UCSURBiorremediacinUNIVERSIDAD CIENTFICA DEL SURFacultad de Ingeniera y Gestin Ambiental

Curso:Biorremediacin Profesor: Alexandra Muos

Ttulo: Aislamiento de Materia Orgnica de Suelos y AguaAlumnas: Gallardo Hctor Nieuwland Antoinette Ponce Zuleika Valladares Eduardo

Lima- Per

1.- IntroduccinEl muestreo es una herramienta para la investigacin cientfica. El objetivo de esta prctica es a partir de una realidad en estudio mediante la representacin adecuada de la poblacin, la determinacin de inferencias sobre dicha poblacin. Existen dos formas de ejecutar el muestreo: simple y compuesta; la diferencia radica en el nmero de toma y la frecuencia de la misma.La realizacin del muestro se lleva a cabo mediante una metodologa, en este punto no existe una nica forma de ejecucin debido a la intervencin de factores principalmente del rea o poblacin bajo estudio. Cabe resaltar, que la existencia de mltiples mtodos implica el establecimiento de criterios bsicos para asegurar la calidad en el proceso. El muestreo del suelo debe de realizarse en reas homogneas a fin de evitar reas con posible influencia de anormalidades en el momento del anlisis. El tiempo de muestreo debe ser suficiente para efectuar de manera correcta el procedimiento, asimismo debe de realizarse en la misma poca del ao. En caso de lluvia o riego debe dejar pasar 48 horas. Entre los puntos importantes del muestreo es asegurar la representatividad de las propiedades edficas de la zona. En el caso del muestreo de agua simple empleado para la determinacin de parmetros de calidad del agua; en cambio la muestra compuesta permite la medicin del caudal instantneo. Asimismo la muestra debe ser homognea y representativa, adems no debe modificar las propiedades fsicas, qumicas o biolgicas del agua. En cuanto al volumen de la muestra se encuentra definido principalmente por las sustancias de estudio y de la concentracin esperada, normalmente se selecciona entre 1 y 2 litros. Los analitos de la muestra deben de estar estables con el fin de asegurar resultados representativos, la misma condicin debe aplicarse durante el almacenamiento. Otro punto a tratar corresponde a las diluciones seriadas. Estas diluciones son hechas a partir de la primera disolucin y posteriormente poseen el mismo factor de dilucin. En la presente practica el muestreo de agua y suelo resulta ser una de las tcnicas con importancia relevante para la realizacin de las actividades; debido a que partir de estas se obtendrn una serie de microorganismos para su cultivo mediante la tcnica del raspado en el agar nutritivo. Objetivos Elaborar diluciones seriales a parir de la disolucin concentrada Comprender el fundamento de las diluciones seriadas. Comprender el fundamento del muestro en agua y suelo. Cultivar las muestras (agua o suelo) en el agar nutritivo.

2.- Materiales y Mtodos

2.1 Materiales: Muestra de Agua Muestra de Suelo Agua Destilada Mechero Bagueta Vaso de Precipitado de 50 mL Bombilla para Pipeta Asa de Digralsky Incubadora Rotuladores 12 Tubos de Ensayo 14 Pipetas de Vidrio de 1mL 1 Pipeta de Vidrio de 10 mL 4 Placas Petri con Agar2.2 MtodosCaracterizacin del terreno y puntos de muestreo1. Se observ el rea alrededor de los puntos de muestreo y se tom nota si haba presencia de vegetacin y su naturaleza, el tipo de suelo, la presencia de contaminacin de las aguas y sus posibles causas, el clima, tipificacin de la zona (urbana/rural) y actividades antropognicas que se realizan en zonas colindantes. 2. Se escogieron los puntos de muestreo del lugar utilizando dos criterios: accesibilidad y presencia de contaminacin.Imagen N 1: Punto de muestreo. Fuente: Elaboracin PropiaImagen N 2: Colindancias del punto de muestreo. Fuente: Elaboracin Propia

Muestreo de agua1. Se acondicion una botella de plstico para almacenar la muestra.2. Entre dos personas se logr una posicin segura para extraer la muestra de la asequia.3. Se procedi a sumergir la botella (con las manos totalmente cubiertas por plstico) hasta unos 10 cm por debajo de la superficie, aproximadamente. 4. Al llenarse por completo, se retir de la fuente, se tap y guard en una bolsa de plstico hasta su uso en el laboratorio.Imagen N 3: Fuente de la muestra de agua.

