ProtozoariosRizhopodos:

Entamoeba histolyticaY otras amebas no patógenas

Dra. Hilda María Solís AcostaProfesora Principal del Departamento de

Microbiología medicaFacultad de Medicina

2012 UNMSM

Entamoeba hartmanni

Entamoeba histolytica

Entamoeba histolyticaEntamoeba histolytica

Entamoeba histolytica

Iodamoeba

E. coli

E.nana

Definición:Producen amebiasis

AmebiasisInfección del intestino grueso del hombre por la ameba Entamoeba histolytica que ocasionalmente puede tener localizaciones extraintestinales e invadir el hígado, pulmón, piel y cerebro.(amebiasis secundaria)

Entamoeba histolyticaAntecedentes

En 1587 se reconoce la Disentería.

Sennert (1626) menciona la contagiosidad de la enfermedad.

Pisonis en 1648 “Historia rerum naturalium” base de la medicina tropical.

En 1875 Lösh descubre trofozoítos móviles en heces de agricultor : Amoeba coli.

En 1883 Koch en autopsias: Entamoeba disenteriae.

En 1885 Kartulis describe las amebas en abscesos hepáticos.

En 1893 y 1894 Quink y Ross describen las formas quísticas como formas de resistencia de las amebas.

En 1903 Schaudinn Entamoeba histolytica Entamoeba coli .

En 1908 Martin, noción de portador asintomático.

En 1912 Rogers acción curativa de la emetina.

Biologia de Entamoeba histolyticaPresenta 2 estadios evolutivos:Trofozoito

y

Quiste.

Caracteres morfológicos y f isiológicosDe E. histolyt ica

Formas vegetativas (trofozoítos)

La forma magna mide 20 a 30 μm.La forma minuta mide 10 a 20 μm.Se movil izan emitiendo psudopodosA 37° movimientos lentos, emisión de seudópodos con desplazamientos amplios de citoplasma.A 20° desplazamientos mínimos, se forman seudópodos de manera explosiva.

Imágenes de trofozoitos

Entamoeba histolytica

Caracteres morfológicos y f isiológicosFormas quísticas

Enquistamiento únicamente en la luz del intestino

El quiste maduro es esférico 12 a 16 μm.

Núcleo único (prequiste) : quiste maduro con 4 núcleos.

Quiste joven tiene uno o dos núcleos con citoplasma granuloso. Se observa dos bastones gruesos son los cuerpos cromatoides o siderófi los.

Imágenes de quistes

Entamoeba histolytica

Ciclo evolutivoForma infectante: Quiste maduro tetranucleado Vía de infección : Oral

Mecanismo de infección: ingesta de agua o alimentos contaminados con heces humanas con quistes maduros tetranucleados.

Ciclo de vida de Entamoeba histolytica

CICLO DE VIDA DE E. histolyticaquiste

Entamoeba histolytica 28COMPLICACIONES EXTRADIGESTIVAS

Ciclo evolutivo no patógeno

Ingesta de quistes maduros.

Desenquistamiento en medio gastro- intestinal.

Tripsina pancreática con T°, pH y potencial de oxido reducción.

Los 4 núcleos se dividen por mitosis y estado fugaz de metaquiste (8 núcleos).

División del citoplasma en 8 pequeñas amebas que se convierten en trofozoítos minuta.

En la luz del colon división por bipartición y aumentan considerablemente.

-Las formas minuta, se redondean con una

pared gruesa.

-Los quistes resisten en el exterior al ser eliminados pasivamente con las heces.

-Los trofozoítos sobreviven al fondo de las vellosidades intestinales.

La eliminación de quistes no es constante y sufre variaciones en el t iempo.

El ciclo no compromete ningún órgano patogénicamente.

Trofozoíto minuta se transforma en patógeno: factor hospedero o factor parásito (cepa).

Amebas penetran la pared intestinal, se agrandan y fagocitan hematíes.

Se dividen por bipartición a ritmo acelerado.

Poder lí t ico, provocan úlceras extendidas en la pared del intestino y en otros órganos.

Mecanismo de transformación en patógeno no es bien conocido.

Ciclo evolutivo patógeno

Por Tratamiento o Anticuerpos, las amebas hematófagas disminuyen ritmo de multiplicación.

Se destruyen muchas amebas y las sobrevivientes migran hacia la luz del intestino.

Los trofozoítos disminuyen de tamaño y luego se enquistan, se reinstala ciclo minuta.

