UJI AKTIVITAS ANTIMIKROBA SENYAWA BIOAKTIF EKSTRAK METANOL DAUN SENGGANI (Melastoma candidum D. Don)

TERHADAP Shigella flexneri DAN Micrococcus luteus SERTA PROFIL KROMATOGRAFI LAPIS TIPISNYA

SutiknoM0406061

Pembimbing :Estu Retnaningtyas N., STP, M.Si.Dr. Artini Pangastuti, M.Si Rabu, 2 Juni 2010

LATAR BELAKANGS. flexneri M. luteus

Penyakit infeksi

Penyakit infeksi

Resistensi thd antibiotik

M. candidum D. DonSecara empiris :-Berkhasiat obat-Aktivitas antimikroba

PEMISAHAN LANJUT :-Esktraksi-Partisi-Fraksinasi

Golongan senyawa kimia

RUMUSAN MASALAH

TUJUAN

MANFAAT

SENGGANI

aktivitas antimikroba

tumbuh liar pada tempat-tempat yang mendapat cukup sinar matahari seperti di lereng gunung, semak belukar, lapangan yang tidak terlalu gersang

(Suparjo, 2009; Susan, 2006; Cushnie, 2005)

Mempunyai khasiat obat:-Menghentikan pendarahan-mengobati wasir-disentri, diare-Jerawat

-sakit perut-infeksi kuman-Antivirus-Antimikroba

Kingdom: PlantaeDivisi : SpermatophytaKelas : DicotyledoneaeOrdo : MyrtalesFamili : Melastomataceae Genus : MelastomaSpesies : Melastoma candidum D. Don

Shigella flexneri

- Gram negatif- Bentuk batang ramping- Susunan antigen kompleks- Mengeluarkan lipopolisakarida yang

toksik

Penyebab Shigellosis : disentri basiller

Hasil survei pada balita di rumah sakit di Indonesia menunjukkan proporsi spesies Shigella sebagai etiologi diare; S.dysentriae 5,9%; S.flexneri 70,6%; S.boydii 5,9%; S.sonnei 17,6% (Santoso, 2004)

Micrococcus luteus- Gram positif- Bentuk bulat / coccus- Dinding sel tersusun atas 2 polimer

seperti peptidoglikan dan asam teikuronat (TUA), yang tersusun atas N-asetil-D-manosaminuronat dan residu D-glukosa yang berikatan secara kovalen

Menyebabkan abses intracranial, meningitis, pneumonia, dan septik artritis

Spesies Micrococcus sp dapat menyebabkan abses intracranial, meningitis, pneumonia, dan septik artritis

KERANGKA PEMIKIRAN

Perlunya pencarian senyawa baru dari alam

Pemisahan senyawa (ekstraksi, partisi, fraksinasi)

Hasil pemisahan tiap proses dimonitor dengan uji aktivitas

antimikroba (metode difusi agar) dan KLT

Fraksi teraktif

Penentuan nilai MIC-MBC golongan senyawa kimia

Daun

Senggani

Uji pendahuluan : Memiliki aktivitas antimikroba

(Retnaningtyas dan Mulyani, 2008)

Perlu adanya penelitian lanjutan untuk mengetahui adanya

senyawa bioaktif daun senggani sebagai antimikroba

Dimonitor kandungan senyawa aktifnya dengan uji KLT

Penyakit infeksi & peningkatan

resistensi terhadap antibiotik meningkat

preparasi sampel

HIPOTESIS

METODE

ALAT

BAHAN

• Bahan utama: daun senggani• Maserasi : metanol absolut• Partisi : eter

• Fraksinasi : Silika gel 60 GF254 , kloroform-etil asetat-metanol

• KLT & penentuan gol.senyawa :

plat silika gel 60 GF254, serium (IV) sulfat, AlCl3, FeCl3, LB, SbCl3, dan Vanillin-H2SO4

• Uji antimikroba : S. flexneri ATCC 12022 dan M. luteus ATCC 40732, Media (NA, MHA,MHB), CMC

CARA KERJA

Daun Senggani

Serbuk daun senggani

Maserasi dgn metanol absolut(3x ulangan, @24 jam), filtrasi

Maserat

Evaporasi dengan rotavapor

Ekstrak Metanol

CARA KERJAEkstrak Metanol

Uji antimikroba dengan difusi agar

Partisi dengan eter

- Analisis profil KLT- Uji Antimikroba dengan difusi agar

Bagian larut Bagian tidak larut

Bagian tidak larut merupakan bagian teraktif

CARA KERJABagian teraktif hasil partisi

Fraksinasi dg VLC

F1 F2 F3 F4 F5 F6 F7 F8 F9 F10 F11

FI FII FIII FIV FV FVI

Uji antimikroba dg difusi agar

FV dan VI (fraksi V dan VI) sebagai fraksi teraktif

Uji MIC dan MBC Deteksi senyawa dengan KLT

Polifenol, Rf 0,21; 0,79; 0,94Polifenol, Rf 0,21; 0,79; 0,94

ANALISIS DATA

• Deskriptif : profil KLT komponen kimia hasil tiap pemisahan

• Perbandingan hasil uji antimkroba : diameter zona hambat, MIC dan MBC

HASIL DAN PEMBAHASAN

Konsentrasi ekstrak(mg/mL)

