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1 “Extracción de probióticos de la muda de camarón blanco (Litopenaeus vannamei B.) para la utilización en el desarrollo del cultivo de tilapia roja (Oreochromis spp.) en etapa de alevinaje”. Diana Carolina, Estepa Angulo Departamento de Ciencias de la Vida y de la Agricultura Carrera de Ingeniería Agropecuaria Trabajo de titulación, previo a la obtención del título de Ingeniera Agropecuaria Mg. Sc Iván Jacinto, Naranjo Santamaría Julio del 2020
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1
“Extracción de probióticos de la muda de camarón blanco (Litopenaeus vannamei B.) para la
utilización en el desarrollo del cultivo de tilapia roja (Oreochromis spp.) en etapa de alevinaje”.
Diana Carolina, Estepa Angulo
Departamento de Ciencias de la Vida y de la Agricultura
Carrera de Ingeniería Agropecuaria
Trabajo de titulación, previo a la obtención del título de Ingeniera Agropecuaria
Mg. Sc Iván Jacinto, Naranjo Santamaría
Julio del 2020
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Dedicatoria
A mi madre la persona más importante en mi vida, Maritza es por ti y para ti.
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Agradecimientos
A mi madre, por la paciencia, el apoyo y la confianza que supo poner en mí para que esto sea posible, sin
ti no soy nada.
No quiero dejar de lado a mi papá, desde el fondo de mi corazón agradezco lo que ha hecho por mí
mientras ha tenido la oportunidad.
Al Dr. Iván Naranjo, director de mi proyecto de investigación por los consejos, la colaboración y amistad
brindada en el trascurso de la carrera.
A don Tejada, don miguel, Pancho, Mauricio, Gato, don Che, quienes siendo auxiliares de servicios de la
universidad supieron brindarme su ayuda en cualquier instancia, especialmente doña Edelina Saltos por
su corazón tan noble y su amistad sincera.
A mis amigas Emilly, Gaby, Kassandra, Diana, Estefania, Dayana, Mercy, Roxana y Priscila por los
momentos especiales que compartimos, por brindarme su apoyo y por las buenas anécdotas que nos
llevamos, gracias por la fidelidad y la confianza, las historias y los años de amistad.
A mi amigo y compañero Adrián Astudillo por la colaboración en la fase de campo de mi proyecto de
investigación y por la buena gestión que hicimos en equipo.
A mis hermanas Fernanda, Tatiana y Heidy, porque han sido parte de esta trayectoria.
A todos ustedes gracias por ese amor y cariño desinteresado.
8
Índice de contenidos
Caratula ......................................................................................................................................................... 1
Certificación ................................................................................................................................................. 2
Análisis Urkund ……………………………………………………………………………………………………………………………………….3
Responsabilidad de autoria........................................................................................................................... 4
Autorizacion de publicacion .......................................................................................................................... 5
Dedicatoria .................................................................................................................................................... 6
Agradecimientos ........................................................................................................................................... 7
Índice de contenidos ..................................................................................................................................... 8
Índice de tablas ........................................................................................................................................... 11
Indice de figuras .......................................................................................................................................... 12
Resumen ..................................................................................................................................................... 13
Abstract ....................................................................................................................................................... 14
CAPÍTULO I .................................................................................................................................................. 15
Introducción ................................................................................................................................................ 15
CAPÍTULO II ................................................................................................................................................. 18
Revisión de literatura .................................................................................................................................. 18
Tilapia roja .............................................................................................................................................. 18
Generalidades .................................................................................................................. 18
Taxonomía ....................................................................................................................... 18
Descripción morfológica de la tilapia roja ....................................................................... 19
Ciclo de vida ..................................................................................................................... 20
Requerimientos climáticos ............................................................................................... 21
Hábitat ........................................................................................................................................... 21
Temperatura .................................................................................................................................. 22
Oxigeno .......................................................................................................................................... 22
pH ................................................................................................................................................... 22
Turbidez ......................................................................................................................................... 22
Alimentación .................................................................................................................... 22
Tilapero alevín 450 ......................................................................................................................... 23
Tilapero inicial 380 ......................................................................................................................... 24
Enfermedades de la tilapia .............................................................................................. 25
Enfermedades bacterianas ............................................................................................................ 25
9
Enfermedades micoticas ................................................................................................................ 26
Enfermedades parasitarias ............................................................................................................ 26
Probióticos .............................................................................................................................................. 27
Definición de probióticos ................................................................................................. 27
Mecanismos de acción de los probióticos ........................................................................ 27
Clasificación de los probióticos ........................................................................................ 28
Dosis de probióticos en la acuacultura ............................................................................ 29
Muda de camarón .................................................................................................................................. 30
Ciclo de muda o ecdisis .................................................................................................... 30
Contenido nutricional de carne de tilapia roja ....................................................................................... 30
CAPÍTULO III ................................................................................................................................................ 32
Materiales y métodos ................................................................................................................................. 32
Ubicación del área de investigación ....................................................................................................... 32
Ubicación política ............................................................................................................. 32
Ubicación geográfica ....................................................................................................... 32
Ubicación ecológica ......................................................................................................... 33
Materiales ............................................................................................................................................... 34
Materiales de laboratorio ................................................................................................ 34
Materiales de campo ....................................................................................................... 35
Métodos.................................................................................................................................................. 36
Diseño experimental ........................................................................................................ 36
Tipo de diseño ................................................................................................................................ 36
Factores a probar ........................................................................................................................... 36
Tratamientos .................................................................................................................................. 37
Repeticiones ................................................................................................................................... 37
Características de las UE ................................................................................................................ 37
Croquis del diseño .......................................................................................................................... 38
Análisis estadístico ........................................................................................................... 39
Esquema del análisis de varianza ................................................................................................... 39
Coeficiente de variación ................................................................................................................ 39
Análisis funcional ........................................................................................................................... 40
Variables a medir ............................................................................................................. 40
Aislación e Identificación de microorganismos de la muda del camarón ..................................... 40
10
Biomasa .......................................................................................................................................... 40
Mortalidad ..................................................................................................................................... 40
Conversión alimenticia ................................................................................................................... 40
Incidencia de enfermedades .......................................................................................................... 41
Tamaño .......................................................................................................................................... 41
Determinación del pH del Agua de los estanques ......................................................................... 41
Manejo especifico del experimento ................................................................................. 41
CAPITULO IV ................................................................................................................................................ 45
Resultados y discusión ................................................................................................................................ 45
Identificación de microorganismos de la muda del camarón ................................................................. 45
Biomasa .................................................................................................................................................. 48
Mortalidad .............................................................................................................................................. 51
Conversión alimenticia ............................................................................................................................ 54
Incidencia de enfermedades ................................................................................................................... 56
Tamaño ................................................................................................................................................... 57
Determinación del pH del Agua de los estanques .................................................................................. 59
CAPITULO V ................................................................................................................................................. 63
Conclusiones ............................................................................................................................................... 63
Recomendaciones ....................................................................................................................................... 64
Referencias bibliograficas ........................................................................................................................... 65
11
Índice de tablas
Tabla 1 Requerimiento de proteína, carbohidratos y lípidos en dietas para tilapia. ................................. 22
Tabla 2 Contenido nutricional del balanceado tilapero alevín 450. .......................................................... 23
Tabla 3 Contenido nutricional del balanceado tilapero inicial 380. .......................................................... 24
Tabla 4 Microorganismos utilizados como probióticos principalmente usados en la alimentación animal.
