Buenas prácticas de higiene en la cadena del café Análisis de la OTA: Un aspecto importante de...

Buenas prácticas de higiene en la cadena del café

Análisis de la OTA:Un aspecto importante de los

programas de prevención contra la OTA

Módulo 6.2

Diapositiva 2Módulo 6.2 - Análisis de la OTA:

Un aspecto importante de los programas de prevención contra la OTA

Por qué hacer un análisis de la OTA

En apoyo a los programas de vigilancia de la OTA Para generar datos sobre los niveles de distribución y

contaminación

Para permitir la evaluación de las repercusiones de las medidas de prevención y optimizar los programas

Para certificar el cumplimiento de los niveles oficiales de OTA o de los requisitos del comprador

En apoyo a la investigación orientada a entender mejor el problema y probar soluciones



Planificación del análisis de la OTA

Para realizar los beneficios del análisis de la OTA, los servicios analíticos deben tener La competencia técnica y el equipo necesarios

para llevar a cabo los análisis requeridos con los niveles de sensibilidad y cuantificación pertinentes

La capacidad de llevar a cabo el volumen de análisis necesarios en el plazo requerido



Inversión en el análisis de la OTA

Instalaciones adecuadas Para reducir al mínimo los peligros

profesionales; asegurar un entorno para que el equipo funcione bien y reciba el mantenimiento necesario t

Equipo y materiales necesarios Para llevar a cabo los estudios y los métodos

oficiales de análisis según se requiera Personal adecuado y calificado

Analistas profesionales y expertos; técnicos para mantener y reparar el equipo; personal de apoyo; capacitación regular en el trabajo



¿Son aceptables los costos?

Promueve la confianza en el sector nacional del café Los programas oficiales de vigilancia y análisis

de la OTA, cuya buena cimentación esté comprobada, pueden promover la confianza de los importadores y la posición del país en el comercio internacional

Protege a los consumidores del país Protege contra el riesgo de que café de poca

calidad se destine al consumo local Recuperación de costos de la industria

Es posible recuperar por lo menos una parte de los costos



Aspectos técnicos de los programas de análisis de la OTA

Los principales aspectos de los programas de análisis de la OTA son Los planes de muestreo Métodos de análisis validados Un sistema para garantizar la calidad



Planes de muestreo para investigar la presencia de OTA en el café

La distribución heterogénea de OTA en los lotes de café hace necesario tomar muestras representativas

Los planes de muestreo se deben diseñar en relación con el objetivo de la toma de muestras Para tener una unidad representativa a fin de estimar el

“todo” Para caracterizar un determinado sector de la población

La formulación de planes oficiales de muestreo tiene como objetivo proporcionar métodos internacionales para evitar dificultades surgidas de diferencias jurídicas y técnicas relacionadas con la toma de muestras en el comercio (Codex Alimentarius)



Establecimiento de métodos de muestreo

Los métodos de muestreo para los programas de vigilancia y análisis de la OTA deben especificar Procedimientos para la toma y la

manipulación de las muestras El tamaño y el número de incrementos para

obtener una muestra representativa Criterios estadísticos para la aceptación y el

rechazo de un lote, a partir de la muestra



El tamaño de la muestra y el número de muestras significan

El porcentaje de lotes aceptados a concentraciones inferiores al límite reglamentado (lotes buenos)

El porcentaje de lotes rechazados a concentraciones superiores al límite reglamentado (lotes malos)

Incertidumbre asociada con el procedimiento de análisis de la OTA

Riesgos de los compradores

Riesgos de los vendedores

Aspectos decisivos del muestreo para el análisis oficial de la OTA



Requisitos para los métodos oficiales de análisis

Validación Precisión Posibilidad de repetir los resultados

(en y entre laboratorios)

En el margen de criterios de desempeño mínimo establecidos



Características principales de los métodos oficiales de análisis

1. Exactitud

2. Aplicabilidad

3. Límites de detección y determinación

4. Linealidad

5. Precisión

6. Recuperación

7. Selectividad

8. Sensibilidad



¿Quién decide en los métodos oficiales de análisis?

