UNIVERSIDAD NACIONAL AUTNOMA DE MXICO FACULTAD DE ESTUDIOS SUPERIORES ZARAGOZAQUMICA FARMACUTICO BIOLGICALaboratorio de Microbiologa General IReporte experimental prcticas: 8. Aislamiento y cuantificacin de microorganismos y 9. Patogenicidad y virulencia.

Resumen.Se llev a cabo la siembra de una muestra con agua de betabel para realizar la cuantificacin de los microorganismos presentes mediante las tcnicas de dilucin y vaciado en placa con asa calibrada. Para ello, se utiliz agar EMB (para enterobacterias y/o gram negativas), AN y ASC al 5%. Posteriormente, se realizaron las pruebas de patogenicidad, de Coagulasa (libre y ligada) con Sthapylococcus aureus, Hemolisina con Streptococcus pyogenes y Staphylococcus aureus, Catalasa con todas las bacterias del cepario (Pseudomona aeruginosa, Salmonella thypi, Klebsiella pneumoniae, Proteus vulgaris, Micrococcus lysodeikticus, Staphylococcus aureus, Bacillus subtilis, Corynobacterium equi y Eschericia coli); asimismo, se analiz en la mesa redonda la presencia de cpsulas como factor de virulencia y, que la manera ms adecuada de llevar a cabo la presencia de esta con las bacterias es mediante una tincin de capsula (desarrollada la clase pasada) con rojo Congo o tinta china. Introduccin.Para trabajar con un microorganismo especfico, se necesita aislar de una muestra, ya sea de algn fluido corporal, alimento o materia orgnica. El aislamiento implica la obtencin de un cultivo puro (axnico), donde slo existe un tipo de microorganismo. La separacin de microorganismos presentes en una poblacin mixta puede lograrse de varias maneras: separando a los microorganismos fsicamente mediante diluciones seriadas y vaciado en placa, por agotamiento de un pequeo inculo en un medio de cultivo slido o utilizando medios de cultivo selectivos para inhibir a los microrganismos no deseados. Existen mtodos para cuantificar microorganismos de una determinada muestra. Estos mtodos pueden cuantificar masa total de la poblacin y otros el nmero de UFC. Su clasificacin de acuerdo a la manera de cuantificar puede ser directa o indirecta y segn los microorganismos que consideren pueden se clasifican en mtodos viables y mtodos totales. El vaciado y cuantificacin en placa es un mtodo indirecto que cuantifica clulas viables, al igual que el mtodo de asa calibrada. La cuantificacin para productos alimenticios est autorizada segn la NOM- 113-SSA1-1994 y la NOM-110-SSA1-1994 con placas que contienen 25 250UFC o bien, la literatura avala su conteo con placas en un rango de 30-300UFC. En tanto, el procedimiento se realiza segn esta imagen:Generalmente los microorganismos se pueden clasificar como saprofitos si no producen enfermedad o patgenos si producen una enfermedad en el hospedero. Los microorganismos patgenos tienen una virulencia que implica la infecciosidad del microorganismo y la severidad de la infeccin producida (virulencia lata, moderada y baja). Los factores de virulencia que desarrolla el microorganismo patgeno para sobrevivir y multiplicarse en el husped son la cpsula propia de la bacteria, toxinas, enzimas, etc.Las toxinas pueden ser endotoxinas, presentes en microorganismos Gram (-) y que se encuentran dentro de la bacteria en su pared celular compuestas por LPS; o exotoxinas, secretadas por bacterias Gram (+) y Gram (-), compuestas de polipptidos y tienen alta toxicidad.Tambin las bacterias cuentan con algunas enzimas para establecer una infeccin o simplemente para su propio metabolismo. La catalasa es una enzima que cataliza la degradacin del H2O2 en hidrogeno y agua, la prueba de laboratorio, permite diferenciar organismos Gram (+) de Gram (-). La coagulasa es una enzima que transforma el fibringeno en fibrina. La hemolisina, es una enzima que transforma la hemoglobina en biliverdina.

Instrumentos y materialMicroorganismos(bacterias de cepario)Reactivos

Asa calibrada

Asabacteriolgica Portaobjetos

Mechero bunsen

-Pseudomona aeruginosa - Salmonella thypi- Klebsiella pneumoniae- Proteus vulgaris- Micrococcus lysodeikticus,- Staphylococcus aureus- Bacillus subtilis- Corynobacterium equi- Escherichia coli- Streptococcus pyogenes Muestra agua de betabelH2O2

Materiales y Metodologa.

Resultados.Tabla I. Aislamiento y cuantificacin. MtodoCuantificacin y vaciado en placa.

Imagen

Resultado

MtodoAsa calibrada (1L)

ImagenAgar NutritivoEMB

Resultado

Tabla II Prueba de Coagulasa. Esta prueba se realiz para los 3 equipos ya que solo se tena un tubo de plasma por profesor. En el tubo de realizo la inoculacin de Salmonella aureus, posteriormente se Incubo a 37C, la tcnica nos dice que debe ser por 4 horas pero el tiempo no era suficiente, mientras se daba la incubacin se le hizo observaciones cada 15 minutos para determinar si haba formacin de algn coagulo sin embargo el tiempo que se estuvo en revisin no dio formacin de dicho coagulo por lo tanto la reaccin se determin como negativa.

Tabla IV Prueba de CatalasaBacteriaReaccin con H2O2

Pseudomona auriginosa+++

Salmonella typhi+

Streptococcus pyogenes-

Klebsiella pneumoniae++

Proteus vulgaris+++

Micrococcus lysodeikticus+++

Staphylococcus aureus++

Bacillus subtilis++

Corynebacterium equi+

Escherichia coli.+

*Algunas reacciones no se aprecian debido a que la foto fue tomada una vez que se terminaron las pruebas.

Tabla III Prueba de Hemolisina (AS5%)BacteriaImagenResultado

Streptococcuspyogenes

Negativo

Staphylococcusaureus

Negativo