.................................................................................................................................................................... 28
Tabla 5 Composición química de la tilapia roja. ......................................................................................... 31
Tabla 6 Recursos utilizados en el aislamiento de bacterias probióticas. .................................................... 34
Tabla 7 Materiales utilizados en el recuento y la identificación de bacterias aisladas. ............................. 35
Tabla 8 Materiales utilizados en la fase de campo. .................................................................................... 35
Tabla 9 Tratamientos evaluados en la investigación. ................................................................................. 37
Tabla 10 Esquema del análisis de varianza de un diseño en DCA. .............................................................. 39
Tabla 11 Características microscópicas de cepa bacteriana proveniente de la muda de camarón. .......... 46
Tabla 12 Prueba bioquímica preliminar inmediata para la identificación de cultivo bacteriano
proveniente de la muda de camarón blanco .............................................................................................. 47
Tabla 13 Análisis de varianza para la variable biomasa final de alevines de tilapia roja (Oreochromis spp.)
con utilización de probióticos extraídos de la muda de camarón blanco (Litopenaeus vannamei b.), santo
domingo, 2020. ........................................................................................................................................... 48
Tabla 14 Análisis de varianza para la variable mortalidad de alevines de tilapia roja (Oreochromis spp.)
con utilización de probióticos extraídos de la muda de camarón blanco (Litopenaeus vannamei B.), santo
domingo, 2020. ........................................................................................................................................... 51
Tabla 15 Análisis de varianza para la variable conversión alimenticia de alevines de tilapia roja
(Oreochromis spp.) con utilización de probióticos extraídos de la muda de camarón blanco (Litopenaeus
vannamei B.), santo domingo, 2020. .......................................................................................................... 54
Tabla 16 Análisis de varianza para la variable tamaño de alevines de tilapia roja (Oreochromis spp.) con
utilización de probióticos extraídos de la muda de camarón blanco (Litopenaeus vannamei B.), santo
domingo, 2020. ........................................................................................................................................... 57
Tabla 17 Análisis de varianza para la variable ph del agua de estanques de alevines de tilapia roja
(Oreochromis spp.) con utilización de probióticos extraídos de la muda de camarón blanco (Litopenaeus
vannamei B.), santo domingo, 2020. .......................................................................................................... 59
12
Indice de figuras
Figura 1 Morfología interna de la tilapia roja (Oreochromis spp.). ........................................................... 19
Figura 2 Periodos de vida de la tilapia roja. ............................................................................................... 21
Figura 3 Mecanismos de interacción entre la microbiota, los probióticos y el huésped. ........................... 28
Figura 4 Ubicación geográfica del área de investigación. .......................................................................... 33
Figura 5 Croquis del diseño. ....................................................................................................................... 38
Figura 6 Cepa bacteriana proveniente de la muda de camarón. ................................................................ 45
Figura 7 Bacterias de la muda de camarón identificadas mediante tinción de Gram. .............................. 46
Figura 8 Biomasa de alevines de tilapia roja con diferentes dosis de probiótico proveniente de la muda
de camarón blanco...................................................................................................................................... 50
Figura 9 Mortalidad de tilapia roja con diferentes dosis de probiótico proveniente de la muda de
camarón blanco. ......................................................................................................................................... 53
Figura 10 Índice de conversión alimenticia de alevines de tilapia roja con diferentes dosis de probiótico
proveniente de la muda de camarón blanco. ............................................................................................. 55
Figura 11 Tamaño de alevines de tilapia roja con diferentes dosis de probiótico proveniente de la muda
de camarón blanco...................................................................................................................................... 58
Figura 12 pH del agua de los estanques de alevines de tilapia roja con diferentes dosis de probiótico
proveniente de la muda de camarón blanco. ............................................................................................. 61
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Resumen
El objetivo de esta investigación fue extraer microorganismos con potencial probiótico de la muda de
camarón blanco y utilizarlos en la alimentación de alevines de tilapia roja, con la finalidad de evaluar los
parámetros zootécnicos y establecer la influencia de los probióticos, dicha investigación se la realizó en
Santo Domingo - Vía Quevedo km 24 en las instalaciones de la universidad de las Fuerzas Armadas ESPE
en el área de acuicultura. Se realizaron 3 tratamientos más el testigo, evaluando las dosis de la
aplicación de los probióticos en el alimento balanceado correspondiendo a: 4, 6 y 8 ml/kg de alimento a
la cual se aplicó la prueba de Tukey (p>0,05). El resultado preliminar de los microorganismos a partir de
la muda de camarón fue del genero Coccus Gram positivas en menor proporción y Gram negativas. En
cuanto a la biomasa, talla, conversión alimenticia y calidad de agua el mejor resultado lo mostro el
tratamiento 3 correspondiendo a la dosis de 8 ml de probiotico/kg de alimento en el que se evidencio
que la biomasa total fue de 7450,1 g, una talla de 14, 78 cm y la conversión alimenticia inferior de 1,7.
Mientras que los tratamientos con dosis mínimas a los 8 ml de Probiótico mostró resultados inferiores.
Palabras clave
Probióticos, muda de camarón, alevines, Oreochromis spp.
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Abstract
The objective of this research was to extract microorganisms with probiotic potential from the white
shrimp molt and use them in feeding red tilapia fry, in order to evaluate zoo technical parameters and
establish the influence of probiotics, This investigation was carried out in Santo Domingo - Vía Quevedo
km 24 at the facilities of the university of the Armed Forces ESPE in the area of aquaculture. 3
treatments plus the control were performed, evaluating the doses of the application of probiotics in the
balanced food corresponding to: 4, 6 and 8 ml / kg of food to which the Tukey test was applied (p> 0.05).
The preliminary result of the microorganisms from the shrimp molt was of the genus Coccus Gram
positive in a smaller proportion and Gram negative. Regarding biomass, height, feed conversion and
water quality, treatment 3 showed the best result, corresponding to the dose of 8 ml of probiotic / kg of
food, which showed that the total biomass was 7450.1 g, a size of 14, 78 cm and a lower feed
conversion of 1.7. While treatments with minimal doses of Probiotic at 8ml showed inferior results.
Key Words
Probiotics, molt of shrimp, alevines, Oreochromis spp.
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CAPÍTULO I
Introducción
A inicios de los años ochenta la tilapia roja fue introducida a nuestro país formando parte de uno
de los cultivos comerciales predominantes (Marcillo, 2008).
El Ministerio de Acuacultura y Pesca indica que es mayormente cultivada en las provincias de la
Costa (Guayas, Los Ríos, Santo Domingo de los Tsáchilas) y Amazonía (Sucumbíos, Pastaza, Napo y
Zamora Chinchipe), aunque también se lo observa en la Sierra (Cotopaxi, Bolívar, Loja y Azuay), en zonas
donde las características agroclimáticas lo permite generalmente cultivada en estanques de tierra de
manera semi intensiva (El Universo, 2018).
Desde su aspecto nutricional tiene un bajo contenido de colesterol lo que la hace más apetecida
que las carnes de cerdo, aves y res, además de su alto contenido de proteína con un total de 19,2%,
grasas 2,3% y energía metabolizable de 96 kcal/100g, siendo una fuente viable de comercialización por
su alta productividad y composición antes mencionada (Toledo & Garcia, 2002).
La tilapia es el tercer producto acuícola exportado hacia los Estados Unidos, representando el 91
por ciento de las exportaciones a este país seguido de Europa y América, lo que lo hace de gran
importancia económica ya que el sector de la acuacultura que agrupa a los camarones, tilapia,
langostinos y crustáceos y este año ya suman $ 2´ 580 971 (El universo, 2019).
Al mencionar a los probióticos se dice que son microorganismos vivos que si en su dieta son
administrados correctamente pueden causar transformaciones en la microbiota asociada al tracto
gastrointestinal del hospedador y generar efectos benéficos como el incremento en la conversión
alimentaria, la resistencia a diferentes enfermedades y la mejora de la calidad del agua (Villamil &
Martínez, 2009).
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La muda del camarón es un elemento que en muchos de los casos no es principalmente utilizado
y que habitualmente es desperdiciado, el cual contiene bacterias que ayudan a la desintegración de la
misma, por lo tanto esta enriquecida de microorganismos que son benéficos.
El sector acuícola busca estrategias de producción que le aporten mayor competitividad a la
cadena productiva, facilitando obtener una mayor cantidad de individuos por ende de superior calidad
por el mismo costo. (Valdes, Mecias, Tovilla, & Sanchez, 2013).
Considerando que una de las dificultades que se presenta en cultivos acuícolas como es la
tilapia, se destaca la aparición de enfermedades infecciosas, el alto porcentaje de mortalidad en la etapa
de alevinaje, y su baja conversión alimenticia debido a problemas fisiológicos de estas especies, al tener
cualquier síntoma de la manifestación de enfermedades se da el uso incontrolado de agentes químicos
como los antibióticos, cuyo espectro de acción es en algunos casos limitado para la prevención y control
de enfermedades, por lo que su uso constante puede causar efectos contraproducentes como la
aparición de cepas bacterianas multi resistentes e incluso pueden llegar a perjudicar la salud del
consumidor, asimismo la residualidad de algunos antibióticos es de vida media en el agua.
Tomando en cuenta que el costo del alimento balanceado puede llegar a representar hasta el
50%, del gasto de producción, es relevante encontrar nuevas alternativas que permitan disminuir los
gastos generados por estos rubros, como lo es la utilización de la muda de camarón para extraer y
generar microorganismos que suministrados en la alimentación ayuden a la rápida producción de
especies acuícolas por ende evitar o disminuir este gasto.