Los métodos validados pueden adoptarse como métodos oficiales

por

El Codex Alimentarius AOAC International Normas nacionales e internacionales



Selección de métodos cuando no hay métodos oficiales o no son aplicables

Validación interna, de acuerdo a las Recomendaciones armonizadas de la IUPAC para la validación de métodos de análisis en un solo laboratorio

Método comprendido en la norma ISO/IEC 17025:1999 o principios de buenas prácticas de laboratorio



Métodos oficiales

Métodos internacionalmente validados en colaboración mediante protocolos

internacionales armonizados

Café tostado, Entwisle et al. 2001; AOAC 2000.09; CEN EN 14132:2003

Café verde, Vargas et al. 2005; AOAC 2004.10

En el sitio web de la AOAC no se ha anunciado algún método oficial de análisis de la ocratoxina A



Diagrama de circulación del análisis de la OTA

Diagrama de los pasos generales de la toma de muestras, preparación

de las muestras y análisis de la presencia de micotoxinas en los productos agrícolas

Preparación de la muestra

MUESTREO

Muestra de prueba

Lote

Extracción

Separación y cuantificación

PurificaciónAnálisis para determinar la

presencia de OTA

MOLIDO Y HOMOGENEIZACI

ÓN

Toma de muestras secundarias

Resultado de la prueba de micotoxinas

Garantía de

calidad analítica



Evaluación de los métodos de análisis de la OTA

Hay criterios funcionales importantes Exactitud y posibilidad de repetición

Hay consideraciones prácticas significativas Velocidad del análisis Cualitativo o cuantitativo Preparación necesaria para hacer el ensayo Costos iniciales y recurrentes



Pasos del análisis de la OTA: preparación de las muestras

Es un paso de primera importancia en el procedimiento analítico

Requiere tiempo

Molido

Homogeneización

Preparación de la pasta



Pasos del análisis de la OTA: la extracción

El solvente específico depende de la matriz o de los pasos de purificación y cuantificación



Pasos del análisis de la OTA: la extracción

Recuperación de la verdadera concentración de las micotoxinas es un punto crítico

Solvente orgánico en presencia de ácido o un solvente de extracción que contenga

bicarbonato de sodio acuoso

Batidora o mezcladora de alta velocidad



Pasos del análisis de la OTA: purificación

Supone en esencia Separar la micotoxina de las sustancias que

se extrajeron con ella Paso inicial de la concentración

Métodos de purificación Los procedimientos comunes requieren

tiempo y son laboriosos Inmunoafinidad con sorbentes para

extracción de fase sólida (EFS)• Un importante método• Proporciona métodos muy selectivos



Pasos del análisis de la OTA: purificación

Columna de inmunoafinidad en la purificación del café verde



Pasos del análisis de la OTA: separación, detección y cuantificación

Los métodos disponibles son Cromatografía de líquidos con detector de

fluorescencia (CL/fluoresencia) Cromatografía en capas delgadas (CCD) Prueba de inmunosorción enzimática (ELISA) Fluorimetría Dispositivos de flujo lateral Inmunoensayo de polarización de

fluorescencia (FPIA)



Pasos del análisis de la OTA: separación, detección y cuantificación

Nuevos enfoques analíticos

Métodos de análisis rápidos y económicos Basados en biosensores

Kits de tiras reactivas

Cromatografía de líquidos aunada a Espectrometría de masas por ionización de haz de

electrones (MS)

Espectrometría de masas en tandem o secuencias (MS/MS)



La cromatografía de líquidos en el análisis de la OTA

Principales ventajas Posibilidad de automatización Poder de separación Selectividad Límites más bajos de detección (0,12-0,2

g/kg)

Principales desventajas Método costoso Requiere analistas y técnicos calificados



La cromatografía de líquidos en el análisis de la OTA

Detección y cuantificación

Cromatograma de una solución normal de OTA a una concentración de 0,0218

µg/ml. Fase inversa 250x4,6 mm – 0,5µm. Detector de fluorescencia. Fase móvil:

acetonitrilo: metanol: agua: ácido acético (35+35+29+1). Caudal: 0,8mL/min.

