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REPORTE FINAL DEL PROYECTO: “ESTUDIO QUIMICO Y FARMACOLOGICO DE OEDOGONIUM CAPILLARE”

PRESENTADO POR:

Rosa Martha Pérez Gutiérrez Sergio Hernández Garrido

José María Mota Flores

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ESTUDIO QUIMICO Y FARMACOLOGICO DE OEDOGONIUM CAPILLARE

CLAVE: 20060144

RESUMEN En este programa de investigación se determinó la actividad antiespasmodica y

antimicrobiana del alga Oedogonium capillare, así como también se obtuvieron los

compuestos responsables de estas actividades. Se evaluó la actividad

antimicrobiana de los extractos hexánico, cloroformico y metanólico de las hojas

de Oedogonium capillare sobre 8 microorganismos (Staphylococcus aureus,

Staphylococcus epidermidis, Bacillus subtilis, Bacillus cereus , Escherichia coli, Vibrio

cholerae, Salmonella typhi y Klebsiella pneumoniae). Dos diterpenos con propiedades

antimicrobianas se aislaros a partir del extracto de cloroformo usando para ello

un fraccionamiento bio-guiado. Las estructuras de los compuestos resultaron ser

Labdan-8,13-diol y Labdan-8,ol-15-acetoxi. En otro ensayo se determinó la

actividad antiespasmodica sobre ileum de rata de los extractos de hexano,

cloroformo y metanol. A partir del extracto de metanol se aisló una δ-lactona

denominada oedogonolide con propiedades relajantes. La estructura también se

determinó por métodos espectroscopicos.

INTRODUCCION

Estudios en plantas medicinales han demostrado que la mayoría de ellas contienen

substancias que pueden ser utilizadas para propósitos terapéuticos. En los estudios

realizados en las algas se encontraron compuestos con diferentes efectos

farmacológicos, como son: analgésico, antiinflamatorios, relajantes musculares

entre otros (1). Actualmente se sabe que más del 15% de las algas ofrecen una

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novedad curativa en relación del 1% de las especies terrestres. Oedogonium

capillare (Linn) Kuetz es un alga, conocida comúnmente como “lama” o “natas

flotantes”. Pertenece a la familia Oedogoniaceae de la División Clorophyta (2,3,4)

Vive en agua dulce, se caracteriza por formar filamentos simples, uniseriados, las

células son largas y angostas, posee cloroplastos reticulados; presenta una forma

de crecimiento basada en el desarrollo de masas flotantes que llegan a cubrir todo

el cuerpo de agua. Esta alga sirve de alimento y protección a los renacuajos y a

otros organismos acuáticos. En la medicina tradicional se ha usado esta alga para

aliviar trastornos gastrointestinales. O. capillare tiene oosporas globosas con

paredes lisas y células cilíndricas de 36 m de diámetro, con una longitud de 210

m, con ogonium solitarios, cilíndricos casi del mismo diámetro que de las células

vegetativas abiertas con un poro superior de 30-50 m de diámetro y 45-75 m de

longitud (5,6).

Las enfermedades infecciosas son de origen muy antiguo, el uso de los extractos de

plantas han sido reportadas para la terapia de tales infecciones. Algunos de estos

agentes perduran hasta nuestros días tales como la quinina, emetina y

sanguinarina. La utilización de la fermentación para la obtención de antibióticos

ha disminuido enormemente el uso de otros métodos alternativos (7).

Actualmente en el campo de los antibióticos los agentes antibacterianos obtenidos

de plantas superiores, particularmente los relacionados con las plantas usadas en

la medicina folklórica para el tratamiento de infecciones presentan una

significativa potencia contra bacterias y hongos patógenos (8). Esto conduce a que

el uso en la medicina folklórica pueda ser racionalizado en base a sus

constituyentes activos que pueden ser aislados empleando técnicas de bioensayo-

directas (9).

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En un estudio Etnobotánico realizado en Xochimilco se encontró que las partes

aéreas de O. capillare son usadas en la medicina tradicional como antiséptico en el

tratamiento de heridas, úlceras, disentería, diarrea e infecciones de la piel. No

existen antecedentes que documenten la realización de estudios acerca de la

actividad antimicrobiana de esta especie. En el presente trabajo se reporta la

actividad antimicrobiana producida por los extractos hexánico, clorofórmico y

metanólico de las hojas de Oedogonium capillare así como también se pretende

establecer las bases científicas del uso en medicina popular del alga O. capillare en

el tratamiento antiséptico de heridas y úlceras. También se determinó el efecto

antiespasmódico del alga O. capillare, empleando diferentes extractos (metanólico,

hexánico y clorofórmico) sobre un bioensayo realizado en órgano aislado de íleon

de rata Wistar.

