Nuevos ácidos grasos omega-3 enzimáticos - Actualización científica
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NUEVOS ÁCIDOS GRASOS OMEGA-3 ENZIMÁTICOS ACTUALIZACIÓN CIENTÍFICA
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Los ácidos grasos esenciales (Omega 3 y Omega 6) son vitales para la salud porque nuestro cuerpo no puede fabricarlos y debemos obtenerlos de forma externa a través de la alimentación. Para el óptimo funcionamiento de muchos tejidos de nuestro cuerpo, como por ejemplo el cerebro (que se compone aproximadamente de un 60% de lípidos y tiene una tasa muy alta de consumo de energía), necesita ácidos grasos imprescindibles. De ellos, los más cruciales son los Omega 3. El DHA es el ácido graso Omega 3 más abundante en el cuerpo porque está presente en todos los órganos especialmente en el sistema nervioso central, en el esperma y en la retina. El contenido de DHA es, habitualmente, entre 5 y 30 veces superior al de EPA en la mayoría de órganos. El DHA es el ácido graso más beneficioso para la salud humana. Es esencial para el sistema cardiovascular, para el desarrollo cerebral y para la capacidad de aprendizaje en los niños, para los ojos y el sistema nervioso y las situaciones de tipo inflamatorio entre otras. Diferentes estudios han demostrado que una ingesta adecuada de DHA es fundamental pero nuestra dieta habitual presenta un déficit. La organización Mundial de la Salud (OMS) recomienda ingerir 150 mg de DHA y EPA al día, cantidad que la dieta habitual de un ciudadano de nuestras latitudes no asume, ya que se encuentra especialmente en el pescado azul, un producto más común en los países nórdicos. Otros organismos internacionales aconsejan cantidades diarias superiores de DHA y EPA: - Asociación Internacional para el Estudios de los Ácidos Grasos y Lípidos (ISSFAL) 650 mg - Agencia Francesa para la Seguridad Sanitaria de los Alimentos (AFSSA) 500 mg - Fundación Británica para la Nutrición (BNF) 1250 mg - Ministerio de Sanidad Danés 300 mg En particular, para el DHA las ingestas diarias recomendadas por estos organismos son: - ISSFAL 325 mg (mínimo 220) - AFSSA 120 mg
Transcript of Nuevos ácidos grasos omega-3 enzimáticos - Actualización científica
NUEVOS AacuteCIDOS GRASOS
OMEGA-3 ENZIMAacuteTICOS
AC TUALIZACIOacuteN CIENTIacuteF ICA
El objetivo principal de esta presentacioacuten es mostrarles nuestra experiencia en el uso de aacutecidos grasos omega-3
En este sentido conviene inicialmente situar el concepto omega-3 como valor nutri-
cional y terapeacuteutico
Es un hecho admitido por la comunidad cientiacutefica que la ingesta de aacutecidos grasos po-
liinsaturados (PUFAs) omega-3 representa un beneficio para la salud en general Una
gran cantidad de estudios con aacutecidos grasos omega-3 han demostrado su importancia
en la dieta aun cuando estos microalimentos no se consideran esenciales ya que son
sintetizados pero en cantidades excesivamente bajas para cubrir las necesidades del
cuerpo
Diversos estudios baacutesicos cliacutenicos y epidemioloacutegicos han reportado ventajas impor-
tantes en la ingesta de aacutecidos grasos omega-3 en campos tan diversos como car-
diologiacutea neurologiacutea oncologiacutea patologiacuteas inflamatorias croacutenicas oftalmologiacutea
Ademaacutes es un componente criacutetico para el desarrollo y funcionalidad del cerebro
BENEFICIOS NUTRICIONALES Y TERAPEacuteUTICOS DE LOS OMEGA-3
ESPECIALIDAD MEacuteDICA REDUCCIOacuteN EN EL RIESGO O IMPACTO
Cardiologiacutea Toda causa de mortalidad muerte suacutebita cardiacuteaca isquemia infarto cerebral reduccioacuten de trigliceacuteridos (especialmente con DHA) aumento de las HDL pero generalmente no modifica los niveles de liacutepidos a dosis bajas presioacuten arterial y reduccioacuten de taquicardias
Dermatologiacutea Soriasis melanoma
Gastroenterologiacutea Caacutencer de Colon enfermedad inflamatoria intestinal (Enfermedad de Crohn y colitis ulcerosa)
InmunologiacuteaEnfermedades infecciosasNefrologiacutea Asma hepatitis nefropatiacuteas
Neurologiacutea Enfermedad del Alzheimer (especialmente DHA) demencia autismo desorden de falta de atencioacuten-hiperactividad
ObstetriciaGinecologiacuteaPediatriacutea
Salud maternal e infantil (especialmente DHA) cognoscitiva (aumento del coeficiente intelectual) y la agudeza visual en recieacuten nacidos y adolescentes mejora la duracioacuten del embarazo y el peso del feto y una gran variedad de otros siacutentomas como por ejemplo la depresioacuten post-parto
Oncologiacutea Caacutencer de mama colorectal de endometrio leucemia melanoma de ovario de paacutencreas de proacutestata renal Puede mejorar el iacutendice tera-peacuteutico de los citostaacuteticos (5-fluorouracilo ciclofosfamida) e inhibe la caquexia asociada al tumor (reduce peacuterdida de peso)
Oftalmologiacutea Degeneracioacuten Macular asociada a la edad Renitis Pigmentosa
Ortopedia Osteoporosisfracturas inflamaciones de las articulaciones (artritis)
Psiquiatriacutea Depresioacuten desorden bipolar esquizofrenia desorden de falta de atencioacuten-hiperactividad
Reumatologiacutea Artritis reumatoide osteoartritis osteoporosis
Cirugiacutea Mejora la recuperacioacuten en el post-operatorio pero hay que tener precauciones en su administracioacuten a altas dosis (gt 10 gg) conjuntamente con anticoagulantes
Urologiacutea Caacutencer de proacutestata prostatitis hiperplasia prostaacutetica benigna
DESVENTAJAS
Un reciente meta-anaacutelisis realizado por Hooper et al ha concluido que no se
ha podido documentar de manera objetiva y estadiacutesticamente significativa
un efecto beneficioso en el consumo de PUFAs omega-3 en la mortalidad rela-
cionada con eventos cardiovasculares o caacutencer 1
Tampoco se ha documentado de manera objetiva y estadiacutesticamente signifi-
cativa el efecto de los omega-3 en la reduccioacuten del riesgo de desarrollar caacuten-
cer2
1 Hooper L et al Risks and benefits of omega 3 fats for mortality cardiovascular disease and cancer systematic review BMJ 2006 332752-760 Balk EM et al Effects of omega-3 fatty acids on serum markers of cardiovascu-lar disease risk A systematic review Atherosclerosis 2006 18919-302 MacLean CH et al Effects of omega-3 fatty acids on cancer risk a systematic review JAMA 2006 295403-15)
SIN EMBARGO
Los estudios anteriormente citados presentaban diferentes deficiencias en su
planteamiento relacionadas con la no separacioacuten de las intervenciones reali-
zadas con los diferentes aacutecidos omega-3 o mezclas de los mismos en forma de
aceite de pescado o suplementos alimenticios enriquecidos
Tambieacuten se ha observado una falta de homogeneidad en cuanto a la duracioacuten
y las dosis en cada tratamiento
Asiacute como tampoco se ha valorado la importancia de la estructura quiacutemica en
la que se ha administrado el aacutecido omega-3 trigliceacuterido (TG) eacutester etiacutelico (EE)
o aacutecido graso libre (FA)
RECOMENDACIONES
Teniendo en cuenta esta controversia la opinioacuten de diferentes expertos es que deberiacutean mantenerse
las actuales recomendaciones en el consumo de aacutecidos grasos omega-3 pero teniendo en cuenta una
serie de criterios que deberiacutean cumplir los aacutecidos grasos omega-3 para su aplicacioacuten nutricional y
terapeacuteutica como son
Manufacturar los PUFAs omega-3 siguiendo los criterios similares a los estaacutendares farma-
ceacuteuticos que incluyen controles de calidad en todas las etapas de produccioacuten para asegu-
rar su pureza y calidad
Utilizar compuestos con un contenido miacutenimo de 0 en PUFA omega-3 de todos los
aacutecidos grasos
La relacioacuten omega-3omega- debe ser mayor de 501
Estas recomendaciones estaacuten de acuerdo con las conclusiones de un workshop sobre aacutecidos grasos
omega-3 recientemente publicadas en la revista Journal American Clinical Nutrition que ademaacutes des-
taca como punto importante la necesidad de realizar maacutes ensayos cliacutenicos que permitan calibrar el
potencial real de los aacutecidos grasos omega-3 tanto a nivel preventivo como terapeacuteutico
iquestQUEacute AacuteCIDO GRASO OMEGA-3
0
5
10
15
20
25
g10
0 g
ALA
EPA
DHA
Adipose
Rectal epith
elium
CheekHeart
MuscleLiver
SpleenRBC
Cerbral c
ortex
SpemRetin
a
Estudio transversal del contenido en aacutecidos grasos en tejidos de adultos de Estados Uni-dos Canadaacute Australia y Europa
De acuerdo con estos criterios el primer punto a resolver es la eleccioacuten del
PUFA omega-3 maacutes adecuado para un determinado tratamiento Los tres aacuteci-
dos grasos de la serie 3 maacutes importantes fisioloacutegicamente hablando son
El alfa-linoleacutenico (ALA)
El eicosapentaenoico (EPA)
El docosahexaenoico (DHA)
El DHA es el aacutecido graso omega-3 maacutes abundante en las membranas y estaacute
presente en todos los oacuterganos Es particularmente el maacutes abundante en el sis-
tema nervioso central en el esperma y en la retina ademaacutes del maacutes variable
entre los oacuterganos
Soacutelo pequentildeas cantidades de ALA y de EPA estaacuten presentes en los tejidos y el
contenido en DHA es habitualmente entre 5-30 veces superior al del EPA en
