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DESHIDRATACION
• TM PATRICIA TOLEDO RODRIGUEZ
Objetivo
eliminación completa del agua de la muestra para que se pueda embeber adecuadamente en los medios de inclusión no hidrosolubles posteriores.
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• Puede realizarse con cualquier agente capaz de absorber agua de los tejidos.
Características:
1.No debe alterar las estructuras tisulares
2.Debe poder mezclarse con el reactivo intermediario o agente aclarante.
3.Rápido
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Características:
1. Producir un endurecimiento aceptable
2. Lo mínimo de peligrosidad intrínsica (vapores)
3.Mínimo riesgo de incendio/explosión
Uso graduaciones crecientes
• Serie de graduación creciente
• Volumen y número de baños del agente deshidratante
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• Baños múltiples
• Tiempo de deshidratación
• Empleo de agentes accesorios: sulfato de cobre anhidro, óxido de calcio y resinas humectantes.
• Se recomienda comprobar el grado de pureza de los alcoholes absolutos (100%)
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Se pueden utilizar
1. ALCOHOL ETILICO
2. Alcohol metílico
3. Acetona
4. Alcohol Isopropílico
5. Dioxano
6. Alcohol Butilico
7. Tetrahidrofurano
ALCOHOL ETILICO
Es el más usado, excelente deshidratante, muy inflamable y de mayor precio que el OH metílico. Para abaratar se usa etanol (OH desnaturalizado con metanol)
CHCHCHCH3333CHCHCHCH2222OHOHOHOH
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USO
1.Graduación creciente
2. Paulatina
3. Se recomienda: 70%-95%-100%
4. Chequear pureza de los reactivos
5. Controlar saturación de los mismos
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ALCOHOL METILICOALCOHOL METILICOALCOHOL METILICOALCOHOL METILICO
funciona igual que el alcohol etílico . Inflamable y tóxico.
ACETONAACETONAACETONAACETONA
muy volátil y de rápida acción.
ALCOHOL ISOPROPILICO O ISOPROPANOL
líquido transparente, inflamable de olor intenso y miscible con
agua. Es incompatible con inclusión con celoidina y provoca
menor endurecimiento de las muestras que el alcohol etílico.
CH3CH (OH)CH3)
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Solventes Universales
DioxanoDioxanoDioxanoDioxano
• miscible con la parafina
TETRAHIDROFURANOTETRAHIDROFURANOTETRAHIDROFURANOTETRAHIDROFURANO
miscible con agua, alcoholes de baja graduación, éter, cloroformo, tolueno, xileno y parafinas. Es de rápida acción y no causa retracción excesiva de los tejidos.
Solventes Universales
Alcohol Butilico
miscible con la parafina.
CHCHCHCH3333CHCHCHCH2222CHCHCHCH2222CHCHCHCH2222OHOHOHOH
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BATERIA DESHIDRATACION
FIJADOR OH 70°OH 95°
OH 100° OH 100°
Aclaramiento
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OBJETIVO
• Se trata de un proceso por el cual se consigue la sustitución del agente deshidratante por una sustancia miscible con el medio de inclusión que va a utilizarse.
• El agente aclarante es un líquido, donde pueda disolverse el medio de inclusión y, de éste modo, penetrar en el tejido.
• No es un objetivo aclarar la muestra a pesar del nombre
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La elección de cual agente usar depende
1. Rapidez para eliminar el deshidratante
2. Acciones nocivas sobre los tejidos y células
3. Adecuación del aclarante sobre el deshidratante
1. Adecuación del aclarante sobre el medio de inclusión
2. Toxicidad
3. Peligrosidad
4. costo
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BATERIA DE ACLARAMIENTO
• Se realizan baños sucesivos de duración variable en función de las características del agente y del volumen de la muestra. En el En el En el En el aclaramiento no hay diluciaclaramiento no hay diluciaclaramiento no hay diluciaclaramiento no hay dilucióóóón del n del n del n del agente. agente. agente. agente. Pueden realizarse pasos intermediarios a aclaramiento de 1:1 , 1:2 con el deshidratante puro.
