UNIVERSIDAD PRIVADA ANTONIO GUILLERMO URRELO

Facultad de Ciencias de la Salud

Dr. Wilman Manuel Ruiz Vigo

Carrera Profesional de Estomatología

EFICACIA INHIBITORIA ENTRE ACEITE ESENCIAL DE ROMERO AL 10% Y

GLUCONATO DE CLORHEXIDINA AL 0.12% EN COLONIAS DE

Porphyromonas Gingivalis DE LA CEPA ATCC 25175 IN VITRO.

Flor de María Sánchez Quintana (Coordinadora)

Marleny Saucedo Tirado

Leonardo Rodríguez

Martin Américo Pariona Vargas

Alison Arribasplata Narro

Jhoselyn Tatiana Fernández Chacón (alumna no matriculada)

Leonardo Sangay Cerquín

Briscy Roncal Ruiz

Asesores:

C.D Jorge Carrascal (marco teórico)

Ms. Esp. C.D. Sandra Rojas Padilla (proyecto de tesis)

Cajamarca – Perú

EFICACIA INHIBITORIA ENTRE ACEITE ESENCIAL DE ROMERO AL 10% Y

GLUCONATO DE CLORHEXIDINA AL 0.12% EN COLONIAS DE

Porphyromonas Gingivalis DE LA CEPA ATCC 25175

PLANTEAMIENTO DEL PROBLEMA

1.1Enunciado del problema

1.1.1 Descripción del problema o datos del campo

El ser humano desde tiempos remotos ha usado a las plantas para

satisfacer sus necesidades y una de ellas es su salud. Mediante el

ensayo error, a través del tiempo llego a determinar las propiedades

curativas de algunas plantas. Estos conocimientos fueron trasmitidos

a través del tiempo y espacio a las generaciones actuales. La

medicina tradicional peruana, herencia de tiempos precolombinos,

sigue siendo la primera instancia de consulta y tratamiento en gran

parte de nuestro país. En ella las plantas medicinales ocupan un rol

muy importante, con una variada flora de aproximadamente 80,000

especies.1

Las plantas medicinales son usadas en la odontología de dos

maneras: una mediante la información que la medicina tradicional

provee y otra bajo la forma científica mediante preparados tales

como pasta dental, pasta tópica, enjuagues bucales, colutorios, etc.

para el tratamiento de gingivitis, aftas, odontalgias, procesos

inflamatorios; como fungicidas y antibacterianos.2

La planta Rosmarinus officinalis L. conocida usualmente como

romero, es conocida dese la antigüedad por sus usos medicinales,

estudios recientes le dan propiedades antimicrobianas y

antioxidantes.3

El Gluconato de Clorhexidina es indicado como parte del tratamiento

periodontal en enjuagues orales y también puede ser usado como

irrigadores a nivel infragingival. El Gluconato de Clorhexidina es uno

de los antimicrobianos más seguros que se conocen, ya que la

producción de resistencia en los microorganismos bucales no es

muy significativa.

El microorganismo anaerobio al cual se expondrá los enjuagues será

la Porphyromona Gingivalis (ATCC 33277). Anaerobio obligado

hallado frecuentemente en bolsillos periodontales profundos y placa

subgingival.4

En base a que se sabe que la clorhexidina  es una

sustancia antiséptica de acción bactericida y fungicida. Pertenece al

grupo de las biguanidas y se utiliza ampliamente en odontología en

concentraciones de 0,2%, 0,12% y 0,10 % en presentaciones para el

uso como colutorio o enjuague bucal. y se ha demostrado que

generan resultados positivos, esta investigación propone evaluar

cuál de estas dos es más efectiva en colonias de Porphyromonas

Gingivalis

Por tal razón en el año 2015, se desarrollará una investigación en la

la Universidad Privada Antonio Guillermo Urrelo (UPAGU), ubicada

en el distrito de Cajamarca, en el noreste del Perú, con el fin de

verificar si la eficacia del aceite esencial de Romero comparando con

la clorhexidina y si esta es es la esperada, para lo cual se usará el

método científico.