la mayoriacutea de los oacuterganos Ademaacutes el DHA es unas 100 veces maacutes abundante
que el EPA en el cerebro y la retina
iquestQUEacute AacuteCIDO GRASO OMEGA-3
Aunque los tres aacutecidos grasos estaacuten relacionados metaboacutelicamente diversos estu-
dios han demostrado que la administracioacuten de ALA no genera las cantidades fisio-
loacutegicas necesarias de DHA y de EPA En cuanto a la administracioacuten de DHA o EPA las
uacuteltimas recomendaciones sugieren que la viacutea maacutes eficiente para el incremento de las
concentraciones de un aacutecido omega-3 es la administracioacuten de dicho aacutecido especiacutefi-
camente De todas maneras en un planteamiento maacutes general la administracioacuten de
DHA garantiza una concentracioacuten baacutesica de EPA mientras que la administracioacuten
exclusiva de este uacuteltimo disminuye la concentracioacuten de DHA
En humanos la capacidad endoacutegena de convertir ALA en DHA o EPA es muy baja
o inexistente por esta razoacuten el consumo de DHA en la dieta puede ser criacutetico para
mantener la concentracioacuten adecuada de DHA en las membranas celulares BrJ
Nutr2002 88355ndash363
Retroconversioacuten de DHA-EPA en el grupo de DHA su concentracioacuten aumento un
69 y la del EPA un 29 En el grupo de EPA este crecioacute un 297 mientras que el
DHA decrecioacute un 15 AmJ ClinNutr1997 66649-59 AmJ ClinNutr2000 711085ndash94 Am
J Clin Nutr 200479765ndash73
α-Linolenic acid (183n-3)
Stearidonic (184n-3)
(204n-3)
EPA (205n-3)
DPA (225n-3)
DHA (226n-3)
iquestQUEacute AacuteCIDO GRASO OMEGA-3
El DHA es el aacutecido graso n-3 en el sistema nervioso central
Por otra parte desde un punto de vista nutricional cuyo objetivo es el de recuperar los depoacutesitos de
aacutecidos grasos omega-3 la administracioacuten de DHA garantiza una intervencioacuten en el sistema nervioso
central ya que la concentracioacuten de EPA en este tejido es puramente testimonial
Dietas que contienen un 95 de DHA inhiben completamente la degeneracioacuten de la retina inducida
por la N-Metil-N-nitrosourea en cambio las dietas que contienen un 475 de DHA (grupo EPA+DHA) o
soacutelo EPA no tuvieron un efecto protector Exp Eye Res 2003 77167ndash173
El DHA es el precursor de los docosatrienos y las resolvinas de la serie D que regulan los procesos aso-
ciados a la inflamacioacuten y su resolucioacuten final J Biol Chem 2003 27814677ndash14687
El DHA hidrolizado de los fosfoliacutepidos de membrana es el precursor endoacutegeno de la respuesta neuro-
protectiva frente reperfusioacuten isqueacutemica J Biol Chem 2003 278 43807ndash43817
La siacutentesis del 1017S-docosatrieno neuroprotectina D1 protege a las ceacutelulas de la retina de la apop-
tosis inducida por estreacutes oxidativo de una manera similar se sugiere que protegeraacute a las neuronas Proc
Natl Acad Sci USA 2004 101 8491ndash8496
10
BIODISPONIBILIDAD
Otro aspecto interesante que puede condicionar la eficacia de un determina-
do tratamiento es la biodisponibilidad de los aacutecidos omega-3 Existen nume-
rosos estudios en animales que han demostrado que los gliceacuteridos son los
transportadores maacutes eficaces para los aacutecidos grasos Ademaacutes los gliceacuteridos
se consideran la forma quiacutemica maacutes favorable desde un punto de vista ali-
mentario superior a los eacutesteres etiacutelicos de aacutecidos grasos insaturados los cuales
presentan una absorcioacuten intestinal deteriorada de los aacutecidos grasos n-3 ob-
servados como se ha demostrado en animales de laboratorio Tambieacuten se ha
demostrado que los eacutesteres etiacutelicos de aacutecidos grasos no saturados se hidro-
lizan a una velocidad maacutes lenta que los gliceacuteridos correspondientes
Un estudio en humanos realizado por la empresa farmaceacuteutica SIGMA-TAU
demostroacute que los trigliceacuteridos obtenidos por reesterificacioacuten presentan una
biodisponibilidad similar al aceite de pescado natural y muy superior a la
de los aacutecidos grasos libres que ademaacutes generan problemas digestivos y tam-
bieacuten superior a la de los eacutesteres etiacutelicos cuya uacutenica ventaja es la pureza que se
puede alcanzar pero por contra generan etanol que puede ser toacutexico a dosis
elevadas
TIPO DE ACEITE CONTENIDO EN PUFA N-3 () BIODISPONIBILIDAD
Aceite de pescado 25-30 7-100
Eacutesteres etiacutelicos gt85 21-57
Aacutecidos grasos libres gt65 51
TrigliceacuteridosRe-esterificados min 70-75 9
En un estudio In vivo en 24 personas sanas comparando una sola toma oral de PUFAs n-3 en estructuras quiacutemicas diferentes se demostroacute un mayor nivel plasmaacutetico de PUFAs n-3 en el grupo tratado con aceite re-esterificado
Extraiacutedo de una publicacioacuten de la empresa SIGMA-TAU
BIOACTIVIDAD - SEGURIDAD
DHA TG QUIacuteMICO ALGATRIUM PLUS
bull pH extremosbull Temperaturas altas (destilacioacuten)bull Reactivos quiacutemicos
bull pH fisioloacutegicobull Temperaturas bajasbull Sin reactivos quiacutemicos
bull Nivel bajo de trigliceacuteridosbull Productos de reaccioacuten secundariosbull Purificacioacuten cromatograacutefica
bull Nivel alto de trigliceacuteridosbull Sin productos secundariosbull No necesita maacutes purificacioacuten
bull Migracioacuten de dobles enlacesbull Oxidacioacuten de dobles enlacesbull Isomerizaciones CisTrans
bull Preservacioacuten de dobles enlacesbull No oxidacioacuten de dobles enlacesbull No isomerizaciones Cis Trans
La siacutentesis industrial de trigliceacuteridos se puede realizar quiacutemicamente o por
viacutea enzimaacutetica Las diferencias en las condiciones de reaccioacuten entre un pro-
ceso de siacutentesis quiacutemico y uno enzimaacutetico determinaraacuten las calidades finales
para cada producto El uso de meacutetodos tradicionales quiacutemicos (separacioacuten
cromatograacutefica destilacioacuten molecular etc) para producir concentrados de
PUFAs omega-3 implican el uso de pHs extremos y de altas temperaturas que
pueden destruir parcialmente la estructura de los dobles enlaces todos cis del
PUFA omega-3 natural por oxidacioacuten isomerizacioacuten o migracioacuten
Por otra parte las condiciones suaves (temperatura menor de 50degC pH 6-8 y
menos productos quiacutemicos) usadas en la hidroacutelisis enzimaacutetica proporcionan
un alternativa prometedora que podriacutea tambieacuten ahorrar energiacutea y aumentar
la selectividad del producto La preservacioacuten de los enlaces dobles conferiraacute
a la moleacutecula una mayor bioactividad
1
ALGATRIUM PLUS
ESPECIFICACIOacuteN UNIDADES LIacuteMITES
Acidez mg KOHg 30 maacutex
Contenido antioxidante g100g 10 - 11
Densidad a 20ordmC Kgl 0930 - 0940
Aacutecido graso DHA (C n3) FA 70 miacuten
Aacutecido graso DPA (C22 5n3) FA 8 maacutex
Aacutecido graso EPA (C0 5n3) FA 10 maacutex
Aacutecidos grasos Omega-3 FA 5 miacuten
Iacutendice de Peroacutexidos meq O2Kg 50 maacutex
Residuo seco g100g 010 maacutex
Muchos estudios demuestran que la bioactividad de los aceites omega-3 y
principalmente del DHA estaacute relacionada directamente con su contenido res-
pecto a los aacutecidos grasos totales los cuaacuteles pueden competir con los omega-3
en un metabolismo concreto Para obtener el maacuteximo nivel de bioactividad
Brudy ha dirigido sus esfuerzos en dos objetivos baacutesicos
Tener el maacuteximo contenido de DHA en el trigliceacuterido
Reducir al maacuteximo el contenido de EPA
Ademaacutes este aceite cumple todos los requisitos legales en cuanto a iacutendice de
peroacutexidos acidez contenido antioxidante nivel de metales pesadoshellip
Especificaciones del aceite omega-3 utilizado en estos estudios
De todos los aceites que hay en el mercado Algatrium Plus (DHA 70e) es
el aceite enriquecido con un contenido en omega-3 global y en DHA maacutes
alto
0
10
20
30
40
50
Comparativa de diferentes aceites omega-3 en el mercado
DPA
EPA
Algatrium Plus
OMEGA-3
60
70
80
90
P M HSO DHA 50CHEM ALGATRIUM PLUS
ALGATRIUM PLUS
1
OMEGA-3 OMEGA-3 SIacuteNTESIS INSA MG DG CHOL PLM TG EE GTOTAL
A PLUS 70 ENZIMAacuteTICO 05 nd 71 nd nd 865 59 936
FISH 20 ATUacuteN 47 nd 22 42 nd 889 nd 911
DHA 50 QUIacuteMICO 27 43 103 35 228 401 140 532
DHA 50 QUIacuteMICO-PURIFICADO 21 nd 188 nd nd 664 52 852
La biodisponibilidad del aceite es directamente pro-
porcional al tipo de moleacuteculas que lo compongan
concretamente a su composicioacuten lipiacutedica Los acei-
tes naturales contienen maacutes del 90 de materia en
forma de gliceacuterido que proporciona una biodispo-
nibilidad maacutexima Algatrium Plus es muy similar a
un aceite natural (la composicioacuten lipiacutedica incluye un
90 de gliceacuteridos totales con un 5 en forma de
trigliceacuteridos y sin monogliceacuteridos) El DHA obteni-
do quiacutemicamente tiene un nivel bajo de trigliceacuteri-
dos (lt50) un mayor nivel de eacutesteres etiacutelicos y un
alto contenido de poliacutemeros (15-0) que no son
absorbibles y que se deben eliminar por cromatogra-
fiacutea en columna (QUIacuteMICO-PURIFICADO)
Especificaciones del aceite omega-3 utilizado en estos estudios
ALGATRIUM PLUS
Solamente los aceites de pescado o de algas naturales que no se han rees-