AGENTES ACLARANTES
1. Xileno (Dimetil benceno)
2. Tolueno (metil benceno)
3. Benceno
4. Cloroformo
5. Tetracloruro de carbono
6.Dioxano
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XILENO
• VENTAJAS• No disuelve celoidina• Agente aclarante más rápido• Endurece poco los tejidos (relativo)
XILENO
• VENTAJAS
• Se elimina fácilmente del medio de inclusión
• Punto óptimo de clarificación fácil de apreciar
• USO RUTINARIO
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XILENO
• DESVENTAJAS• Es tóxico• Solo aclara desde alcohol absoluto• Tiende a volver blanquecinos los tejidos
• Endurece si se sobrepasa el tiempo óptimo
• Tiende a acidificación
TOLUENO
• VENTAJAS• Es rápido• Endurece menos que el xileno y no blanquea los tejidos
• Puede conservar una muestra por más de 12 horas sin alteraciones
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TOLUENO
• VENTAJAS
• Punto óptimo de clarificación fácil de apreciar
• USO RUTINARIO• MAS LENTA PENETRACION QUE XILOL
TOLUENO
• DESVENTAJAS• Es tóxico• Solo aclara a partir del alcohol abs.• Tiende a la acidificación
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BENCENO
• VENTAJAS
• Es relativamente rápido• Endurece poco y no blanquea• Causa una retracción mínima• Se elimina fácilmente
BENCENO
• DESVENTAJAS
• Muy tóxico• Altamente inflamable
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CLOROFORMO
• VENTAJAS• No afecta al tejido• Es lento• Muy útil en tejidos fibrosos, muestras descalcificadas, pieles, etc
CLOROFORMO
• DESVENTAJAS• El punto de aclaramiento es difícil de apreciar
• El tejido tiende a flotar• Es muy difícil de eliminar para la parafina
• Olor poco agradable
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Tetracloruro de carbono
• VENTAJAS
• No es inflamable• No afecta al tejido• Más barato que cloroformo• Uso en piezas duras
Tetracloruro de carbono
• DESVENTAJA• Muy tóxico• Lento• Difícil identificar punto de aclaramiento
• Demora cerca de 15 horas
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Dioxano
• VENTAJAS• Es también un deshidratante• Miscible con la parafina• Se puede utilizar como deshidratante y aclarante
Dioxano
Desventajasincompatible con los fijadores que tienen dicromato
Indice de deshidratación menor que los alcoholes
Debe eliminar el agua acumulada después de cada inclusión
con cloruro cálcico
Inodoro Muy tóxico (se exige su uso bajo campana)
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PROTOCOLO
• PROCEDIMIENTO LENTO1.OH 70% 2H
2.OH 95% 2H
3.OH 100% 2H
4.OH 100% 1H
5.X I 2H
6.X II 2H
7.X III 1H
PROTOCOLO
• PROCEDIMIENTO RAPIDO1.OH 70% 30 MIN
2.OH 100% 30 MIN
3.OH 100% 30 MIN
4.OH 100% 30 MIN
5.X I 15 MIN
6.X II 30 MIN
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IMPORTANTE
• Las muestras pueden permanecer por largos períodos de tiempo en:
1.Lavado post fijación (correcta fijación)
2.OH de baja graduación ***
CONTROL DE SATURACION
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CONTROL DE SATURACION
CONTROL DE SATURACION
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RETORTA DE PROCESADOR
INTERIOR DE RETORTA
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ESTACIONES
IMPREGNACION E INCLUSION
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DEFINICION
• Es el proceso de tiene por objeto rellenar o infiltrar completamente la muestra con el medio que se va a utilizar para la imbibición del tejido. El fundamento del proceso radica en la ocupación completa con el medio de los espacios intra y extraceculares inicialmente llenos con agua
MEDIOS DE INCLUSION
HIDROFILOSHIDROFILOSHIDROFILOSHIDROFILOS
AGARAGARAGARAGARGELATINAGELATINAGELATINAGELATINAPOLIETILENGLICOLPOLIETILENGLICOLPOLIETILENGLICOLPOLIETILENGLICOLRESINAS ACRILICASRESINAS ACRILICASRESINAS ACRILICASRESINAS ACRILICASRESINAS EPOXIRESINAS EPOXIRESINAS EPOXIRESINAS EPOXIOCTOCTOCTOCT
HIDROFOBOSHIDROFOBOSHIDROFOBOSHIDROFOBOS
PARAFINAPARAFINAPARAFINAPARAFINAPARAPLASTPARAPLASTPARAPLASTPARAPLASTRESINAS SINTETICASRESINAS SINTETICASRESINAS SINTETICASRESINAS SINTETICASCELOIDINACELOIDINACELOIDINACELOIDINANITROCELULOSASNITROCELULOSASNITROCELULOSASNITROCELULOSAS
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MEDIOS HIDROFILOS
• Agar y gelatina: la inclusión no requiere de deshidratación y aclarantes, se realiza una inclusión con concentraciones crecientes del medio. Puede endurecerse el taco obtenido con formalina cálcica , hecho que facilita el corte.
