PRACTICA 04: EXAMEN COPROPARASITOSCPICO, TCNICA DIRECTAOBJETIVOS: Realizar un examen Coproparasitoscpico (cps), a una muestra de heces con el fin de buscar e identificar formas parasitarias.

MATERIAL:

Aplicadores de madera Papel de estraza

Portaobjetos cubreobjetos

Solucin de lugol tubos de ensaye de 13x100

Microscopio sol. Salina fisiolgica

INTRODUCCIN

Un examen Coproparasitoscpico es el estudio de la materia fecal para la bsqueda e identificacin de formas parasitarias. Los mtodos Coproparasitoscpico, se pueden dividir en: cualitativos y cuantitativos; los primeros se usan para saber que formas parasitarias existen y los segundos en qu numero se encuentran; estos ltimos se utilizan sobre todo en las helmintiasis

Los mtodos cualitativos pueden ser de dos tipos: los mtodos de concentracin y el examen directo. El examen directo es el ms antiguo que se conoce por los datos histricos que se tienen en relacin a los primeros microscopios, probablemente Antonio Van Leewenhoek en el siglo XVIII, fue de los primeros en utilizarlo, al encontrar y observar en sus propias heces fecales trofozotos de Giardia lamblia.

El mtodo tiene entre sus caractersticas, la sencillez y rapidez para llevarlo a cabo, adems de lo econmico que resulta realizarlo, pues es el que requiere menos material

Ha sido el mtodo indicado como excelente para la bsqueda de trofozotos. En la prctica ha demostrado su eficacia cuando se utiliza lugol, para la bsqueda e identificacin de quistes, huevecillos y larvas. Pero tiene una limitante: la muestra utilizada es tan pequea, que es poco representativa.

PROCEDIMIENTO

1. En un portaobjetos se colocan, separadamente (en cada extremo), una gota de solucin salina fisiolgica y otra de lugol.

2. Con uno o dos aplicadores de madera, se toma una muestra de 1 a 4 mg de heces y se mezcla con la solucin salina, haciendo una suspensin homognea.3. Con el mismo aplicador se retiran las fibras y otros fragmentos gruesos.

4. Se coloca el cubreobjetos.

5. Se efecta la misma operacin en la gota de lugol.

6. Se observa al microscopio, primero con objetivo seco dbil y despus con el seco fuerte.

7. La preparacin con solucin salina, sirve para identificar y reportar el hallazgo de trofozotos. La preparacin con lugol sirve para reportar el hallazgo de quistes, huevos y larvas.

8. Realiza el dibujo de lo observado.

9. RECUERDA: la materia fecal es potencialmente infectante, por lo que se tendrn los cuidados necesarios para su manejo que garanticen la correspondiente bioseguridad.

CUESTIONARIO

1. Explica que son los protozoarios, estadios que presentan y cules son las especies patgenas ms comunes para el hombre

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2. Indica la clasificacin de los helmintos, sus caractersticas principales y los que parasitan con ms frecuencia al hombre

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3. Por qu se dice que la preparacin con solucin salina fisiolgica sirve para identificar trofozotos de los parsitos?

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4. Adems del intestino, donde ms pueden los parsitos infectar al hombre?

Da algunos ejemplos

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5. A qu se refiere cuando decimos que el inconveniente de esta tcnica es que es poco representativa? Explica e indica cmo podemos disminuirla

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CONCLUSIONES

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PRACTICA 04: EXAMEN COPROPARASITOSCPICO,

TCNICA DE CONCENTRACIN DE FAUSTOBJETIVOS:

Realizar un examen Coproparasitoscpico (cps), de concentracin utilizando la tcnica de Faust; con el fin de buscar e identificar formas parasitarias, en una muestra de heces.