terificado satisfacen la legislacioacuten alimentaria en cuanto a su composicioacuten
y por lo tanto son un alimento El DHA obtenido quiacutemicamente no satisface los
requisitos de la farmacopea europea sobretodo relacionado con el nivel de
trigliceacuteridos gliceacuteridos totales y en el contenido en compuestos polimeacutericos
Es necesaria una purificacioacuten por cromatografiacutea en columna para que el pro-
ducto cumpla los requisitos de la legislacioacuten europea Algatrium Plus tiene la
misma composicioacuten que los aceites naturales y por lo tanto se consideran
un alimento
LEGISLACIOacuteN
0
10
20
30
40
50
Composicioacuten estructural Algatrium Plus
Farmacopea
DHA 50 QUIacuteMICO
DHA 50 QUIacuteMICO-PURIFICADO
60
70
80
90
INS DG PLM TG EE
100
MG FA GTotal
1
ACTIVIDAD ANTITUMORAL
Para valorar la actividad de Algatrium Plus nuestro primer obje-
tivo fue determinar su capacidad citotoacutexica antitumoral En este
sentido realizamos un estudio comparativo usando ceacutelulas tumo-
rales (HeLa) y ceacutelulas sanas como control (renales y de piel) Hemos
realizado estudios dosis-respuesta para determinar el valor de IC50
como criterio de toxicidad (es la concentracioacuten que mata al 50 de
las ceacutelulas) Hemos analizado dos variables el efecto de la estructu-
ra del liacutepido y del contenido en DHA Para un contenido en DHA del
70 de todos los aacutecidos grasos se obtuvo la misma toxicidad en
ceacutelulas tumorales con el eacutester etiacutelico (EE) el aacutecido graso libre (FA) o
el trigliceacuterido (TG) Pero en ceacutelulas renales sanas el EE tiene la mis-
ma toxicidad que en las ceacutelulas tumorales y en las ceacutelulas de piel el
FA demuestran una gran toxicidad siendo los TG la forma con un
mejor cociente de seguridad Para una misma estructura quiacutemica
el TG una disminucioacuten del contenido en DHA a 50 o al 20 (este
uacuteltimo es la concentracioacuten en el aceite de pescado) disminuye de
forma dramaacutetica el efecto citotoacutexico en las ceacutelulas del tumor Estos
resultados demuestran que la forma oacuteptima es el trigliceacuterido con
un alto contenido en DHA (Algatrium Plus)
Efectos del contenido en DHA y de la estructura quiacutemica Toxicidad celular
FA 70 1231 plusmn90 nd 722 plusmn58 17
EE 70 5663 plusmn539 726 plusmn83 710 plusmn97 798 -102
TG (Algatrium Plus) 70 7167 plusmn419 3927 plusmn375 586 plusmn88 1223 -670
TG (Quiacutemico) 50 19560 plusmn278 4136 plusmn256 5640 plusmn696 347 -073
TG (Pescado) 20 22676 plusmn279 31160 plusmn1582 13794 plusmn2864 164 -226
ESTRUCTURA DHA PIEL RENAL HeLa
RELACIOacuteNDE
SEGURIDAD
CEacuteLULASTUMORALESCEacuteLULAS SANAS
COMPOSICIOacuteNIC50 (μM)
Otra actividad interesante de los PUFAs omega-3 en caacutencer es su uso como
adyuvantes en la quimioterapia convencional En este sentido determina-
mos los efectos de Algatrium Plus a concentraciones subtoacutexicas sobre la toxi-
cidad de la Doxorrubicina y del 5-fluoroacilo La exposicioacuten simultaacutenea de las
ceacutelulas tumorales al DHA y a la droga aumenta la toxicidad de la misma dos
veces (disminuye el valor de la IC50) Por otra parte si Algatrium Plus se ha
incorporado previamente a la membrana celular este efecto potenciador au-
menta hasta 10 veces
ACTIVIDAD COMO ADYUVANTE ANTITUMORAL
Efecto del DHA sobre la actividad antitumoral de la Doxorrubicina o del 5-fluoroacilo Toxicidad celular
Este efecto potenciador depende del contenido en DHA ya que con el uso de
un aceite quiacutemico (50 en DHA) o de aceite de pescado (20 en DHA) se pier-
de progresivamente dicho efecto potenciador Tambieacuten es significativo que
este efecto no incrementa la toxicidad de los citostaacuteticos en ceacutelulas sanas
Efecto del contenido en dha sobre la actividad antitumoral de la doxorrubicina Toxicidad celular
Control 0 2953 plusmn316 (n=8)
Pre-incorporado15
10
301 plusmn54 (n=8)287 plusmn67 (n=8)370 plusmn44 (n=6)
Simultaacuteneo 5 1843 plusmn162 (n=4)
Control 0 2330 plusmn368 (n=12)
Pre-incorporado15
10
280 plusmn110 (n=7)238 plusmn101 (n=4)380 plusmn142 (n=6)
Simultaacuteneo 5 1480 plusmn801 (n=6)
LIacuteNEA CELULAR
HeLa-Epitelial (Dox)
HT-29-Colon (5-FU)
SISTEMADE ADICIOacuteN
ALGATRIUM PLUS μM IC50 (μM)
0 2953 plusmn316 11586 plusmn3699
5 287 plusmn67 10466 plusmn2304
10 370 plusmn44 10805 plusmn1742
5 1309 plusmn156 11633 plusmn1569
10 1063 plusmn207 9801 plusmn2709
5 2574 plusmn296 11575 plusmn1249
10 2365 plusmn157 15303 plusmn4813
CONTENIDOEN DHA
Control
DHAAlgatrium Plus
DHA TG 50Quiacutemico
DHA TG 20Pescado
DHA (μM)CEacuteLULA TUMORAL CEacuteLULA SANA
IC50 (nM)
1
BIOACTIVIDAD - SEGURIDAD
En los sistemas quiacutemicos puros las moleacuteculas maacutes susceptibles al ataque de los
radicales libres son los aacutecidos grasos poliinsaturados (PUFAs) como el aacutecido do-
cosahexaenoico (DHA n-3) y en general esta susceptibilidad aumenta con
el nuacutemero de dobles enlaces In vivo se supone el mismo comportamiento
Entonces iquestpor queacute el DHA una diana molecular de los radiaciones libres es el
aacutecido graso maacutes abundante en tejidos expuestos a un potencial estreacutes oxidativo
como la retina o en tejidos con un sistema antioxidante celular deficiente como
el sistema nervioso central
iquestACTIVIDAD PRO-O ANTIOXIDANTE
BIOACTIVIDAD - SEGURIDAD
En este contexto hemos estudiado la influencia de la presencia del DHA enzimaacutetico
en la membrana celular sobre la generacioacuten intracelular de radicales libres utilizando
como sistema experimental dos liacuteneas celulares humanas sanas fibroblastos de piel
(Foreskin ATC CRL 2076) y ceacutelulas epiteliales pigmentarias de la retina (ARPE-19 ATCC
CRL 2302)
La cuantificacioacuten de los radicales libres generados se ha realizado mediante metodolo-
giacuteas fluorescentes usando sondas moleculares como el HDCF-DA DHR y DHE
Como inductores exoacutegenos de estreacutes oxidativo se ha utilizado el AAPH y el sistema
xantinaxantin oxidasa y como inductores endoacutegenos la rotenona y la antimicina A
0
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE CELULAR
Como se muestra en la figura la presencia de Algatrium Plus en la
membrana celular disminuye la generacioacuten intracelular de radicales
libres despueacutes de estar sometidas las ceacutelulas a un estreacutes oxidativo
Este comportamiento es independiente de la ceacutelula en estudio (piel o
retina) y del marcador utilizado (H2DCF-DA o DHR) lo cual nos indica la
activacioacuten de un mecanismo general El nivel de proteccioacuten observado
tambieacuten es similar frente al mismo estiacutemulo oxidativo
0 50 100 150 200 250Tiempo (min)
Fluo
resc
enci
a (U
A)
-49
CEacuteLULAS DE RETINA
H2DCF-DA
0 50 100 150 200Tiempo (min)
Fluo
resc
enci
a (U
A)
-42
CEacuteLULAS DE PIEL
0 50 100 150 200 250Tiempo (min)
Fluo
resc
enci
a (U
A)
-56DHR
0 50 100 150 200 250Tiempo (min)
Fluo
resc
enci
a (U
A)
-50
Control
Algatrium Plus
Incr
emen
to
Pro
tecc
ioacuten
EFECTO ADITIVO
Algatrium Plus
0
0306
09
18
21
05 5
1215
Para determinar que la proteccioacuten antioxidante de Algatrium Plus era un
proceso general cambiamos el inductor de estreacutes oxidativo de un produc-
to quiacutemico (el AAPH) a un sistema enzimaacutetico (sistema XXO) o inductores
endoacutegenos (ROT y ANT A) Se ha observado el mismo comportamiento en
todos los casos
El efecto antioxidante de Algatrium Plus depende de la dosis mostrando
un comportamiento dosis-dependiente a la inversa El mayor efecto se ha
observado en una concentracioacuten baja de DHA mientras que a altas con-
centraciones el efecto antioxidante disminuye independientemente de la
potencia del estreacutes oxidativo
Tambieacuten el efecto antioxidante de Algatrium Plus presenta un efecto adi-
tivo con la frecuencia de la administracioacuten La administracioacuten de una do-
sis diaria inrementa el efecto antioxidante respecto a una sola administra-
cioacuten
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE CELULAR
0 50 100 150 200 250Tiempo (min)
Fluo
resc
enci
a (U
A)
-49
CEacuteLULAS DE RETINA AAPH
P
rote
ccioacute
n
ROT ANT A XXO0
10
20
3040
50
60
INDEPENDIENTE DEL INDUCTOR
P
rote
ccioacute
n
DEPENDENCIA DE LA DOSIS
Algatrium Plus
0
10
20
3040
50
60
05 5 50Dosis diaria
Una dosis
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE CELULAR
La generacioacuten intracelular de radicales libres se confirmoacute mediante
microscopia de fluorescencia confocal Las micrografiacuteas muestran una
acumulacioacuten progresiva en el tiempo de radicales libres en las ceacutelulas
control sin DHA mientras que en las que han incorporado Algatrium
Plus en su membrana el nivel intracelular de radicales libres no ha
aumentado
T= 0 min
T= 15 min
T= 30 min
CONTROL ALGATRIUM PLUS 05 μM
CEacuteLULAS DE PIEL
A nivel celular la generacioacuten de radicales libres parece ser dependiente de
la composicioacuten en aacutecidos grasos de la ceacutelula pero la influencia especiacutefica de
cada clase de aacutecido graso no ha sido estudiada
Por otra parte a nivel industrial el meacutetodo de siacutentesis usado para obtener
el aceite enriquecido en DHA puede ser muy importante en la calidad final
del producto En este sentido hemos estudiado la importancia del contenido
