OBJETIVOS:OBJETIVOS GENERALES:Conocer el protocolo de recuperacin de ovocitos de animales post mortem mediante la tcnica de aspiracin folicular.OBJETIVOS ESPECIFICOS:Conocer las tcnicas existentes en la recuperacin de ovocitos post mortem.Conocer la tcnica de aspiracin folicular realizados en bovinos post mortem.

REVISION BIBLIOGRAFIA:

Recoleccin de ovarios en animales post-mortem. La obtencin de ovarios provenientes de vacas sacrificadas en el matadero suministra una fuente abundante de ovocitos obtenidos a bajo costo provenientes de animales en diferentes estados del ciclo estral, que pueden ser madurados, fertilizados y cultivados in-vitro hasta estados del desarrollo embrionario. La recoleccin de ovocitos permite recuperar y aprovechar folculos no ovulatorios, que bajo condiciones fisiolgicas se tornaran en folculos atrsicos, con el fin de aprovechar al mximo el potencial gentico de una donadora por procedimiento in vitro. Se debe evaluar los factores externos que estn involucrados en la manipulacin de los ovocitos antes de realizar el cultivo, ya que estos pueden afectar la expresin de la competencia del desarrollo. La competencia de desarrollo se puede definir como la habilidad que tiene el ovocito fertilizado de formar embriones hasta estados avanzados (blastocito). Dentro de los factores externos que estn relacionados con la manipulacin de los ovarios, se encuentran la temperatura de almacenamiento de los ovarios y el tiempo de recoleccin de los ovocitos despus del sacrificio. El tiempo de recoleccin de los ovocitos de los ovarios igualmente influye en la competencia de desarrollo. (GORDON & LU, 1990), reportan que los ovocitos pueden permanecer en solucin salina a temperatura de 30 a 37 grados C. durante 8 horas sin llegar a afectar su calidad para los procesos de maduracin y fertilizacin in-vitro. Los ovocitos provenientes de ovarios recogidos en el matadero se pueden obtener por dos mtodos: mtodo de corte de ovarios y el mtodo de aspiracin con una jeringa de folculos superficiales mayores de 2 mm. de dimetro.Mtodo de corte:

Los ovarios se transportan al laboratorio en solucin salina suplementada con antibiticos, a temperatura entre 30-37 grados centigrados. En el laboratorio, se hace remocin del tejido adyacente, del cuerpo lteo y de sangre con lavados de solucin salina y alcohol. El mtodo de corte consiste en colocar cada uno de los ovarios en cajas petri que contienen el medio de cultivo y se corta la superficie y el interior de los ovarios a lo largo y a travs de este con cuchillas separadas por 2 mm.

Tambin llamado MTODO SLICING Consiste en la realizacin de cortes longitudinales y transversales con una hoja de bistur, en la superficie del ovario para liberar el contenido folicular en una placa de cultivo. Se observan los complejos cmulo- ovocito al microscopio y se seleccionaron aquellos quepresentenunaomscapasdelasclulasdelcmulosnoexpandidasyuncitoplasmaovocitario homogneo (Hernndez et al., 2012)Con las tcnicas descritas se recuperan similar cantidad de ovocitos por ovario y similar cantidad de ovocitos de calidad por ovario. Por tanto, es posible utilizar cualquiera de estas tcnicas de recuperacin, pero los ovocitos deben ser tomados de folculos de 2-8 mm de dimetro y solamente de aquellos que se encuentren en la superficie del ovario (Gmez etal., 2012)

Mtodo de aspiracin:

Se someten a este procedimiento, folculos superficiales visibles de 2-5 mm. de dimetro con jeringas de 5-10 cc. y aguja calibre 18G. Las investigaciones realizadas por Carolan y col., Hamano y Kuwayama, Lonergan y col., indican que con el mtodo de corte de folculos se obtiene una mayor proporcin de ovocitos y de excelente calidad para estudios in vitro comparado con el mtodo de aspiracin. La disminucin de las tasas de recuperacin y produccin de embriones en el caso de aspiracin folicular puede estar asociado a efectos nocivos sobre las capas de las clulas del cmulus ejercidas por las fuerza de aspiracin. Por otra parte, el mayor nmero de ovocitos obtenidos por el mtodo de corte. Puede estar explicado por la recuperacin de ovocitos provenientes de folculos menores de 2 mm. de dimetro que estn en el interior del folculo; sin embargo, Arlotto y col., (1996) sostienen que estos ovocitos tienen poco potencial para sufrir maduracin meitica y desarrollo embrionario comparado con los ovocitos