MATERIAL:

Aplicadores de madera Papel de estraza

Portaobjetos cubreobjetos

Solucin de lugol tubos de ensaye de 13x100

Microscopio agua de la llave

Asa bacteriolgica vaso de precipitados de 100 ml

Gasas gradilla

Centrifuga mechero bunsen o Fisher

Embudo densmetro de 1.100 a 1.200

Sulfato de zinc con densidad 1.18 (aprox. 33%)INTRODUCCIN

Desde 1938 cuando fue descrito este mtodo, fue bien recibido, es uno de los ms utilizados en todo el mundo. Es parecido al que describi Lane en 1924, aunque l utiliz solucin saturada de cloruro de sodio, como este mtodo es poco eficaz para quistes; se utiliza ms el de Faust que es muy eficaz para estas formas parasitarias. La tcnica de Faust, hace una buena concentracin de quistes, huevos y larvas; es la tcnica preferida por la generalidad de los laboratorios. Las

formas parasitarias son encontradas con facilidad pues las preparaciones quedan

con pocos artefactos.

Su limitacin es que es poco eficaz para huevos pesados como los de Taenia spp; Faciola heptica y de Ascaris lumbricoides. Este mtodo se utiliza solucin de Zinc, cuya densidad especfica es de 1.180g/ml

(33%), que conforma un medio de densidad ms alta que la de los huevos: Necator 1.055 g/ml, Tricocfalo 1.150 g/ml, Ascaris frtil 1.110 g/ml y facilita que

los huevos livianos de estos helmintos, con menor peso especfico que la solucin,

se concentren y floten.

La concentracin adecuada aconsejada es la que usa como reactivo una solucin acuosa de sulfato Zinc al 33% con una densidad al 1.180 g/ml. El agua utilizada diluye y lava la materia fecal. El filtrado con gasa doblada y evita que los detritos gruesos traspasen las paredes, la centrifugacin enriquece en delgada pelcula la superficie del lquido centrifugado con los huevos livianos de algunos helmintos.

PROCEDIMIENTO

1) Mezclar bien una porcin de materia fecal para preparar una suspensin homognea con 1 a 2 g de materia fecal en 10 ml de agua destilada.

2) Filtrar la suspensin a travs de una gasa doblada en cuatro, sobre un tubo de centrfuga, ayudndose con un embudo pequeo.

3) Centrifugar el filtrado a 2500 rpm por 1 min.

4) Decantar el lquido sobrenadante y completar con agua hasta igualar la medida anterior, centrifugar nuevamente. Resuspender el sedimento.

5) Repetir el procedimiento 2 veces hasta que el lquido sobrenadante est listo.

6) Decantar nuevamente el lquido sobrenadante reemplazndolo por igual cantidad de solucin de sulfato de Zinc al 33%. Mezclar bien la solucin con el

sedimento. Centrifugar durante 1 minuto a 1500 rpm.

7) Tomar 3 a 4 gotas de las partculas que flotan en la superficie del lquido.

Colocarlas en portaobjeto y mezclarla con 1-2 gotas de lugol, colocar cubreobjeto.

(Te puedes ayudar con el asa limpia o flameada, para recoge la muestra de la pelcula superficial, durante 2 o 3 ocasiones sucesivas y se deposita en el portaobjetos)

8) Examinar al microscopio y reporte sus resultados.

9) Realiza el dibujo de lo observado.

10) Para ayudarte a identificar a los parsitos que puedas encontrar; recurre a

los dibujos de los diversos parsitos mostrados en las grficas de la practica anterior.

NOTA: Recuerda, la materia fecal es potencialmente infectante, por lo que se

tendrn los cuidados necesarios para su manejo, que garanticen la correspondiente bioseguridad.

CUESTIONARIO

1.- Por qu es importante cuidar la preparacin del sulfato de zinc y checar su densidad cada vez que se utilice?

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3.- En todo examen de heces es importante realizar una evaluacin fsica de la muestra. Qu fin tiene este?

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CONCLUSIONES:________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

PRACTICA 05: COPROCULTIVOOBJETIVOS: Identificar los antimicrobianos sensibles Conocer los enteropatgenos

Aislar mediante el uso de los diversos medios de cultivo los principales enteropatgenos.MATERIAL:

Asa bacteriolgica Mechero Fisher

Estufa de incubacin a 37C

Agares estriles de SS, EMB, Mc Conkey,

Caldo tetrationato, agar sulfito bismuto

Agar verde brillante.

