Manejo de Cajas Petri

“MANEJO DE LAS CAJAS DE PETRI EN EL LABORATORIO DE MICROBIOLOGIA”

Integrantes:Irina TeheránRubén Lara

Cristian Mendoza Wendy CastroRocío GómezYeris Imitola

Introducción

La gente más feliz, no necesariamente tiene lo mejor de todo; simplemente disfrutan al máximo de todo lo que está en su camino.

GENERALIDADES

Cápsula formada por dos discos de cristal que pueden adaptarse entre sí. En el disco que forma el fondo de la caja se deposita el agar y el conjunto puede ser fácilmente esterilizado, sembrado y colocado en la estufa. La caja de Pétri, se utiliza generalmente para la separación de los microbios cuyas colonias se desarrollan aisladamente y pueden ser estudiadas con facilidad.

HISTORIAEn 1881 Koch ideo un método para reproducir bacterias en un medio de cultivo sólido hecho con gelatina, e introdujo el método de la placa para asegurar cultivos puros. El uso de un medio sólido fue una idea nueva, ya que hasta esa época se habían empleado casi exclusivamente infusiones vegetales y otros líquidos, lo que facilito la obtención de cultivos puros de bacterias para su estudio individual. Para los cultivos en placa empleamos una cajita de vidrio llamada cápsula o caja de Petri introducida por Petri, uno de los ayudantes de Koch durante 1887.

UTILIDAD

Es utilizada para preparar cultivos de hongos, virus y bacterias, y también para seleccionar muestras de animales o alimentos.

Existen de 2 tipos las plasticas y las de cristal

Plásticas: son desechables y vienen estériles

Cristal: son reutilizables pero nuevas y/o usadas deben pasar por un proceso desinfección y esterilización antes de ser usadas.

Material de Vidrio:

Generalmente el vidrio es de borosolicato, PYREX Y KIMAX

Y de aluminosilicato, vidrio COREX

PYREX Y KIMAX

Resiste todas la temperaturas de trabajo en el laboratorio de rutina

Altamente resistente a los ataques químicos

Tiene un alto punto de tensión, y le impide daños por acción del calor.

Bajo coeficiente de expansión lineal ( alrededor de 3 x 10 –6 º Celsius), lo cual significa un pequeño cambio de volumen al cambiar de temperaturas y le da mayor fuerza mecánica

COREX

Además de las propiedades del Pirex y Kimax, el vidrio COREX presenta la ventaja de mayor resistencia mecánica: es más resistente alrayado , la rotura y oscurecimiento causadopor los álcalis.

LIMPIEZA Y DESINFECCION

Material de Vidrio:

Limpieza del Material de Vidrio:

NO OLVIDE NUNCA QUE: El material nuevo de vidrio, que aún no ha sido utilizado, debe

lavarse con solución detergente, enjuagarlo con abundante agua corriente y finalmente con agua destilada.

Todo material proveniente de procedimientos de laboratorio es potencialmente infectante.

El material de vidrio debe estar químicamente limpio y libre de contaminación y residuos de grasas o detergentes


Es importante que el material de vidrio se encuentre totalmente limpio antes de usarlo para análisis o para calibrarlo.

Debe permitir cuando se encuentra limpio que la superficie se humedezca uniformemente, y que el agua se adhiera a la superficie del vidrio en capa continua.


Hay varios métodos para limpiar el material de vidrio del laboratorio, el mas utilizado es la de ácido sulfúrico y dicromato de potasio sódico.

También se pueden utilizar para lavado de material de vidrio: Ácido nítrico al 20% durante 12 horas ( material para mediciones de iones como sodio, potasio, calcio y hierro), ácido sulfúrico, alcohol y agua desionizada.

La elección del agente limpiador depende de la naturaleza del contaminante.


