ResultadosResultados de la de la semanasemanaanterior (TSB)anterior (TSB)

Título de la gráfica: ______________________________

# tuboTSB

Crecimiento/No crecimiento

Descripción del crecimiento

1-24

ResultadosResultados de la de la semanasemanaanterior (TSA slant)anterior (TSA slant)

Título de la gráfica: ______________________________

tuboTSA slant

Crecimiento/No crecimiento

Descripción del crecimiento

Lab #3Técnicas de cultivos purosTécnicas de cultivos puros

ObjetivosObjetivos

� Diferenciar entre ciertos medios de cultivo� Describir cómo preparar un medio� Diferenciar las distintas técnicas de aislación:

esparcido, estriado y vertido en platoesparcido, estriado y vertido en plato� Llevar a cabo un estriado del tubo de

transferencia de la semana anterior� Hacer una dilución de agua y vertir en platos

¿Qué contiene un medio?¿Qué contiene un medio?

�� Aquellos requerimientos nutricionales que Aquellos requerimientos nutricionales que los microorganismos necesitan para los microorganismos necesitan para crecer. crecer.

�� Depende del ambiente en donde viven.Depende del ambiente en donde viven.�� Depende del ambiente en donde viven.Depende del ambiente en donde viven.

Algunos Requerimientos nutricionales:� Carbono (C)� Nitrógeno (N)� Elementos no metálicos :

� azufre (S) y fósforo (P)� azufre (S) y fósforo (P)

� Elementos metálicos:� Ca++, Na++, K+, Cu++, Mg++, Mn++, Fe+2,+3 y trazas

de Zn++

� Vitaminas� H20

Factores físicos que afectan el crecimiento

� Temperatura� pH

� ** ambas afectan las actividades enzimáticas

� Disponibilidad de oxígeno� oxígeno atmosférico

• Formación de ATP

� fermentación anaerobia

MEDIOS DE CULTIVO� Clasificación :1. Físicamente

Medio %Agar EjemploLíquido 0 Caldo NutritivoSemisólido 0.5 a 1 Medio MovilidadSólido 1.5 a 2 Agar NutritivoSólido 1.5 a 2 Agar Nutritivo

2. QuímicamenteDefinido: Composición quím. definida (Sales)Complejo: Composición quím. difícil de definir

(Peptona, Extr. levadura, etc).

3. Usos

� Líquido (caldo)

� Semisólido

� Sólido

3. Usos (cont)•Líquido (caldo)

•Crecimiento de gran # microorganismos•Estudios fermentación

3. Usos (cont)•Semisólido:

•Crecimiento anaerobio (fermentación)•Motilidad

3. Usos (cont)

•Sólido:•Crecimiento superficial•Cultivo puro (transferencia)

Agar slant

MedioMedio parapara el el crecimientocrecimiento de de unauna bacteria bacteria fastidiosafastidiosa

Ejemplo de los componentes:

Components Amount Function of components

Beef extract 1.5 g Source of vitamins and other growth factors

Yeast extract 3.0 g Source of vitamins and other growth factors

Peptone 6.0 g Source of amino acids, N, S, and P

Glucose 1.0 g C and energy source

Agar 15.0 g Inert solidifying agent

Water 1000 mL

pH 6.6

ClasificaciónClasificación de de mediosmedios de de cultivocultivo: :

A. Medio no selectivo

Es un medio en el cual puede crecer una gran variedad de microorganismos; tanto G+ como G-.

Ej.: Plate count Agar, Tryptic Soy Broth, Tryptic Soy Agar

TSA

B. Medio Selectivo

ClasificaciónClasificación de de mediosmedios de de cultivocultivo: :

••Ej.: Brain Heart Infusion (BHI) 6.5% NaCl, Ej.: Brain Heart Infusion (BHI) 6.5% NaCl, Crecimiento en SalCrecimiento en SalEnterococcusEnterococcus

•• Lauryl Broth con Antibiotico, Lauryl Broth con Antibiotico, Microorganismos resistentesMicroorganismos resistentes

Seleciona a un grupo de microorganismos

•• Lauryl Broth con Antibiotico, Lauryl Broth con Antibiotico, Microorganismos resistentesMicroorganismos resistentes

C. Medio Diferencial

ClasificaciónClasificación de de mediosmedios de de cultivocultivo: :

No limita el crecimiento de microorganismos solo permitediferenciar a los organismos que crecieron. Importante enambiente clínico para diagnostico de patógenos.