Material y Métodos

Material biológico Oedogonium capillare (L.) Kutzing perteneciente a la familia de las Oedogoniaceae

(Chlorophycophyta) se recolectó en el Centro de Investigaciones Biológicas

Acuícolas (CIBAC) en Xochimilco Estado de México, en un criadero de ranas

donde crece abundantemente en excelentes condiciones. Taxonómicamente fue

identificado por la Dra. Guadalupe Figueroa del Departamento del Hombre y su

Ambiente de la Universidad Autónoma Metropolitana-Xochimilco. Un ejemplar

se colocó en formalina al 4% para formar parte de la colección de ficología como

referencia (núm. 4892).

Limpieza del alga

2 kg de O. capillare se recolectaron de los estanques por medio de una red.

Posteriormente se separaron manualmente los ejemplares más saludables de las

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hojas muertas y otros residuos orgánicos que caen a la superficie del agua Para

eliminar totalmente los elementos extraños se centrifugó tres veces a 1500 rpm

durante 5 minutos (rendimiento húmedo 181 g). El material se observó al

microscopio para determinar si efectivamente estaba limpio. Inmediatamente

después se secó a la sombra (rendimiento seco 69 g) y se molió hasta obtener un

polvo fino (10).

Preparación de los extractos

300 g de las hojas molidas de O. capillare se empacaron en cartuchos de papel filtro

que se colocaron en un soxhlet y se extrajeron con hexano a reflujo durante cinco

horas continuas (11). Siguiendo un procedimiento similar al planteado para la

obtención del extracto hexánico se realizaron, sobre la misma muestra extracciones

sucesivas con cloroformo y metanol absoluto. Posteriormente se filtró y el

disolvente se secó con Na2SO4 anhidro y se destiló en un rotavapor al vacío

quedando un residuo viscoso de color verde oscuro, con un rendimiento para los

extractos hexánico, cloroformico y metanólico de 4.5, 3.1 y 5.6 % respectivamente

(12).

Organismos

Las bacterias Gram-positivos empleados en este estudio son: Staphylococcus aureus,

Staphylococcus epidermidis, Bacillus subtilis y Bacillus cereus y las Gram-negativos:

Escherichia coli, Vibrio cholerae, Salmonella typhi y Klebsiella pneumoniae. Los

microorganismos fueron proporcionados por el Departamento de Microbiología de

la Escuela Superior de Ciencias Biológicas, IPN y por el Departamento del

Hombre y su Ambiente de la Universidad Autónoma Metropolitana-Xochimilco.

Todos los medios de cultivo se adquirieron en Difco.

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Preparación de los cultivos de microorganismos

Para la determinación del efecto antibacteriano se empleó el método de difusión de

disco (13). Se aplicó 0.1 mL de una dilución 1 en 100 del cultivo de cada bacteria

equivalente a 106-107 células/mL. en la superficie de platos de Mueller-Hinton (14).

preparados previamente con el medio estéril caldo Soya tripticaseina (TSB). Para

cuantificar el número o de microorganismos se siguió el método tradicional de

conteo en placa a partir de las diluciones cuantitativas (15). En cada plato se

adicionó una solución que contenía 200 g/ml de cada extracto disuelto en DMSO.

Las placas se incubaron a 37 ˚C durante 24 h, al finalizar este periodo se midieron

los diámetros de las zonas de inhibición alrededor de cada disco. Se usó como

control positivo los antibióticos gentamicina y kanamicina y como control negativo

se utilizaron discos de papel esteril (Difco) impregnados con DMSO (dimetil

sulfóxido).

Concentración mínima inhibitoria. La CMI (concentración mínima inhibitoria) de

los extractos se determinó por el método de dilución de agar (16). Alrededor de

105 células, se inocularon en cada tubo posteriormente se añadió cada extracto en

una concentración de 125, 250, 500 y 1000 g/mL. Los cultivos fueron incubados

durante 24 h a 37˚C, sobre un agitador rotatorio, posteriormente el crecimiento

bacteriano se examinó espectrofotométricamente. El tubo que no presentó turbidez

o sea que se produce un crecimiento no visible fue tomada como la CMI de la

sustancia para el microorganismo utilizado. Cada experimento se realizó por

duplicado.