Asegurando el aumento y colonización de especies bacterianas beneficiosas en la flora intestinal
capaces de dominar el medio e inhibir el desarrollo de patógenos, se asegura también el rendimiento de
la alimentación y consecuentemente la ganancia de peso y aumento de la inmunología natural del
animal.
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Por lo antes mencionado se han planteado los siguientes objetivos:
• Extraer probióticos de la muda de camarón blanco para la utilización en el desarrollo del cultivo de
tilapia roja en etapa de alevinaje.
• Aislar e identificar microorganismos probióticos obtenidos a partir de la muda del camarón blanco.
• Verificar el efecto en los parámetros zootécnicos en el cultivo del tilapia roja (Oreochromis spp.) en
etapa de alevinaje con la utilización de probióticos extraídos de la muda de camarón blanco.
• Realizar un estudio de la microbiota intestinal de alevines de tilapia roja para comprobar la
colonización de los probióticos en el tracto gastrointestinal.
• Realizar análisis bromatológicos de proteína, grasa, pH, acidez, ceniza y humedad en los alevines de
tilapia.
Hipótesis
Ho1: La muda de camarón blanco no proporciona probióticos utilizables para la alimentación en
el cultivo de tilapia roja en etapa de alevinaje.
Ho2: Los probióticos extraídos de la muda de camarón no tienen ningún efecto sobre los
parámetros zootécnicos y el desarrollo de alevines de tilapia roja.
Ha1: La muda de camarón blanco proporciona probióticos utilizables para la alimentación en el
cultivo de tilapia roja en etapa de alevinaje.
Ha2: Los probióticos extraídos de la muda de camarón tienen efecto sobre los parámetros
zootécnicos y el desarrollo de alevines de tilapia roja.
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CAPÍTULO II
Revisión de literatura
Tilapia roja
Generalidades
La tilapia roja es un cruce tetrahibrido de cuatro especies de géneros las cuales son:
Oreochromis mossambicus, O. aureus, O. hornorum y O. niloticus (Castillo, 2001).
Taxonomía
• REINO : Animal
• PHYLUM : Vertebrata
• SUBPHYLUM : Craneata
• SUPERCLASE : Gnostomata
• SERIE : Piscis
• CLASE : Teleostomi
• SUBCLASE : Actinopterigii
• ORDEN : Perciformes
• SUBORDEN : Percoidei
• FAMILIA : Cichlidae
• GÉNERO : Oreochromis
• ESPECIE : Oreochromis sp. (Saavedra, 2006).
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Descripción morfológica de la tilapia roja
La tilapia roja presenta un cuerpo comprimido lateralmente muy alto y como su nombre lo
indica un color rojo intenso, con orificios nasales simples, uno de cada lado de la cabeza. Se muestran
cinco tipos de aletas en las cuales comprende la aleta caudal, pectoral, pélvica, anal y aleta dorsal
(Moreno , 2013).
Esta claramente presenta un dimorfismo sexual ya que en el caso de los machos posee dos
orificios bajo el vientre (ano y poro urogenital) mientras que las hembras presentan tres orificios los
cuales son ano, oviducto y uretra (Moreno , 2013).
Figura 1 Morfología interna de la tilapia roja (Oreochromis spp.).
Nota: la figura representa la morfología interna de un pez de tilapia roja. Tomado de (Cantor, 2007).
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Ciclo de vida
Iniciando con la etapa o periodo oval en el que consiste en la ovoposición de los huevo, antes de
llegar a esta etapa se dice que la reproducción de la tilapia inicia a partir de los 3 o 4 meses de edad, en
el cual el macho hace un cortejo a la hembra elaborando un nido al fondo del estanque con el
movimiento de sus aletas. Una vez elaborado el nido la hembra deposita los huevos en este, para que
sean fecundados por el macho. Al finalizar este proceso la hembra recoge los huevos en su boca y los
mantiene a lo largo de tres a cinco días en ella para su desarrollo y eclosión, durante este tiempo la
hembra no se alimenta (Saavedra, 2006).
El periodo larval comprende a los peces con el saco vitelino o de nutrientes el cual sirve para la
alimentación de los mismos (Veliz, 2018).
Periodo de alevinaje, en este la larva sale a la luz y se alimenta de los productos que encuentra a
su alrededor, quiere decir que en este periodo ya está totalmente reabsorbido el saco vitelino (Veliz,
2018).
El periodo juvenil, en este periodo el pez a dado por terminado su desarrollo físico, que implica
ya su madurez sexual y finalmente pasa a la etapa de adulto en la cual es la última fase del ciclo y el pez
vive su vida hasta la muerte (Veliz, 2018).
21
Figura 2 Periodos de vida de la tilapia roja.
Nota: la figura representa el proceso de vida que desarrolla la tilapia roja durante todo su ciclo.
Recuperado de (FONDEPESCA, 1986). Copyrigth 2002 por (Rodriguez S. , 2002).
Requerimientos climáticos
Hábitat
Debido a la rusticidad de la tilapia y a los cruces híbridos que se han dado, la tilapia se adapta
con facilidad a una variedad de climas en los que se destacan los tropicales y subtropicales (Flores,
2002).
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Temperatura
La tilapia prefiere aguas isotérmicas, es decir aguas que conservan una temperaturas
constantes, ya que variaciones muy fuertes afectan a la tasa metabólica de la tilapia por lo que las
temperaturas adecuadas van entre los 20 – 30 °C con variación hasta de 5° (Marcillo, 2008).
Oxigeno
Los rangos apropiados de los niveles de oxígeno sobrepasan los 4 a 6 ppm ya que cantidades
menores ocasionan sobrevivencia a cortos periodos y crecimiento retardado (Marcillo, 2008).
pH
Los niveles de pH adecuados para la producción de tilapia roja están entre los 6,5 y 9. Si están
por debajo de pH 6 o por encima de 9 se presenta una interrupción metabólica, hay un lento desarrollo,
inapetencia y otros factores que afectan a su crecimiento hasta producir la muerte (Calderon , 2016).
Turbidez
Los niveles en los que se recomienda hacer recambios de agua es cuando ha alcanzado de entre
los 30 – 40 cm de medición con un disco secchi (Calderon , 2016).
Alimentación
La tilapia puede consumir una gran variedad de alimentos por lo que se clasifica de tipo
omnívora (Poot, 2009).
Tabla 1 Requerimiento de proteína, carbohidratos y lípidos en dietas para tilapia.
Nutrientes esenciales Estadío Requerimiento dietario
Proteína Alevino/juvenil 45 - 60 / 35 - 45 %
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Carbohidratos Alevino/juvenil < 25 %
Proteína Alevino/juvenil 120 / 110 mg/kg
Lípidos Alevino 5 -8 %
Ω-6 EFA - Ω-3 EFA Todos los estadíos 0,5 - 1,0 %
Nota: Esta tabla muestra los requerimientos de nutrientes esenciales según el estadio del pez. Tomado
de (Bhujel, 2002).
Tilapero alevín 450
En el caso de la alimentación este balanceado es una composición de materias primas de origen
vegetal y animal en forma balanceada este aporta con nutrientes en cantidades correctas
específicamente necesarias y proporciones relativas entre sí.
Presenta una granulometría en polvo
Se suministra hasta los 35 días en peso aproximado de 3 hasta los 20 g (Bioalimentar, 2017).
El cual contiene las siguientes características nutricionales:
Tabla 2 Contenido nutricional del balanceado tilapero alevín 450.
Humedad Máx. 12 %
Proteína cruda Min 45 %
Grasa Min 8 %
24
Fibra cruda Máx.4 %
Cenizas Máx. 10 %
Nota: Se expresa en la tabla 2 las cantidades máximas y mínimas del contenido nutricional del alimento
balanceado. Tomado de (Bioalimentar, 2017).
Tilapero inicial 380
Este balanceado se suministra desde los 20 g hasta los 70 g de peso de los peces
aproximadamente hasta los 80 días de edad.
Presenta una granulometría de 2 mm.
Tabla 3 Contenido nutricional del balanceado tilapero inicial 380.
Humedad Máx. 12 %
Proteína cruda Min 38 %
Grasa Min 7 %
Fibra cruda Máx.4 %
Cenizas Máx. 10 %
Nota: Esta tabla muestra las cantidades máximas y mínimas del contenido nutricional del alimento
balanceado. Tomado de (Bioalimentar, 2017).
25
Enfermedades de la tilapia
Enfermedades bacterianas
Infección por Aeromonas hydrophila: la sintomatología de esta enfermedad se presenta
inicialmente al observar peces letárgicos, baja el consumo de alimento o hay inapetencia y
seguidamente se presenta mortalidad. Se presenta formaciones ulcerativas, hemorragias en la piel en la
zona periocular, edemas, descamaciones y en algunos casos despigmentación (Grajales , 2018).
