Fundamentos de la citometría de flujo

Paula Amat MartínezLaboratorio Hematología Hospital Clínico de Valencia

-Fundamentos de citometría de flujo

-Componentes del equipo

-Parámetros de estudio

-Aplicaciones clínicas de la citometría de flujo en el laboratorio de Hematología

-Ejemplos

Indice

Neoplasias de células plasmáticasProliferación de un clon de células B que sintetizan y segregan una sola inmunoglobulina homogénea o sus fragmentos

Las principales neoplasias de células plasmáticas que se estudian por CMF son:MGUS/MielomaPlasmocitoma solitarioAmiloidosis Primaria (AL) Macroglobulinemia de Waldenström/LPL (MW)

Fundamentos de la citometría de flujo.

Fundamentos de la citometría de flujo. OBJETIVOS PRINCIPALES DE LA CITOMETRÍA DE FLUJO•Identificar y enumerar subpoblaciones celulares únicas y definidas.

•Seleccionar y separar físicamente subpoblaciones de células deseadas (por deflección electrostática ; esta tecnología de separación se llama "electronic cell sorting")

•Medir capacidad funcional de subpoblaciones celulares definidas

COMO SE DETECTAN ESTAS CARACTERÍSTICAS • El citómetro de flujo detecta como las células interactúan con un láser

Fundamentos de la citometría de flujo.

SISTEMA FLUÍDICOSISTEMA ÓPTICOSISTEMA ELECTRÓNICO

Componentes del equipo

Beckton Dickinson-Bioscie

Sistema fluídico

Beckton Dickinson-Bioscie

Sistema óptico

Sistema óptico

Beckton Dickinson-Bioscie

Sistema ópticoAnticuerpos monoclonales y fluorocromos

Beckton Dickinson-Bioscie

Sistema ópticoAnticuerpos monoclonales y fluorocromos

Beckton Dickinson-Bioscie

Sistema ópticoAnticuerpos monoclonales y fluorocromos

Asociación Mejicana de Patología Clínica, A.C

Sistema ópticoAnticuerpos monoclonales y fluorocromos

Asociación Mejicana de Patología Clínica, A.C

Sistema electrónico

Beckton Dickinson-Bioscie

Sistema electrónico

Beckton Dickinson-Bioscie

• El tamaño celular relativo ( Forward Scatter o FSC)• La complejidad interna o granularidad relativa (Side Scatter o

SSC)• Intensidades relativas de emisión de fluorescencia

( FL1, FL2, FL3 ,FL4)

Parámetros de estudio

-Diagnóstico-Identificación-Cuantificación

-Pronóstico-Marcadores fenotípicos pronósticos

-Monitorización del tratamiento

Aplicaciones clínicas de la citometría de flujo

% CD34+ 1.1 + 0.6 (0.3-2.6)

% CD34+ or CD117+ 2.2 + 1.4 (0.6-6)

% NRC 4.7 + 2.1 (2-9)

% Neutrophils 67 + 6.1 (57-80)

% Monocytic cells 4.3 + 1.4 (2-6.5)

% Eosinophils 2.5 + 1.3 (0.8-5)

% Basophils 0.4 + 0.7 (<0.1-2.4)

% Mast cells 0.02 + 0.01 (<0.03)

% Plasma cells 0.2 + 0.2 (0.01-0.5)

% B-lymphocytes 2.9 + 1.5 (1.6-6.3)

% B-cell precursors 0.9 + 0.8 (0.1-3.9)

% T-cells 9.2 + 4.5 (2.6-18)

% NK-cells 2.8 + 1.4 (0.7-5)

Distribución de las poblaciones en la médula ósea

Distribución de las poblaciones en la sangre periférica

Maduración linfoide

Maduración neutrófilo

Maduración monocito

Trabajo en equipo

- CORRECTO USO Y MANTENIMIENTO DEL APARATO- LAVADO- CALIBRACIÓN Y COMPENSACIÓN

- ENTRENAMIENTO DEL PERSONAL - PROCESAMIENTO- MARCAJE DE LAS MUESTRAS- FORMACIÓN

- ANÁLISIS- CONTROLES DE CALIDAD