Animales

Se utilizaron ratas machos Wistar, de un peso de 200-250 g. Se mantuvieron con

periodos de luz-oscuridad de 12:12 y humedad relativa de 50%; agua y comida ad

limitum.

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Preparación del tejido

Los animales se sacrificaron por dislocación cervical, se abrió la cavidad abdominal

y se extrajo el íleon que se cortó en segmentos de 1.5 cm; cada uno de los anillos se

fijó a un transductor F-60 conectado a un fisiógrafo Narco-BioSystems y el otro

extremo a una cámara para órgano aislado, con 10 ml de solución fisiológica Krebs-

Hansseleit, con burbujeo constante de una mezcla de oxígeno al 5 % y bióxido de

carbono al 95 % (carbógeno), a temperatura constante de 37 ºC y pH de 7.2. El

tejido se dejó estabilizar durante 30 minutos, la solución fisiológica fue cambiada

cada 10 minutos. Para probar cada uno de los extractos se hizo un registro control

durante 5 minutos y después el extracto se le agregó al baño que permaneció en

contacto con el músculo durante 5 minutos periodo durante el cual se hizo el

registro experimental, terminado éste se lavó el tejido y se volvió a realizar otro

registro para evaluar las condiciones fisiológicas del músculo. Para cada uno de los

extractos se utilizaron tejidos recién obtenidos. Se probaron los extractos de

cloroformo, hexano y metanol para determinar cual de ellos tenía efecto sobre el

íleon (17).

Con el extracto activo se hizo una curva dosis respuesta con adición acumulativa al

baño y las concentraciones usadas fueron de 0.5, 1, 2, 4, 8 y en algunos casos 16

mg/ml. Para evaluar la actividad antiespasmódica se utilizó KC1 60 mM para

producir una contracción sostenida y posteriormente aplicar el extracto activo. Se

utilizó acetilconina (2µg/ml) la cual se aplica después de la incubación del tejido

con el extracto durante 10 minutos y se comparó con el registro control

previamente realizado. Los resultados se normalizaron como porcentaje a partir de

los obtenidos al inicio de las pruebas.

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Análisis estadístico

Los resultados se presentan como la media ± desviación estándar, con el número

de los experimentos (n). La comparación de los datos se hizo mediante un análisis

de varianza ANOVA. Se estableció la diferencia significativa para una p< 0.05.

Extracción y Aislamiento

Labdan-8,13-diol y Labdan-8,ol-15-acetoxi

1.5 kg de O. capillare seca y molida se extrajeron con cloroformo a temperatura de

reflujo durante 4 h. El solvente se elimino por medio de un rotavapor al vació, el

residuo se cromatografió en columna sobre sílica gel con cloroformo. Las

fracciones más activas fueron la A y B. La A se recromatografió con

cloroformo/acetato de etilo/hexano 10:1:0.5 , la B con acetato de etilo/éter

etílico/hexano 1:1:2. Las fracciones obtenidas con actividad antibacteriana se

cromatografiaron en columna con Sephadex LH-20 con

ciclohexano/diclorometano/metanol 7:4:1. Los compuestos se purificaron en

placas preparativas con cloroformo/acetona 85:15. Se obtuvieron 1 (41 mg), 2 (62

mg).

Oedogonolide

1.5 kg de O. capillare seca y molida se extrajeron con metanol a temperatura de

reflujo durante 4 h. El solvente se elimino por medio de un rotavapor al vació, el

residuo se cromatografió en columna sobre sílica gel con CH2Cl2/MeOH 10:1

como eluente, se colectaron 8 fracciones. De acuerdo con las pruebas

farmacológicas las fracciones F-1ª y F-2ª presentaron efecto antiespasmodico. Las

fracciones se combinaron y se recromatografiaron en sílica gel con acetona/hexano

6:1 para producir 8 fracciones. La fracción F-5B se cromatografió con

Cloroformo/metanol/hexano 10:1.5:2 para producir 6 fracciones. La F-2C se

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cromatografio en Sephadex L-20 con cloroformo para producir la δ-lactona, la cual

se purifico en cromatografía preparativa con cloroformo. Se obtuvieron 80 mg de

este compuesto (3).

