PRUEBAS DE COMPATIBILIDAD

INTRODUCCION

Las pruebas de compatibilidad son una serie de ensayos realizados sobre la sangre del presunto donante y del presunto receptor de una transfusión sanguínea que tiene por objeto detectar cualquier incompatibilidad existente entre ambas.

Este procedimiento incluye: la prueba cruzada mayor y la prueba cruzada menor. En la mayor se enfrentan los G.R. de donante con el suero del receptor, y en la prueba cruzada menor se hace reaccionar el suero del donante con los G.R. del receptor.

OBJETIVO

El propósito de las pruebas de compatibilidad es prevenir la transfusión de sangre incompatible.

Estas pruebas tienen como objetivos:

a) Garantizar que los G.R. a transfundir sean ABO y RH compatibles con el receptor.

b) Detectar anticuerpos en el suero del receptor que estén dirigidos contra antígenos de los G.R. del donante.

LIMITACIONES

*No garantizan la sobrevida normal de los G.R. transfundidos. *No previenen la inmunización del receptor. *No detectan todos los errores en la clasificación del sistema ABO. *No detectan errores en la clasificación del factor Rh a menos que el suero contenga anticuerpos anti-Rh. *No previenen reacciones hemolíticas tardías secundarias a respuestas anamnésicas a antígenos contra los cuales el paciente había sido previamente inmunizado. *No detecta anticuerpos anti-leucocitarios, anti-plaque- tarios o contra proteínas del suero. *No previenen reacciones febriles o alérgicas.

PROCEDIMIENTOS

1. Clasificación del receptor: * Determinar los grupos ABO / Rh. Si hay discrepancias deben resolverse antes de iniciar las pruebas cruzadas.

* Realizar la prueba de coombs directa en los G.R. del receptor para detectar auto-sensibilización eritrocítica Si es positiva, facilita el dx. del caso, si es negativa, no habrá necesidad del empleo del autocontrol en la Prueba cruzada.

* Investigar en el suero la presencia de anticuerpos irregulares, empleando células detectoras o “ células pantallas ”.

2) Selección de la sangre adecuada para la transfusión

* Del refrigerador seleccionar la unidad de sangre a transfundir de acuerdo al grupo ABO y Rh del paciente.

* Separar uno de los segmentos sellados integrado a la unidad de sangre y colocarlo en un tubo de vidrio e identificarlos.

* En esta muestra, verificar los antígenos ABO y Rh. No es necesario determinar sub-grupos u otros antígenos, a menos que el receptor contenga anticuerpos irregulares.

3) Realización de la Prueba cruzada

En la prueba cruzada mayor, se pretende detectar la presencia, en el suero del receptor, Ac dirigidos contra los G.R. del posible donante, lo cual produciría una destrucción prematura de éstos y, al menos un descenso del rendimiento de la perfusión hemática.

Vale señalar que si la prueba cruzada mayor es importante para la transfusión, no menos lo es la prueba de detección de anticuerpos, que algunos autores la emplean como parte de la rutina del estudio de compatibilidad.

ANTICUERPOS IRREGULARES

Anticuerpos irregulares son aquellos que están dirigidos contra grupos sanguíneo que no se determinan de una forma rutinaria.

Los aloanticuerpos irregulares son detectados, de una forma más precisa por el uso de paneles de hematíes fenotipados. Esto último consiste en realizar la prueba cruzada mayor pero sustituyendo los G.R. del donante por G.R. del grupo O que expresan los antígenos más corrientes de los otros sistemas de grupos sanguíneos.

METODOLOGIA

MATERIAL NECESARIO Gradilla Tubos de ensayo Pipetas de 1.0 y 10 ml. Baño maría Centrífuga y relojREACTIVOSSuero fisiológico Albumina bovina al 30 %MUESTRASuero del receptor Suspensión al 5 % de G.R. del donante, preferiblemente lavados

TECNICA DE LA PRUEBA CRUZADA MAYOR

FASE I

1) Colocar en el tubo de 10 x 75 ml. dos gotas del suero del receptor.

2) Agregar una gota del G.R. lavados suspendidos en S.S. al 5 %, centrifugar.