Una muestra de heces recolectada en frasco estril

Hisopos estriles

INTRODUCCIN

Las Enterobacterias representan la mayor parte de la flora microbiana del tracto intestinal del hombre. En ella se incluyen grmenes comensales (Proteus y bacilos coliformes), as como patgenos del gnero Salmonella y Shigella. El vibrin colrico puede ser aislado de casos de clera.

Durante las infecciones entricas, cuando se presentan patgenos tales como Salmonella y Shigella, el bacterilogo debe distinguir entre los habitantes normales del intestino y los agentes etiolgicos de enfermedad.

Es importante destacar que las bacterias intestinales toman parte en los procesos digestivos tanto del hombre como de los animales. Ellos ayudan a la sntesis de vitaminas del complejo B y de la vitamina K.

La materia fecal evacuada debe ser reciente y deben cultivarse lo ms pronto posible despus de haber sido recolectada. Las muestras debern obtenerse al inicio del cuadro clnico, antes de iniciar el tratamiento antimicrobiano.

Las muestras de heces se pueden tomar directamente en un frasco limpio de boca ancha y con tapa hermtica, de preferencia estril. Si la muestra se toma en el mismo laboratorio donde se va a realizar el aislamiento, no es necesario usar medio de transporte y hay que sembrar de inmediato.

En estudios de campo o cuando el laboratorio no est cercano, la muestra se toma con un hisopo, el cual debe quedar bien impregnado de materia fecal. El hisopo se coloca en un medio de transporte como el Cary-blair.

PROCEDIMIENTO

1. Introducir un hisopo estril en varios puntos de la muestra.

2. Descargar la muestra en un rea pequea de los medios de cultivo: SS, Mc Conkey y EMB y realizar el estriado.

3. Incubar las cajas a 37C durante 24 o 48 horas

4. Observar las caractersticas morfolgicas de las colonias desarrolladas indicando si existen cambios en el medio, pigmentos en la colonia etc.

5. Tratar de identificar si existe crecimiento de Salmonella o Shigella que se manifiestan como colonias de color blanco en Mc Conkey e incoloras en EMB.

6. Al mismo tiempo que las placas, con la muestra fecal se inocula un medio de enriquecimiento como el caldo tetrationato, colocando el hisopo impregnado con la muestra en el caldo al cual se le agreg previamente 0.2 ml de yodo por gramo de materia fecal.

7. Incubar este medio de enriquecimiento por 12 o 18 horas a 37C

8. A partir del caldo tetrationato se siembran placas con medios inhibitorios como el agar verde brillante y el agar sulfito de bismuto, este ltimo si se est buscando S. typhi. Despus de incubar a 37C durante 24 horas la placa de verde brillante y 48 horas la de sulfito bismuto, se revisan cuidadosamente en busca de colonias sospechosas. En el verde brillante Salmonella crece como colonias rojas y en sulfito de bismuto como colonias negras.

9. Para mayor seguridad en la identificacin de Enterobacterias es necesario realizar pruebas bioqumicas a las cepas aisladas en los medios de cultivo.

Las ms comunes son IMVIC En el siguiente cuadro indica las caractersticas morfolgicas de las diferentes bacterias en cada uno de los medios de cultivo:

CUESTIONARIO

1.- Cules son las principales bacterias patgenas que pueden ser aisladas por medio del coprocultivo? Qu enfermedades producen cada una de stas?

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3.- Explica brevemente en qu consisten las pruebas de Indol, Rojo de Metilo, Voges-Proskauer y Citrato (IMVIC):

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CONCLUSIONES:

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OBJETIVOS

Aprender las tcnicas de cultivo y manipulacin de diferentes tipos de hongos. Conocer las principales caractersticas morfolgicas (macroscpicas y microscpicas) de los hongos.

INTRODUCCION

Los hongos son organismos eucarioticos y de mayor tamao que las bacterias, se distinguen de otros eucariotes como animales por ser inmviles y de las algas y plantas por carecer de pigmentos fotosintticos.Son de nutricin hetertrofa, es decir dependen de nutrientes ornicos que son solubilizados por sistemas enzimticos especficos y son absorbidos a travs de sus pared celular y memebrana plasntica.