1.1.2 Fundamentación del problema o información documental

El “romero” es un arbusto perenne aromático, perteneciente a la

familia Labiatae, caracterizada por tener aproximadamente 1.5

metros de altura, los tallos jóvenes que se vuelven leñosos al

madurar, presenta pequeñas flores agrupadas en densas ramas

terminales.5

Tiene propiedades analgésicas, espasmolítico, antiinflamatorio,

antifúngico y posible propiedad antineoplásica.6, 7 El “romero” es

una especie vegetal común en la península Ibérica y, en general,

en toda la cuenca mediterránea.8

Llega al Perú en el siglo XVI. En el Perú crece en la costa, sierra y

la selva hasta los 3500 msnm.9 Las enfermedades periodontales

representan infecciones mixtas de los tejidos periodontales,

causadas principalmente por bacterias anaerobias gramnegativas10

La profundización del surco gingival que se produce durante estas

infecciones coincide con una proliferación bacteriana importante,

desafiando al sistema inmunitario, generando una respuesta local y

una respuesta sistémica del huésped.11 En investigaciones in vitro

con aceite esencial de Rosmarinus officinalis (romero) ha

demostrado tener actividad antibacteriana frente a bacterias de la

cavidad oral como: Porphyromonas Gingivalis, Actinobacillus

actinomycetemcomitans, Fusobacterium nucleatum, Streptococcus

mutans, y Streptococcus sobrinus.12

También el extracto de R.officinalis a demostrado actividad

antibacteriana contra S. mutans, S. aureus, S. casei13 y en

Streptococcus mitis estándar de ATCC 98811, Streptococcus

sanguinis ATCC 10556, Streptococcus mutans ATCC 25175,

Estreptococcus sobrinus ATCC 27609 y Lactobacillus casei14 El

presente estudio tiene como objetivo determinar el efecto

antibacteriano in vitro del extracto etanólico de Rosmarinus

officinalis (Romero) sobre flora bacterias de bolsa periodontal.

1.2 Formulación del problema de investigación

¿Entre el aceite esencial de Romero al 10% y el Gluconato de

clorhexidina al 0.12% cual tendrá mayor eficacia inhibitoria en las

colonias de Porphyromonas Gingivalis de la sepa ATCC 25175 in

vitro?

1.3 Justificación del problema de investigación

1.3.1 Justificación teórica

Es importante realizar esta investigación, pues existen muy

pocas investigaciones en las que se proponga una relación

entre las variables de estudio; además esta investigación en

un futuro usando los resultados que obtendremos, servirá

como referencia para realizar más investigaciones del tema y

lograr nuevos conocimientos.

1.3.2 Justificación Básica

En la presente investigación se buscara reforzar los escasos

conocimientos los cuales nos permitirán orientar a futuras

investigaciones.

1.3.3 Justificación aplicada

La importancia de esta investigación será en beneficio de los

profesionales de la salud con el uso de una nueva alternativa

de conocimiento y beneficio para el tratamiento de pacientes

las cuales sean portadoras de las Porphyromonas

Gingivalis.

1.3.4 Justificación tecnológica

Mediante el uso del aceite esencial de Rosmarinus officinalis

(romero) se va diseñar un tratamiento alternativo para

controlar la eficacia inhibitoria de la Porphyromonas Gingivalis

de la sepa ATCC 37277. Que hasta el momento se controla

con Gluconato de Clorhexidina al 0.12%. La investigación

tendrá un valor agregado aplicado a la carrera de

estomatología.

1.4 Objetivos

1.4.1 Objetivos General

Evaluar la eficacia en la actividad antibacteriana del extracto

de aceite esencial de Rosmarinus officinalis (romero) y

Gluconato de Clorhexidina al 10 % en cultivos de colonias

de Porphyromonas Gingivalis de la sepa ATCC 37277.