Material que se va a usa por primera

vez, material manchado, grasoso o pipetas con coágulos de sangre se debe pasar por una mezcla Sulfocrómica, si se necesita de urgencia debe dejarse por lo menos una hora, de lo contrario 12 horas. Enjuagar con agua del chorro y pasar por agua destilada.


Mezcla Sulfocrómica: Medir 500 ml de agua destilada en

erlenmeyer de un litro Añadir lentamente con agitación constante

250 ml de ácido sulfúrico concentrado Sumergir el erlenmeyer en un recipiente que

contenga agua corriente para enfriar el contenido

Agregar 100 g de dicromato de potasio y mezclar hasta disolver

Aforar a un litro con agua destilada

Material de vidrio para análisis físico-químico en el laboratorio:

DESCONTAMINACIÓN: Es un procedimiento que remueve

microorganismos patógenos de los objetos, dejándolos seguros para su manipulación.

Se realiza utilizando el hipoclorito de sodio o dicloroisocianurato de sodio según sea el caso. Se emplea jabón enzimático.


LIMPIEZA: Es la remoción de toda

materia extraña ( suciedad, materia orgánica, etc) de los objetos o las superficies; usualmente es realizada con agua y detergente enzimático para los equipos, instrumental o elementos. El detergente común se usa para superficies como paredes, pisos, etc.

Esta siempre debe proceder a los procesos de desinfección.


LIMPIEZA: Detergente: Agente químico utilizado para la eliminación de

suciedad . Debe eliminar la suciedad orgánica e inorgánica, no producir daño en los equipos, no dejar residuos ( facilidad de enjuague) y no ser tóxico para el personal que lo manipula.

Detergente Enzimático: Detergente que contiene enzimas proteolíticas que disuelven la materia orgánica; preferiblemente de pH neutro, disminuyendo la posibilidad de corrosión y picado. Se utiliza para pre-remojo del instrumental, evitando la manipulación del material contaminado por parte del operario. Biodegradable y no iónico al 2% ( extran, tween )


LIMPIEZA: Después de haber

mantenido el material en la disolución limpiante

lavar totalmente con agua del grifo

lavar finalmente con agua destilada.

si es material para contener como los vasos de precipitados, finalmente debe lavarse con alcohol etílico.


LAVADO DE RECIPIENTES:

Debe adicionarse suficiente solución limpiadora y girarlo varias veces, para que una capa de disolución cubra todo el interior, cualquier ruptura en la capa indica un lugar de contaminación.

PROTOCOLO DE DESINFECCION Y LAVADO DE MATERIAL CONTAMINADO EN EL

LABORATORIO

Material de Vidrio

Protocolo de Desinfección y Lavado de Material Contaminado en el Laboratorio

DESINFECCIÓN:

Es un proceso que elimina todos los microorganismos de los objetos o superficies con excepción de las esporas bacterianas. Se realiza utilizando un agente desinfectante. Los mas usados son yodóforos, aldehídos, clorados, alcoholes y peroxígenos


GERMICIDA CONCEN TRACION

NIVEL ACCION

BACT VIRU LIPO

VIRU HIDRO

TBC HONGOS

ESPORAS

Alcohol etílico 50-75% Intermed Si Si No Si Si No

Peróxido de hidrogeno

3-25% Alto Si Si Si Si Si Si

Formaldehído 3-8% Alto Intermed

Si Si Si Si Si Si

Amonios cuaternarios

0.4-1.6% acuoso

Bajo Si Si No No Si No

Fenólicos 0.4-5% acuoso

Intermed Bajo

Si Si Si No Si No

Cloro y derivados 100-10.000 ppm

Intermd Si Si Si Si Si No

Yodóforos 30-50 ppm yodo libre

Intermed Si Si Si Si Si No

Glutaraldehído 2% Alto si si Si Si Si Si


DESINFECCIÓN: Prepare diariamente una solución de hipoclorito de sodio

a 500 PPM, para el lavado de material así: 5 cc de límpido comercial (hipoclorito de sodio 5%)