Los tratamientos de esta enfermedad están relacionados al manejo, evitando los cambios
bruscos de la temperatura del agua, recambios de agua adecuados, regulando la temperatura en los
medios de transporte y aclimatación de los alevines al momento de la siembra. Para brotes severos se
utiliza una dosificación especifica en la dieta de los peces (Pulido, 2012).
Infección por Flavobacterium culumnaris: una infección por F. columnaris causa destrucción
severa de la piel, branquias y aletas ya que esta bacteria Gram (-) secreta una potente enzima que
facilita atacar estas zonas (Pulido, 2012).
La prevención de la enfermedad se relaciona a la manipulación de los peces ya que se debe
mantener la integridad de la capa de moco y más bien estimular la secreción de este. Baños con sal
ayudan a disminuir su presentación y en casos severos se recomienda la utilización de antibióticos
(Pulido, 2012).
Infección por Edwarsiella tarda: los principales factores que propician esta enfermedad es la
acumulación de materia orgánica en agua y el fondo de los estanques (Vasquez, Rodón, Restrepo, &
Eslava , 2010).
Los signos clínicos observables son un nado errático en los peces, letargia y exoftalmia as
conocido como ojos saltones.
26
La prevención de la enfermedad se basa en adecuadas densidad de peces en los estanques,
recambios de agua oportunos, buena alimentación y mantenimientos de los estanques (Vasquez, Rodón,
Restrepo, & Eslava , 2010).
Enfermedades micoticas
Dentro de las enfermedades más comunes causadas por hongos es la saprolegniosis
(Saprolegnia sp.) la cual se manifiesta con lesiones en la boca, aletas y piel que son cubiertas por una
masa algodonosa y de color blanquecino que corresponde al micelio del hongo
Se relacione generalmente con higiene deficiente y un mal manejo de los peces, la cual puede
ser tratada con baños de sal. Esta enfermedad también está asociada a enfermedades bacterianas
simultaneas (Conroy, 2017).
Enfermedades parasitarias
Infestación por trichodínidos: siendo el problema más limitante en la reversión de las larvas,
generalmente afecta las branquias y orofaringe pudiéndose también afectar la piel y las aletas.
Su tratamiento se basa en la disminución de la materia orgánica en los estanques y baños con
sal o formol en dosis recomendadas (Conroy, 2017).
Infestación por coccidias: la identificación de este parasito pasa desapercibida en nuestro
medio por lo que se dice que es el único parasito de gran importancia gastrointestinal ya que
clínicamente solo se reporta el aumento de la mortalidad. El manejo y control depende de que no haya
sobrealimentación y no mantener altas densidades en los estanques (Pulido, 2012).
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Probióticos
Definición de probióticos
Los probióticos son complementos nutricionales que contienen microrganismos que actúan de
forma beneficiosa en un huésped ya que mejoran el equilibrio microbiano (Aquahoy, 2019).
Ingresan al tracto gastrointestinal y se mantienen vivas desplazando a los microorganismos
patógenos, es decir actúan de manera competitiva (El Universo, 2017).
Mecanismos de acción de los probióticos
Los probióticos afectan mecanismos inmunológicos de la mucosa y actúan con microorganismos
potencialmente patógenos y generan productos metabólicos tales sean ácidos grasos, los cuales se
comunican con las células del huésped por medio de señales químicas. Estos mecanismos inhiben el
desarrollo de patógenos, mejoran el ambiente intestinal y generan una barrera intestinal (Merenstein &
Salminen, 2017).
El efecto preventivo de los microorganismos denominados y utilizados como probióticos se
realiza mediante dos mecanismos distintos en el cual incluye el antagonismo que impide que los
probióticos se desarrollen y se multipliquen y segundo la producción de toxinas que hacen imposible la
acción patogénica.
28
Figura 3
Mecanismos de interacción entre la microbiota, los probióticos y el huésped.
Nota: En la figura se muestra la interacción y mecanismos de acción de los probióticos con el huésped,
en este acaso es tilapia (Oreochromis mossambicus) Tomado de (Rodriguez A. , 2017).
Clasificación de los probióticos
Tabla 4
Microorganismos utilizados como probióticos principalmente usados en la alimentación animal.
Especies lactobacillus Especies bifidobacterium
L. acidophilus
L. casei B. adolescentes
L. crispatus B. animalis
L. gallinarum B. bifidum
L. gasseri B. breve
29
L. jonhsonni B. infantis
L. paracasei B. lactis
L. reuteri B. longum
L. plantarum
L. rhamnosus
Otras bacterias del ácido láctico Bacterias de ácido no láctico
Enterococcus faecalis
E. faecium Bacillus cereus
Lactococcus lactis Escrerichia coli cepa nissle
Leuconostoc mesenteroides Propionibacterium freudenreichii
Pediococcus acidilactici Saccharomyces cerevisiae
Sporolactobacillus inulinus S. boulardii
Streptococcus thermophilus
Nota: La tabla muestra los microorganismos que comúnmente han sido utilizados en la alimentación
animal en diferentes especies. Tomado de (Cifuentes, 2018).
Dosis de probióticos en la acuacultura
Según investigaciones realizadas con la utilización de probióticos en la alimentación de peces de
tilapia se muestran dosis de aproximadamente 2, 4 y 6 g por cada kg de alimento balanceado.
Los resultados de una investigación demuestran que las dosis que mejores resultados mostraron
respecto al desempeño productivo fue el tratamiento con 6 g de probióticos para las variables:
incremento de peso, tamaño final y conversión alimenticia, en comparación con el control o testigo en
el cual no se tomó en cuenta la aplicación de probióticos, esto sustenta que la utilización de probióticos
es viable en el cultivo de tilapia (Galdamez & Saenz, 2017).
30
Muda de camarón
Ciclo de muda o ecdisis
Según el autor (Gonzales, 2007) menciona que la ecdisis ocurre en los crustáceos de forma
cíclica, esto se da cuando los organismos aumentan su talla y su peso, durante este proceso el camarón
ha absorbido agua y la división celular se ve favorecida por lo que dice que tiene los siguientes estadios
de desarrollo:
Estadio A (1° muda). Representa el 2,5 % de la duración del ciclo denominada Postmuda en el
cual el Exosqueleto es muy blando y tiene sedas llenas de matriz protoplásmica.
Estadio B (2° muda) el cual simboliza el 16,5% de la duración: Postmuda. El exoesqueleto
muestra una consistencia apergaminada. Se comienza a formar un estuche cónico en la base de la seta.
Estadio C (3° muda) compuesto del 21% de la duración del ciclo llamado Intermuda. El
exoesqueleto está completamente formado y es resistente. El estuche cónico de la seta está terminado.
Estadio D (4° muda) representa el 60% de la duración denominado Premuda en este el epitelio
se desprende de la cutícula, principio de la formación de la seta. Inicio de secreción de nuevas capas
cuticulares.
Estadio E (5° muda) representa el 0.5% de duración del ciclo: Muda o exuviación que consiste en
la expulsión del tegumento; el animal sale de su antiguo exoesqueleto y lo abandona (Gonzales, 2007).
Contenido nutricional de carne de tilapia roja
El contenido nutricional de la tilapia en fresco se ve reflejado en los siguientes valores.
31
Tabla 5
Composición química de la tilapia roja.
Proteína
(%)
Humedad
(%)
Cenizas (%) Grasa (%) Carbohidratos
(%)
Promedio 19,73 75,87 1,22 3,13 0,04
Nota: Se muestra en la tabla del contenido nutricional de la tilapia roja en fresco. Tomado de (Pino,
y otros, 2018).
En el caso del contenido de proteína va a depender de la etapa de crecimiento de los peces ya
que a inicios del desarrollo el alimento balanceado contiene mayores contenidos de proteína por lo que
se manifiestan en la contenido de proteína en la carne en fresco (Rodriguez N. , 2017).
Los peces deben contener un valor de 0,2 % mínimo y 1,5 % máximo, estar dentro de este rango
es aceptable en los peces de tilapia roja (Rodriguez N. , 2017).
La grasa es el tercer componente mayoritario de la composición química del pescado, luego del
agua y las proteínas. Se encuentran totalmente relacionados el contenido de grasa y humedad ya que
los pescados blancos o magros, son aquellos que poseen un contenido de grasa hasta del 2% y dentro de
este grupo se encuentra la tilapia roja (Rodriguez N. , 2017).