3) Observar el sobrenadante para detectar hemólisis, desprender del fondo del tubo las células para observar aglutinación. Anotar los resultados

FASE II

1) Agregar dos gotas de albúmina bovina, mezclar, incubar a 37oC durante 15 a 30 minutos.

2) Centrifugar. Observar el sobrenadante para hemólisis, desprender suavemente el botón de células del fondo del tubo y anotar resultados.

FASE III

1)Lavar cuatro veces con S.S. para realizar Coombs indirecto.: agregar dos gotas del reactivo antiglobulina poliespecífico y mezclar. Centrifugar, ver aglutinación. 2)Agregar una gota de células control de coombs si la prueba es negativa: centrifugar, leer, anotar resultados. Esta prueba debe ser +, de lo contrario resultados son inválidos. Repetir la prueba.

INTERPRETACION

Existe compatibilidad si no se observa hemólisis o aglutinación en ninguno de los pasos de la prueba.

El Autocontrol

Es una prueba que se realiza simultáneamente con la prueba cruzada. En un tubo se coloca dos gotas del suero del receptor + una gota de G.R. del mismo receptor, y se siguen los mismo pasos que la prueba mayor.

Interpretación: Permite detectar una prueba de Coombs directa positiva, así como la presencia de roleaux u otras anormalidades que pueden causar problemas en la interpretación de la P. cruzada mayor.

PRUEBA CRUZADA MENOR

Es el procedimiento inverso de la prueba cruzada mayor, en donde las células de receptor se ponen en contacto con el suero del donante.

No es necesario realizarla si se han investigado anticuerpos irregulares en el suero del donante conjuntamente con el procedimiento de clasificación del ABO / Rh

PRUEBAS CRUZADAS IMCOMPATIBLES

INTRODUCCION

La mayoría de las pruebas de compatibilidad no muestran discrepancias y las sangres cruzadas son clasificadas como serológicamente compatibles.

Sin embargo, ocasionalmente se presentan incompatibilidades que deben resolverse prontamente.

Antes de iniciar el trabajo de laboratorio para la resolución serológica de la incompatibilidad, es importante hacer una evaluación de la Historia Clínica que incluya:

HISTORIA CLINICA

Diagnóstico: Las discrepancias encontradas a menudo reflejan una condición secundaria relacionada con el proceso primario por lo que es necesario obtener una información más precisa de la etiología para poder establecer una correlación entre los hallazgos seroló –gicos y la enfermedad del paciente.

Antecedentes: Suministran información valiosa: edad, sexo, raza, intervenciones quirúrgicas, embarazos.

Antecedentes transfusionales, siendo importante los anticuerpos adquiridos de forma pasiva.

Medicamentos.-

CORRELACION ENTRE EL PROBLEMA SEROLOGICO Y CONDICIONES CLINICAS

Coombs directo positivo Anemias hemolíticas auto e aloinmune

Poliaglutinación ( Ag. T ) Sépsis Antígeno B adquirido Inf. Bacterianas, Ca. Colon , obstr. Intest.

Anticuerpos calientes carcinomas,linfomas, timomas, colagenosis

Anticuerpos frios Crioaglutininas, neumonia, linfomas, virosis,

Anticuerpos irregulares Transfusiones pasadas o recientes, transfusión deplasma con aloanticuerpos

Antígenos A / B deprimidos exanguíneotransfusión, Plasmaféresis, neonatos, leucemias, Q.T.

Ausencia de anticuerpos ABO Inmunodeficiencias, agammaglobulinemia, neonatos y lactantes < 3 meses, ancianos

Rouleaux Mieloma Múltiple, gelatina de Wharton

Aloanticuerpos Embarazadas, pólitrans-fundidos, neonatos

Campo mixto Quimeras, TMO, hemorragia feto-materna o materno

Anticuerpos inmunes Neonatos con enf. hemolítica Anti-AB embarazadas del grupo O

Drogas o medicamentos Metil-dopa, L-Dopa, penicilina, cefalosporina,

Quinina, quinidina

GUIA DE TRABAJO

1. Confirmar la presencia de discrepancias serológicas pasadas y actuales, relacionadas con:

Discrepancias ABO y / o Rh Anticuerpos irregulares Reacciones transfusionales graves

2. Descartar la posibilidad de un error humano

3. Demostrar si el anticuerpo causante de la incompatibilidad es un autoanticuerpo o un aloanti-cuerpo. Esta distinción se estableced en la práctica observando la reacción de autocontrol, que será negativa en presencia de aloanticuerpo.