1.4.2 Objetivos Específicos

- Evaluar eficacia inhibitoria mediante el diámetro del halo de

inhibición con aceite esencial de Rosmarinus officinalis

(romero) en concentración de 10 % en colonias de

Porphyromonas Gingivalis de la cepa ATCC 25175, in vitro.

- Evaluar eficacia inhibitoria mediante el diámetro del halo de

inhibición con Gluconato de clorhexidina al 0,12% en colonias

de Porphyromonas Gingivalis de la cepa ATCC 25175, in

vitro.

- Comparar la actividad antibacteriana de las dos sustancias

de experimentación, mediante la medida del diámetro de los

halos de inhibición generados por el aceite esencial de

Rosmarinus officinalis (romero) y Gluconato de clorhexidina al

0,12% sobre colonias de Porphyromonas gingivalis de la cepa

ATCC 25175.

2. MARCO CONCEPTUAL

2.1 Esquemas que sustentan el esquema conceptual

A nivel internacional y a nivel regional no existen antecedentes sobre

el tema a llevar.

A nivel nacional encontramos antecedentes de una tesis de la

Universidad Nacional De San Marcos para obtener el título de

cirujano dentista en el año 2013 Lima – Perú, nos dice que existe

actividad antibacteriana in vitro del extracto etanólico de Rosmarinus

officinalis (romero) sobre cultivos de bacterias anaerobias frecuentes

en pacientes con bolsa periodontal. A comparación de nuestro

proyecto de tesis sobre la variable aceite escencial de romero

(Rosmarinus officinalis), se tiene en cuenta como una variable de la

tesis referida al extracto etanólico de Rosmarinus officinalis (romero).

Teixeira L. (2012). Determinó la acción antimicrobiana in vivo del

extracto de R.officinalis Linn, en bacterias orales presentes en la

biopelícula. Realizó un estudio con 11 voluntarios, quienes realizaron

un enjuague bucal con las siguientes soluciones:

placebo;clorhexidina al 0,12 (control positivo) y extracto de R.

officinalis Linn, en 3 fases de 14 días cada uno. El índice de higiene

oral simplificado se utilizó para determinar la acción de las

soluciones en la biopelícula. Después del uso de clorhexidina, el 64

% de los voluntarios presento buena higiene y menos del 36 %

limpieza regular, con una media de 1,16. Después de usar extracto

de R. officinalis el 54 % presento buena higiene y 45 % limpieza

regular, con una media de 1,3.19.

Genena A. y Col. (2008). Evaluaron la actividad antioxidante,

antibacteriana y

anti fúngica del extracto de R. officinalis. Se usó una técnica para la

obtención del extracto llamada: Extracción con fluidos supercríticos

(SFE), técnica eficaz para la separación de compuestos activos de

las hierbas. El extracto de R. officinalis mostro mayor actividad

antibacteriana contra las bacterias Gram-positivas (Staphylococcus

aureus ATCC 25923 y Bacillus cereus ATCC 11778) el extracto se

hizo más eficiente con el paso tiempo de extracción (MIC 0.25 y

0.125 mg/ml espectivamente). También mostró un efecto contra las

bacterias Gram-negativas (Escherichia coli ATCC 25922 y

Pseudomonas aeruginosaATCC 27853) con un MIC ≥ 1.0 mg/ml. El

extracto obtenido en los primeros 60 minutos no presentó actividad

antifúngica suficiente para inhibir el crecimiento de C. albicans (MIC

> 2.0 mg/ml), pero el obtenido con un período de extracción

creciente este llegó a presentar actividad (MIC= 0.5 mg/ml).30

Koo et al. (16) evaluaron la actividad antibacteriana in vitro del

extracto etanólico propóleo y de la Arnica montana sobre bacterias

orales (Streptococcus mutans,Actinomyces naeslundi,Actinomyces

viscosus,Porphyromonas gingivalis yTreponema denticola).