500 cc de agua del chorro Utilícela para descartar el material y para descontaminar

el material biológico (muestras) Deje actuar hasta el día siguiente ( mínimo dos horas) Esta solución se debe renovar todos los días, porque es

desactivada por acción de la luz directa. Produce vapores tóxicos al incinerar los residuos infecciosos, cuando a sido agregada a estos


Ejemplo: Si deseamos preparar un litro de solución a una

concentración de 5000 ppm y el hipoclorito viene en concentración del 5% sería:

( 1 litro) x 5000 ppm = 100 cc de hipoclorito 5 x 10 Si la concentración del cloro cambia sea 6%, 13% u otra

simplemente cambie en la formula la concentración x= ( 1 litro) x 5.000 ppm = 38.46 cc de hipoclorito 13 x 10


Preparación: Medir con probeta plástica los 100 cc de hipoclorito Agregar el hipoclorito al recipiente en el cual se va a

preparar. Añadir agua hasta completar el volumen de solución

a preparar. El recipiente usado debe tener una capacidad

superior a la que se va a preparar.


Compuestos yodóforos: Son líquidos de acción contra virus, hongos y

bacterias con un tiempo de contacto de 30 minutos. No tiene acción sobre esporas bacterianas. Desinfectante de nivel intermedio. Los más usados son yodopovidona en solución o

jabón al 2,5% y yodo polietoxipolipropoxietanol. Desinfectar unidades y quirófanos, elementos no

críticos.


ESTERILIZACION: Se hace con el fin de

destruir, todos los microorganismos, tanto en medio de cultivo, como en recipiente o instrumentos.


ESTERILIZACIÓN: El material que amerite autoclavado por

alta contaminación someterlo: a 121ºC, 15 libras de presión por 20 minutos.


ESTERILIZACIÓN:La central de Esterilización debe cumplir con: Recepción del material Lavado Secado Inspección Lubricación Empaque Procesamiento Almacenamiento materiales estériles Almacenamiento materiales no estériles


Una vez descontaminado el material deje en

agua con jabón líquido neutro , lave con cepillo y asa de pipetas tubos o probetas; las láminas y laminillas deben ser enjuagadas con el cepillo respectivo o esponjilla ( este material no debe ser lavado más de 5 veces, después debe descartarse).

Saque el agua de jabón con abundante agua del chorro y finalmente deje en agua destilada para extraer los residuos de jabón.

Las láminas y laminillas sumergirlas en alcohol etílico y secar con tela que no deje escapar lanilla.


Los tubos y demás material de vidrio dejelos secar al aire, luego clasificar y colocar en sus respectivos puestos .

Al material biológico de descarte adicionar hipoclorito a 500 PPM y descartar al día siguiente en las bolsas rojas que serán enviadas a incineración, mientras es recogida por la ruta de recolección, mantener en canecas con tapa hermética, para evitar sean regadas por animales, roedores o insectos en la central de aseo y residuos.


En el laboratorio clínico, de aguas y alimentos,

se hace diariamente una limpieza, para remover la suciedad o mugre y posteriormente una sanitización ( proceso de desinfección eficiente) para esto se utiliza un detergente eficaz, biodegradable y agua de buena calidad.

La desinfección se hace con el objeto de destruir microorganismos patógenos, toxigénicos y saprofíticos.

Material del Laboratorio de Microbiología

LIMPIEZA DE MATERIAL DE VIDRIO:

El material de vidrio que contenga cultivos o cualquier otro tipo de material contaminado por microorganismos, es colocado en un recipiente de descarte para llevarlo a desinfección y posterior esterilización cuando así lo amerite.

Luego se lava con agua corriente, se sumerge en solución detergente neutra y utilizando una esponjilla o cepillo de cerdas suaves se lava nuevamente con agua corriente, se deja escurrir y se seca al horno en calor seco, 200 ºC por 1 a 2 horas, según el volumen de material.