Labdan-8,13-diol (1) Coulourless oil; C20H38O2; IR vmax cm-1: 3560 (OH), 3090,

1240, 995; ElMS 70 eV m/z (rel. Int.) 310 [M]+ (4), 295 (M-Me) (4), 209 (35), 192 (16),

177 (14), 137 (20), 109 (100), 43 (60). 1HNMR δ 1.52 (m, H-1), 1.32 (m, H-2), 1.35 (m,

H-3), 1.93 (s, br, J = 2.4 Hz, H-5), 0.78 (dd, J = 4.4, 2.5 Hz, H-9), 2.23 (dddd, J = 15.1,

10.1, 5.1, 1.1 Hz, H-12), 1.19 (s, H-16), 1.15 (s, Me-17), 1.0 (s, Me-18), 0.96 (s, Me-19),

1.18 (s, Me-20); 13CNMR δ 39.7 (C-1), 18.2 (C-2), 42.6 (C-3), 33.6 (C-4), 56.4 (C-5),

21.0 (C-6), 38.9 (C-7), 72.8 (C-8), 58.4 (C-9), 36.6 (C-10). 23.1 (C-11), 36.9(C-12), 75.5

(C-13), 33.3(C-14). 15.0 (C-15). 19.8 (C-16), 23.7 (C-17), 33.9 (C-18). 22.1 (C-19), 14.9

(C-20).

Labdan-8,ol-15-acetoxi (2) Los datos espectrales están acorde a la literatura

(18,19,20).

Oedogonolide (3). Compound I. IR (KBr) vm"x: 3452 (OH), 2924,2854,1740 (lactona),

1437, 1375, 1235 (δ-lactona), 1126 (alcohol secundario), 1017,940, 800,602 cm-l; alta-

resolución MS m/z 256.2021 (C15H28O3); 1HNMR (300MHz, CDCl333) δ 0.88 (m), 1.28

(s, H-15), 1.81 (d, J=6.4Hz, H-14), 1.82--2.15 (m), 3.76 (ddq, J=6.3. 6.3, 6.4Hz, H-13).

13CNMR (300MHz, CDCl3) δ 170.5 (C-l), 39.8 {C-2), 31.6 (C-3), 29.4 (C-4), 73.3 (C-5).

34.5 (C-6), 22.6 (C-7), 31.6 (C-8), 29.8 (C-9), 32.6 {C-10), 23.4 (C-11), 41.4 (C-12), 69.6

(C-13), 20.2 (C-14), 26.3 (C-15). EIMS: m/z {rel. int.) 256 [M), [C15H28O3), 241 {2), [M-

15, C14H25O3), 167 {16), 149 (100) [C10H13O), 139 {4), 125 {14), 113 (8) [C6H4O2], 111

(26), 99 (11),98 (2) [C6H10O), 97 (40), 89 (42), 85 {27) [C5H9O], 84 (22) [C6H12], 83 (32)

[C5H7O], 71 {52), 70 (12) [C5H10], 69 (32), 57 {84), 56 [C4H8] 55 (50) [C4H7], 69 (44), 70

(18), 85 (34), 43 (60) [CH3CO+), 42 (3), [C2H2O), 41 (28), [C3H5].

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RESULTADOS Y DISCUSION

Actividad antimicrobiana

La tabla 1 presenta la zona de inhibición en cada uno de los microorganismos

susceptibles a la concentración de 200 µg/mL del extracto hexánico de O. capillare

ya que los extractos metanólico y clorofórmico no muestran efecto

antimicrobiano en estas condiciones. Las cepas más susceptibles fueron

Staphylococcus aureus, Staphylococcus epidermidis y Salmonella Typha con una zona

de inhibición de 18-21 mm. En contraste, Escherichia coli, Vibrio cholerae y

Klebsiella pneumoniae fue de 6-8 mm.