32
CAPÍTULO III
Materiales y métodos
Ubicación del área de investigación
La investigación se realizó en la Provincia de Santo Domingo de los Tsáchilas, Cantón Santo
Domingo, Parroquia Luz de América km 24 de la vía Santo Domingo – Quevedo en la Hda Zoila Luz, en las
instalaciones de Acuicultura.
Ubicación política
• País: Ecuador
• Provincia: Santo Domingo de los Tsáchilas
• Cantón: Santo Domingo
• Parroquia: Luz de América
• Sector: Hda. Zoila Luz
Ubicación geográfica
• Coordenadas: UTM Piscinas
• Zona: 17
• Norte: 9954272
• Este: 688335
33
Figura 4
Ubicación geográfica del área de investigación.
Nota: en la figura se representa geográficamente la Universidad de las Fuerzas Armadas, lugar donde se
realizó la investigación. Tomado de (Uday, 2014).
Ubicación ecológica
• Zona de vida : Bosque húmedo Tropical
• Altitud : 272 msnm
• Temperatura promedio : 23 ºC
• Precipitación : 2800 mm/año
• Humedad relativa : 89%
• Heliofanía : 760 horas luz/año
Área de investigación
34
• Suelos : Francos Arenoso
• Temperatura del agua : 23 - 24° C.
• pH del agua : 6,5
Materiales
Materiales de laboratorio
Tabla 6
Recursos utilizados en el aislamiento de bacterias probióticas.
Materiales/Equipos Reactivos Muestra
Estufa bacteriológica Sustrato Manitol Muda de camarón
Cámara de flujo laminar Sustrato Muller H.
Autoclave Sustrato Sabouround
Cocineta eléctrica Alcohol antiséptico
Cajas Petri Solución salina
Pipeta Agua Destilada
Vasos de precipitación
Papel parafilm
Kit de disección
Mechero
Probetas
Matraces
35
Tabla 7
Materiales utilizados en el recuento y la identificación de bacterias aisladas.
Materiales/Insumos Reactivos Muestras
Microscopio H2O2 (Agua oxigenada) Microorganismos aislados de la muda
de camarón
Mecheros KOH
Porta Objetos Agua destilada
Kit de disección Azul de metileno
Cubre objetos Safranina
Goteros Alcohol acetona
Contador de colonias Aceite de inmersión
Cristal violeta
Materiales de campo
Tabla 8
Materiales utilizados en la fase de campo.
Materiales/Equipos Reactivos Muestra
Disco secchi Agua Alevines de tilapia
Medidor de oxigeno Cloro Probióticos
Red de pesca CaCO3 Balanceado
Potenciometro Melaza
Termómetro Sal en grano
36
Tanques plásticos
Manguera ¾
Machete
Escoba
Flexómetro
Baldes plásticos
Balanza analítica
Calibrador
Métodos
Diseño experimental
Tipo de diseño
Para esta investigación se desarrolló un diseño completamente al azar (DCA).
Factores a probar
Alimento balanceado sin probióticos y con probióticos en tres niveles.
37
Tratamientos
Tabla 9
Tratamientos evaluados en la investigación.
Tratamiento Denominación
T0 Alimento sin Probiótico
T1 Alimento + Probiótico 4 ml/kg de balanceado
T2 Alimento + Probiótico 6 ml/kg de balanceado
T3 Alimento + Probiótico 8 ml/kg de balanceado
Repeticiones
Por cada tratamiento se realizaron cuatro repeticiones
Características de las UE
• Número de unidades experimentales : 16
• Forma de las unidades experimentales : Rectangular
• Dimensiones : 1,5 m * 2,5 m * 1,2 m
• Área de las unidades experimentales : 4,5 m3
• Separación entre tratamientos : 4 m
• Peso promedio de los alevines : 0,03 gramos
• Numero de alevines por m2 : 49 alevines
• Densidad de alevines por UE : 219
• Número total de alevines : 3500
38
Croquis del diseño
Figura 5
Croquis del diseño.
Nota: En la imagen se puede observar como estuvieron distribuidos los tratamientos con cada una de
sus repeticiones. Adaptado por el autor.
39
Análisis estadístico
Esquema del análisis de varianza
Tabla 10
Esquema
del análisis
de varianza
de un
diseño en
DCA.
Coeficiente de variación
Para el cálculo del coeficiente de variación se utilizó la siguiente fórmula:
CV =�CM�
X∗ 100 =
Dónde:
CV = Coeficiente de variación.
CMEE = Cuadrado medio del error experimental.
X = Promedio de tratamiento
Fuentes de variación Grados de libertad
Tratamiento (t-1) 3
T0 vs Resto 1
Error Experimental t(r-1) 12
Total (r*t)-1 15
40
Análisis funcional
El análisis funcional se realizó mediante la aplicación de la prueba de significancia de TUKEY al
5%.
Variables a medir
Aislación e Identificación de microorganismos de la muda del camarón
Una vez obtenida la muestra de muda camarón, fue llevada al laboratorio de microbiología de la
universidad ESPE, para proceder al aislamiento de los microrganismos.
Biomasa
A la recepción de alevines se determinó el peso promedio y de igual manera se lo realizó al final
del experimento se debe tomar en cuenta que para este cálculo se utilizó la tabla de (Bioalimentar,
2017) para determinar esta variable, se utilizó la siguiente formula:
Biomasa = Peso promedio * número de peces
Mortalidad
El porcentaje de mortalidad se determinó de la siguiente manera, una vez realizado el conteo de
los peces al final del ensayo.
Mortalidad = # ��������������# ������������ ���
∗ 100
Conversión alimenticia
Esta variable se determinó en relación al alimento consumido durante los 90 días del
experimento y la ganancia de peso de los alevines, usando la fórmula:
41
Conversión alimenticia = ������������������ � ��� ������
Incidencia de enfermedades
Se tomó en cuenta la sintomatología de los peces en estudio para determinar la presencia de
enfermedades.
Tamaño
Con la utilización de un calibrador se determinó el tamaño de los alevines, haciendo la medición
desde la aleta caudal hasta el vértice de la cabeza.
Determinación del pH del Agua de los estanques
Esta variable se determinó con la ayuda de un potenciómetro, tomando una muestra de agua de
cada uno de los estanques en el mismo día de los recambios de agua, diferenciado con el pH inicial del
agua utilizada para el llenado de los estanques.
Manejo especifico del experimento
Aislamiento e identificación de microorganismos. Este proceso se realizó en los laboratorios de
la Universidad de las Fuerzas armadas en ESPE, específicamente en el laboratorio de uso múltiple de
microbiología.
a) Preparación de los medios de cultivo
Para este proceso se tomó de referencia a (Lopez & Cruz, 2011) en el cual explica el
procedimiento a seguir y se detalla a continuación:
Se tomaron tres medios de cultivos los cuales fueron Agar Manitol, Agar Saboround y Agar
Nutritivo, para efectuar la siembra de los microorganismos en el que según la dosis recomendada de
cada uno de ellos fue 16,65g/150 ml de agua destilada, 9,75g/150ml y 4,2g/150ml respectivamente. La
42
preparación consistió en el peso de las cantidades antes mencionadas y diluirlas en agua destilada
mientras se calentaba esta solución hasta llegar a una coloración nítida de sustrato. Esta solución fue
llevada a la autoclave para su respectiva esterilización por un tiempo de 20 minutos y una temperatura
de 121°C. Una vez transcurrido ese tiempo se llevó el sustrato a la cámara de flujo laminar y se colocó en
cajas Petri en una dosificación de 10 ml por caja.
Inicialmente se preparó 50 cajas con los diferentes medios de cultivo para determinar su mejor
crecimiento de bacterias, y al probar el mejor medio de cultivo se determinó a Manitol como más
efectivo y se replicaron 50 cajas Petri más.
b) Microorganismos de la muda de camarón
Para aislar los microrganismos de la muda de camarón se procedió a macerar la muda o ecdisis
del camarón en un mortero hasta obtener particular pequeñas de la misma, a estas se les agrego suero
fisiológico y se procedió a filtrar la solución. La dosificación fue por cada 10g de muda de camarón 5 ml
de suero fisiológico según la metodología empleada por (Lopez & Cruz, 2011).