Hemolisis Beta, Alfa y Gamma(observar propiedades hemolíticas)

Blood Agar

ClasificaciónClasificación de de mediosmedios de de cultivocultivo: : D. Medio Selectivo Diferencial

Ej. :MacConkey AgarSelectivo: Bacilos gram negativoDiferencial: Fermentadores de lactosa/no fermentadoresOrganismos: Escherichia, Salmonella

Ej. :Bile Esculin Agar

Ej. :Mannitol Salt AgarSelectivo: Alto contenido de salDiferencial: Fermentadores de MannitolOrganismos: Staphylococcus

Ej. :Bile Esculin AgarSelectivo: Sales biliaresDiferencial: Hidrolizacion de EsculinaOrganismos: Enterococcus, Streptococcus

ClasificaciónClasificación de de mediosmedios de de cultivocultivo: :

E. Medio EnriquecidoPosee características nutricionales específicas para estimular la producción de algún componente

Preparación de Medios� Medios comerciales deshidratados� Recipientes: Tubos y Platos de Petri� Esterilización : Depende de la naturaleza del material y su estado físico!!

� Calor húmedo: • autoclave (121º C 15 lbs. presión 15 min.)• autoclave (121º C 15 lbs. presión 15 min.)

� Calor seco� Luz ultravioleta� Óxido de etileno (gas)� Filtración:

• Filtros bacteriológicos (0.1 a 0.22 µm, 0.45 µm)

DiluciónDilución

�� PermitePermite el el aislamientoaislamiento de de coloniascolonias discretasdiscretas quequepuedenpueden ser ser subcultivadassubcultivadas en en cultivoscultivos purospuros..

�� TécnicasTécnicasa. a. EstriadoEstriado en en platoplatob. b. VertidoVertido en en platoplato

Dilución

A.

b. b. VertidoVertido en en platoplatoc. c. EsparcidoEsparcido en en platoplato

B.

C .

ESTRIADO EN PLATO

Estriado en plato (Resultado)

Esparcido en platoEsparcido en plato

Dilusiones En SerieDilusiones En Serie

Vertido en PlatoVertido en Plato

� Recuento de BacteriasUnidades Formadoras de Colonias (UFC)

UFC/ml = # de colonias x 1/ factor de dilución

Consideraciones:Contar platos con 25 a 250 coloniasPlatos con <25 reportar como TFTCPlatos con >250 reportar como TNTC

Parte ExperimentalParte Experimental

A. A. EstriadoEstriado en en PlacasPlacas

�� Con Con unauna agujaaguja de de inocularinocular “loop” tome “loop” tome unaunamuestramuestra del del tubotubo de la bacteria de la bacteria quequetransfiriótransfirió la la semanasemana pasadapasada (TSA slant) y (TSA slant) y transfieratransfiera al al platoplato de TSA de TSA provistoprovisto..transfieratransfiera al al platoplato de TSA de TSA provistoprovisto..

�� RepitaRepita esteeste procedimientoprocedimiento con el con el tubotubo del del desconocidodesconocido..

�� Solo Solo tomarátomará la la muestramuestra del del tubotubo al al inicioiniciodel del estriadoestriado

Recuerde utilizar las técnicas Recuerde utilizar las técnicas acépticas necesarias para que acépticas necesarias para que

evite contaminación de la muestra.evite contaminación de la muestra.1

4

1

4

Desconocido!!!

Esterilice la aguja antes de tocar la muestra y después de pasarla por el medio

2

3

4

2

3

4

B. Esparcido en PlatoB. Esparcido en Plato

�� La mitad del grupo se lavará las manos La mitad del grupo se lavará las manos con agua y jabón la otra mitad con agua y jabón la otra mitad nono ..

�� Todos los estudiantes se enjuagarán las Todos los estudiantes se enjuagarán las manos en los envases previamente manos en los envases previamente manos en los envases previamente manos en los envases previamente identificados (los que tienen las manos identificados (los que tienen las manos lavadas en uno y la otra mitad del grupo lavadas en uno y la otra mitad del grupo en el otro)en el otro)

�� Se hará una dilución en serie utlizando Se hará una dilución en serie utlizando esa agua.esa agua.

Esparcido en platoEsparcido en platoGrupo con manos lavadas

Grupo con manos sin lavar

Envase con Agua Envase con Agua

1 ml1 ml

0.1 ml

10-1

10-2 10-3

1 ml1 ml

0.1 ml0.1 ml

1 ml

0.1 ml

10-1

10-2 10-3

1 ml

0.1 ml 0.1 ml

�� ¿Dónde crees que vas a ver más ¿Dónde crees que vas a ver más crecimiento de bacterias?crecimiento de bacterias?

�� ¿Porqué?¿Porqué?

RecapitulaciónRecapitulación

�� ¿Cómo se clasifican los medios?¿Cómo se clasifican los medios?�� ¿Cuáles son los tipos de medio?¿Cuáles son los tipos de medio?�� ¿Cuáles son los métodos de esterilización ¿Cuáles son los métodos de esterilización

más comunes?más comunes?más comunes?más comunes?�� ¿Cuáles son las técnicas de dilusión en ¿Cuáles son las técnicas de dilusión en

serie?serie?

PreguntasPreguntas