de DHA y del origen sinteacutetico en el efecto antioxidante
Como se puede observar en la figura una disminucioacuten del contenido en DHA
al 50 (origen quiacutemico) o al 20 (aceite de pescado) de los aacutecidos grasos to-
tales induce una disminucioacuten del efecto antioxidante en las ceacutelulas de retina
aunque en ninguacuten caso llega a ser pro-oxidante Sin embargo en ceacutelulas de
piel esta reduccioacuten es tan acusada que soacutelo Algatrium Plus es antioxidante
siendo los otros dos pro-oxidantes
Dado el caraacutecter multifactorial de un tratamiento nutricional no es aconseja-
ble administrar un producto que presente actividades divergentes en funcioacuten
del tejido al que se incorpore
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE CELULAR
CEacuteLULASDE PIEL
05 μM
5 μM
50 μM
ACEITE DE PESCADO
P
ROTE
CCIOacute
N
0
20
40
60
-20
-40
DHA TG50QUIacuteMICO
ALGATRIUMPLUS
P
ROTE
CCIOacute
N
60
20
0
CEacuteLULASDE RETINA
40
DHA quiacutemico vs Algatrium Plus
ACEITE DE PESCADO
DHA TG50QUIacuteMICO
ALGATRIUMPLUS
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE CELULAR
Si la baja actividad del aceite de origen quiacutemico (50 en DHA) pudie-
ra estar relacionado con la presencia de estructuras polimeacutericas su eli-
minacioacuten por cromatografiacutea en columna deberiacutea permitir recuperar su
actividad antioxidante Como se puede observar en la figura una mani-
pulacioacuten excesiva del producto original para eliminar contaminantes
o para mejorar sus caracteriacutesticas organoleacutepticas se traduce en una
peacuterdida de bioactividad
P
ROTE
CCIOacute
N
0
10
20
30
40
50
60
-10DHA TG50QUIacuteMICO
ALGATRIUMPLUS
DHA TG50 QUIacuteMICOPURIFICADO
(DHA)
05 μM
5 μM
50 μM
CEacuteLULAS DE RETINA
DHA quiacutemico vs Algatrium Plus
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE CELULAR
La actividad antioxidante del Algatrium Plus tambieacuten esta relacionada
con su mayor biodisponibilidad ya que un eacutester etiacutelico o un aacutecido graso
libre con el mismo contenido en DHA presenta una actividad antioxi-
dante como maacuteximo la mitad de la de Algatrium Plus
P
ROTE
CCIOacute
N
0
10
20
30
40
50
60
05 μM
(DHA)
FA-BSA
Algatrium Plus
CEacuteLULAS DE RETINA
Efecto de la estructura quiacutemica Fa vs Ee vs Tg
70
5 μM
TG 50 CHEM
EE 70
FA Aacutecido graso libre
EE Eacutester etiacutelico
TG Trigliceacuterido
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE CELULAR
Comparado con los antioxidantes normalmente utilizados en tratamien-
tos oculares a las concentraciones oacuteptimas descritas Algatrium Plus pre-
senta a todas las dosis estudiadas un efecto superior
P
ROTE
CCIOacute
N
0
10
20
30
40
50
60CEacuteLULAS DE RETINA
Algatrium Plus vs antioxidantes
Algatrium Plus
NAC mM
Cys 1 m
M
Co Q 100 μM
Vit E 100 μM
Vit C 100 μM
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE CELULAR
Incluso si estos antioxidantes se combinan o se incrementa su concen-
tracioacuten 10 oacute 100 veces
P
ROTE
CCIOacute
N
0
10
20
30
40
50
60CEacuteLULAS DE RETINA
Algatrium Plus vs antioxidantes
Algatrium Plus
ANT1
ANT1 x10
ANT1 x100ANT2
BIOACTIVIDAD
En este punto la cuestioacuten es iquestCuaacutel es el mecanismo por el cual el Algatrium Plus
ejerce este efecto antioxidante tan potente
Los Omega-3 pueden actuar a diferentes niveles en la fisiologiacutea celular La de-
fensa antioxidante celular se basa en la actividad de un nuacutemero de enzimas an-
tioxidantes junto con otros antioxidantes quiacutemicos conjuntamente previenen la
peroxidacioacuten lipiacutedica la proteiacuteca y el dantildeo en DNA Hemos estudiado el efecto de
Algatrium Plus en diversos aspectos del sistema antioxidante celular
Generacioacuten del anioacuten superoacutexido (O-)
La actividad superoacutexido dismutasa (SOD) y de la glutatioacuten peroxidasa (GPx)
La concentracioacuten intracelular de glutatioacuten (GSH)
La peroxidacioacuten lipiacutedica
Y el dantildeo en DNA
BIOACTIVIDAD
Mecanismo de actividad antioxidante
CellularRespiration
OxidativeBurst
EnvironmentalFactors
O-SOD
GSH
GPx
LipidPeroxidation
ProteinPeroxidation
DNA Damage
HO
HO + O
HO
GSSG
GRed
Catalase
OH
1 3
30
BIOACTIVIDAD
Mecanismo de actividad antioxidante
CellularRespiration
OxidativeBurst
EnvironmentalFactors
O-SOD
GSH
GPx
LipidPeroxidation
ProteinPeroxidation
DNA Damage
HO
HO + O
HO
GSSG
GRed
Catalase
OH
1 3
=
+
BIOACTIVIDAD
Hemos encontrado que la incorporacioacuten de Algatrium Plus en las ceacutelulas disminuye la genera-
cioacuten del anioacuten superoacutexido la peroxidacioacuten lipiacutedica de una manera dosis-dependiente inversa y
el dantildeo en DNA
Los niveles inferiores del anioacuten superoacutexido bajo estreacutes oxidativo en ceacutelulas tratadas con Alga-
trium Plus puede ser debido a la actividad maacutes alta de la SOD respecto al control
Por otra parte la actividad de la GPx en las ceacutelulas tratadas no era diferente de las ceacutelulas control
con o sin estreacutes oxidativo
El cambio maacutes significativo fue el incremento (300) de la concentracioacuten intracelular de GSH
relacionado con un incremento de la siacutentesis de novo
Estos resultados nos indican que Algatrium Plus ejerce su efecto antioxidante mediante un
incremento de la actividad del sistema antioxidante celular sin una participacioacuten directa en
el mismo que lo diferencia de los antioxidantes quiacutemicos convencionales
Esto sugiere que las ceacutelulas toleran cantidades pequentildeas de DHA y que eacuteste actuacutea a modo de
estiacutemulo para evitar cualquier acumulacioacuten de radicales libres la incorporacioacuten de Algatrium
Plus en las biomembranes provoca una respuesta celular antioxidante adaptativa
3
ESTUDIOS IN VIVO
Para valorar la accioacuten de Algatrium Plus se utilizoacute como modelo de es-
treacutes oxidativo el inducido por el ejercicio fiacutesico aerobio
Se sometioacute a deportistas a un esfuerzo continuado al 75 de su consu-
mo maacuteximo de oxiacutegeno durante 90 minutos lo cual supone una produc-
cioacuten suficiente de radicales libres y estreacutes oxidativo como para conocer
la capacidad antioxidante de cualquier manipulacioacuten dieteacutetica
Para dar credibilidad a los resultados obtenidos in vitro es necesario una
constatacioacuten de los mismos in vivo En este sentido se ha desarrollado
un ensayo cliacutenico controlado cruzadov de 4 meses de duracioacuten (N = 40
deportistas) a una dosis de 2 gdiacutea de Algatrium Plus
Las variables a estudiar fueron el dantildeo en DNA y paraacutemetros antioxidan-
tes seacutericos
Se observoacute un aumento estadiacutesticamente significativo en la capacidad
antioxidante total del serum (plt005) antes y despueacutes de la realizacioacuten
de las pruebas rectangulares en los deportistas que habiacutean ingerido Al-
gatrium Plus durante un periodo de tres semanas a cuatro meses
H2O
2 (n
mol
L m
in)
150
160
170
180
190
200
BASAL
CAPACIDAD ANTIOXIDANTE TOTAL
Paraacutemetros antioxidantes in vivo
4 MESES
ESTUDIOS IN VIVO
20 DIacuteAS
Algatrium Plus
Control
3
El nivel plasmaacutetico de MDA como iacutendice de peroxidacioacuten lipiacutedica fue
aumentando durante la realizacioacuten de todas las pruebas de esfuerzo
(plt0035) Despueacutes de la ingesta de Algatrium Plus durante 3 semanas
el dantildeo oxidativo a nivel lipiacutedico en las mismas condiciones disminuye
praacutecticamente a nivel basal (plt005) observaacutendose a los 4 meses de tra-
tamiento un efecto protector en esta variable MD
A (n
mol
L)
10
20
30
40
60
BASAL
PEROXIDACIOacuteN LIPIacuteDICA
Paraacutemetros antioxidantes in vivo
4 MESES
ESTUDIOS IN VIVO
20 DIacuteAS
50
0
-10
Hay un aumento en el dantildeo oxidativo del DNA durante la realizacioacuten de
las pruebas rectangulares del esfuerzo medidas como el nivel de 8-oxo-
dG en la orina (plt0011) La ingesta de Algatrium Plus durante 3 sema-
nas y hasta 4 meses protege el DNA del dantildeo oxidativo inducido por el
esfuerzo de una manera significativa (plt0035)
8-ox
o-dG
(pm
olK
gx24
h)
100
200
300
400
600
BASAL
DANtildeO MOLECULAR EN EL DNA
Paraacutemetros antioxidantes in vivo
4 MESES
ESTUDIOS IN VIVO
20 DIacuteAS
500
0
700
800
900
3
Como efectos colaterales en el rendimiento deportivo se ha observado
que los niveles de glicemia disminuyen durante la realizacioacuten de la prue-
ba rectangular de esfuerzo (plt00009) Esta reduccioacuten en la glicemia era
menor despueacutes de 3 semanas de ingesta de Algatrium Plus se traduciacutea
en un aumento del nivel de glicemia a los 4 meses de tratamiento con
Algatrium Plus
mg
dL
-6
-4
-2
BASAL
VARIACIOacuteN EN LA CONCENTRACIOacuteN DE GLUCOSA
Variables fisioloacutegicas de rendimiento deportivo
4 MESES
ESTUDIOS IN VIVO
3 SEMANAS
4
0
-8
2
mL
min
2600
2650
2700
BASAL
CONSUMO DE OXIacuteGENO
Variables fisioloacutegicas de rendimiento deportivo
4 MESES
ESTUDIOS IN VIVO
3 SEMANAS
2900
2550
2850Tambieacuten se ha observado un aumento significativo del consumo abso-
luto (plt0019) y relativo (plt0036) de oxiacutegeno determinado en el umbral
del esfuerzo triangular con la ingesta de Algatrium Plus hasta 4 meses
Estos resultados parecen indicar que la ingesta de Algatrium PLus pue-