 

Diameter zona hambat (mm)S. flexneri M.luteus

100 7,99 7,37200 11,12 9,77300 11,65 10,37400 11,44 12,74500 13,79 13,04600 13,60 12,92700 12,29 12,32800 13,24 13,84900 12,85 13,75

1000 13,45 14,32Kontrol Amoxicilin (2,5)  11,97  12,03

Kontrol CMC (1) 0 0Kontrol Metanol (960) 0 0

Hasil uji difusi agar ekstrak metanol daun senggani terhadap bakteri

211 1

2

(A) S. flexneri ; (B) M. luteus(1) 900 mg/mL ; (2) 800 mg/mL

A B

0

2

4

6

8

10

12

14

16

100 200 300 400 500 600 700 800 900 1000D

iam

eter

zo

na

ham

bat

(mm

)

Konsentrasi ekstrak (mg/mL)

S.flexneri

M.luteus

Hasil partisi(1) UV366. (2) UV254 , (3) serium (IV) sulfat

a. Bagian tidak larut eter; b. bagian larut eter

Fase diam = silika gel GF254

Fase gerak = CHCl3 : EtOAc (1:9)(v/v)

Jarak pengembangan = 6 cm

Kromatogram hasil partisi ekstrak daun senggani pada pelarut eter absolut

A. S. flexneri : konsentrasi ekstrak 500 mg/mL

B. S.flexneri : konsentrasi ekstrak 1000 mg/mL dan kontrol amoxicillin 2,5 mg/mL

C. M. luteus : konsentrasi ekstrak 500 mg/mL

D. M.luteus : konsentrasi ekstrak 1000 mg/mL dan kontrol amoxicillin 2,5 mg mL

Hasil uji difusi agar bagian tidak larut eter senyawa hasil partisi

Konsentrasi ekstrak (mg/mL) Diameter zona hambat (mm)Shigella flexneri Micrococcus luteus

100 12,10 9,85 200 14,10 11,19 300 16,20 14,25400 15,83 14,24500 18,35 14,48600 18,72 15,07700 19,07 16,67800 18,67 15,84900 18,88 16,44

1000 18,10 17,27Kontrol Amoxicillin (2,5) 15,50 16,60

Kontrol CMC (1) 0 0Kontrol Metanol (960) 0 0

Kontrol Eter (1000) 0 0

Hasil uji difusi agar bagian tidak larut eter senyawa hasil partisi

Hasil uji difusi agar bagian tidak larut eter senyawa hasil partisi

0

5

10

15

20

25

100 200 300 400 500 600 700 800 900 1000

Dia

met

er z

on

a h

amb

at (

mm

)

Konsentrasi ekstrak (mg/mL)

S.flexneri

M.luteus

Hasil uji difusi agar bagian larut eter senyawa hasil partisi

A.S. flexneri : konsentrasi ekstrak 500 mg/mLB.S.flexneri : konsentrasi ekstrak 1000 mg/mL dan kontrol amoxicillin 2,5 mg/mLC.M. luteus : konsentrasi ekstrak 500 mg/mLD.M.luteus : konsentrasi ekstrak 1000 mg/mL dan kontrol amoxicillin 2,5 mg/mL

Konsentrasi ekstrak (mg/mL) Diameter zona hambat (mm)

Shigella flexneri Micrococcus luteus

100 9,67 4,78

200 11,93 8,07

300 11,25 8,93

400 13,85 10,23

500 16,24 9,24

600 15,40 12,50

700 15,22 12,10

800 15,75 12,89

900 16,09 13,60

1000 10,77 9,30

Kontrol Amoxicillin (2,5) 14,50 12,20

Kontrol CMC (1) 0 0

Kontrol Metanol (960) 0 0

Kontrol Eter (1000) 0 0

Hasil uji difusi agar bagian larut eter senyawa hasil partisi

0

2

4

6

8

10

12

14

16

18

100 200 300 400 500 600 700 800 900 1000

Dia

met

er z

on

a h

amb

at (

mm

)

Konsentrasi ekstrak (mg/mL)

S.flexneri

M.luteus

Hasil uji difusi agar bagian larut eter senyawa hasil partisi

Hasil Fraksinasi

Fraksi I : Kloroform 100%Fraksi II : Kloroform-Etil Asetat (2:1) (v/v)Fraksi III : Kloroform-Etil Asetat (1:1) (v/v)Fraksi IV : Kloroform-Etil Asetat (1:3) (v/v)Fraksi V : Kloroform-Etil Asetat (1:5) (v/v)Fraksi VI : Kloroform-Etil Asetat (1:9) (v/v)Fraksi VII : Kloroform-Etil Asetat (1:15) (v/v)Fraksi VIII : Kloroform-Metanol (1:1) (v/v)Fraksi IX : Kloroform-Metanol (2:1) (v/v)Fraksi X : Kloroform-Metanol (3:1) (v/v)Fraksi XI : Metanol absolut