Estos organismos pueden ser unicelulares (levaduras) o multicelulares (filamentosos), sin embargo, tambin existen hongos dimrficos principalemnte patgenos que se presentan ewn las dos fromas alternativamente, dependiendo de condiciones ambientales como la temperatura.

Las levaduras son clulas de forma esfrica u oval, ampliamente distribuidas en la naturaleza: frecuentemente se encuentran formando una cubierta polvosa fina sobre frutos y hojas. Las levaduras se reproducen asexualmente por gemacin, un proceso por el cual brota una protuberancia o yema de la celula madre que posteriormente se separa como celula indicidual.

El cuerpo o estructura vegetativa caracterisitca de los hongos filamentososs (mohos) se denominan talo, generalmente constituido de hifas ramificadas que forman el micelio. Las hifas de algunos hongos presentan tabiques transversales o septos, aunque en el caso de los zygomicetes las hifas no presentan estos septos y se les conoce como hifas cenocticasEl principal mecanismo de reproduccin de los hongos es asexual, por fragmentaion de hifas vegetativas o por la produccin de abundantes esporas en conidiforos y esporangioforos formados en hifas areas llamadas hifas reproductivas. Sin embargo, la descripcin de las estructuras de reproduccin sexual es el principal criterio de lasificacion, por el que pueden ser ubicados en tres subdivisiones o phylum: zygomycota, ascomycota y basidiomycota.

Se estima que puede haber 1.5 millones, de las cuales se han descrito mas de 250 000 y de estas solo se conocen 150 especies patgenas para el hombre y otras tantas para plantas y animales. Es d gran importancia conocerlos, por los beneficios que propiorcionan al hombre, ya que como se menciono la mayora son saprobios ( utilizan materia orgnica muerta), por lo que tiene una gran capacidad de reciclar materiales orgniucos de diferentes tipos, de tal forma que se pueden utilizar como agentes de biodegradacin de compuestos recalcitrantes en procesos de biorremediacin.

Desde la antigedad, estos microorganismos se han utilizado en procesos de produccin de diferentes alimentos como: vino, cerveza, pan y queso entre otros. Tambien se ha reportado que en la naturaleza hay diversas especies que funcionan como importantes agentes de control biolgico de insectos (bioinsecticidas) y que pueden mejorar la nutricin y permanencia de la mayora de plantas (micorrizas)MATERIALES 3 tubos de cultivo inclinados con 7 ml de agar saboraud 3 tubos de cultivo inclinados con 7ml de agar micobiotico 1 mechero Fischer o bunsen

PROCEDIMIENTOSEl profesor proporcionara a los alumnos tubos de cultivo con Aspergillus niger, Penicillium chrysogenum, Rhizopus oligosporus, Trichoderma viridae y de la levadura Saccharomyces cerevisiae.

El estudiante inocular cada una de las cepas en placas petri con 2 medios de cultivo: medio saboroud y micobiotico

Hara la descripcin macrocopica de cada especie en los dos medios de cultivo

SIEMBRA DE HONGOS

Sembrar en agar saboraud, agar micobiotico a 208-30C durante 3-5 dias a ms.

DESCRIPCION MACROSCOPICA DE LEVADURAS Y HONGOS

1.- Hacer la descripcin de la forma, tamao, aspecto, textura y color de las colonias de Aspergillus niger, Penicillium chrysogenum, Rhizopus oligosporus, Trichoderma viridae y de la levadura Saccharomyces cerevisiae.

2.- En los cultivos de mohos describir la forma, tamao y el tipo de colonia; asi como las caractersticas del micelio (algodonoso, aterciopelado, vellosos, areo o pegado al medio) el color del micelio, el olor de esporas, cambio en el medio de cultivo, etc.

DESCRIPCION MICROSCOPICA DE LEVADURAS1.- De las colonias de levaduras preparar un frotis fijado al calor y teirlo con azul de metileno.

2.- Hacer observaciones al microscopio con objetivo de 40X y 100X

RESULTADOS

A. REPORTAR SUS OBSERVACIONES EN EL CUADRO.

B. COMPARA LAS OBSERVACIOENS REALIZADAS CON LOS ESQUEMAS

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