Aquellos microorganismos que resultaron sensibles en la prueba de difusión por

disco se les determinaron la concentración mínima inhibitoria. La Tabla 2 muestra

los resultados de la determinación de la concentración mínima inhibitoria (CMI) de

la actividad antibacteriana producida por el extracto hexánico. Las bacterias

Staphylococcus epidermidis, Staphylococcus aureus y Salmonella typha son más

sensibles a los compuestos antibacterianos presentes en el extracto hexánico de la

O. capillare que los demás microorganismos probados (CMI 250 g/mL), en cambio

los microorganismos Escherichia coli, Klebsiella pneumoniae y Vibrio cholerae fueron

los más resistentes (CMI 1000 g/ml). La actividad se comparó con la producida

por la gentamicina y kanamicina, los valores se encuentran en el rango reportado

en la literatura (15).

El extracto hexánico fue más activo que los extractos cloroformico y metanólico

probablemente porque contiene una alta concentración de los compuestos activos

los cuales se encuentran ausentes en los otros extractos o en muy baja

concentración. En las condiciones de prueba el extracto hexánico mostró actividad

antibacteriana por disco ensayada para las bacterias. La actividad antibacteriana

11

estaría relacionada a los componentes menos polares presentes en los extractos

dado que la sensibilidad se obtuvo en el extracto de hexano y no en los otros dos.

La actividad antimicrobiana de Labdan-8,13-diol y Labdan-8,ol-15-acetoxi del

Oedogonolide se presenta en la Tabla 3.

Actividad antiespasmodica

Efecto relajante del extracto metanólico de O. Caplillare sobre el tono basal del íleon de rata.

El extracto metanólico de Oedogonium capillare presentó un efecto relajante, los

extractos clorofórmico y hexánico no tuvieron efecto sobre la amplitud de las

contracciones ni sobre el tono del músculo del íleon de la rata Wistar.

La adición acumulativa del extracto metabólico (0.5 – 8 mg/ml) produjo una

relajación progresiva de la amplitud de las contracciones del íleon con IC50 0.6

mg/ml, n= 27, ( figura 1 ). Se observó con el extracto es capaz de inhibir la

actividad contráctil del íleon en una forma significativa, esto se presentó en todas

las preparaciones estudiadas.

Para conocer la actividad del extracto sobre el tono del músculo se probaron

diferentes concentraciones del extracto metabólico (0.5 a 8 mg/ml) sobre el íleon y

se obtuvo una relajación máxima de 180 ± 51.2 % (n = 27) por debajo del tono basal

(figura 2); con un IC50 = 2.2 mg/ml; se puede ver que este efecto es completamente

reversible porque cuando el extracto se eliminaba de la preparación el tejido se

recuperaba totalmente; esto puede apoyar las bases fisiológicas para el uso que se

le da en la medicina tradicional para el tratamiento de los trastornos

gastrointestinales.

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Efecto antiespasmódico del extracto metabólico de O. Capillare sobre íleon de rata

Se indujo la contracción sostenida del íleon con KC1 60 mM (estímulo

despolarizante) y se observó una relajación de 5.6 ± 15.3 %, n = 45 por debajo del

tono basal, al aplicar concentraciones acumulativas del extracto metabólico (0.5 a

16 mg/ml); con un IC50 = 0.74 mg/ml (figura 3).

La preparación se preincubó con el extracto metabólico (0.5 a 8 mg/ml) durante 10

minutos y se le agregó acetilcolina (2 g/ml) se obtuvo una reducción de la

contracción producida por el neurotransmisor de 96.5 ± 3.6 %, n = 27 con la dosis

mayor del extracto, comparada con el registro control y con relación dosis

dependiente, con un IC50 = 1.8 mg/ml (Figura 4).

El extracto metabólico tiene componentes polares dosis dependientes, relajantes,

reversibles y antiespasmódicos sobre el íleon de rata ya que es capaz de inhibir la

respuesta de un amplio rango de estímulos contráctiles así como de una alta

concentración de potasio y del neurotransmisor acetilcolina, aunque mostró mayor

selectividad por el KC1 puesto que su IC50 fue menor que para la acetilcolina, sin

embargo son mas semejantes comparados con el extracto metabólico (8,9) La

actividad antiespasmódica apoyaría el uso que se le da en la herbolaria para el

tratamiento de trastornos intestinales.

