQ) pa a todos os s ste as


Técnicas de identificación/QC

FTIRUV-Vis

Fluorescencia


Algunas ventajas del Nuevo Cary 60

Figure 1. Ten superimposed wavelength scans of methylene blue (20 ppm) solution in water. As can be seen, the scans overlay perfectly confirming the accuracy of the Cary 60 UV-Vis and the absence of any photobleaching of the sample

Figure 2. Scanning kinetics using fiber optics in situ of methylene blue under the exposure of a high-intensity UV lamp (Oriell 500 W Hg(Xe) lamp) over a period of 20 minutes within the range 400 to 800 nm. Labels refect maximum absorbance wavelengths

Figure 3. Scans of 50 µl samples of DNA at 4 °C at two concentrations showing the characteristic absorbance peak at 260 nm. Note peak absorbance of 1.0 absorbance units for 50 µg/mL DNA versus peak absorbance of 0 5 b b it f 25 / L DNA d t ti dh t th B L b t L (A l)


0.5 absorbance units for 25 µg/mL DNA, demonstrating adherence to the Beer–Lambert Law (A= εcl)

Accesorios para muestras líquidasFibras ópticas Intercambiadores

automáticos de cubetas

Test de disolución

Sippers

Tray cellSistemas de termostatizaciónpor peltier, y

it ió

Automuestreadores

agitación magnética

October 25, 2011Confidentiality Label

38

ANALISIS DE MUESTRAS EN DISOLUCIÓN: AGILENT 8453 DADAGILENT 8453 DAD

Características principales

Intervalo de trabajo: 190-1100 nmjTiempo de adquisición del espectro: 0.1 seg

SBW fijo de 1.0 nm

C l fCumple farmacopea.

Policromador: No partes móviles excepto el shutter.

Facil acceso al compartimento de pmuestras.

Intervalo fotométrico: 3.0 UA

Luz difusa:0 05% a 220 nm método ASTMLuz difusa:0.05% a 220 nm método ASTM

Ruido fotométrico: <0.0002 a 500nm y 0uA

Estabilidad fotométrica: < 0.001 a 500 nm


39

! Pero en ocasiones esto no es suficiente!

A veces, en estudios cinéticos, los blancos no son estables a lo largo del tiempo.

En ocasiones las muestras son complejas y es conveniente restar la contribución de la matriz.

Cuando se requiere una mayor resolución en los espectros, o medir con absorbancias altas o muy bajas, o medir por derivadas.con absorbancias altas o muy bajas, o medir por derivadas.

O es necesario un control perfecto de la temperatura.

O las muestras son muy turbias, incluso sólidas y dispersan la luz.

Es necesario mayor productividad en control de calidad

ESPECTROSCOPÍA DE MUESTRAS LIQUIDAS O SOLIDAS: VARIAN CARY 100/300SOLIDAS: VARIAN CARY 100/300

Características principalesp pCary 100 Cary 300

Monocromador simple doble

Intervalo trab. 190-900 nm 190-900 nm

Veloc Barrido 3000nm/min 3000nm/min

Resolución límite < 0.24 nm < 0.24 nm

Luz difusa < 0.02% < 0.0005%

Interv fotometrico 3 8 uA 5 0 uAInterv fotometrico 3.8 uA 5.0 uA

Ruido fotométrico <0.0008 a 2 uA <0.0008 a 2 uA

- < 0.008 a 5uA

Estab. fotométrica <0.0003 uA <0.0003uA


41

ESPECTROSCOPÍA DE MUESTRAS LIQUIDAS O SOLIDAS: VARIAN CARY 100/300

El SBW de el Cary 300es completamente variable

Rendijas variables

es completamente variableentre los 0.2 y 4 nm en pasos de 0.1nm

La misma muestra medida con SBW de 0.2, 2.0 y 4.0 nm.

Mínima luz difusa: Amplia linealidad fotométrica

Muestras de KMnO4 desde 10 mg/l a 450 mg/l

ESPECTROSCOPÍA DE MUESTRAS SOLIDAS O LIQUIDAS: VARIAN CARY 4000/5000/6000QU S C 000/5000/6000

Características principales

Cary 4000 Cary 5000 Cary 6000 Monocromador doble doble doble

Red de difracción 1200 l/mm a 250nm 1200 l/mm a 250nm 1200 l/mm a 250nm

300I/mm a 1192nm 600l/min a 1000 nm

D PMT PMT PbS f PMT A I G fDetectores PMT PMT y PbS smart ref PMT y AsInGa ref

Intervalo trab. 175-900 nm 175-3300 nm 175-1800 nm

Resolución < 0.048 nm < 0.048 nm <0.048nmResolución 0.048 nm 0.048 nm 0.048nm

Luz difusa UV < 0.00007% < 0.00007% <0.00007%

Luz difusa NIR <0.0002% a1420nm <0.00001 a 1420 nm

<0.00045 a 2365nm

Interv fotometrico >8 uA >8 uA >8uA


43

L b t i d í t i í i bi í i á i i á i

CAMPOS DE APLICACION: AGILENT CARY 4000/5000/6000Laboratorios de síntesis química, bioquímica, orgánica, inorgánica, polímeros, catálisis, materiales.