Procesador automático de muestras



La cromatografía en capas delgadas en el

análisis de la OTATécnica robusta, sencilla, veloz, económica

Principales ventajas

Relativamente económicaconsiderable competencia y experiencia en los países en desarrollo

utilizada en aplicaciones de rutina

Columna de inmunoafinidad

Extractos de muestras libres de interferencias mayores de la matriz

adecuada para el análisis dimensional de CCDmejora: la sensibilidad, separación, resolución y visualización




análisis de la OTA

Confirmación de la presencia de OTA a través de la CCD

Rociar las láminas de ccd con cloruro de aluminio y bicarbonato de sodio

Exponer las placas a vapor de amonio

Se ha confirmado la CCD en FI como método para la detección de OTA en el café




análisis de la OTA

Principales desventajas de la CCD

Costo elevado de los fluorodensitómetros comerciales

La cuantificación sigue siendo una limitación Habilidad de los analistas para cuantificar

visualmente la toxina Falta de resolución Poca sensibilidad




análisis de la OTA

Muestras normal y naturalmente contaminadas por OTA, disueltas con tolueno ácido acético

(99:1, v/v) y detección en placa normal de CCD



Métodos de detección para el análisis de la OTA

Principales ventajas

Métodos rápidos de prueba Fáciles de usar El análisis se puede llevar a cabo sobre el

terreno




Limitaciones Respuesta cualitativa: sí o no hay contaminación Resultados negativos falsos Necesidad de confirmación de los resultados

positivos

Desventajas Elevado costo recurrente Falta de atención respecto a la condición de la

extracción de las muestras Tendencia a no tener en cuenta los requisitos de

las muestras




Kits de análisis para detección en el caféCompuesto Empresa Producto Reconocimient

oMatrices primarias

ocratoxina r-Biopharm GmbH

RIDASCREEN OTA Column - Granos de café

ocratoxina VICAM OchraTest - Granos de café

OTA TECNA S.r.l. Immunoscreen OCHRA -

Cereales, piensos, vino, café verde y cacao

ocratoxina Tepnel BioSytems Ltd.

BioKits OTA Assay - Cereales, fruta seca, café verde, y vino blanco

OTA y B Romer Labs AgraQuant OTAssay (2-40ppb) -

Cebada, trigo, café verde, maíz, soya y trigo

OTA y B Romer Labs AgraQuantR Ochratoxin (2-40

ppb) ELISA Test Kit -

Trigo, maíz, cebada, café verde



El método ELISA en el análisis de la OTA

Ventajas del sistema ELISA Sencillez Número de muestras que se pueden

analizar al mismo tiempo

Popular y útil instrumento de detección gracias a la disponibilidad de anticueros

policlonales y monoclonales contra la OTA



El método ELISA en el análisis de la OTA

Desventajas del sistema ELISA Menos exacto y sensible Se encontraron muy pocas correlaciones

(tradicionales) Resultados positivos o negativos falsos No se debe usar como método cuantitativo Sólo se debe usar con alimentos en los que se

ha experimentado ampliamente y cuya eficacia se ha demostrado

En cada prueba deben utilizarse suficientes controles



Métodos de espectrofluorimetría para el análisis de la OTA

Suponen Utilizar columnas de inmunoafinidad con

fluorómetro

Principales desventajas Tasas mayores de resultados positivos y

negativos falsos



Garantía de calidad del análisis de la OTA

Garantía de calidad analítica Son esenciales programas para

garantizar resultados fidedignos Donde se requiere aceptabilidad

internacional, es importante la acreditación

Se proporciona orientación detallada sobre garantía de calidad analítica para el análisis de la OTA en la sección de documentación de apoyo del módulo 5.2 de este CD-Rom

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