Fuente: Elaboracin propiaImagen N 4: Procedimiento de muestreo.

Fuente: Elaboracin Propia

Muestreo de sueloImagen N 5: Procedimiento de muestreo.

Fuente: Elaboracin PropiaProcedimiento de Laboratorio Dilucin SeriadaConsiste en una serie de Diluciones simples que amplifican el factor de dilucin rpidamente, comenzando con una pequea cantidad inicial de muestra. La fuente del material para diluir en cada paso viene del material diluido en el tubo anterior. En una dilucin seriada el factor de dilucin total en cualquier punto es el producto del factor de dilucin individual en cada uno de los tubos.Imagen N 6: Procedimiento de laboratorio.

Fuente: Elaboracin propia

Sembrado en Superficie con Asa de DigralskySobre una Placa Petri se vierte el medio de cultivo, en este caso usaremos Agar, se deja solidificar y se coloca sobre la superficie la muestra diluida. Con ayuda de un Asa de Drigalsky se extiende la muestra hasta su absorcin total por el medio de cultivo. La muestra debe estar diluida en agua, puede provenir de un medio Acuoso como tambin de un medio Terrestre. Al igual que cualquier mtodo de siembra este proceso debe ser realizado cerca de un mechero encendido con la finalidad de esterilizar el ambiente en el cual se est trabajando, evitando as la contaminacin de la muestra.Imagen N 7: Procedimiento de Laboratorio.Fuente: Elaboracin propia

3.- Procedimiento3.1 Muestra de AguaCultivo microbiolgico: Se realiz dos veces para la muestra de agua y suelo contaminados.

1. Se extrajo 1 mL/ gr de agua/ tierra de la muestra y se coloc en la balanza con papel toalla como contenedor (2.3 gr), en caso de la tierra, y para el agua se calcul con la misma pipeta de extraccin (de 1mL de capacidad).

Imagen N 8: Paso N 1 para muestra de agua.

Fuente: Elaboracin Propia2. Con la pipeta de 10 ml se extrajeron 9 ml de agua destilada desde su recipiente. Se mezcl el agua/ la tierra con el agua destilada en un beaker hasta que la tierra se diluya.3. En 6 tubos de ensayo se coloc 9 ml de agua destilada cada uno, y se procedi a agregar 1 ml de la mezcla anterior en el tubo n 1; del tubo n 1 se extrajo 1 ml en pipeta de 1 ml estril para el tubo n 2 y del n 2 al n 3, sucesivamente hasta llegar al tubo n 6.Imagen N 9: Paso N 3 para muestra de agua y tierra.

Fuente: Elaboracin Propia4. Se encendi el mechero y se procedi a esterilizar el asa de Drigalsky que posteriormente fue utilizada para sembrar bacterias en 4 placas de agar nutritivo (2 para la muestra de tierra y 2 para la muestra de agua). Asimismo se procedi a la siembra de ambos en caldo.5. A 2 de las placas agar (una de tierra y una de agua) se agregaron 3 gotas de disolucin cada una y las otras 2 placas recibieron 1 ml cada una desde la micropipeta.Imagen N 10: Pasos N 4 y 5 del procedimiento de laboratorio. Fuente: Elaboracin propia6. Se dej reposar las placar agar en el laboratorio de Ingeniera Ambiental bajo condiciones de temperatura ambiente debidamente identificadas con la fecha, nombre del grupo, integrantes del grupo y disoluciones.7. Despus de 1 semana se procedi a hacerle un conteo de colonias y su diferenciacin.