Muli y Maingi (11) evaluaron la actividad antimicrobiana del propóleo

de tres regiones de Kenia (Taita, Tana y Samburu) sobre

Pseudomona aeuroginosa,Escherichia coli y Staphylococcus El

extracto etanólico de propóleo al 10% de la región de Tana y

Samburu tenían una mayor actividad.antibacteriana que el extracto

etanólico de propóleo al 10% de la región de Taita (p<0,05). aureus.

2.2 Bases del esquema conceptual

En base a Rengifo R 7 (Perú, 2013) y Moromi, H et al 8 (Perú,

2009) que demostraron la actividad antibacteriana in vitro de los

propóleos contra microorganismos patógenos orales como la

Porphyromonas gingivalis.

Así se crea el siguiente esquema conceptual: el extracto etanólico

de propóleo peruano deberá usarse para obtener mayor eficacia

inhibitoria en colonias de Porphyromonas gingivalis de la cepa

ATCC 25175 que el gluconato de clorhexidina al 0,12% in vitro.

De lo cual se deriva el siguiente contexto de investigación.

a. Aceite esencial del romero: La especie vegetal Rosmarinus

officinalis L. perteneciente a la familia Lamiaceae, y conocida

popularmente como romero, es una especie originaria de la

región mediterránea, rica fuente de metabolitos activos, esta

planta es muy usada en la medicina tradicional por sus efectos

digestivos, antiespasmódicos y carminativos (4).

El aceite esencial obtenido de sus hojas es considerado como

un antimicrobiano natural que puede ser utilizado en la

producción de nuevos agentes con actividad antimicrobiana

para la industria farmacéutica y alimentaría (5). Su actividad

contra algunas cepas patógenas ha sido reportada por varios

autores (6-11). Se han realizado estudios in vitro con extractos

de R. officinalis en los que se ha evaluado su actividad

inhibitoria Gram positivas y Gram negativas.

b. Gluconato de clorhexidina al 0.12%: El espectro antibacteriano

de la clorhexidina según lo referido por Bascones A et al

(España, 2002) incluye tanto a bacterias gram positivas como

gram negativas, algunos virus como el HIV y algunos hongos,

pero sólo es esporicida a elevadas temperaturas. Su utilización

es amplia y es el agente más efectivo para tratamientos

periodontales 11. Los vehículos de administración que se

utilizan con más frecuencia son los colutorios (a una

concentración de 0,12 y 0,2%), aerosoles (0,12 y 0,2%), geles

(0,12 y 1%) y barnices, su eficacia está relacionada con la

concentración de la misma y la frecuencia de aplicación. La

acción preventiva del barniz de clorhexidina sobre la

enfermedad periodontal, fue determinada por primera vez en

estudios in vitro por Petersson et al, donde se demostró una

alta sensibilidad a la clorhexidina, tanto de Porphyromonas

gingivalis como de Actinobacillus actinomycetencomitans,

bacterias que se hayan altamente implicadas en su etiología 12.

c. Eficacia inhibitoria: Se puede definir como la resistencia de

cepas de bacterias gram positivas y gram negativas dándose

la concentración mínima inhibitoria expuestas a fármacos

bacteriostáticos como flavonoles, flavononas y flavononoles,

se mide a través del diámetro (milímetros) de los halos de

inhibición.

2.3 Discusión del esquema conceptual

La investigación consistirá en confirmar el esquema

conceptual que se ha creado. Las razones por las que se creó el

esquema conceptual son las que refiere Takarada K. y col.

(2004)11, comprobó que el aceite esencial de Rosmarinus

officinalis con una concentración inhibitoria mínima de 0.5%

inhibió el crecimiento de las bacterias Gram-negativas A.

actinomycetemcomitans, P. gingivalis y F. nucleatum. Dalirzani Z.