de incrementar el rendimiento deportivo
2750
2800
3
CONCLUSIONES
Los aacutecidos grasos omega-3 son un concepto vigente tanto desde un punto de
vista nutricional como terapeacuteutico con un alto potencial de desarrollo
La aplicacioacuten de los aacutecidos grasos omega-3 en estos campos requiere de produc-
tos manufacturados de acuerdo con los estaacutendares que se aplican a productos
farmaceacuteuticos que incluyen controles de calidad para asegurar su pureza y cali-
dad estructural que condiciona su bioactividad Como estaacutendar es exigible una
riqueza miacutenima superior al 5 en una estructura quiacutemica muy biodisponible
como un trigliceacuterido
La incorporacioacuten de Algatrium Plus en las membranas celulares no soacutelo no pro-
mueve la peroxidacioacuten lipiacutedica sino que actuacutea como un activador del sistema
antioxidante celular probablemente como consecuencia de una respuesta adap-
tativa de la ceacutelula
INFORMACIOacuteN LEGAL
ALGATRIUM es una Marca Internacional propiedad de BRUDY TECHNOLOGY
El uso de DHA de alta concentracioacuten para el tratamiento de enfermedades tu-
morales estaacute protegido por la Patente Internacional nordm200501141 Propiedad de
BRUDY TECHNOLOGY
La comercializacioacuten y el uso de Omega-3 Antioxidantes estaacute protegido por la
Patente Internacional nordm200503202 propiedad de BRUDY TECHNOLOGY
Dr Joan C Domingo Pedrol - Departamento de Bioquiacutemica y Biologiacutea Molecular - Universidad de Barcelona - Telf 934 021 214 - e-mail jcdomingoubedu
Fabricado en Espantildea por Brudy Technology - CRiera de Sant Miquel 3 - ordm ordf - 000 Barcelona - Tel 93 17 03
El objetivo principal de esta presentacioacuten es mostrarles nuestra experiencia en el uso de aacutecidos grasos omega-3
En este sentido conviene inicialmente situar el concepto omega-3 como valor nutri-
cional y terapeacuteutico
Es un hecho admitido por la comunidad cientiacutefica que la ingesta de aacutecidos grasos po-
liinsaturados (PUFAs) omega-3 representa un beneficio para la salud en general Una
gran cantidad de estudios con aacutecidos grasos omega-3 han demostrado su importancia
en la dieta aun cuando estos microalimentos no se consideran esenciales ya que son
sintetizados pero en cantidades excesivamente bajas para cubrir las necesidades del
cuerpo
Diversos estudios baacutesicos cliacutenicos y epidemioloacutegicos han reportado ventajas impor-
tantes en la ingesta de aacutecidos grasos omega-3 en campos tan diversos como car-
diologiacutea neurologiacutea oncologiacutea patologiacuteas inflamatorias croacutenicas oftalmologiacutea
Ademaacutes es un componente criacutetico para el desarrollo y funcionalidad del cerebro
BENEFICIOS NUTRICIONALES Y TERAPEacuteUTICOS DE LOS OMEGA-3
ESPECIALIDAD MEacuteDICA REDUCCIOacuteN EN EL RIESGO O IMPACTO
Cardiologiacutea Toda causa de mortalidad muerte suacutebita cardiacuteaca isquemia infarto cerebral reduccioacuten de trigliceacuteridos (especialmente con DHA) aumento de las HDL pero generalmente no modifica los niveles de liacutepidos a dosis bajas presioacuten arterial y reduccioacuten de taquicardias
Dermatologiacutea Soriasis melanoma
Gastroenterologiacutea Caacutencer de Colon enfermedad inflamatoria intestinal (Enfermedad de Crohn y colitis ulcerosa)
InmunologiacuteaEnfermedades infecciosasNefrologiacutea Asma hepatitis nefropatiacuteas
Neurologiacutea Enfermedad del Alzheimer (especialmente DHA) demencia autismo desorden de falta de atencioacuten-hiperactividad
ObstetriciaGinecologiacuteaPediatriacutea
Salud maternal e infantil (especialmente DHA) cognoscitiva (aumento del coeficiente intelectual) y la agudeza visual en recieacuten nacidos y adolescentes mejora la duracioacuten del embarazo y el peso del feto y una gran variedad de otros siacutentomas como por ejemplo la depresioacuten post-parto
Oncologiacutea Caacutencer de mama colorectal de endometrio leucemia melanoma de ovario de paacutencreas de proacutestata renal Puede mejorar el iacutendice tera-peacuteutico de los citostaacuteticos (5-fluorouracilo ciclofosfamida) e inhibe la caquexia asociada al tumor (reduce peacuterdida de peso)
Oftalmologiacutea Degeneracioacuten Macular asociada a la edad Renitis Pigmentosa
Ortopedia Osteoporosisfracturas inflamaciones de las articulaciones (artritis)
Psiquiatriacutea Depresioacuten desorden bipolar esquizofrenia desorden de falta de atencioacuten-hiperactividad
Reumatologiacutea Artritis reumatoide osteoartritis osteoporosis
Cirugiacutea Mejora la recuperacioacuten en el post-operatorio pero hay que tener precauciones en su administracioacuten a altas dosis (gt 10 gg) conjuntamente con anticoagulantes
Urologiacutea Caacutencer de proacutestata prostatitis hiperplasia prostaacutetica benigna
DESVENTAJAS
Un reciente meta-anaacutelisis realizado por Hooper et al ha concluido que no se
ha podido documentar de manera objetiva y estadiacutesticamente significativa
un efecto beneficioso en el consumo de PUFAs omega-3 en la mortalidad rela-
cionada con eventos cardiovasculares o caacutencer 1
Tampoco se ha documentado de manera objetiva y estadiacutesticamente signifi-
cativa el efecto de los omega-3 en la reduccioacuten del riesgo de desarrollar caacuten-
cer2
1 Hooper L et al Risks and benefits of omega 3 fats for mortality cardiovascular disease and cancer systematic review BMJ 2006 332752-760 Balk EM et al Effects of omega-3 fatty acids on serum markers of cardiovascu-lar disease risk A systematic review Atherosclerosis 2006 18919-302 MacLean CH et al Effects of omega-3 fatty acids on cancer risk a systematic review JAMA 2006 295403-15)
SIN EMBARGO
Los estudios anteriormente citados presentaban diferentes deficiencias en su
planteamiento relacionadas con la no separacioacuten de las intervenciones reali-
zadas con los diferentes aacutecidos omega-3 o mezclas de los mismos en forma de
aceite de pescado o suplementos alimenticios enriquecidos
Tambieacuten se ha observado una falta de homogeneidad en cuanto a la duracioacuten
y las dosis en cada tratamiento
Asiacute como tampoco se ha valorado la importancia de la estructura quiacutemica en
la que se ha administrado el aacutecido omega-3 trigliceacuterido (TG) eacutester etiacutelico (EE)
o aacutecido graso libre (FA)
RECOMENDACIONES
Teniendo en cuenta esta controversia la opinioacuten de diferentes expertos es que deberiacutean mantenerse
las actuales recomendaciones en el consumo de aacutecidos grasos omega-3 pero teniendo en cuenta una
serie de criterios que deberiacutean cumplir los aacutecidos grasos omega-3 para su aplicacioacuten nutricional y
terapeacuteutica como son
Manufacturar los PUFAs omega-3 siguiendo los criterios similares a los estaacutendares farma-
ceacuteuticos que incluyen controles de calidad en todas las etapas de produccioacuten para asegu-
rar su pureza y calidad
Utilizar compuestos con un contenido miacutenimo de 0 en PUFA omega-3 de todos los
aacutecidos grasos
La relacioacuten omega-3omega- debe ser mayor de 501
Estas recomendaciones estaacuten de acuerdo con las conclusiones de un workshop sobre aacutecidos grasos
omega-3 recientemente publicadas en la revista Journal American Clinical Nutrition que ademaacutes des-
taca como punto importante la necesidad de realizar maacutes ensayos cliacutenicos que permitan calibrar el
potencial real de los aacutecidos grasos omega-3 tanto a nivel preventivo como terapeacuteutico
iquestQUEacute AacuteCIDO GRASO OMEGA-3
0
5
10
15
20
25
g10
0 g
ALA
EPA
DHA
Adipose
Rectal epith
elium
CheekHeart
MuscleLiver
SpleenRBC
Cerbral c
ortex
SpemRetin
a
Estudio transversal del contenido en aacutecidos grasos en tejidos de adultos de Estados Uni-dos Canadaacute Australia y Europa
De acuerdo con estos criterios el primer punto a resolver es la eleccioacuten del
PUFA omega-3 maacutes adecuado para un determinado tratamiento Los tres aacuteci-
dos grasos de la serie 3 maacutes importantes fisioloacutegicamente hablando son
El alfa-linoleacutenico (ALA)
El eicosapentaenoico (EPA)
El docosahexaenoico (DHA)
El DHA es el aacutecido graso omega-3 maacutes abundante en las membranas y estaacute
presente en todos los oacuterganos Es particularmente el maacutes abundante en el sis-
tema nervioso central en el esperma y en la retina ademaacutes del maacutes variable
entre los oacuterganos
Soacutelo pequentildeas cantidades de ALA y de EPA estaacuten presentes en los tejidos y el
contenido en DHA es habitualmente entre 5-30 veces superior al del EPA en
la mayoriacutea de los oacuterganos Ademaacutes el DHA es unas 100 veces maacutes abundante
que el EPA en el cerebro y la retina
iquestQUEacute AacuteCIDO GRASO OMEGA-3
Aunque los tres aacutecidos grasos estaacuten relacionados metaboacutelicamente diversos estu-
dios han demostrado que la administracioacuten de ALA no genera las cantidades fisio-
loacutegicas necesarias de DHA y de EPA En cuanto a la administracioacuten de DHA o EPA las
uacuteltimas recomendaciones sugieren que la viacutea maacutes eficiente para el incremento de las
concentraciones de un aacutecido omega-3 es la administracioacuten de dicho aacutecido especiacutefi-
