7/17/2019 Cromatografia de Afinidad

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   T   E   K   N   O   K   R   O   M   A

   F  a  x  g  r  a   t  u   i   t  o  p  a  r  a  p  e   d   i   d  o  s   9   0   0   1

   2   1   9   0   5

   B   i  o  c  r  o  m  a   t  o  g  r  a   f   í  a  :  c  r

  o  m  a   t  o  g  r  a   f   í  a   d  e  a   f   i  n   i   d  a   d   (   A   F   C   )

Cromatografía de afinidad (AFC)

Columnas TSK-gel AFC

De entre todas las técnicas cromatográficas, la Cromatografíade Afinidad (AFC) ofrece la mayor especificidad yselectividad para el aislamiento y purificación de biomo-

léculas.

Esta técnica se basa en interacciones bioespecíficas gra-cias a las cuales la columna de AFC absorbe únicamentede la muestra los componentes que presentan afinidad conlos ligandos acoplados al soporte cromatográfico. Cuandoel compuesto retenido es eluido, se consiguen niveles depureza extraordinarios, gracias a la elevada selectividadde estas interacciones de afinidad.

Toso ofrece una amplia gama de columnas analíticas ypreparativas, así como relleno, con una amplia variedad

de ligandos específicos y grupos funcionales química-mente activos. Toda la gama toma como base el rellenopolimérico TSKgel G5000PW, de 1000 A de tamaño deporo. Esto permite abordar la purificación de biomolécu-las de hasta 5.000.000 Da.

Además, estas resinas poliméricas son química y física-mente estables, siendo resistentes a los ataques microbia-nos, dimensionalmente estables frente a los cambios depH y compatibles con muchos disolventes orgánicos.Además, en muchos casos, la resina es autoclavable y per-mite su lavado con soluciones de 0.5M NaOH.

Columnas construidas también en vídrio paratrabajos de purificaciÓn de enzimas y proteÍnas.

Columna Ligando Concentración Capacidad AplicacionesLigando adsorción más usuales

TSK Chelate-5PW Ácido 20 µmol/ml Para Cu++ o Zn++ Purificación de proteínas séricas,iminoacético 20 µmol/ml colagenasa, lactoferrina,

proteínas glanulares, interferón.

TSK Boronate-5PW Ácido m-aminofenil- Sorbitol Separación de glicoproteínas,borónico 40 µmol/ml nucleasas, nucleótidos, catecolaminas,

carbohidratos, RNA de transferencia.

TSK ABA-5PW p-aminobenzamida Tripsina Purificación de tripsina, trombina

3-4 mg/ml bovina, urokinasa enterokinasa,actividor del plasminógeno.

TSK Tresyl-5PW Tresyl 20 µmol/ml Permite una fácil inmovilizaciónde diversos ligandos.

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  F  a  x  g  r  a  t  u  i  t  o  p  a  r  a  p  e  d  i  d  o  s  9  0  0  1

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   T   E   K   N   O   K   R   O   M   A

   F  a  x  g  r  a   t  u   i   t  o  p  a  r  a  p  e   d   i   d  o  s   9   0   0   1

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Procedimiento para inmovilizar los ligandosa la columna TSKgel Tresyl-5PW

1. Lavar la columna con 3 ml de agua destilada a unflujo de ~0,5 ml/min (para columnas de 7,5 mm

ID x 75 mm).

2. Lavar la columna con ~3 ml de tampón a un flujode 0,5 ml/min. El tampón empleado no deberácontener grupos amino. Una solución 1,0 Mde tampón fosfato pH 7-8 es en general muyefectiva.

3. Hacer circular a través de la columna una solu-ción de la proteína durante toda una noche a unflujo de 0,2-0,5 ml/min a 4°C. La concentraciónóptima de proteína será entre 5 y 10 mg/ml.

4. Después de la operación de acoplamiento, blo-quear los grupos activados residuales mediante ellavado con 0,1 M Tris-HCE (pH8) durante unahora a 4°C.

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  F  a  x  g  r  a  t  u  i  t  o  p  a  r  a  p  e  d  i  d  o  s  9  0  0  1

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Columnas TSK-GEL de afinidad, analiticas y preparativas. Propiedades

Referencia Descripción ID Longitud Tamaño Eficacia mínima Caudales (ml/min) Presión(mm) (cm) partícula Rango Máx máxima

(µm) de trabajo(kg/cm2)

Columnas de vidrio

TH-14452 ABA-5PW vidrio, 1000Å 5 5,0 10 500 0,5-0,8 1,0 20

TH-14453 ABA-5PW vidrio, 1000Å 8 7,5 10 1.300 0,5-1,0 1,2 15

TH-14449 Boronate-5PW vidrio, 1000Å 5 5,0 10 500 0,5-0,8 1,0 20

TH-14450 Boronate-5PW vidrio, 1000Å 8 7,5 10 1.300 0,5-1,0 1,2 15

TH-14440 Chelate-5PW vidrio, 1000Å 5 5,0 10 500 0,5-0,8 1,0 20

TH-14441 Chelate-5PW vidrio, 1000Å 8 7,5 10 1.300 0,5-1,0 1,2 15

TH-14457 Tresyl-5PW vidrio, 1000Å 5 5,0 10 500 0,2-0,8 1,0 10

TH-14458 Tresyl-5PW vidrio, 1000Å 8 7,5 10 1.300 0,5-1,0 1,2 10

Columnas de acero inoxidable

TH-13067 ABA-5PW 7,5 7,5 10 1.300 0,5-1,0 1,2 10

TH-13066 Boronate-5PW 7,5 7,5 10 1,.300 0,5-1,0 1,2 10

TH-08645 Chelate-5PW 7,5 7,5 10 1.300 0,5-1,0 1,2 10

TH-08646 Chelate-5PW 21,5 15,0 13 2.500 4,0-6,0 8,0 15

TH-14455 Tresyl-5PW 6,0 4,0 10 0,2-0,8 1,0 10

TH-14456 Tresyl-5PW 7,5 7,5 10 0,5-1,0 1,2 10

Precolumnas

Referencia Descripción Tamaño de partícula (µm)

TH-14454 ABA-5PW Glass Guardgel Kit 20 Para P/Ns 11452 y 11453

TH-13127 ABA-5PW Guardgel Kit Para P/N 13067

TH-14451 Boronate-5PW Glass Guardgel Kit 20 Para P/N 14450

TH-13125 Boronate-5PW Guardgel Kit Para P/N 13066

TH-14442 Chelate-5PW Glass Guardgel Kit 20 Para P/Ns 14440 y 14441

TH-08647 Chelate-5PW Guardgel Kit Para P/N 08645

Bulk packing

TH-16028 Tresyl-5PW, 2g dry gel 10

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