Esta solución se sembró en las cajas Petri previamente preparadas con el sustrato y se llevó a
incubar por un tiempo de 48 horas a una temperatura de 37°C.
c) Tinción simple y tinción de Gram
Una vez aislados los microorganismos de la muda del camarón, se realizó la caracterización de
los mismos. Esta tinción se la ejecutó para darle una caracterización a las bacterias aisladas, se procedió
de la siguiente manera:
Sobre un porta objeto se colocó una muestra representativa del material de estudio y se dejó
secar al aire, seguidamente se hizo un flameo para fijar la muestra, se agrega unas gotas de cristal
violeta y se espera un minuto para proceder a escurrir y enjuagar con agua destilada, se deja secar y
43
luego se añade lugol se escurre y se deja actuar por un minuto, se enjuaga y se deja secar,
posteriormente siguiendo el mismo procedimiento se agrega alcohol cetona y finalmente safranina
dejando secar y se analizó la muestra en el microscopio iniciando con lectura 100X.
d) Pruebas preliminares bioquímicas
Prueba de catalasa. Esta prueba se la realizo mediante la aplicación de una muestra de una
colonia aislada sobre un porta objeto, a esta se le añadió una gota de peróxido de hidrogeno y se la dejo
actuar por 20 segundos, tiempo en el cual se determinó si hacia burbujas para dar lectura al resultado.
Si la muestra hace burbujas el resultado es positivo para bacterias Gram positivas (+) mientras
que si no formaba burbujas se trata de bacterias Gram negativas (-).
Prueba de oxidasa. Para esta prueba se tomó una muestra de las bacterias previamente aisladas
y se las colocó en un portaobjetos seguido la cubrimos con una gota de KOH al 3% y se dejó actuar con
ligeros movimientos por tres minutos. Trascurrido ese tiempo con un asa se mezcla la solución y al
formarse una hebra viscosa mediante la separación del asa con la muestra, se determina que son
bacterias Gram negativas, al contrario y al no formarse dicha hebra se dice que pertenecen a bacterias
Gram positivas.
Preparación de estanques para la siembra de alevines. Se realizó una limpieza de las malezas
alrededor de los estanques con fumigación de herbicida quemante paraquat (dicloruro de paraquat),
posteriormente se realizó un lavado de las piscinas donde estarían los alevines con bastante agua y cloro
para su respectiva desinfección.
44
Se realizó la aplicación de cal y se dejó reposar por un día para proceder al llenado de los
estanques, mientras se preparaba la realización de zanjas para las escorrentías de la lluvia y colocación
de mallas anti depredadores.
Preparación del Probiótico. Con las bacterias previamente aisladas e identificadas, se procedió a
esterilizar melaza por 3 días seguidos con una duración de 3 horas a una temperatura 121°C para
eliminar todo agente contaminante de la misma, en donde se procedió a inocular las bacterias que se
encontraban en cajas Petri en una dosis de 20 cc de agua destilada estéril, para diluir las bacterias y
mezclarlas con 150 ml de melaza.
Preparación del alimento. En un kg de alimento se hizo la mezcla del Probiótico en las dosis
respectivas; 4 ml/kg, 6ml/kg, 8ml/kg de alimento, el cual al ser mezclado y homogenizado se dejó secar
al aire para proceder a la alimentación de los alevines.
Alimentación de los alevines. Los alevines fueron alimentados con el balanceado Bio mentos
peces tilapero 450, el cual fue suministrado hasta los 35 días de edad y luego fue reemplazado por
tilapero 380 para su consumo hasta los 90 días de edad.
La alimentación fue distribuida en raciones diarias inicialmente en una cantidad de 6
raciones/día durante las cuatro primeras semanas, posteriormente se fueron disminuyendo las raciones
hasta llegar a 3 raciones/día.
45
CAPITULO IV
Resultados y discusión
Identificación de microorganismos de la muda del camarón
Figura 6
Cepa bacteriana proveniente de la muda de camarón.
46
Nota: Esta figura muestra una cepa bacteriana que fue aislada de la muda de camarón blanco
(Estepa, 2020).
Figura 7
Bacterias de la muda de camarón identificadas mediante tinción de Gram.
Nota: La imagen muestra que mediante la tinción de Gram se observan bacterias Gram positivas y Gram
negativas. (Estepa, 2020)
Tabla 11
Características microscópicas de cepa bacteriana proveniente de la muda de camarón.
Gram negativos Coccus 2,14 x 10 8 UFC/ml
Gram positivos Streptococcus
47
Tabla 12
Prueba bioquímica preliminar inmediata para la identificación de cultivo bacteriano proveniente de la
muda de camarón blanco
Catalasa Positivo para bacterias Gram negativas (-).
Oxidasa Positivo para bacterias Gram negativas (-).
Respecto a la identificación microbiológica, pudimos notar que las tinciones mostraron bacterias
Gram negativas tanto como Gram positivas en menores proporciones, en el caso de las bacterias Gram
negativas se determinó que corresponden a bacterias del ácido no láctico ente las cuales están coccus.
Mientras que la menor proporción de bacterias Gram positivo se identificó a streptococcus.
Mediante la Prueba bioquímica preliminar se muestra que se obtiene un resultado positivo para
bacterias Gram negativas ya que al realizar la prueba la muestra no formó burbujas, mientras que para
oxidasa se muestra el mismo resultado debido a que a la lectura de la muestra esta formó una hebra
viscosa.
Según (Cifuentes, 2018) las bacterias encontradas en la muda de camarón son microorganismos
que se usan como probióticos en la alimentación animal.
(Al - Harbi & Uddin, 2005) Realizaron un estudio de la diversidad bacteriana de tilapia nilotica
cultivada en agua salina en la que encontraron géneros predominantes como Streptococcus en su tracto
digestivo, en este caso tenemos gran concordancia que este género se encuentra también presente en
la muda de camarón por su procedencia, ya que esta ecdisis corresponde a cultivos camaroneros de
agua salada de la provincia de Manabi.
48
(Escobar, Olvera , & Puerto, 2006) Explican que las bacterias hemofermentativas de los géneros
tales como: Srtreptococcus, Enterococcus, Aerococcus, Pediococcus son microorganismos que más se
utilizan como probióticos por lo que juegan un papel muy importante en la inhibición y eliminación de
microorganismos patógenos, y que tienen la capacidad de sobrevivir en un hábitat muy variado por lo
que se dice que son resistentes, finalmente se dice que son anaerobios facultativos y bioquímicamente
explica que son bacterias Gram positivas y catalasas negativas.
También se presenta otro grupo de gran importancia probiotica tales como: Carnobacterium,
Leuconostoc, Lactobacillus y Lactococcus.
(Lara M. , 2003) Realizó un estudio en el cual identifico y aisló microorganismos provenientes de
tilapia nilotica en el que encontró Streptococcus spp. El cual fue el microrganismo más factible a
utilizarse como Probiótico en la alimentación de tilapia debido a que presento resultados favorables en
la disminución de estrés y un efecto benéfico en el medio ambiente del cultivo.
Biomasa
Tabla 13
Análisis de varianza para la variable biomasa final de alevines de tilapia roja (Oreochromis spp.) con
utilización de probióticos extraídos de la muda de camarón blanco (Litopenaeus vannamei b.), santo
domingo, 2020.
Fuente de variación Suma de
Cuadrados Grados de Libertad
Cuadrados medios
F calculado
p-valor
Tratamiento 25219636,75 3 8406545,58 4,98 0,018 **
Testigo Vs Resto 3974633,2 1 3974633,2 2,35 0,1509 ns
Error 20261972,5 12 1688497,71 Total 45481609,25 15
49
En la tabla 13 se observa que existe diferencia significativa para la fuente de variación
tratamientos (p-valor es 0,018) por lo que indica el rechazo de la hipótesis nula y aceptación de la
hipótesis alternativa, mientras que para las comparaciones del tratamiento testigo vs el resto no
muestra diferencia significativa, obteniendo un p – valor de 0,1509. El coeficiente de variación para esta
variable es de 24,59%
(Lara , Briones, & Olvera, 2002) Al realizar un estudio en el cual probaron el efecto de un
promotor de crecimiento en tilapia nilotica (Oreochromis niloticus) , el que consistió en la aplicación de
(Streptococcus faecium y Lactobacillus acidophilus) como Probiótico comercial comparado con una
dieta convencional y adicionando terramicina, en el que se obtuvieron resultados favorables en el
crecimiento en peso con el Probiótico comercial con una dosis de 4 g/ kg de alimento mientras que con
la alimentación convencional se obtuvieron resultados mucho menores.
Al analizar una investigación realizada por (Mantilla, 2018), donde evaluó un complejo
bacteriano a base de Bacillus spp y Paracoccus sp. En tilapia hibrida, donde obtuvo resultados en los que
demuestra que los animales que recibieron la aplicación del Probiótico presentaron mayor ganancia de
peso. En esta investigación se mostró que la adición de 5g de Probiótico muestra los mejores resultados
en lo correspondiente al incremento del peso corporal con un porcentaje del 17,91% con respecto al
tratamiento testigo.