camente De todas maneras en un planteamiento maacutes general la administracioacuten de
DHA garantiza una concentracioacuten baacutesica de EPA mientras que la administracioacuten
exclusiva de este uacuteltimo disminuye la concentracioacuten de DHA
En humanos la capacidad endoacutegena de convertir ALA en DHA o EPA es muy baja
o inexistente por esta razoacuten el consumo de DHA en la dieta puede ser criacutetico para
mantener la concentracioacuten adecuada de DHA en las membranas celulares BrJ
Nutr2002 88355ndash363
Retroconversioacuten de DHA-EPA en el grupo de DHA su concentracioacuten aumento un
69 y la del EPA un 29 En el grupo de EPA este crecioacute un 297 mientras que el
DHA decrecioacute un 15 AmJ ClinNutr1997 66649-59 AmJ ClinNutr2000 711085ndash94 Am
J Clin Nutr 200479765ndash73
α-Linolenic acid (183n-3)
Stearidonic (184n-3)
(204n-3)
EPA (205n-3)
DPA (225n-3)
DHA (226n-3)
iquestQUEacute AacuteCIDO GRASO OMEGA-3
El DHA es el aacutecido graso n-3 en el sistema nervioso central
Por otra parte desde un punto de vista nutricional cuyo objetivo es el de recuperar los depoacutesitos de
aacutecidos grasos omega-3 la administracioacuten de DHA garantiza una intervencioacuten en el sistema nervioso
central ya que la concentracioacuten de EPA en este tejido es puramente testimonial
Dietas que contienen un 95 de DHA inhiben completamente la degeneracioacuten de la retina inducida
por la N-Metil-N-nitrosourea en cambio las dietas que contienen un 475 de DHA (grupo EPA+DHA) o
soacutelo EPA no tuvieron un efecto protector Exp Eye Res 2003 77167ndash173
El DHA es el precursor de los docosatrienos y las resolvinas de la serie D que regulan los procesos aso-
ciados a la inflamacioacuten y su resolucioacuten final J Biol Chem 2003 27814677ndash14687
El DHA hidrolizado de los fosfoliacutepidos de membrana es el precursor endoacutegeno de la respuesta neuro-
protectiva frente reperfusioacuten isqueacutemica J Biol Chem 2003 278 43807ndash43817
La siacutentesis del 1017S-docosatrieno neuroprotectina D1 protege a las ceacutelulas de la retina de la apop-
tosis inducida por estreacutes oxidativo de una manera similar se sugiere que protegeraacute a las neuronas Proc
Natl Acad Sci USA 2004 101 8491ndash8496
10
BIODISPONIBILIDAD
Otro aspecto interesante que puede condicionar la eficacia de un determina-
do tratamiento es la biodisponibilidad de los aacutecidos omega-3 Existen nume-
rosos estudios en animales que han demostrado que los gliceacuteridos son los
transportadores maacutes eficaces para los aacutecidos grasos Ademaacutes los gliceacuteridos
se consideran la forma quiacutemica maacutes favorable desde un punto de vista ali-
mentario superior a los eacutesteres etiacutelicos de aacutecidos grasos insaturados los cuales
presentan una absorcioacuten intestinal deteriorada de los aacutecidos grasos n-3 ob-
servados como se ha demostrado en animales de laboratorio Tambieacuten se ha
demostrado que los eacutesteres etiacutelicos de aacutecidos grasos no saturados se hidro-
lizan a una velocidad maacutes lenta que los gliceacuteridos correspondientes
Un estudio en humanos realizado por la empresa farmaceacuteutica SIGMA-TAU
demostroacute que los trigliceacuteridos obtenidos por reesterificacioacuten presentan una
biodisponibilidad similar al aceite de pescado natural y muy superior a la
de los aacutecidos grasos libres que ademaacutes generan problemas digestivos y tam-
bieacuten superior a la de los eacutesteres etiacutelicos cuya uacutenica ventaja es la pureza que se
puede alcanzar pero por contra generan etanol que puede ser toacutexico a dosis
elevadas
TIPO DE ACEITE CONTENIDO EN PUFA N-3 () BIODISPONIBILIDAD
Aceite de pescado 25-30 7-100
Eacutesteres etiacutelicos gt85 21-57
Aacutecidos grasos libres gt65 51
TrigliceacuteridosRe-esterificados min 70-75 9
En un estudio In vivo en 24 personas sanas comparando una sola toma oral de PUFAs n-3 en estructuras quiacutemicas diferentes se demostroacute un mayor nivel plasmaacutetico de PUFAs n-3 en el grupo tratado con aceite re-esterificado
Extraiacutedo de una publicacioacuten de la empresa SIGMA-TAU
BIOACTIVIDAD - SEGURIDAD
DHA TG QUIacuteMICO ALGATRIUM PLUS
bull pH extremosbull Temperaturas altas (destilacioacuten)bull Reactivos quiacutemicos
bull pH fisioloacutegicobull Temperaturas bajasbull Sin reactivos quiacutemicos
bull Nivel bajo de trigliceacuteridosbull Productos de reaccioacuten secundariosbull Purificacioacuten cromatograacutefica
bull Nivel alto de trigliceacuteridosbull Sin productos secundariosbull No necesita maacutes purificacioacuten
bull Migracioacuten de dobles enlacesbull Oxidacioacuten de dobles enlacesbull Isomerizaciones CisTrans
bull Preservacioacuten de dobles enlacesbull No oxidacioacuten de dobles enlacesbull No isomerizaciones Cis Trans
La siacutentesis industrial de trigliceacuteridos se puede realizar quiacutemicamente o por
viacutea enzimaacutetica Las diferencias en las condiciones de reaccioacuten entre un pro-
ceso de siacutentesis quiacutemico y uno enzimaacutetico determinaraacuten las calidades finales
para cada producto El uso de meacutetodos tradicionales quiacutemicos (separacioacuten
cromatograacutefica destilacioacuten molecular etc) para producir concentrados de
PUFAs omega-3 implican el uso de pHs extremos y de altas temperaturas que
pueden destruir parcialmente la estructura de los dobles enlaces todos cis del
PUFA omega-3 natural por oxidacioacuten isomerizacioacuten o migracioacuten
Por otra parte las condiciones suaves (temperatura menor de 50degC pH 6-8 y
menos productos quiacutemicos) usadas en la hidroacutelisis enzimaacutetica proporcionan
un alternativa prometedora que podriacutea tambieacuten ahorrar energiacutea y aumentar
la selectividad del producto La preservacioacuten de los enlaces dobles conferiraacute
a la moleacutecula una mayor bioactividad
1
ALGATRIUM PLUS
ESPECIFICACIOacuteN UNIDADES LIacuteMITES
Acidez mg KOHg 30 maacutex
Contenido antioxidante g100g 10 - 11
Densidad a 20ordmC Kgl 0930 - 0940
Aacutecido graso DHA (C n3) FA 70 miacuten
Aacutecido graso DPA (C22 5n3) FA 8 maacutex
Aacutecido graso EPA (C0 5n3) FA 10 maacutex
Aacutecidos grasos Omega-3 FA 5 miacuten
Iacutendice de Peroacutexidos meq O2Kg 50 maacutex
Residuo seco g100g 010 maacutex
Muchos estudios demuestran que la bioactividad de los aceites omega-3 y
principalmente del DHA estaacute relacionada directamente con su contenido res-
pecto a los aacutecidos grasos totales los cuaacuteles pueden competir con los omega-3
en un metabolismo concreto Para obtener el maacuteximo nivel de bioactividad
Brudy ha dirigido sus esfuerzos en dos objetivos baacutesicos
Tener el maacuteximo contenido de DHA en el trigliceacuterido
Reducir al maacuteximo el contenido de EPA
Ademaacutes este aceite cumple todos los requisitos legales en cuanto a iacutendice de
peroacutexidos acidez contenido antioxidante nivel de metales pesadoshellip
Especificaciones del aceite omega-3 utilizado en estos estudios
De todos los aceites que hay en el mercado Algatrium Plus (DHA 70e) es
el aceite enriquecido con un contenido en omega-3 global y en DHA maacutes
alto
0
10
20
30
40
50
Comparativa de diferentes aceites omega-3 en el mercado
DPA
EPA
Algatrium Plus
OMEGA-3
60
70
80
90
P M HSO DHA 50CHEM ALGATRIUM PLUS
ALGATRIUM PLUS
1
OMEGA-3 OMEGA-3 SIacuteNTESIS INSA MG DG CHOL PLM TG EE GTOTAL
A PLUS 70 ENZIMAacuteTICO 05 nd 71 nd nd 865 59 936
FISH 20 ATUacuteN 47 nd 22 42 nd 889 nd 911
DHA 50 QUIacuteMICO 27 43 103 35 228 401 140 532
DHA 50 QUIacuteMICO-PURIFICADO 21 nd 188 nd nd 664 52 852
La biodisponibilidad del aceite es directamente pro-
porcional al tipo de moleacuteculas que lo compongan
concretamente a su composicioacuten lipiacutedica Los acei-
tes naturales contienen maacutes del 90 de materia en
forma de gliceacuterido que proporciona una biodispo-
nibilidad maacutexima Algatrium Plus es muy similar a
un aceite natural (la composicioacuten lipiacutedica incluye un
90 de gliceacuteridos totales con un 5 en forma de
trigliceacuteridos y sin monogliceacuteridos) El DHA obteni-
do quiacutemicamente tiene un nivel bajo de trigliceacuteri-
dos (lt50) un mayor nivel de eacutesteres etiacutelicos y un
alto contenido de poliacutemeros (15-0) que no son
absorbibles y que se deben eliminar por cromatogra-
fiacutea en columna (QUIacuteMICO-PURIFICADO)
Especificaciones del aceite omega-3 utilizado en estos estudios
ALGATRIUM PLUS
Solamente los aceites de pescado o de algas naturales que no se han rees-
terificado satisfacen la legislacioacuten alimentaria en cuanto a su composicioacuten
y por lo tanto son un alimento El DHA obtenido quiacutemicamente no satisface los
requisitos de la farmacopea europea sobretodo relacionado con el nivel de
trigliceacuteridos gliceacuteridos totales y en el contenido en compuestos polimeacutericos
Es necesaria una purificacioacuten por cromatografiacutea en columna para que el pro-
ducto cumpla los requisitos de la legislacioacuten europea Algatrium Plus tiene la
misma composicioacuten que los aceites naturales y por lo tanto se consideran
un alimento
LEGISLACIOacuteN
0
10
20
30
40
50
Composicioacuten estructural Algatrium Plus