Identificación de compuestos.Análisis de estructura.Química de coordinación.Isómeros.Catálisis heterogenea “in situ”

Laboratorios de síntesis de materiales cerámicos pinturas recubrimientosLaboratorios de síntesis de materiales cerámicos, pinturas, recubrimientosAnálisis de color. Coordenadas cromáticas

Laboratorios de óptica, telecomunicaciones, electrónica, nuevas energías, aeronáutica, materiales.

Reflectividad/absortividad de componentes ópticos, paneles solares, plásticos, semiconductores nanotubos de carbonosemiconductores, nanotubos de carbono.Recubrimientos y grosores.Cálculos de índices de refracción.

44

Ventajas de Fluorescencia• Mayor Sensibilidad que UV/VIS (100-1000 veces)

• Mayor Selectividad.

• Solo el 10% de sustancias emiten fluorescencia• Espectros de Emisión y Excitación específicos.

•Dispersión Raleigh por los solutos de la muestra, que puede dar lugar a la aparición de picos fantasma, picos de segundo orden, etcp y p

• Separaciones de mezclas (Barridos sincrónicos).

• Información cualitativa del ambiente químico.

• PH.

etc

•Bandas de Raman del disolvente, que pueden confundirse con bandas de emisión del compuesto estudiado

• Polaridad local.• Viscosidad.• Temp

• Gran intervalo lineal

•Fotobleach. O destrucción del fluoroforo en el estado excitado

• Absorción: 3 órdenes• Emisión 6-7 órdenes

• Información multidimensional.

• 2 transiciones, doble información.

• Marcadores más seguros

• Sustituyen los marcadores radioactivos.y

• Técnica sencilla y económica

• Tanto los instrumentos como la operación es sencilla y económica.

45

Aplicaciones de FRET o RT FRET

TR FRET

46

Aplicaciones: Estudios de interacciones e hibridación de ácidos nucléicos o proteínas.

Caracteriación del proceso de hibridación por FRET de una proteínamarcada con un quencher (DABCYL) y una sonda de DNA marcada con

ácidos nucléicos o proteínas.

marcada con un quencher (DABCYL) y una sonda de DNA marcada con un compuesto fluorescente (5 y 6 carboxifluoresceína)

Cary Eclipse equipado con paquete biomelt (sistema multiceldas termostatizadocon peltier, controlador y sondas de temperatura. Software para el cálculo de temperaturas de melting (Tm) mediante el método de la derivada

I!NUEVO CARY 630!!: Flexibilidad en el MuestreoSolving problems through innovation…

Dialpath TumblIR630 Interfp 630 Interf

ATR diamanteReflectancia difusa Transmisión ATR diamanteReflectancia difusa Transmisión

INNOVADOR: Tecnología Revolutionaria para el Análisis de Muestras Líquidas con el “DialPath”Análisis de Muestras Líquidas con el DialPath

Paso óptico(μm) Interv. Conc. Tipico

30 100% - 0.1%50 50% - 500 ppm50 50% - 500 ppm100 20% - 100 ppm200 10 % - 50 ppm

AGILENT CARY 630 INNOVACION: Tecnología Superior en el Análisis de Sólidos con el ATR de Diamante de Agilent

Ser capaz de

el Análisis de Sólidos con el ATR de Diamante de Agilent

Mas de 2x veces el rendimiento de

energía que Menor ruido

conseguir espectrosde mejor calidad y más

rápidosO=

Lo quesignificag q

nuestroscompetidores

OAnalizar muestras queotros competidores no

pueden!

significa…

0 0030.003

0.002

0.001

0.000

Abso

rban

ce

Cary 630 Competidor A

3900 3800 3700 3600 3500 3400 3300 3200 3100 3000 2900 2800 2700 2600 2500

-0.001

-0.002

Wavenumber

A

Wavenumber

INTUITIVO: Visualización de los resultados, búsquedas y análisis cuantitativobúsquedas y análisis cuantitativo.

Los resultados de la búsqueda se muestran en la lista de Las concentraciones obtenidas se muestran en valorLos resultados de la búsqueda se muestran en la lista de espectros similares que se pueden superponer o mostrar

conjuntamente con el original

Las concentraciones obtenidas se muestran en valor numérico además de poder establecerse límites de

alarma para una interpretación más sencilla.