El material de vidrio o cualquier otro material contaminado con microorganismos, es colocado en un recipiente para llevarlo al autoclave para su esterilización 121 º C por 30 minutos. Lavar con agua corriente, Luego se sumerge en solución detergente y posteriormente se lava normalmente con agua del chorro y una esponjilla, se deja escurrir y se seca en calor seco (horno).


Las pipetas después de su uso, se colocan en un recipiente con solución de hipoclorito de sodio, 1 g/L de cloro libre( 1.000 ppm), se lavan con abundante agua del chorro, se enjuagan con agua destilada, se escurren, se secan en un ambiente de calor seco.


ESTERILIZACION POR CALOR SECO:

Se utiliza el flameado por mechero, para esterilizar asas resistentes al fuego.

El horno de aire caliente, que se utiliza para esterilizar el material de vidrio y frascos para toma de muestras utiliza una temperatura de 170 º C por dos horas.


ESTERILIZACION EN CALOR HÚMEDO Envolver el material en papel de esterilización

(papel kraft), se sella con cinta de enmascarar para esterilización y se lleva al autoclave a 121·C por 15 a 20 minutos a 15 a 20 libras de presión. Se coloca un Indicador ya sea Químico ( Cinta Indicadora para vapor, Integradores químicos, Cinta Indicadora para Oxido de Etileno) o Biológico ( tiras con esporas específicas: Bacillus stearothermophilus ( vapor), B. subtilis ( oxido Etileno).

Se usa para medios de cultivo y materiales


ESTERILIZACION POR MEDIOS QUIMICOS: Se utiliza hipoclorito de sodio al 5 %, a una

concentración de 1.000 ppm de cloro libre, que es efectivo contra células bacterianas, vegetativas, esporuladas, virus, hongos y parásitos.

Se utiliza para limpieza de los mesones, antes y después de trabajar, para limpiar paredes y pisos y para sumergir el material sucio antes de esterilizar, los mesones también son limpiados con fenol al 1 % o formol al 4%.


CARACTERÍSTIC VAPOR CALOR SECO PLASMA OXIDO DE ETILENO

GAS DE FORMALDEHIDO

Qué esterilizar?

Líquidos hidrosolubles, equipos metálicos e instrumental, material de caucho y material textil.

Artículos de vidrio, instrumental delicado con bordes de corte.

Elementos sensibles al calor.



Qué no esterilizar?

Material termosensible.

Telas y materiales de caucho, material termosensible.

Materiales que contengan celulosa: papel, tela, compresas, madera. No líquidos y polvos. Esterilización de canales largos y angostos como lúmenes, canales ciegos

Telas y Siliconas

Artículos porosos: papel, tela, compresas, líquidos. Polvos, silicona.


CARACTERÍST VAPOR CALOR SECO PLASMA OXIDO DE ETILENO

GAS DE FORMALDEHID

Tipo de Empaque

Algodón, kraf blanco, polipropileno no tejido

aluminio Tyvek/Mylar y polipropilen no tejido

Kraf blanco, polietileno, Tyvek/Mylar,polipropileno no tejido

Kraf blanco, polietileno, Tyvek/Mylar, polipropileno no tejido

Tiempo y Temperatura

15 min a 121 *C

10 min a 126*C

3 min a 134 *C ( solo en caso de urgencia)

30 min a 180*C

1 hora a 170*C

2 horas a 160*C

2,5 horas a 150*C

3 horas a 140*C

6 horas a 120*C

45 min a 50*C( 50Lt)

75 min (100 Lt)

54 min (100 Lt).

Ciclo corto: cargas que no contienen endoscopios flexibles

Proceso 6 horas.

Aireamiento 10 horas.

Temperatura entre 38*C y 55*C.