Farmacopea
DHA 50 QUIacuteMICO
DHA 50 QUIacuteMICO-PURIFICADO
60
70
80
90
INS DG PLM TG EE
100
MG FA GTotal
1
ACTIVIDAD ANTITUMORAL
Para valorar la actividad de Algatrium Plus nuestro primer obje-
tivo fue determinar su capacidad citotoacutexica antitumoral En este
sentido realizamos un estudio comparativo usando ceacutelulas tumo-
rales (HeLa) y ceacutelulas sanas como control (renales y de piel) Hemos
realizado estudios dosis-respuesta para determinar el valor de IC50
como criterio de toxicidad (es la concentracioacuten que mata al 50 de
las ceacutelulas) Hemos analizado dos variables el efecto de la estructu-
ra del liacutepido y del contenido en DHA Para un contenido en DHA del
70 de todos los aacutecidos grasos se obtuvo la misma toxicidad en
ceacutelulas tumorales con el eacutester etiacutelico (EE) el aacutecido graso libre (FA) o
el trigliceacuterido (TG) Pero en ceacutelulas renales sanas el EE tiene la mis-
ma toxicidad que en las ceacutelulas tumorales y en las ceacutelulas de piel el
FA demuestran una gran toxicidad siendo los TG la forma con un
mejor cociente de seguridad Para una misma estructura quiacutemica
el TG una disminucioacuten del contenido en DHA a 50 o al 20 (este
uacuteltimo es la concentracioacuten en el aceite de pescado) disminuye de
forma dramaacutetica el efecto citotoacutexico en las ceacutelulas del tumor Estos
resultados demuestran que la forma oacuteptima es el trigliceacuterido con
un alto contenido en DHA (Algatrium Plus)
Efectos del contenido en DHA y de la estructura quiacutemica Toxicidad celular
FA 70 1231 plusmn90 nd 722 plusmn58 17
EE 70 5663 plusmn539 726 plusmn83 710 plusmn97 798 -102
TG (Algatrium Plus) 70 7167 plusmn419 3927 plusmn375 586 plusmn88 1223 -670
TG (Quiacutemico) 50 19560 plusmn278 4136 plusmn256 5640 plusmn696 347 -073
TG (Pescado) 20 22676 plusmn279 31160 plusmn1582 13794 plusmn2864 164 -226
ESTRUCTURA DHA PIEL RENAL HeLa
RELACIOacuteNDE
SEGURIDAD
CEacuteLULASTUMORALESCEacuteLULAS SANAS
COMPOSICIOacuteNIC50 (μM)
Otra actividad interesante de los PUFAs omega-3 en caacutencer es su uso como
adyuvantes en la quimioterapia convencional En este sentido determina-
mos los efectos de Algatrium Plus a concentraciones subtoacutexicas sobre la toxi-
cidad de la Doxorrubicina y del 5-fluoroacilo La exposicioacuten simultaacutenea de las
ceacutelulas tumorales al DHA y a la droga aumenta la toxicidad de la misma dos
veces (disminuye el valor de la IC50) Por otra parte si Algatrium Plus se ha
incorporado previamente a la membrana celular este efecto potenciador au-
menta hasta 10 veces
ACTIVIDAD COMO ADYUVANTE ANTITUMORAL
Efecto del DHA sobre la actividad antitumoral de la Doxorrubicina o del 5-fluoroacilo Toxicidad celular
Este efecto potenciador depende del contenido en DHA ya que con el uso de
un aceite quiacutemico (50 en DHA) o de aceite de pescado (20 en DHA) se pier-
de progresivamente dicho efecto potenciador Tambieacuten es significativo que
este efecto no incrementa la toxicidad de los citostaacuteticos en ceacutelulas sanas
Efecto del contenido en dha sobre la actividad antitumoral de la doxorrubicina Toxicidad celular
Control 0 2953 plusmn316 (n=8)
Pre-incorporado15
10
301 plusmn54 (n=8)287 plusmn67 (n=8)370 plusmn44 (n=6)
Simultaacuteneo 5 1843 plusmn162 (n=4)
Control 0 2330 plusmn368 (n=12)
Pre-incorporado15
10
280 plusmn110 (n=7)238 plusmn101 (n=4)380 plusmn142 (n=6)
Simultaacuteneo 5 1480 plusmn801 (n=6)
LIacuteNEA CELULAR
HeLa-Epitelial (Dox)
HT-29-Colon (5-FU)
SISTEMADE ADICIOacuteN
ALGATRIUM PLUS μM IC50 (μM)
0 2953 plusmn316 11586 plusmn3699
5 287 plusmn67 10466 plusmn2304
10 370 plusmn44 10805 plusmn1742
5 1309 plusmn156 11633 plusmn1569
10 1063 plusmn207 9801 plusmn2709
5 2574 plusmn296 11575 plusmn1249
10 2365 plusmn157 15303 plusmn4813
CONTENIDOEN DHA
Control
DHAAlgatrium Plus
DHA TG 50Quiacutemico
DHA TG 20Pescado
DHA (μM)CEacuteLULA TUMORAL CEacuteLULA SANA
IC50 (nM)
1
BIOACTIVIDAD - SEGURIDAD
En los sistemas quiacutemicos puros las moleacuteculas maacutes susceptibles al ataque de los
radicales libres son los aacutecidos grasos poliinsaturados (PUFAs) como el aacutecido do-
cosahexaenoico (DHA n-3) y en general esta susceptibilidad aumenta con
el nuacutemero de dobles enlaces In vivo se supone el mismo comportamiento
Entonces iquestpor queacute el DHA una diana molecular de los radiaciones libres es el
aacutecido graso maacutes abundante en tejidos expuestos a un potencial estreacutes oxidativo
como la retina o en tejidos con un sistema antioxidante celular deficiente como
el sistema nervioso central
iquestACTIVIDAD PRO-O ANTIOXIDANTE
BIOACTIVIDAD - SEGURIDAD
En este contexto hemos estudiado la influencia de la presencia del DHA enzimaacutetico
en la membrana celular sobre la generacioacuten intracelular de radicales libres utilizando
como sistema experimental dos liacuteneas celulares humanas sanas fibroblastos de piel
(Foreskin ATC CRL 2076) y ceacutelulas epiteliales pigmentarias de la retina (ARPE-19 ATCC
CRL 2302)
La cuantificacioacuten de los radicales libres generados se ha realizado mediante metodolo-
giacuteas fluorescentes usando sondas moleculares como el HDCF-DA DHR y DHE
Como inductores exoacutegenos de estreacutes oxidativo se ha utilizado el AAPH y el sistema
xantinaxantin oxidasa y como inductores endoacutegenos la rotenona y la antimicina A
0
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE CELULAR
Como se muestra en la figura la presencia de Algatrium Plus en la
membrana celular disminuye la generacioacuten intracelular de radicales
libres despueacutes de estar sometidas las ceacutelulas a un estreacutes oxidativo
Este comportamiento es independiente de la ceacutelula en estudio (piel o
retina) y del marcador utilizado (H2DCF-DA o DHR) lo cual nos indica la
activacioacuten de un mecanismo general El nivel de proteccioacuten observado
tambieacuten es similar frente al mismo estiacutemulo oxidativo
0 50 100 150 200 250Tiempo (min)
Fluo
resc
enci
a (U
A)
-49
CEacuteLULAS DE RETINA
H2DCF-DA
0 50 100 150 200Tiempo (min)
Fluo
resc
enci
a (U
A)
-42
CEacuteLULAS DE PIEL
0 50 100 150 200 250Tiempo (min)
Fluo
resc
enci
a (U
A)
-56DHR
0 50 100 150 200 250Tiempo (min)
Fluo
resc
enci
a (U
A)
-50
Control
Algatrium Plus
Incr
emen
to
Pro
tecc
ioacuten
EFECTO ADITIVO
Algatrium Plus
0
0306
09
18
21
05 5
1215
Para determinar que la proteccioacuten antioxidante de Algatrium Plus era un
proceso general cambiamos el inductor de estreacutes oxidativo de un produc-
to quiacutemico (el AAPH) a un sistema enzimaacutetico (sistema XXO) o inductores
endoacutegenos (ROT y ANT A) Se ha observado el mismo comportamiento en
todos los casos
El efecto antioxidante de Algatrium Plus depende de la dosis mostrando
un comportamiento dosis-dependiente a la inversa El mayor efecto se ha
observado en una concentracioacuten baja de DHA mientras que a altas con-
centraciones el efecto antioxidante disminuye independientemente de la
potencia del estreacutes oxidativo
Tambieacuten el efecto antioxidante de Algatrium Plus presenta un efecto adi-
tivo con la frecuencia de la administracioacuten La administracioacuten de una do-
sis diaria inrementa el efecto antioxidante respecto a una sola administra-
cioacuten
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE CELULAR
0 50 100 150 200 250Tiempo (min)
Fluo
resc
enci
a (U
A)
-49
CEacuteLULAS DE RETINA AAPH
P
rote
ccioacute
n
ROT ANT A XXO0
10
20
3040
50
60
INDEPENDIENTE DEL INDUCTOR
P
rote
ccioacute
n
DEPENDENCIA DE LA DOSIS
Algatrium Plus
0
10
20
3040
50
60
05 5 50Dosis diaria
Una dosis
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE CELULAR
La generacioacuten intracelular de radicales libres se confirmoacute mediante
microscopia de fluorescencia confocal Las micrografiacuteas muestran una
acumulacioacuten progresiva en el tiempo de radicales libres en las ceacutelulas
control sin DHA mientras que en las que han incorporado Algatrium
Plus en su membrana el nivel intracelular de radicales libres no ha
aumentado
T= 0 min
T= 15 min
T= 30 min
CONTROL ALGATRIUM PLUS 05 μM
CEacuteLULAS DE PIEL
A nivel celular la generacioacuten de radicales libres parece ser dependiente de
la composicioacuten en aacutecidos grasos de la ceacutelula pero la influencia especiacutefica de
cada clase de aacutecido graso no ha sido estudiada
Por otra parte a nivel industrial el meacutetodo de siacutentesis usado para obtener
el aceite enriquecido en DHA puede ser muy importante en la calidad final
del producto En este sentido hemos estudiado la importancia del contenido
de DHA y del origen sinteacutetico en el efecto antioxidante
Como se puede observar en la figura una disminucioacuten del contenido en DHA
al 50 (origen quiacutemico) o al 20 (aceite de pescado) de los aacutecidos grasos to-
tales induce una disminucioacuten del efecto antioxidante en las ceacutelulas de retina
aunque en ninguacuten caso llega a ser pro-oxidante Sin embargo en ceacutelulas de
piel esta reduccioacuten es tan acusada que soacutelo Algatrium Plus es antioxidante
siendo los otros dos pro-oxidantes
Dado el caraacutecter multifactorial de un tratamiento nutricional no es aconseja-