Mientras que (Florez & Ordoñez, 2014) manifiestan que a la séptima semana los alevines
muestran un mayor peso en alevines de tilapia roja con un valor de 7,02g correspondiente al
tratamiento 3 que consistió en la aplicación de Probiótico en una dosis de 0,15 L/kg de alimento
balanceado.
A continuación se presenta la prueba de rangos múltiples de Tukey al 5% de probabilidad, para la
variable biomasa.
50
Figura 8
Biomasa de alevines de tilapia roja con diferentes dosis de probiótico proveniente de la muda de
camarón blanco.
La prueba de tukey nos muestra dos rangos de significancia en el cual se encuentran la categoría
en donde se ubica el tratamiento 3, con un promedio de 7450,1 g de biomasa el cual consistía en la
aplicación de una dosis de 8 ml de Probiótico en el concentrado para la alimentación de los alevines de
tilapia, mientras que el segundo rango de significancia B se encontró a los tratamientos T0, T1 y T2 el
[VALOR]
A
[VALOR]
AB
[VALOR]
B
[VALOR]
B
0
1000
2000
3000
4000
5000
6000
7000
8000
9000
8 6 4 testigo
pes
o e
n (
g)
Dosis de probiotico (ml/kg de alimento)
biomasa (g)
51
cual consistía en una dosis de 0, 4, 6 ml de Probiótico por cada kg de alimento respectivamente
obteniendo un valor promedio de biomasa de 4562,73 g.
Mortalidad
Tabla 14
Análisis de varianza para la variable mortalidad de alevines de tilapia roja (Oreochromis spp.) con
utilización de probióticos extraídos de la muda de camarón blanco (Litopenaeus vannamei B.), santo
domingo, 2020.
Fuente de variación Suma de
Cuadrados Grados de Libertad
Cuadrados medios
F calculado
p-valor
Tratamiento 139,34 3 46,45 0,59 0,6326 ns
Testigo Vs Resto 38,88 1 38,88 0,49 0,4952 ns
Error 943,03 12 78,59
Total 1082,36 15
En la tabla 14 se observa que no existe diferencia significativa para la variable porcentaje de
mortalidad ya que el p-valor es 0,6326 por lo que indica la aceptación de la hipótesis nula y rechazo de la
hipótesis alternativa que fundamenta que los probióticos extraídos de la muda de camarón blanco no
tienen influencia sobre el parámetro mortalidad de alevines de tilapia roja.
52
En la comparación del tratamiento testigo vs el resto de los tratamientos no se muestran
diferencias significativas el p- valor fue de 0,4952. El coeficiente de variación para esta variable es de
25,02%
La mortalidad de los alevines estuvo influencia por dos factores importantes inicialmente por la
calidad de agua que utilizamos en el que se expone que las aguas de Luz de América presentan
problemas de altos índices de la presencia de metales pesados (Narvaez & Guzman , 2010).
Y segundo la época lluviosa ya que las temperaturas elevadas provocan una disminución de
oxígeno y aumento de nitritos lo cual generan un ambiente toxico en el agua del estanque, además las
precipitaciones presentadas en el mes de marzo en el cual se reportaron muertes repentinas después de
lluvias nocturnas lo que se explica que los cambios bruscos de la temperatura y de la presión
atmosférica afectan la cantidad de oxígeno disuelto en la capa superficial, así también en el aumento de
sólidos en suspensión debido al trasporte o remoción del material del suelo del estanque lo que provoca
mayor turbidez.
Los datos obtenidos por medio de la estación metrológica puerto Ila (INAMHI, 2020) informan
que la precipitación correspondiente al día 08 y 09 de Marzo donde se presentó la mayor mortalidad
tuvo una precipitación de 51,7 mm y 34,3 mm respectivamente siendo así los valores más altos en el
mes y el cual tuvo influencia directa en la mortalidad, tomando en cuenta la temperatura se muestra
que los valores máximos de los días antes mencionados tuvieron valores de 32 °C y 31,5°C como
temperatura máxima y mínimas de 23,2 y 22,1 °C. Estos cambios bruscos incidieron en la variable
mortalidad.
En este caso los probióticos utilizados en la alimentación de alevines de tilapia no tuvieron
ninguna influencia en la variable mortalidad.
53
A continuación se presenta la prueba de rangos múltiples de Tukey al 5% de probabilidad, para la
variable porcentaje de mortalidad.
Figura 9
Mortalidad de tilapia roja con diferentes dosis de probiótico proveniente de la muda de camarón blanco.
En la prueba de tukey nos indica un solo rango de significación (A), en el que podemos
determinar que no existen diferencias entre tratamientos para la variable porcentaje de mortalidad, los
valores van entre el 30,7 y 38,5 %.
38,15
A
37,68
A
35,28
A
30,7
A
0
5
10
15
20
25
30
35
40
45
testigo 6 4 8
% d
e m
ort
alid
ad
Dosis de probiotico (ml/kg de alimento)
% mortalidad
54
Conversión alimenticia
Tabla 15
Análisis de varianza para la variable conversión alimenticia de alevines de tilapia roja (Oreochromis spp.)
con utilización de probióticos extraídos de la muda de camarón blanco (Litopenaeus vannamei B.), santo
domingo, 2020.
Fuente de variación Suma de
Cuadrados Grados de Libertad
Cuadrados medios
F calculado
p-valor
Tratamiento 1,15 3 0,38 1,07 0,3974 ns
Testigo Vs Resto 3,00E-03 1 3,00E-03 0,01 0,9284 ns
Error 4,29 12 0,36
Total 5,44 15
El análisis de varianza para la variable conversión alimenticia lo muestra la tabla 15
demostrando que no se muestra diferencias significativas en la fuente de variación tratamiento y
comparaciones testigo vs el resto su p – valor es de 0,3974 y 0,9284 respectivamente, lo que indica el
rechazo de la hipótesis alternativa y aceptación de la hipótesis nula. Su coeficiente de variación fue de
29,78.
55
(Lara , Briones, & Olvera, 2002) Indican que los resultados de su investigación de la comparación
del efecto de un promotor de crecimiento convencional y un Probiótico comercial, en el cual explicaron
que tuvieron una menor tasa de conversión alimenticia con el tratamiento que contenía el Probiótico
con un valor de 1,69 mientras que el tratamiento control y el tratamiento con terramicina con valores
de 2,12 y 2,25 respectivamente. En base a estos resultados concordamos con estos autores ya que en
nuestra investigación el tratamiento con el valor más bajo en el índice de conversión alimenticia se le
atribuyo al tratamiento 3 con una dosis de 8 ml de Probiótico/kg de alimento obteniendo una C.A de 1,7.
(Lopez & Cruz, 2011) al realizar una investigación en el efecto de un Probiótico nativo y uno
comercial en fase juvenil de tilapia, mostraron índices de conversión alimenticia de 1,72 y 1,73 en
comparación con el tratamiento testigo en el que tuvieron un índice de 1,98 al final de la investigación lo
que nos hace referencia que el suministro de probióticos influye en el índice de conversión alimenticia
de manera positiva.
A continuación se presenta la prueba de rangos múltiples de Tukey al 5% de probabilidad, para la
variable conversión alimenticia.
Figura 10
Índice de conversión alimenticia de alevines de tilapia roja con diferentes dosis de probiótico proveniente
de la muda de camarón blanco.
56
La figura 10 nos indica que se encuentran un solo rango de significancia en la variable
conversión alimenticia de los alevines donde se presenta el valor más bajo 1,7 en el tratamiento con una
dosis de 8 ml de Probiótico en comparación del resto de los tratamiento teniendo valores de entre 2 y
2,45. Quiere decir que el tratamiento de 8 ml de Probiótico adicionado su dieta indica que debió
consumir 1,7 kg de alimento para ganar un kg de peso.
Estos valores revelan que la adición de un Probiótico en la alimentación de los alevines
disminuye la cantidad de alimento necesario para el desarrollo, por ende se puede ver reflejado en un
menor costo de producción.
Incidencia de enfermedades
En esta variable se puede describir que durante la fase de investigación no se tuvo presencia de
enfermedad en decir un 0% que haya causado un tipo de mortalidad en las especies estudiadas.