El KC1 inhibe la entrada de calcio por los canales de membrana L operadas por

voltaje. La acetilcolina se une a su receptor serpentina acoplados a través de una

proteínas G a una fosfolipasa C de la membrana plasmática, fosfatidilinositol 4.5

bifosfato, que cataliza la formación de 1,4,5 trifosfato de inositol y diacilglicerol, los

cuales actúan como segundos mensajeros. La primera substancia actúa liberando

calcio intracelular del retículo endoplásmico y la segunda, es decir, el diacilglicerol,

activa la proteína quinasa C dependiente de fosfolípidos capaz de fosforilar ciertas

proteínas específicas. Por lo que se sugiere que la relajación producida por el

13

extracto algal podría ser debida a inhibición de la liberación del calcio intracelular

del retículo y/o inhibición de la entrada de calcio a través de la membrana (10,11).

La actividad antiespasmodica del Oedogonolide se presenta en las graficas (5,6,7).

Elucidación de las estructuras Labdan-8,13-diol (1). El espectro de IR indica un grupo alcohol (3560 cm-1). El

espectro de 13CDEPT revela la presencia de 6 metilos, 8 metilenos, 2 metinos y 4

carbonos cuaternarios. El espectro de 1HNMR muestra cinco grupos metil

terciarios a δ 1.19, 1.15, 1.0, 0.96 y 1.18, dos oxígenos que forman grupos OH. El

espectro de 13CNMR presenta señales para un carbinol cuaternario a δ 72.8 (C-8), y

δ 75.5 (C-13), tres metilos terciarios a δ 33.9, 22.1 y 14.9 para C-18, 19 y 20

respectivamente. Estas señales son características para los diterpenos de la serie de

Labdanos. Este compuesto presenta un ion molecular a m/z 310 (C20H38O2)

correspondiente a un diterpeno biciclo con dos grupos hidroxilo. El ion m/z 209 se

forma por la perdida de la cadena lateral. Ese rompimiento corresponde a una

decalina conteniendo cuatro metilos y un grupo OH. El espectro de masas muestra

un patrón de fragmentación característico de los Labdanos. Un pico a m/z 191

corresponde a el fragmento [a3]-H2O. El pico base a m/z 109 es típico de

compuestos con un grupo presente en el anillo A.

Diterpenos aislados de O. capillare

Estructuras Fig. 8. Correlación observada en el espectro de HMBC del compuesto 1.

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Fig. 9. Correlación observada en el espectro de HMBC del compuesto 2.

Oedogonolide (3). La presencia de un grupo OH (3452 cm-1) y δ-lactona (1740 y 1235

cm-1) se observaron en el espectro de IR. El espectro de 13CNMR muestra 15

señales incluyendo un grupo éster (δ 170.5), 2 carbonos enlazados a un oxígeno, un

metino (δ 69.6), un carbono cuaternario (δ 73.3), dos grupos metil (δ 26.3 y 20.2),

los otros 10 carbonos son metilenos (DEPT espectro). El espectro de 1HNMR revela

la presencia de un doblete a δ 1.81 de un grupo metilo acoplado a un protón de un

metino a δ 3.76, un singulete (δ 1.28) de un grupo metilo atacando a un carbón

cuaternario. La señal del metino cambio a campos bajos a δ 4.89 por acetilación,

este se encuentra cerca de un grupo OH. El centro asimétrico C-13 se asigno por

medio de NOE; irradación del H-13 (δ 3.76) realza la señal H-4 a δ 1.81. H-13 debe

de ser trans basado en los patrones de acoplamiento entre H-13ª y H-14b (δ 1.81, d,

J = 6.4 Hz), la configuración de C-13 es R. El espectro de masas presenta los picos a

m/z 85 y 89 un pico a m/z 70 y 71 unido a una señal a m/z 43 característicos para δ-

lactona. Los picos m/z 70 y 71 se forman a partir del fragmento m/z 99 por

expulsión de CO. Consecuentemente este compuesto se denomino Oedogonolide.

