Fragoso Ortega ArielPeña Ángeles David Fernando

Gpo.: 05 Equipo: 212/10/2010

Práctica 6 Técnicas de aislamiento de microorganismos.

Objetivos Explicar el fundamento de diferentes medios de cultivo y condiciones de incubación

para el aislamiento de microorganismos con características específicas. Aplicar diferentes técnicas para el aislamiento de microorganismos. Comparar con cepas de referencia la eficiencia de las técnicas de siembra, medios de

cultivo y condiciones de incubación empleadas para el aislamiento de microorganismos

Obtener y comprobar la pureza de los cultivos aislados Aplicar una técnica de conservación de corto o mediano plazo a los cultivos puros

obtenidos.

IntroducciónEn todos los ambientes naturales habitan múltiples microorganismos de diversos tipos y actividad fisiológica. Para efectuar el estudio de un organismo particular es necesario separarlo de la población mixta en la que se encuentra. Para tal fin se emplean técnicas de aislamiento que conduzcan a la obtención de un cultivo puro.

De manera general los métodos de aislamiento incluyen:1. Separación física de los microorganismos mediante:

a) Diluciones seriadas y siembra por vertido en placab) Siembra por agotamiento

2. Utilización de medios de cultivo selectivo y diferencial.3. Aprovechamiento de características particulares de los microorganismos, tales

como la formación de esporas, el metabolismo anaerobio y/ o facultativo, la capacidad para utilizar sustratos poco comunes, etc.

Para facilitar el proceso de aislamiento y obtener mejores resultados, frecuentemente se emplean combinaciones de las técnicas anteriores.

Cuadro 1. Condiciones de incubación para el desarrollo de microorganismos

Medio

Temperatura° C

Tiempo

BHI

37 24 hEMBMSA

YPMD28 3 a 5 díasSRB

Brewer

Resultados y discusión

1

Cuadro 2. Número y tipo de colonias desarrolladas en placas sembradas por diferentes técnicas

Técnica de siembra Placa vertida AgotamientoMedios de cultivo

Número aproximado de colonias

Número de colonias

diferentes

Presencia de colonias

aisladas

Número de colonias

diferentesYPMD ND ND ND ND

SRB 80

8 eran colonias de

hongo (2 especies) y aprox. 72 de colonias de

estafilococos

ND ND

ND = No determinado

YPMD – Vertido YPMD – Agotamiento SRB – Vertido

2

Cuadro 3Resultados del crecimiento de actinomicetos y hongos

MEDIO DE CULTIVO

COLONIA MORFOLOGÍA COLONIAL CARACTERÍSTICAS MICROSCÓPICAS (INCLUIR

ESQUEMA)

YPMD

1

Se observaron cocos Gram (+) en agrupación de

estafilococos,

2

SRB1

Solo se observaron microconidias, con coloración

verdosa.

1

2

3

Cuadro 4Características de colonias seleccionadas para el aislamiento y de las colonias obtenidas en resiembras subsecuentes

Medio de

cultivo

Clave de la colonia

Características macroscópicas

Características microscópicas

(incluir esquema)

Características iniciales

1

Se observo una mezcla de 2 especies, una parecía Rhizopus y la otra se

desconoce, pero era muy similar a Penicillium.

1ª resiembra

SRB1

Solo se observaron microconidias, con coloración

verdosa.

2ª resiembra

SRB

1

En ambas colonias se observaron conidias con coloración. También se observaba el inicio de la

formación del esporangio, tomando una forma similar a

un cono (muy parecido a Rhizopus).

2

1

2

4

3ª resiembra

SRB1 Se logró observar el cuerpo

fructífero completo. Las hifas eran cenocíticas y se encontraban nucleadas.

También se observaron conidias. Además se

observaron estructuras similares a raíces.

Análisis de Resultados.

Después de inocular la caja de petri con YPMD y fijar una preparación obtenida de esta para aplicarle una tinción de gram, observamos que se trataban de cocos gram (+). Y en la caja de petri con SRB se observo el crecimiento de dos especies de hongos, una de las cuales era muy parecida a Rhizopus y al realizar la impronta se observaron solo conidias. En la primera resiembra, se eligió aislar la especie que se parecía al Rhizopus la cual presentaba un micelio blanco, sin embargo no se obtuvo completamente aislada ya que se aprecio contaminación. Aunque al observar una de las colonias formadas por impronta se seguían observando conidias con pigmentación verde. En la segunda resiembra, se observo la formación de dos colonias iguales con micelio blanco, esta vez sin contaminación. Al elaborar la impronta de una de las colonias y mirarla al microscopio vimos que se empezaban a formar esporangios que estaban tomando la forma de conos similar al Rhizopus. En la tercera resiembra se obtuvo una colonia en la cual después de realizar la impronta se observaron esporangios ovalados, hifas nucleadas y cenocíticas, conidias y algunas estructuras similares a raíces. Al comparar las características tanto macroscópicas como microscópicas de cada una de las resiembras y de la colonia seleccionada del cultivo inicial, confirmamos que se aisló con éxito la colonia del hongo seleccionado.

Conclusiones.

El medio de cultivo SRB resulto ser muy eficaz para el desarrollo de hongos y por ende su aislamiento. Este resultado confirmo la información encontrada en la investigación previa respecto al agar SRB. La pureza de una colonia aislada se determina comparando las

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resiembras entre si y las características iniciales de la colonia seleccionada para el aislamiento. La comparación se puede realizar a simple vista (observación macroscópica, el desarrollo de un solo tipo de especie) y usando la técnica de impronta, para comprobar que efectivamente las características microscópicas coinciden con las de la especie que se pretende aislar.

Bibliografía.

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Vullo, D., M. Wachsman, L. Alche. 2000. Microbiología en Práctica. Manual de laboratorio para la enseñanza de Microbiología básica y aplicada. 1ª edición. Atlante S. R. L. Argentina

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