Métodos de detección de Antígeno- Anticuerpo

MsC. Libeth Yajaira Criado G.

Docente Escuela de Medicina

Universidad de Santander

El reconocimiento del Antígeno por las inmunoglobulinas

Las inmunoglobulinas se presentan en forma transmembrana (mIg) o soluble(sIg)

Inmunoglobulinas

Inmunoglobulinas

Dominios básicos de las inmunoglobulinas

Isotipos determinados por las cadenas pesadas

Variabilidad de inmunoglobulinas

Tipos de Enlaces entre Antígeno-Anticuerpo

Funciones de las Inmunoglobulinas

Pruebas Diagnósticas

Validez

Sensibilidad

Especificidad

Reproducibilidad

Seguridad

La seguridad de una prueba diagnóstica

Valor predictivo positivo

Valor predictivo negativo

Anticuerpos

Pueden aparecer en dos formas:

◦ Unidos a membranas

◦ Secretados (solubles)

Funciones efectoras:

◦ Neutralización de antígenos

◦ Activación del Sist. del complemento

◦ Opsonización de antígenos

◦ Hipersensibilidad inmediata

Policlonales: Obtenidos a partir de animales inmunizados con el antígenoMonoclonales: Producidos in vitro.

Los anticuerpos pueden ser:

Detección del Antígeno

Detectan el microorganismo utilizando anticuerpos específicos marcados.Si en una muestra clínica (LCR, orina, esputo ) está

presente el microorganismo, al agregarle los anticuerpos marcados específicos contra él, se fijarán al organismo y se produce la señal correspondiente:

• Aglutinación• Cambio de color de un sustrato• Fluorescencia• Emisión de luzPor el contrario si el microorganismo buscado no está

presente en la muestra, los anticuerpos no podrán unirse a él y no se producirá la señal.

La muestra

Las reacciones inmunológicas

Se pueden realizar en placas de titulación, tubos convencionales, membranas, portaobjetos.

Aglutinación

Se utilizan anticuerpos adheridos por su región Fc a partículas grandes de Látex que facilitan la observación de la aglutinación al formarse grumos de gran tamaño.

Permiten la detección de antígenos solubles (polisacarido); se pueden realizar sobre un portaobjetos y se llevan a cabo en tan sólo unos minutos.

Aglutinación

Inmunofluorescencia

Se utilizan anticuerpos marcados con sustancias fluorescentes que se fijan a los microorganismos inmunofluorescencia directa, IFD

La visualización se realiza con un microscopio de fluorescencia.

Se observa el microorganismo brillante (fluorescente) sobre unfondo oscuro.

INMUNO PRECIPITACIÓN

Es la precipitación de complejos antígeno-anticuerpo. Las condiciones para que se lleven a cabo las reacciones de inmunoprecipitacion son: o Los antígenos deben ser multivalente y solublesCada anticuerpo debe tener al menos dos sitios de unión a antígenos disponible.

o El antígeno y el anticuerpo deben estar presentes en las correctas proporciones lo que permite que todos los antígenos y anticuerpos sean parte de la malla.

La precipitación es un cambio de fase, en la cual los reactantes solubles forman un producto insoluble, este fenómeno es llamado reacción de precipitación. La formación de la malla no puede ocurrir cuando el antígeno tiene un único epitope que no es repetido. Debido a que un antígeno univalente no puede unirse a dos diferentes anticuerpos simultáneamente.

INMUNO PRECIPITACIÓN

Inmunofluorescencia

Inmunofluorescencia indirecta

• Detecta los diferentes antígenos con su anticuerpo específico no marcado y a continuación revelarlo mediante un anticuerpo marcado dirigido con el primer anticuerpo(Anti-anticuerpo) ( con un solo anticuerpo marcado se pueden revelar los diferentes anticuerpos específicos no marcados)

Enzimoinmunoensayo -ELISA

Test de Outcherlony:

En gel de agarosa, en el cual se colocan, a una distancia de varios mm una de otra, las dos sustancias a reaccionar (Ag y Ac).

Tanto las inmunoglobulinas como los antígenos migran por difusión y en minutos, o pocas horas, se encuentran. Si hay especificidad entre ellas y están presentes en las concentraciones apropiadas se forma en pocas horas, el complejo Ag-Ig que es visible como una línea blanca. Esta línea se forma en el frente del encuentro de los dos reactantes y es por lo tanto perpendicular a la dirección de migración entre ellas.

Gracias