Oedogonolide

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13-epi-labdanolic acid. Tet. Lett. 3475-3480. Tabla 1. Actividad antibacteriana del extracto hexánico de Oedogonium capillare

Microorganismos Extracto de Hexano Estándar (30 g/disco) 200 g/ml Gantamicina Kanamicina Zona de inhibición en mm

Bacillus subtilis (B) NCTC 542

15± 0.89 28±1.01 14±0.57

Bacillus cereus (B) ATCC 17689

13± 1.34 26±2.51 14±1.78

Staphylococcus aureus

(B) NCTC 8531

19±3.06 21±0.71 24±4.10

Staphylococcus epidermidis

(A) ATCC 55654

21±3.90 18±2.54 20±3.86

Escherichia coli (B) ATCC 25922

6±2.80 22±1.15 18±2.16

Vibrio cholerae (B) ATCC 17689

8±1.68 16±2.4 18± 1.87

Salmonella typhi (A) ATCC 13310

18±2.05 24±3.01 20±3.64

Kiebsiella pneumoniae

(A) ATCC 14786

7±0.97 19±0.98 16±1.08

(A) Departamento de Microbiología de la Escuela Nacional de Ciencias Biológicas, IPN. (B) Departamento del Hombre y su Ambiente de la Universidad Autónoma Metropolitana-Xochimilco. Antibióticos estándar: Gentamicina y kanamicina. Como testigo se emplearon discos de papel impregnados con DMSO, no se presentó actividad antimicrobiana en ningún caso.

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Tabla 2. Actividad antibacteriana del extracto hexánico de Oedogonium capillare

Microorganismos Extracto hexánico CMI ( g/ml)

Bacillus subtilis (C) NCTC 542

500

Bacillus cereus (B) ATCC 17689

500

Staphylococcus aureus (B) NCTC 8531

250

Staphylococcus epidermidis (B) ATCC 55654

250

Escherichia coli (C) ATCC 25922

1000

Vibrio cholerae (B) ATCC 17689

1000

Salmonella typhi (A) ATCC 13310

250

Kiebsiella pneumoniae (A) ATCC 14786

1000

(A) Departamento de Microbiología de la Escuela Nacional de Ciencias Biológicas, IPN. (B) Departamento del Hombre y su Ambiente de la Universidad Autónoma Metropolitana-Xochimilco. Antibióticos estándar: Gentamicina y kanamicina. Como testigo se emplearon discos impregnados con DMSO, no se presentó actividad antimicrobiana en ningún caso.

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Tabla 3. Concentración mínima inhibitoria (MIC) de Labdan-8,13-diol (1) y Labdan-8,ol-15-acetoxi (2) aislados del alga Oedogonium capillare

Microorganismos MIC ( g/ml) 1 2

Bacillus subtilis (C)NCTC 542

>25 25

Bacillus cereus (B) ATCC 17689

>50 50

Escherichia coli (D) ATCC 25922

- -

Kiebsiella pneumoniae (A) ATCC 14786

>12.5 12.5

Salmonella typhi (B) ATCC 13310

- -

Staphylococcus aureus (B) NCTC 8531

>12.5 12.5

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Figura 1. Efecto relajante del extracto metabólico de O. Capillare sobre las concentraciones de ileon aislado de rata. Las barras verticales representan la desviación media de las concentraciones. p> 0.05.

Figura 2. Efecto relajante de O capillare sobre el íleon aislado de la rata Wistar. Las barras

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corresponden a la desviación media estándar. p< 0.05.

Figura 3. Efecto antiespasmódico dosis-dependiente del extracto de O. capillare sobre íleon aislado, previamente despolarizado con KC1 (60 mM). Las barras corresponden a la desviación media estándar. P< 0.05.

Figura 4. Curva de relajación dosis-dependiente después de la edición del extracto de O. capillare al íleon de rata previamente estimulado con acetilcolina. Las barras corresponden a la desviación media estándar. p< 0.05

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Figura 5. Efecto del extracto de methanol (400, 200 and l00 µgmL) y oedogonolide (10-4, 10-5, 5 x 10-5 M) sobre la contracción inducida en ileum de rata por acetilcolina. Resultados son expresados en SEM. *p < 0-05, **p < 0.01, ***p < 0.001 (n=6) .

Figura 6. Efecto del extracto de methanol (400, 200 and l00 µgmL) y oedogonolide (10-4, 10-5, 5 x 10-5 M) sobre la contracción inducida por cloruro de bario (10-4) in ileum. Resultados son expresados en SEM. *p < 0-05, **p < 0.01, ***p < 0.001 (n=6) .

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Figura 7. Efecto del extracto de methanol (400, 200 and l00 µgmL) y oedogonolide (10-4, 10-5, 5 x 10-5 M) sobre la contracción inducida por histamine en ileum de rata aislado.Resultados son expresados en SEM. *p < 0-05, **p < 0.01, ***p < 0.001 (n=6).