Se puede atribuir a los controles iniciales preventivos ya que se realizó un baño de sal en los
estanques para prevenir la aparición de diferentes enfermedades que causen un efecto dañino en los
[VALOR]
A
[VALOR]
A
[VALOR]
A
[VALOR]
A
0
0,5
1
1,5
2
2,5
3
6 testigo 4 8
Co
nve
rsio
n a
limen
tici
a
Dosis de probiotico (ml/kg de alimento)
ICA
57
alevines. El uso de los probióticos según menciona (Lopez & Cruz, 2011) en el cual tuvieron un 0% de
incidencia de enfermedades, explican que los microorganismos utilizados como probióticos generan un
efecto protector en los animales inhibiendo el desarrollo de agentes patógenos.
Tamaño
Tabla 16
Análisis de varianza para la variable tamaño de alevines de tilapia roja (Oreochromis spp.) con utilización
de probióticos extraídos de la muda de camarón blanco (Litopenaeus vannamei B.), santo domingo,
2020.
Fuente de variación Suma de
Cuadrados Grados de Libertad
Cuadrados medios
F calculado
p-valor
Tratamiento 2,13 3 0,71 0,79 0,5245 ns
Testigo Vs Resto 0,14 1 0,14 0,15 0,701 ns
Error 10,84 12 0,9 Total 12,97 15
La variable tamaño nos detalla un análisis de varianza en el que no se muestran diferencias
significativas para la fuente variación tratamiento ni para el contraste testigo vs tratamiento con un p –
valor de 0,5245 y 0,701 respectivamente, el cual hace énfasis en el rechazo de la hipótesis alternativa en
el que dice que la adición de probióticos en la alimentación de alevines de tilapia no tiene ninguna
influencia en los parámetros zootécnicos. El coeficiente de variación para esta variable fue de 6,72%.
El estudio realizado por (Betancur, 2018) en el que realizó la aplicación de probióticos en micro
cápsulas las cuales fueron suministradas junto con el alimento teniendo un diámetro de 2mm con el fin
de evaluar variables de calidad de tilapias donde demostró que los peces alimentados con concentrado
más Probiótico exponen talla más elevada que el tratamiento control teniendo resultados de 25, 3 cm y
14, 54 cm siendo estos los resultados más altos respecto al resto de los tratamientos.
58
A continuación se presenta la prueba de rangos múltiples de Tukey al 5% de probabilidad, para la
variable tamaño de alevines.
Figura 11
Tamaño de alevines de tilapia roja con diferentes dosis de probiótico proveniente de la muda de
camarón blanco.
59
En este caso se observa en la figura 11 un solo rango de significancia, el cual expone que no hay
diferencias significativas, sin embargo coloca al tratamiento 3 correspondiente a una dosis de 8 ml de
Probiótico/kg de alimento con la longitud más alta respecto a los demás tratamientos.
Determinación del pH del Agua de los estanques
Tabla 17
Análisis de varianza para la variable ph del agua de estanques de alevines de tilapia roja (Oreochromis
spp.) con utilización de probióticos extraídos de la muda de camarón blanco (Litopenaeus vannamei B.),
santo domingo, 2020.
[VALOR]
A
[VALOR]
A
[VALOR]
A
[VALOR]
A
12,5
13
13,5
14
14,5
15
15,5
8 testigo 4 6
Lon
gitu
sd (
cm)
Dosis de probotico (ml/kg de alimento)
Tamaño
60
Fuente de variación Suma de
Cuadrados Grados de Libertad
Cuadrados medios
F calculado
p-valor
Tratamiento 0,19 3 0,06 60,17 <0,0001 **
Testigo Vs Resto 0,12 1 0,12 110,35 <0,0001 **
Error 0,01 12 1,10E-03
Total 0,2 15
El análisis de varianza expuesto en la tabla 17 muestra diferencias altamente significativas para
la variable pH del agua del estanque tanto para la fuente de variación de tratamiento y la comparación
de testigo con el resto de los tratamientos ya que muestra un p – valor (<0,0001) lo que indica que los
probióticos tienen influencia en los parámetros de calidad del agua. El coeficiente de variación para esta
variable fue de 0,45 %.
(Hernandez, 2016) Respecto a su investigación expresaron que el parámetro de calidad del agua
respecto a la temperatura de agua y pH más óptimos para el desarrollo de tilapias lo encontraron en los
tratamientos donde usaron la alimentación con probióticos, donde los valores estaban entre 7,83 y 7,93
y temperaturas de 27,73 y 27,87 °C. por lo que coincidimos con los autores ya que obtuvimos valores
similares en nuestra investigación.
Al mantenerse estos pH estables o en las condiciones óptimas para el cultivo de tilapia se
favorece la buena productividad de la especie mientras que al tener pH por debajo o encima de los
valores óptimos producen cambios en la actividad de los peces como inapetencia, letargia, se retrasan
en el crecimiento y en si retrasan la producción (Galdamez & Saenz, 2017).
Cabe mencionar que los probióticos mejoran significativa el pH de agua de los estanques ya que
analizando el agua utilizada para los recambios de agua están mantuvieron un pH de 6,62
61
(Lara, Vellijin, Garcia , & Pertúz, 2016) Tuvieron temperaturas entre los 27,7 °C manteniéndose
constante durante la fase de investigación mientras que los valores de pH inicialmente fueron inferiores
y por debajo de los rangos deseables concurridas 8 semanas tuvieron valores de pH de 7,8 y 8,6
atribuyendo el valor óptimo al tratamiento con dosis más alta de Probiótico.
A continuación se presenta la prueba de rangos múltiples de Tukey al 5% de probabilidad, para la
variable pH del agua de estanques.
Figura 12
pH del agua de los estanques de alevines de tilapia roja con diferentes dosis de probiótico proveniente de
la muda de camarón blanco.
En la figura 12 se muestran tres rangos de significancia teniendo en el valor más alta al
tratamiento con dosis de 8 ml de Probiótico obteniendo así un pH de 7,47 mientras que en segundo
rango se significancia está el tratamiento con dos de 6 y 4 ml de Probiótico con pH de 7,32 y 7,29
respectivamente y finalmente el ultimo rango de significancia en tratamiento testigo con un pH de 7,17.
[VALOR]
A
[VALOR]
B
[VALOR]
B[VALOR]
C
6,8
6,9
7
7,1
7,2
7,3
7,4
7,5
7,6
8 6 4 Testigo
pH
Dosis de probiotico (ml/kg alimento)
pH del agua del estanque
62
En el caso de la temperatura se mantuvieron constantes y dentro de los valores óptimos para el
desarrollo de los alevines con valores de entre los 27, 7 y 27,4 °C.
63
CAPITULO V
Conclusiones
Mediante esta investigación se concluye que:
La muda de camarón blanco (Litopenaeus vannamei B.) proporciona microrganismos con
potencial Probiótico en los que destacamos al género coccus gram positivos y negativos en una
concentración de 2,4 x 10 8 UFC/ml. Los cuales pueden ser utilizados para el desarrollo del cultivo de
tilapia roja y en la alimentación animal.
Al culminar la etapa de alevinaje se logró determinar la mejor dosis de aplicación de probióticos
que fue de 8 ml/ kg de alimento el cual mostro mejores resultados respecto a las dosis inferiores, y la
biomasa reflejo un alto valor con un total de 7,46 kg teniendo una diferencia con el resto de los
tratamientos de 3,26 kg.
El porcentaje de mortalidad difiere inicialmente por la adaptabilidad de la especie y la época
lluviosa que tiene gran influencia en el desarrollo del cultivo de tilapia.
En si los probióticos mejoran la calidad de agua en lo correspondiente al pH en el caso de la
acuicultura se sabe que le pH óptimo para el crecimiento de los peces es de 6 a 9 por lo tanto en la
presente investigación el pH inicial del estanque fue de 6,62 y los probióticos mejoraron la calidad de pH
llegando así a 7,47 que es más próximo a lo recomendado por los autores, y este pH lo consigue con la
aplicación de probiótico en dosis de 8 ml/kg de alimento.
64
Recomendaciones
Realizar pruebas moleculares a los microorganismos aislados de la muda de camarón para así
tener una identificación más precisa, determinando su género y especie.
Se recomienda realizar investigaciones en la cual se analice la aplicación de dosis superiores a
los 8 ml de Probiótico /kg de alimento para determinar los efectos en el cultivo de tilapia roja
relacionados a la calidad del agua y los parámetros zootécnicos de la especie.
Se recomienda la continuidad de esta investigación en la medición o desarrollo de la microbiota
intestinal del pez.
Realizar el análisis bromatológico de la canal obtenida de la tilapia alimentada con probióticos.
Cabe mencionar que los dos puntos anteriores no se los pudo efectuar en la investigación
debido a la emergencia sanitaria que ocurrió en el país y en el mundo y se deberían realizar en
investigaciones posteriores.
65
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