P 1 2 3 4 5 6 7 8 10 11 9

P 1 2 3 4 5 6 7 8 10 11 9

Kromatogram fraksi ekstrak daun senggani dengan deteksi (1) UV366; (2) UV254; dan (3) serium (IV)

sulfatFase diam: silika gel GF254

Fase gerak : MeOH : EtOAc (1 : 7) (v/v)Jarak pengembangan : 6 cm

Kromatogram fraksi akhir ekstrak daun senggani

FI FII FIII FIV FV FVI

UV366; (2) UV254; dan (3) serium (IV) sulfat Fase diam : silika gel 60 GF254

Fase gerak : MeOH : EtOAc (1:7) (v/v)Jarak pengembangan : 6 cm

• S.flexneri • M.luteusA = Fraksi VB = Fraksi VI

Sampel Uji Diameter zona hambat (mm)

S. flexneri M. luteusFraksi I 0 0Fraksi II 4,07 6,27Fraksi III 6,15 13,14Fraksi IV 9,09 11,55Fraksi V 10,22 12,78Fraksi VI 9,75 14,04Kontrol Amoxicillin 2,5 mg/mL 6,30 16,50

Kontrol CMC 1 mg/mL 0 0Kontrol Metanol 960 mg/mL 0 0Kontrol Eter 1000 mg/mL 0 0

0

2

4

6

8

10

12

14

16

F1 F2 F3 F4 F5 F6

Fraksi

Dia

met

er z

on

a h

amb

at (

mm

)

S.flexneri

M.luteus

MIC - MBCBakteri K

(mg/mL)OD1

(nm)OD2

(nm)∆OD(nm)

Pertumbuhan Bakteri AktivitasPasca

Inkubasi Uji Lanjut

S. flexneri(Fraksi V)

100 0,2932 1,7963 1,5031 Tumbuh - -

200 0,9045 1,4127 0,5082 Tumbuh - -

300 1,0585 2,0275 0,969 Tumbuh - -

400 2,1279 2,8341 0,7062 Tumbuh - -

500 2,7668 3,6123 0,8455 Tumbuh - -

M. luteus(Fraksi VI)

100 0,2932 1,3694 1,0762 Tumbuh - -

200 0,9045 1,7407 0,8362 Tumbuh - -

300 1,0585 2,5151 1,4566 Tumbuh - -

400 2,1279 2,9597 0,8318 Tumbuh - -

500 2,7668 2,6833 0,0835 Tidak tumbuh

Tumbuh Bakteriostatis

PENENTUAN GOL.SENYAWA KIMIA

• (1)UV366

• (2) UV254

• (3) AlCl3• (4) FeCl3• (5) LB

• (6) SbCl3• (7) serium (IV) sulfat

• (8) Vanillin-H2SO4

Fase diam = silika gel GF254

Fase gerak = metanol : kloroform : wash benzen (2:1:1) (v/v)Jarak pengembangan 7 cm

No Deteksi HasilWarna Rf

1 UV366 - -2 UV254 -3 AlCl3 - -4 FeCl3 Kehitaman 0,21; 0,79; 0,945 Lieberman burchard - -6 SbCl3 - -7 Serium (IV) sulfat - -8 Vanillin- H2SO4 - -

Perkiraan senyawa Fenolik

• (1)UV366

• (2) UV254

• (3) AlCl3• (4) FeCl3• (5) LB

• (6) SbCl3• (7) serium (IV) sulfat

• (8) Vanillin-H2SO4

Fase diam = silika gel GF254

Fase gerak = metanol : kloroform : wash benzen (2:1:1) (v/v)Jarak pengembangan 7 cm

No Deteksi Hasil

Warna Rf

1 UV366 - -

2 UV254 - -

3 AlCl3 - -

4 FeCl3 Kehitaman 0,21; 0,79; 0,94

5 Liberman Burchard - -

6 SbCl3 - -

7 Serium (IV) sulfat - -

8 Vanillin- H2SO4 - -

Perkiraan senyawa Fenolik

KESIMPULAN

– Hasil partisi ekstrak metanol daun senggani (Melastoma candidum D.Don) menunjukkan aktivitas antimikroba paling kuat terhadap :

S. flexneri 700 mg/mL (diameter penghambatan 19,07 mm).

M.luteus 1000 mg/mL (diameter penghambatan 17,27 mm).

Hasil fraksinasi :

fraksi V mampu menghambat S.flexneri (diameter penghambatan terbesar 10,22 mm)

fraksi VI mampu menghambat M.luteus (diameter penghambatan terbesar 14,04 mm).

– Profil kandungan kimia dari fraksi V dan fraksi VI menunjukkan adanya bercak pada Rf 0,21; 0,79; 0,94.

– Fraksi V dan fraksi VI dapat diperkirakan sebagai senyawa fenolik.

TERIMA KASIH