La presencia de glóbulos rojos en el citoplasma del trofozoito es elemento diagnóstico, en paciente con diarrea.

PatogenicidadMecanismos de virulencia

Experimentos:Contacto en cultivo lectina reconociendo galactosamina de la célula epitelial suficiente para provocar hendiduras en la membrana y que l leva a su destrucción.

Desaparición de microvellocidades con modificaciones letales.

Proteasas provocarán la transformación esférica y daño de la matriz celular.

Mecanismos de virulencia

Las proteinasas (histolisína una proteinasa-cisteína) de la ameba, degradan el tejido colágeno, la f ibronectina, en los cult ivos celulares.

También se ha detectado toxinas citopatógenas que producen efecto de aglutinación celular y producen Ac IgG.

Por movimientos de pseudópodos ejerce efecto mecánico en células epiteliales y su soporte.

Lesiones intestinales

Entamoeba

histolytica

Diagnóstico de la AmebiasisDirecto

Examen microscópico

Examen en fresco de heces, a 37° C, inmediatamente después de la toma de muestra.

Se encuentran trofozoítos de 20 a 30 μm conteniendo glóbulos rojos.

Se debe repetir el examen ( 3 exámenes seriados)

Es mejor colectar la muestra a través de una rectoscopia.

Cultivos en medios artif iciales como PAVLOVA.

Cultivos en líneas celulares.

Metodos de Concentración (Ritchie, Faust)

Métodos de coloración:Temporales como la de lugol y otros.

Permanentes como, frotises de heces Coloreados con: a. Hematoxil ina férrica b. Gomorris tr ichrome.

Se puede agregar colorantes como: la eosina que tiñen el fondo de rosa para observar los quistes en negativo.

El lugol colorea las membranas externas y nucleares de color amaril lo o marrón.

El reactivo de Bailenger colorea el citoplasma y bastones cristaloides en rojo y el núcleo negro.La coloración Sargeaunt colorea la pared externa del quiste, la membrana nuclear de color verde claro y los cuerpos cromatoides de verde oscuro.

Diagnóstico: forma magna

En referencia al diagnóstico el hallazgo de trofozoítos con eritrocitos fagocitados en heces frescas o biopsias se correlaciona con la presencia de E. histolytica.

Entamoeba hartmanni

Entamoeba hartmanniTrofozoito

Entamoeba hartmanni

CosmopolitaEn 1959 fue descrita nuevamente por Barrow. Se le consideraba una raza pequeña de

E. histolityca.Faust 1958, informa sobre sus diferencias con E. histolytica

Entamoeba hartmanni trofozoito quiste

Morfología, biología y ciclo evolutivo.E. hartmanni semejante a E. histolytica en todas las fases de su ciclo vital, salvo por su tamaño.Trofozoitos desde 4 hasta 12µ, no ingieren hematies, y son menos moviles.Núcleo similar al de E. coli , por su cromatina y su cariosoma.

Quistes de 5 a 10 micras, los inmaduros con 1 o 2 núcleos, varios cuerpos cromatoides cortos.

Quistes maduros con 4 núcleos.

Epidemiología

Cosmopolita.

Se adquiere por ingesta de quistes maduros.

La prevalencia es casi igual a la E. histolytica.

Patogenia, anatomia patológica y sintomatología.E. hartmanni es considerada un sinónimo de E. histolytica.

Experimentalmente se vio que producía colit is amibiana en perros y gatos.

En humanos no se ha observado patología.

Diagnóstico

Examen de heces, coloraciones

E. hartmanni e E. histolytica se diferencian mejor por el tamaño de sus quistes.

E. hartamanni se confunde frecuentemente con E. nana.

Tratamiento

No se indica ya que los portadores son asintomáticos.

Profilaxis

Evitar ingerir alimentos o agua contaminados con heces humanas.

Entamoeba dispar

Entamoeba dispar

Entamoeba dispar

La ameba comensal Entamoeba dispar, morfológicamente idéntica a

E. histolytica.

Entamoeba dispartrofozoito quiste

ANTECEDENTES

Emil Brumpt en 1925 describe una ameba

similar a E. histolytica, con 4 núcleos y la denomina Entamoeba dispar, considerándola no patógena

En 1978 Sargeunt y Wil l iams uti l izando los patrones de migración electroforética de tres isoenzimas (glucosa fosfato isomerasa, fosfoglucomutasa y malato xidoreductasa) lograron establecer:

Cuatro diferentes zimodemas, uno de los cuales es relacionado con la forma invasora y los otros con la forma no invasora o comensal.