FIN DE LA CLASE

4. En que fase de la prueba cruzada la reacción de aglutinación es más evidente ?

a) Fase de centrifugación inmediata ( Fase I ) : El autocontrol y pantallas I-II están negativos.

* Sugiere incompatibilidad ABO. Se deben revisar los grupos del donante y receptor.

* Si el receptor es A o AB y el donante es A, sugiere que el receptor puede ser A2 o A2B y contener anti-A1 en su suero. Se debe clasificar a ambos con lectina o suero anti-A y verificar la especificidad del anticuerpo con células A2 a las que no debe aglutinar.Dicho anticuerpo no tiene importancia clínica sino reacciona a 37oC

En que fase de la prueba cruzada la reacción de aglutinación es más evidente ?

b) Aglutinación en las Fases II o III ( albumina o antiglobulina )

El autocontrol es negativo pero las pantallas I y/o II son positivas: Sugiere la presencia de un aloanti -cuerpo caliente. Se debe proceder a su identificación y cruzar nuevas unidades de sangre hasta encontrar las necesarias compatibles .

5. Porcentaje de donantes incompatibles.

a) Si todas las pruebas han resultado incompatibles y ambas pantallas fuertemente aglutinadas, pero el autocontrol negativo, puede tratarse de un anticuerpo contra un antígeno de alta incidencia, o de múltiples anticuerpos presente

b) Si solo un donante es incompatible pero las pantallas y el autocontrol resultaron negativas, puede tratarse : * Un anticuerpo dirigido contra un antígeno de baja incidencia que solo está presente en los G.R. de ese donante. * El problema puede residir en el donante. Se le debe practicar un Coombs directo, y si es positivo su sangre no debe ser usada para transfusión.

6) ¿ Todos los donantes son aglutinados con la misma intensidad ?

Si la intensidad de la reacción no es igual en todas las células , sugiere:

* Una mezcla de anticuerpos, cada uno con diferente potenciaEfecto de dosis ( anti-M, anti-c, aanti-C anti-e, anti-E ).

Si la intensidad es fuertemente uniforme, puede corresponder a uno o varios anticuerpos con alto título.

7) Prueba cruzada ioncompatible, autocontrol positivo ( Coombs directo ) y pantallas positivas:

+ Corresponde a un autoanticuerpo en el paciente, el cual reacciona con antígenos presentes en las células autólogas y extrañas.

8) ¿ Tiene el receptor la prueba de Coombs directa positiva, sin anticuerpos irregulares demostrables en el suero ? :

* Anemia hemolítica autoinmune * Reacción hemolítica tardía *Efecto droga

9) ¿ La prueba cruzada es incompatible en las tres fases, al igual que las pruebas pantallas, pero el Coombs directo es negativo. Sugiere: * Mezcla de anticuerpos fríos y calientes * Un anticuerpo frío que fija el complemento

10) Anormalidades en el suero del paciente

9) Contaminantes en el sistema conducen a reacciones falsas positivas

DISCREPANCIAS EN LA PRUEBA MENOR

1) Incorrecta clasificación ABO del donante y receptor

2) Presencia de un anticuerpo en el plasma del donante que reacciona con su correspondienre antígeno en el receptor

3) El receptor tiene Coombs directo positivo

4) Contaminantes en el sistema

PRUEBA CRUZADA INCOMPATIBLE

ORIENTACION PARA LA SOLUCION DEL PROBLEMA

1. Incorrecta determinación de los antígenos ABO

2. Aloanticuerpos

a. Pantallas positivas. Anticuerpos contra: Antígenos de alta incidencia Mezcla de anticuerpos Antígenos de bvaja incidencia

b. Pantallas negativas: anti-A1

3) Autoanticuerpos ( autocontrol positivo )

5) Autosensibilización de los eritrocitos del donante

6) Anormalidades en el suero del paciente:

* Hipergammaglobulinemia ( roleaux ) * Presencia de dextranos * Presencia de otros expansores del plasma

7) Contaminantes en el sistema

* Tubos sucios * Contaminación bacteriana de la muestra * Presencia de fibrina * Contaminación de la solución salina