3.2 Muestra de Sueloa. Diluir la muestra de la siguiente manera:i. Muestra de Suelo: Diluir 10 gr de la muestra de suelo en 90 mL de Agua Destilada. Homogenizar.b. Verter 9 mL de Agua Destilada en doce Tubos de Ensayo, seis para la Muestra de Suelo.c. Para cada Muestra se realizara el mtodo de Dilucin Seriada usando seis Tubos de Ensayos con 9 mL de Agua Destilada cada uno, en donde se ira diluyendo 1 mL de la muestra en el 1er Tubo, luego 1 mL de la dilucin del 1er Tubo en el 2do Tubo y asi sucesivamente hasta llegar al Tubo Nro 6, este procedimiento se realiza para la muestra de suelo:

Imagen N 11: Procedimiento de laboratorio.

Fuente: Elaboracin Propia

d. Se proceder a colocar 0.5 mL de la Muestra, diluida en el Tubo Nro 6, en una Placa Petri para luego aplicar el mtodo de Sembrado en Superficie con el Asa de Degralsky. Realizar este procedimiento en dos Placas Petri por Muestra (Dos para la Muestra de Suelo).e. Incubar las Placas Petri a 26C durante tres das en una estufa incubadora.f. Toma de resultados.g. Anlisis de Resultados.

4.- Resultados

Dilucin Muestra SueloTapa - Repeticin 1Presencia de ColoniasDilucin Muestra SueloContratapa - Repeticin 1Presencia de Colonias

Dilucin Muestra SueloTapa- Repeticin 2- Presencia de Colonias

Dilucin Muestra Suelo. Contratapa-Repeticin2-Presencia de Colonias

Dilucin Muestra AguaTapa - Repeticin 1- Pres. Colonias

Dilucin Muestra AguaContratapa Repeticin1. Pres Colonias

Dilucin Muestra AguaTapa - Repeticin 2Presencia de ColoniasDilucin Muestra AguaContratapa - Repeticin 2Presencia de Colonias

5.- Discusin

La muestra de agua se recolectaron de una de las lagunas de Pantanos de Villa. Por ende se encontrarn colonias de Coliformes fecales y Coliformes totales, por la presencia de aguas residuales de descargas. La muestra de suelo se recolectaron de una de la fraccin de suelo adyacente lagunas de Pantanos de Villa. Por ende son las colonias presentes en Placas Petri con agar nutritivo, tanto en la muestra de agua y de suelo son las mismas. El Mtodo de Dilucin Seriada es muy efectivo para separar los microorganismos de la muestra base, este se complementa con el mtodo de siembra el cual nos permite cuantificar y determinar los microrganismos presentes en la totalidad de la muestra.

6.- Conclusiones

El Mtodo de siembra utilizado no es el ms adecuado para determinar microorganismos ya que en los resultados solo hubo crecimiento de bacterias ms no de hongos u otros microorganismos presentes en las muestras. Para cada tipo de microorganismo existe una tcnica y un procedimiento ms efectivo. Segn los resultados obtenidos se puede concluir que no todos los microorganismos encontrados en el agua son iguales a los encontrados en el suelo, esto se puede verificar observando la presencia de bacterias de color amarillento en la muestra de Suelo las cuales no se encuentran en la muestra de Agua.

7.- Recomendaciones Se recomienda verificar, antes de la prctica, si todos los equipos e instrumentos a usar estn en buenas condiciones; de no ser as los resultados pueden variar considerablemente. Se recomienda el correcto uso de los Equipos de Proteccin Personal en un laboratorio, as se evitara o minimizara cualquier accidente o incidente durante la prctica. Se recomienda tener una adecuada y estricta manipulacin de las muestras al momento de desarrollar la prctica, siguiendo un protocolo ya establecido, esto evitara cualquier contaminacin de los usuarios con la muestra. Se recomienda, al momento de desarrollar la prctica, la toma de apuntes con la finalidad de poder usar estos datos en el anlisis de los resultados.