EPIDEMIOLOGIASe revisan los nuevos hallazgos en cuanto la

epidemiología en dist intos países del mundo, uti l izando

las técnicas moleculares de diferenciación para E. histolytica / E. dispar.

Los pacientes en cl imas templados presentan esta ameba (E. dispar) generalmente.

En el examen al fresco se observan quistes se trata verdaderamente de esta ameba.

de E. dispar, por cuanto la presencia de anticuerpos se uti l iza para diferenciar una infección por E. histolytica de una causada por E. dispar.

Diagnóstico de Amebas

El referencia al diagnóstico el hallazgo de trofozoítos con eritrocitos fagocitados en heces frescas o biopsias se correlaciona con la presencia de E. histolytica. Por el contrario los quistes de ambos protozoarios son indistinguibles.

En la actualidad se dispone de variadas técnicas inmunológicas, algunos comercialmente disponibles, para la detección de antígenos en heces y anticuerpos en suero, para ambos casos la técnica más uti l izada es el ELISA indirecto.

Se establece la presencia de 21 zimodemas, de los cuales nueve corresponden a zimodemas no patogénicos, actualmente identif icados para E. dispar y los restantes doce a zimodemas patogénicos que corresponden a

E. histolytica.

Entamoeba hartmanni

Entamoeba disparson del grupo “LIKE” ya que son muy parecidas a E. histolytica. para un ojo no muy experto pueden ser confundidas al examen directo.

MECANISMOS DE DEFENSA DEL Hospedero

INESPECÍFICOS: • Mucus intestinal • Peristalt ismo intestinal.

ESPECÍFICOS: • GALT (tejidos l infoides asociados al

intestino) • IgA secretoria • Aumento de la IgE • Eosinófi los

Diagnostico indirectoEn la actualidad se dispone de variadas técnicas inmunológicas, algunos comercialmente disponibles:Coproantigenos, para la detección de antígenos en heces. y anticuerpos en suero, para ambos casos la técnica más uti l izada es el ELISA indirecto, Dot Elisa, Wester BLOT.HAI (reacción de hemoaglutinación indirecta).

ELISA

C-

C-

C+

C+

DOT ELISA

RHAI HAI

Inmunodiagnóstico

Test de ELISA indirecto-IgG, IGM

Test de Dot-ELISA

IFI (Reacción de inmunofluorescencia indirecta).

IEC (Reacción de contrainmunoeletroforesis)

Reacción de hemaglutinación indirecta (HAI).

por cuanto la presencia de anticuerpos se uti l iza para:

diferenciar una infección por E. histolytica de una causada por E. dispar, que es morfologicamente parecida.

También por el estudio de Isoenzimas, se establece la presencia de mas de 21 zimodemas, de los cuales 9 corresponden a zimodemas no patogénicos, actualmente identif icados para E. dispar Y por lo menos 12 zimodemas patogénicos que corresponden a

E. histolytica.

Se ha desarrollado anticuerpos monoclonales.

y establecido la presencia de al menos 6 epitopos importantes como posibles herramientas para la diferenciación de E. histolytica / E. dispar.

Empleo de Antígenos recombinantes a mejorado el diagnóstico.

Diagnóstico MolecularMas o menos se sabe que existen 37 subespecies de E. histolytica.

Últimamente se esta trabajando con el ADN para poder diferenciarlas.

PCR.

Isoenzimas.

Electroforesis de isoenzimas como método de diferenciación entre

E. histolytica y E. dispar Todas las especies de amibas del intestinos humano pueden ser diferenciadas por patrones isoenzimáticos. Este resultado incluye la importante verif icación de la existencia de la E. hartmanni, de E. histolytica, como especie distintiva.

Gracias a la técnica de electroforesis de isoenzimas actualmente se ha logrado establecer lo siguiente:

Más de 20 patrones isoenzimáticos de E. histolytica han sido encontrados en cuatro continentes.

Epidemiología

E. histolytica es cosmopolita.

Se adquiere por ingesta de quistes maduros (tetranucleados).

La prevalencia de E. histolytica depende de varios factores especialmente socioeconómicos, cepa de la ameba y factores propios del hospedero.

EPIDEMIOLOGIASe revisan los nuevos hallazgos en cuanto la epidemiología en distintos países del mundo, uti l izando.

las técnicas moleculares de diferenciación para E. histolytica.

Los pacientes en climas templados presentan la ameba (E. dispar) generalmente.