Línea de productos de FT-IR - Espectrómetros

Desarrollo de métodosInvestigación

Rutina con muestras

AGILENT 640-IRSistema “Mid-range”

complejas

AGILENT 660-IRSistema “Mid-range”

UP

Medidas en rutinaQA / QC

Investigación Desarrollo de métodosInvestigación fundamental y aplicada

A áli i d t l j

GRA

Análisis de muestras complejas

AGILENT 670-IRHi h E d

DABHigh End BLE Investigación básica


AGILENT 680-IR


High end Step-scan

Aplicaciones: Análisis de fármacos genéricosMid‐IR

0.05

0.04

Espectros superpuestos MIR de muestras de comprimidos de six cetirizineEn el estudio se empleó un comprimido de cada distribuidor

0.03

0.02

0.01

Absorba

nce

3200 2800 2400 2000 1600 1200 8003600

Wavenumber (cm‐1)

0.00

Near‐IR4386.60 55

Espectros superpuestos Near‐IR de seis comprimidos de six cetirizineEn el estudio se empleó un comprimido de cada distribuidor

6492.7 6269.1

5170.34775.3

0.55

0.45

0.35

0.25

bsorba

nce

0.15

0.05

Ab

11000 10000 9000 8000 7000 6000 5000 4000Wavenumber (cm‐1)Wavenumber (cm )

Aplicaciones: Análisis por PCA de los datos de Near-IR Near IRNear‐IR

6492 7 6269 1

5170.34775.3

4386.60.55

0.45

0.35ancia

6492.7 6269.10.35

0.25

0.15

0.05

Absorba

11000 10000 9000 8000 7000 6000 5000 4000Nº de onda (cm‐1)

CVS (D)

AB

C

Cada comprimido se corre portriplicado. Se analizaron 5 comprimidos distintos por

Rite Aid (E)

CVS (D) C

F

comprimidos distintos pordistribuidor de un total de 6 fabricantes.

A ‐ Tradaxine® (SBL Pharmaceutical)B ‐ Zyrtec® OTC (McNeal Consumer Health)C ‐ Zyrtec (Merck Medco—Pfizer)D ‐ Cetirizine (CVS—Dr. Reddy’s Lab)E ‐ Cetirizine (Rite Aid—Dr. Reddy’s Lab)

PCA d d d N IR

3 × 5 × 6 = 90 Espectros Near‐IR para el PCA clustering

( y )F ‐ Cetirizine (Walmart—Perrigo)

PCA de tres componentes de datos en Near‐IR

Línea de productos de FT-IR - MicroscopiosAGILENT 610 IR Mi AGILENT 620 IR MiAGILENT 610-IR Microscope

Detector individual & Dos detectores individuales

AGILENT 620-IR MicroscopeInfrared Imaging & detector

individual

A il t 610 IR A il t 620 IR55

Agilent 610-IRMid - High End

Desarrollo de métodosInvestigación Aplicada y fundamental

Agilent 620-IRHigh End

Desarrollo de métodosInvestigación aplicada y fundamentalg p y

Muestras complicadasg p y

Muestras difíciles de analizar

Inclusiones en guantes de látex

Alta concentración

1730/ 2920 cm-1 1165 cm-1

de estearatoen el defecto

Uniforme

1453 cm-1

distribución del poliisobutileno

Baja concentración de acrilinotriloy estireno en el defecto

3030 cm-1 1495 cm-12340 cm-1

PEO con 10% testosterona. 200,000 peso molecular, TCristalización = 50ºC

PEO 0 070 07 0 200 20 0 330 33 0 460 46 0 590 59 1 111 11 1 241 24

0.1 0.51468cm-1PEO

D O

0:070:07 0:200:20 0:330:33 0:460:46 0:590:59 1:111:11 1:241:24

no imageat t=00.0 0.9

2661cm-1

D2O

0.0 0.91662 cm-1TTN

1:371:37 1:501:50 2:022:02 2:282:28 2:412:41 2:542:54 3:063:062:152:15

En resumen

Agilent dispone a día de hoy de soluciones tanto para el análisis elemental, como para la caracterización general de muestras en los laboratorios farmacéuticos. Se trata de plataformas versátiles que permiten abordar una enorme cantidad de aplicaciones desde interfaces muy robustas y de alta productividad.

Con diseños basados en la innovación técnica, los bajos costes de mantenimiento y un manejo sencillo a la vez que

i d l j t i té iproporcionando las mejores prestaciones técnicas.

!! MUCHAS GRACIAS !!!! MUCHAS GRACIAS !!

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