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Instituto de Medicina Genómica SL

Agustín Escardino 9,

Parc Científic de la Universitat de València

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Rev. 1

Cuantificación del reordenamiento m-BCR: BCR-ABL p190 mediante PCR a tiempo real

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Reactivos Color Viales Conservación

Master-Mix m-BCR Disco morado 2 x 24 reacciones 4ºC

Master-Mix ABL Disco amarillo 2 x 24 reacciones 4ºC

Control m-BCR-ABL Tapa morada 4 viales 4ºC

Tabla 1. Componentes del kit Imegen-m-BCR-ABL






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:

Equipos 1 Termociclador de PCR a tiempo real

2 Micropipetas (10 µL, 20 µL y 200 µL)

3 Vórtex

Materiales 1 Tubos ópticos de 0,2 mL

2 Tapas ópticas para tubos de 0,2 mL

3 Puntas de pipetas con filtro (10 µL, 20 µL y 200 µL)

4 Tubos estériles de 1.5 mL

5 Guantes de látex sin polvo






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Reactivos Rehidratación

Master-Mix m-BCR 130 μL de agua/vial

Master-Mix ABL 130 μL de agua/vial

Control m-BCR-ABL 50 μL de agua/vial

Tabla 2. Volumen de rehidratación de los componentes del kit






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VortexSpin

VortexSpin

VortexSpin

VortexSpin

VortexSpin

5 ll

C+ m-BCR-ABL

25x104

l45 lH20

VortexSpin

VortexSpin

VortexSpin

VortexSpin

VortexSpin

5 ll 5 ll 5 ll

C+ m-BCR-ABL

25x103

C+ m-BCR-ABL

25x102

C+ m-BCR-ABL

25x101

C+ m-BCR-ABL

25

l45 lH20

l45 lH20

l45 lH20

VortexSpin

VortexSpin

VortexSpin

VortexSpin

VortexSpin

5 ll5 ll

C+ m-BCR-ABL

25x104

l45 lH20l45 l

H20

VortexSpin

VortexSpin

VortexSpin

VortexSpin

VortexSpin

5 ll5 ll 5 ll5 ll 5 ll5 ll

C+ m-BCR-ABL

25x103

C+ m-BCR-ABL

25x102

C+ m-BCR-ABL

25x101

C+ m-BCR-ABL

25

l45 lH20l45 l

H20l45 l

H20l45 l

H20l45 l

H20l45 l

H20






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Reactivos Volumen por

reacción

Máster-Mix m-BCR o

Máster-Mix ABL 5 µL

Máster-Mix PCR 2x 10 µL

Tabla 3. Cantidad de reactivos necesaria por reacción






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11

Sonda Receptor Emisor o

Quencher m-BCR FAMTM TAMRA

ABL FAMTM TAMRA

Tabla 4. Información de las sondas

Campos Etapa 1

Activación enzimática

Etapa 2

PCR

Nº de Ciclos 1 ciclo inicial 1 ciclo inicial 50 ciclos

Desnaturalización Unión de

oligonucleótidos / Extensión

Temperatura 50ºC 95ºC 95ºC 60ºC

Tiempo 2 minutos 10 minutos 15 segundos 1 minuto*

Tabla 5. Programa de PCR óptimo para el 7500 FAST o StepOne






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NCN= m-BCR-ABLCN

ABLCN

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