La seroprevalencia por E. histolytica en pacientes con heces positivas por quistes

de E. histolytica/ E. dispar .

DISENTERIA AMEBIANA : AMEBIASIS

Entamoeba histolytica

DISTRIBUCIÓN

- Mundial

quistes infecciosos

RIZOPODOS

Entamoeba histolytica

Los trofozoitos no son infecciosos

Distribución de Entamoeba histolytica

Tratamiento de la Amebiasis

Amoebicidas de contacto

Actúan sobre los trafozoítos forma minuta.Paramomicina 1500 mg (25-30 mg/Kg) c/8 hs. 5-7 días.

Amoebicidas tisulares

Dehidroemetina 1 mg/Kg en inyección subcutánea durante 10 días.

Metronidazol 2000 mg (30-50 mg/Kg) c/8 hs. 5-10 días.

Tinidazol 2000 mg (50-75 mg/Kg) 1 vez por 2 días.

Entamoeba coli

Entamoeba coliEsta ameba parasita al ser humano y a veces al cerdo, mono y puede vivir como comensal en el intestino grueso. Causando infecciones asintomáticas que no l legan a adquirir importancia clínica. Esta ataca al ser humano en cualquier edad, siendo más frecuente en niños y adultos jóvenes.

MorfologíaPresenta 2 estadios evolutivos: trofozoito, quiste,. El trofozoito de E. coli , es de forma ameboide incolora, de 15 a 50 micras, con citoplasma viscoso en el que es difíci l diferenciar el ectoplasma del endoplasma, y el núcleo no se observa con facil idad.

Entamoeba coli (trofozoito)

En las preparaciones teñidas con hematoxil ina,

En el interior del endoplasma se encuentran pocas o muchas vacuolas alimenticias, que generalmente contienen bacterias.

El núcleo esférico, de membrana relativamente gruesa y revestida en el interior por placas o gránulos de cromatina y un cariosoma de volumen moderado y excéntrico.

Quiste

Redondeados de 8 núcleos con barras cromidiales con extremos asti l lados, doble pared quística.

Entamoeba histolytica (quiste)

Antecedentes

Entamoeba coli fue identif icada por Lewis Descrita por Cunningham en Calcuta. Gras fue el primero que dio una descripción que permitiera reconocerla, y dijo haberla encontrado en las heces de personas sanas y enfermas.

E. coli es un protozoario que se encuentra presente en los hombres de todo el mundo.

Más común entre las poblaciones nativas de los países de climas cálidos y húmedos. También se encuentra con frecuencia entre algunos grupos o población de clima frío.

CICLO EVOLUTIVOForma infectante; quiste maduro (8 núcleos)Vía de infección: OralMecanismo de infección: ingesta de agua o alimentos contaminados con el quiste maduro.

Epidemiología

Se transmite en forma de quiste viable por contaminación fecal oral.

La infección es alta en países tropicales, en climas fríos se debe a malas condiciones de higiene.

Patogenia

No patógeno y no produce síntomas.

Diagnóstico

Hallazgo principalmente de trofozoitos y quistes.

Diagnostico

Hallazgo de cualquier estadio evolutivoTrofozoito o quiste.

Profilaxis

Igual que las otras amebas ya que es un indicador de fecalismo.

Iodamoeba butschli i

Iodamoeba butschlii (trofozoito)

Iodamoeba butschlii (quiste)

Endolimax nana (trofozoito)

Endolimax nana (Quiste)

CONTROL y PROFILAXIS

INDIVIDUAL

Higiene personal y ambiental . Lavado de manos Lavado meticuloso de frutas y verduras

HIGIENE COLECTIVA

SANEAMIENTO AMBIENTALPOTABILIZACIÓN DEL AGUA ACTIVIDADES DE CONTROL BIEN ESTRUCTURADAS Y PERMANENTES.

• programas en convenio con la universidad para:

• control de enteroparásitos en guarderías comunitarias para preescolares, ESCOLARES,

• que logra reducción significativa en la prevalencia de las parasitosis a través de actividades de:

–EDUCACIÓN SANITARIA –DIAGNÓSTICO –TRATAMIENTO

ESTRATEGIAS DE CONTROL 

A CORTO PLAZO Atención médica individual Tratamiento farmacológico Educación sanitaria

 A LARGO PLAZO Mejora del saneamiento ambientalAbastecimiento de agua potable Promoción de higiene personal y alimentaría.

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MUCHAS GRACIAS Por su atención