• OCT: son marcas comerciales.
MEDIOS HIDROFILOS
• Resinas Sintéticas: ha reemplazado el uso de la gelatina
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MEDIOS HIDROFOBOS
• Celoidina: nitrocelulosa purificada de baja viscosidad, se utiliza en muestras de dureza heterogénea, por ejemplo globo ocular, se usa en estudios neurohistológicos, pues la celoidina provoca pocas retracción y compresión del tejido, favoreciendo los estudios de poblaciones celulares
MEDIOS HIDROFOBOS
• PARAFINAS: mezcla de hidrocarburos saturados de cadena larga que se obtiene como un subproducto incoloro e inodoro de la industria petroquímica. A temperatura ambiente es sólida. Existen diferentes tipos de parafina, variando en punto de fisión (40 a 70°c).
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PARAFINAS
• Las nueva generación de parafina tienen incluidos polímeros plásticos, y se conocen comercialmente con nombres tales como Paraplast, paraplast plus, paraplast X-extra, histosec, histowax, etc.
PARAFINAS
• Cortes mas uniformes y menor efecto compresor sobre el bloque de tejido a t. ambiente
• Aumento de dureza y homogeneidad del bloque
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IMPORTANTE
• CALIDAD INTRA HOSPITALARIA
• CONTROL DIARIO CON TERMOMETRO EXTERNO DE LAS TEMPERATURAS DE
TODAS LAS PARAFINAS.
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INCLUSION Y ORIENTACION DE LAS MUESTRAS
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CONTENEDOR DE MUESTRAS
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HOJA DE CONTROL/REGISTRO
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PINZAS
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CASSETTES DE INCLUSION
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DIFICULTALES
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DIFICULTALES
Piel
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Cono, borde marcado.
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Piel
Piel
![Page 44: DESHIDRATACION - Weeblymelissapuentes.weebly.com/uploads/1/1/0/9/11098901/histoprocesa… · Mama Mama. Mama. Material mucoso. Material disgregado. Material disgregado. Cono. Cono.](https://reader034.fdocuments.es/reader034/viewer/2022052409/60837039de1bf3102c628b86/html5/thumbnails/44.jpg)
Piel
Cono, limite marcado
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Piel
Piel.
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Vesícula.
Vesícula.
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Mama
Mama.
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Mama.
Material mucoso.
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Material disgregado.
Material disgregado.
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Cono.
Cono.
![Page 51: DESHIDRATACION - Weeblymelissapuentes.weebly.com/uploads/1/1/0/9/11098901/histoprocesa… · Mama Mama. Mama. Material mucoso. Material disgregado. Material disgregado. Cono. Cono.](https://reader034.fdocuments.es/reader034/viewer/2022052409/60837039de1bf3102c628b86/html5/thumbnails/51.jpg)
Cono.
Cono.
![Page 52: DESHIDRATACION - Weeblymelissapuentes.weebly.com/uploads/1/1/0/9/11098901/histoprocesa… · Mama Mama. Mama. Material mucoso. Material disgregado. Material disgregado. Cono. Cono.](https://reader034.fdocuments.es/reader034/viewer/2022052409/60837039de1bf3102c628b86/html5/thumbnails/52.jpg)
Incluir por área de obtención de corte, área mayor.
Incluir por área mayor.
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Muestra endoscópica, teñida con eosina.
Muestra endoscópica, teñida con eosina.
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Muestra endoscópica teñida con hematoxilina.
Cinco muestras endoscópicas.
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Cuatro muestras endoscópicas.
Cuatro muestras endoscópicas.