y col. (2011)20 demostró el efecto antimicrobiano del extracto

etanólico de R.officinalis sobre Streptococcus mutans, la media de

la zona de inhibición fue 11,52 ± 0,96 significativamente menor

que la clorhexidina (14.07 ±1.70). Castaño H. y Col. (2010)16

comprobaron la actividad antimicrobiana del extracto etanólico de

R. officinalis contra las bacterias S. sonnei, S. typhimurium y L.

monocytogenes. Monroy A. y Col. (2009)26 evaluaron la actividad

antimicrobiana del extracto etanólico de R. officinalis, comparado

con clorhexidina al 0,12% . in vitro contra Listeria monocitogenes,

Salmonella typhi Staphylococcus aureus, donde encontraron una

inhibición del 90% de las UFC. Alves M. y Col. (2008)12

estudiaron la actividad antimicrobiana de Rosmarinus officinalis

sobre especies de microorganismos predominantes en el biofilm

supragingival, como en cepas de Streptococcus mutans,

Streptococcus mitis, Setreptococcus sobrinus y Lactobacillus

casei demostró ser susceptible a la acción del observándose

halos de inhibición de 11 a 20mm. Silva M. y Col. (2008)13

comprobaron actividad antimicrobiana del extracto hidroalcóholico

de R. officinalis sobre cepas estándar como Streptococcus

sanguinis , Streptococcus mutans, Estreptococcus sobrinus y

Lactobacillus casei , Se observó halos de inhibición del

crecimiento bacteriano de 11 a 18 mm. En la investigación de

Albado E et al 15 (Perú, 2001) “en la actualidad existe una gran

variedad de agentes antimicrobianos, llamados colutorios, entre

estos la clorhexidina al 0,12 %, como el agente más utilizado en el

medio, dada su eficacia en la eliminación de microorganismos

cariogénicos. Sin embargo, presenta efectos adversos de este

medicamento generalmente leves y transitorios en especial

manchas pardas en los dientes, la lengua, prótesis y

restauraciones de silicato y resina, así como la alteración pasajera

de la percepción gustativa y descamación de la mucosa oral que

limitan su utilización 16. Además la clorhexidina es una sustancia

antiséptica que tiene un amplio espectro de actividad frente a

bacterias gram positivas y gram negativas, y en especial es eficaz

frente a estreptococos del grupo mutans, estreptococos simples,

Selenomonas spp y Propionibacterium spp, sin embargo, su

acción sobre los hongos es evaluada como relativa y no es

esporicida, ni virucida ni actúa sobre bacterias ácido-alcohol

resistentes. En concentraciones elevadas suele ser bactericida y

en concentraciones bajas, bacteriostática”

2.4. Definición de términos básicos

2.4.1. Aceite esencial de Romero al 10 %: Uso de Aceite

Esencial de Romero ( Rosmarinus officinalis L) al 10% .

2.4.2. Gluconato de clorhexidina al 0,12 %: Uso de gluconato

de clorhexidina al 0,12 %.

2.4.3. Eficacia inhibitoria: Diámetro del halo de inhibición.

3. HIPÓTESIS Y OPERACIONALIZACIÓN DE VARIABLES

3.1. Hipótesis

3.1.1.Hipótesis de investigación o trabajo

Hi: Aceite escencial de Romero (Rosmarius officinalis) al 10%

debe usarse para obtener mayor eficacia inhibitoria que el

gluconato de clorhexidina al 0,12 % en colonias de

Porphyromonas gingivalis de la cepa ATCC 25175 in vitro.

1.1.1. Hipótesis nula

H0: μ Aceite escencial de Romero (Rosmarius officinalis) al 10% ≤

μ gluconato de clorhexidina al 0,12 %.

Interpretación de la hipótesis nula

La media poblacional del Aceite Escencial del Romero (

Rosmarius officinalis) tendrá menor o igual eficacia inhibitoria que

la media poblacional del gluconato de clorhexidina al 0,12 % en

colonias de Porphyromonas ginvivalis de la cepa ATCC 25175 in

vitro.

1.1.2. Hipótesis alterna

La media poblacional Alternativa del Aceite escencial del romero

(Rosmarius officinalis) tendrá mayor eficacia inhibitoria que la

media poblacional del gluconato de clorhexidina al 0,12 % en

colonias de Porphyromonas ginvivalis de la cepa ATCC 25175 in

vitro

3. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS

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