8 horas a 65*C

Indicador químico

Cinta indicadora para Vapor ( en el exterior del paquete)

Cinta indicadora para Calor Seco ( en el exterior del paquete)

Cinta Indicadora para Plasma ( en el exterior del paquete)

Cinta Indicadora para Oxido de Etileno ( en el exterior del paquete)

Cinta Indicadora para Formaldehído ( en el exterior del paquete)


CARACTERÍST VAPOR CALOR SECO PLASMA OXIDO DE

ETILENOGAS DE FORMALDEHID

Indicador químico

Integrador químico Vapor ( interior del paquete)

Integrador Químico Plasma ( interior del paquete)

Integrador químico Oxido de Etileno ( interior del paquete)

Integrador químico Formaldehído ( interior del paquete)

Indicador

biológicoTest de Esporas de Bacillus stearothermophilus

( una vez al día en una carga aleatoria)

Test de Esporas de Bacillus subtilis variedad niger ( una vez al día en una carga aleatoria)

Test de Esporas de Bacillus stearothermophilus

( una vez al día en una carga aleatoria)

Test de Esporas Bacillus subtilis variedad niger ( una vez al día en una carga aleatoria)

Test de Esporas de Bacillus stearothermopilus (una vez al día en una carga aleatoria)


DESECHO DE MATERIAL DE CULTIVOCajas de Petri, tubos con solución salina, medios líquidos de cultivo

Cuando? Diariamente

Que usa? Hipoclorito de sodio 5000 ppmRecipientes para descartar el materialElementos de protección personal


Esterilizar en el autoclave a 121*C por 1 hora Medios de cultivo de las cajas de petri: desechar en la

bolsa roja marcada “peligroso infeccioso” Solución salina y tioglicolato: desecharlos en el sifón Depositar los tubos en solución de hipoclorito a 5000

ppm durante 30 minutos Lavar los tubos según las indicaciones del lavado de

material de vidrio.

DESECHO DE MATERIAL DE CULTIVO

Calidad del material de vidrio

PRUEBAS DE LIMPIEZA PARA EL MATERIAL DE VIDRIO:

Prueba de limpieza

Los vasos sucios generalmente tienen gotas de agua en la superficie interna.

Prueba de limpieza

Observamos si el material de vidrio está cubierto por una capa continua de agua que no forma goticas en las paredes ni fluye de manera discontinua.

La forma más simple es llenar el material de vidrio con agua destilada – desionizada y vaciarla.

Prueba de limpieza

Otra forma de controlar la calidad del lavado del material de vidrio es la presencia de manchas de agua dentro y fuera del vaso o tubo de ensayo.

Estas manchas podrían originarse a partir del lavado inadecuado del material con agua dura, que produce manchas blanquecinas en las paredes al secarse.

Prueba de limpieza

El auxiliar del laboratorio como parte integrante del sistema de garantía de calidad, debe analizar algunos materiales al azar, por lo menos una vez a la semana para detectar restos de detergentes y debe registrar el resultado de esta supervisión, el cual debe ser avalado por el jefe directo o de la sección.

Prueba de limpieza

Cuando se advierte restos de detergentes en cualquiera de los materiales de vidrio deben tomarse las precauciones y ejercer los procedimientos de corrección de inmediato.

Revisar la calidad del detergente o del agua y prolongar el tiempo de enjuague con agua del chorro y destilada posterior al proceso de limpieza.

Prueba de limpieza

La eliminación del detergente puede comprobarse con una solucion de:

2mg de sulfobromoftaleina sódica BSP en 10 ml de agua destilada

O a 20 ml de agua desionizada agregar dos gotas de BSP

la disolución puede hacerse en un recipiente y ser usada para lavar las paredes internas y externas del material de vidrio seleccionado. La aparición de un color rosa ( púrpura) en cualquier momento indica la presencia de detergente residual.

Que Dios los tenga en la palma de su mano

Y que los Ángeles los cuiden siempre.

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