ble administrar un producto que presente actividades divergentes en funcioacuten
del tejido al que se incorpore
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE CELULAR
CEacuteLULASDE PIEL
05 μM
5 μM
50 μM
ACEITE DE PESCADO
P
ROTE
CCIOacute
N
0
20
40
60
-20
-40
DHA TG50QUIacuteMICO
ALGATRIUMPLUS
P
ROTE
CCIOacute
N
60
20
0
CEacuteLULASDE RETINA
40
DHA quiacutemico vs Algatrium Plus
ACEITE DE PESCADO
DHA TG50QUIacuteMICO
ALGATRIUMPLUS
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE CELULAR
Si la baja actividad del aceite de origen quiacutemico (50 en DHA) pudie-
ra estar relacionado con la presencia de estructuras polimeacutericas su eli-
minacioacuten por cromatografiacutea en columna deberiacutea permitir recuperar su
actividad antioxidante Como se puede observar en la figura una mani-
pulacioacuten excesiva del producto original para eliminar contaminantes
o para mejorar sus caracteriacutesticas organoleacutepticas se traduce en una
peacuterdida de bioactividad
P
ROTE
CCIOacute
N
0
10
20
30
40
50
60
-10DHA TG50QUIacuteMICO
ALGATRIUMPLUS
DHA TG50 QUIacuteMICOPURIFICADO
(DHA)
05 μM
5 μM
50 μM
CEacuteLULAS DE RETINA
DHA quiacutemico vs Algatrium Plus
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE CELULAR
La actividad antioxidante del Algatrium Plus tambieacuten esta relacionada
con su mayor biodisponibilidad ya que un eacutester etiacutelico o un aacutecido graso
libre con el mismo contenido en DHA presenta una actividad antioxi-
dante como maacuteximo la mitad de la de Algatrium Plus
P
ROTE
CCIOacute
N
0
10
20
30
40
50
60
05 μM
(DHA)
FA-BSA
Algatrium Plus
CEacuteLULAS DE RETINA
Efecto de la estructura quiacutemica Fa vs Ee vs Tg
70
5 μM
TG 50 CHEM
EE 70
FA Aacutecido graso libre
EE Eacutester etiacutelico
TG Trigliceacuterido
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE CELULAR
Comparado con los antioxidantes normalmente utilizados en tratamien-
tos oculares a las concentraciones oacuteptimas descritas Algatrium Plus pre-
senta a todas las dosis estudiadas un efecto superior
P
ROTE
CCIOacute
N
0
10
20
30
40
50
60CEacuteLULAS DE RETINA
Algatrium Plus vs antioxidantes
Algatrium Plus
NAC mM
Cys 1 m
M
Co Q 100 μM
Vit E 100 μM
Vit C 100 μM
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE CELULAR
Incluso si estos antioxidantes se combinan o se incrementa su concen-
tracioacuten 10 oacute 100 veces
P
ROTE
CCIOacute
N
0
10
20
30
40
50
60CEacuteLULAS DE RETINA
Algatrium Plus vs antioxidantes
Algatrium Plus
ANT1
ANT1 x10
ANT1 x100ANT2
BIOACTIVIDAD
En este punto la cuestioacuten es iquestCuaacutel es el mecanismo por el cual el Algatrium Plus
ejerce este efecto antioxidante tan potente
Los Omega-3 pueden actuar a diferentes niveles en la fisiologiacutea celular La de-
fensa antioxidante celular se basa en la actividad de un nuacutemero de enzimas an-
tioxidantes junto con otros antioxidantes quiacutemicos conjuntamente previenen la
peroxidacioacuten lipiacutedica la proteiacuteca y el dantildeo en DNA Hemos estudiado el efecto de
Algatrium Plus en diversos aspectos del sistema antioxidante celular
Generacioacuten del anioacuten superoacutexido (O-)
La actividad superoacutexido dismutasa (SOD) y de la glutatioacuten peroxidasa (GPx)
La concentracioacuten intracelular de glutatioacuten (GSH)
La peroxidacioacuten lipiacutedica
Y el dantildeo en DNA
BIOACTIVIDAD
Mecanismo de actividad antioxidante
CellularRespiration
OxidativeBurst
EnvironmentalFactors
O-SOD
GSH
GPx
LipidPeroxidation
ProteinPeroxidation
DNA Damage
HO
HO + O
HO
GSSG
GRed
Catalase
OH
1 3
30
BIOACTIVIDAD
Mecanismo de actividad antioxidante
CellularRespiration
OxidativeBurst
EnvironmentalFactors
O-SOD
GSH
GPx
LipidPeroxidation
ProteinPeroxidation
DNA Damage
HO
HO + O
HO
GSSG
GRed
Catalase
OH
1 3
=
+
BIOACTIVIDAD
Hemos encontrado que la incorporacioacuten de Algatrium Plus en las ceacutelulas disminuye la genera-
cioacuten del anioacuten superoacutexido la peroxidacioacuten lipiacutedica de una manera dosis-dependiente inversa y
el dantildeo en DNA
Los niveles inferiores del anioacuten superoacutexido bajo estreacutes oxidativo en ceacutelulas tratadas con Alga-
trium Plus puede ser debido a la actividad maacutes alta de la SOD respecto al control
Por otra parte la actividad de la GPx en las ceacutelulas tratadas no era diferente de las ceacutelulas control
con o sin estreacutes oxidativo
El cambio maacutes significativo fue el incremento (300) de la concentracioacuten intracelular de GSH
relacionado con un incremento de la siacutentesis de novo
Estos resultados nos indican que Algatrium Plus ejerce su efecto antioxidante mediante un
incremento de la actividad del sistema antioxidante celular sin una participacioacuten directa en
el mismo que lo diferencia de los antioxidantes quiacutemicos convencionales
Esto sugiere que las ceacutelulas toleran cantidades pequentildeas de DHA y que eacuteste actuacutea a modo de
estiacutemulo para evitar cualquier acumulacioacuten de radicales libres la incorporacioacuten de Algatrium
Plus en las biomembranes provoca una respuesta celular antioxidante adaptativa
3
ESTUDIOS IN VIVO
Para valorar la accioacuten de Algatrium Plus se utilizoacute como modelo de es-
treacutes oxidativo el inducido por el ejercicio fiacutesico aerobio
Se sometioacute a deportistas a un esfuerzo continuado al 75 de su consu-
mo maacuteximo de oxiacutegeno durante 90 minutos lo cual supone una produc-
cioacuten suficiente de radicales libres y estreacutes oxidativo como para conocer
la capacidad antioxidante de cualquier manipulacioacuten dieteacutetica
Para dar credibilidad a los resultados obtenidos in vitro es necesario una
constatacioacuten de los mismos in vivo En este sentido se ha desarrollado
un ensayo cliacutenico controlado cruzadov de 4 meses de duracioacuten (N = 40
deportistas) a una dosis de 2 gdiacutea de Algatrium Plus
Las variables a estudiar fueron el dantildeo en DNA y paraacutemetros antioxidan-
tes seacutericos
Se observoacute un aumento estadiacutesticamente significativo en la capacidad
antioxidante total del serum (plt005) antes y despueacutes de la realizacioacuten
de las pruebas rectangulares en los deportistas que habiacutean ingerido Al-
gatrium Plus durante un periodo de tres semanas a cuatro meses
H2O
2 (n
mol
L m
in)
150
160
170
180
190
200
BASAL
CAPACIDAD ANTIOXIDANTE TOTAL
Paraacutemetros antioxidantes in vivo
4 MESES
ESTUDIOS IN VIVO
20 DIacuteAS
Algatrium Plus
Control
3
El nivel plasmaacutetico de MDA como iacutendice de peroxidacioacuten lipiacutedica fue
aumentando durante la realizacioacuten de todas las pruebas de esfuerzo
(plt0035) Despueacutes de la ingesta de Algatrium Plus durante 3 semanas
el dantildeo oxidativo a nivel lipiacutedico en las mismas condiciones disminuye
praacutecticamente a nivel basal (plt005) observaacutendose a los 4 meses de tra-
tamiento un efecto protector en esta variable MD
A (n
mol
L)
10
20
30
40
60
BASAL
PEROXIDACIOacuteN LIPIacuteDICA
Paraacutemetros antioxidantes in vivo
4 MESES
ESTUDIOS IN VIVO
20 DIacuteAS
50
0
-10
Hay un aumento en el dantildeo oxidativo del DNA durante la realizacioacuten de
las pruebas rectangulares del esfuerzo medidas como el nivel de 8-oxo-
dG en la orina (plt0011) La ingesta de Algatrium Plus durante 3 sema-
nas y hasta 4 meses protege el DNA del dantildeo oxidativo inducido por el
esfuerzo de una manera significativa (plt0035)
8-ox
o-dG
(pm
olK
gx24
h)
100
200
300
400
600
BASAL
DANtildeO MOLECULAR EN EL DNA
Paraacutemetros antioxidantes in vivo
4 MESES
ESTUDIOS IN VIVO
20 DIacuteAS
500
0
700
800
900
3
Como efectos colaterales en el rendimiento deportivo se ha observado
que los niveles de glicemia disminuyen durante la realizacioacuten de la prue-
ba rectangular de esfuerzo (plt00009) Esta reduccioacuten en la glicemia era
menor despueacutes de 3 semanas de ingesta de Algatrium Plus se traduciacutea
en un aumento del nivel de glicemia a los 4 meses de tratamiento con
Algatrium Plus
mg
dL
-6
-4
-2
BASAL
VARIACIOacuteN EN LA CONCENTRACIOacuteN DE GLUCOSA
Variables fisioloacutegicas de rendimiento deportivo
4 MESES
ESTUDIOS IN VIVO
3 SEMANAS
4
0
-8
2
mL
min
2600
2650
2700
BASAL
CONSUMO DE OXIacuteGENO
Variables fisioloacutegicas de rendimiento deportivo
4 MESES
ESTUDIOS IN VIVO
3 SEMANAS
2900
2550
2850Tambieacuten se ha observado un aumento significativo del consumo abso-
luto (plt0019) y relativo (plt0036) de oxiacutegeno determinado en el umbral
del esfuerzo triangular con la ingesta de Algatrium Plus hasta 4 meses
Estos resultados parecen indicar que la ingesta de Algatrium PLus pue-
de incrementar el rendimiento deportivo
2750
2800
3
CONCLUSIONES
Los aacutecidos grasos omega-3 son un concepto vigente tanto desde un punto de
vista nutricional como terapeacuteutico con un alto potencial de desarrollo
La aplicacioacuten de los aacutecidos grasos omega-3 en estos campos requiere de produc-
tos manufacturados de acuerdo con los estaacutendares que se aplican a productos
farmaceacuteuticos que incluyen controles de calidad para asegurar su pureza y cali-
dad estructural que condiciona su bioactividad Como estaacutendar es exigible una
riqueza miacutenima superior al 5 en una estructura quiacutemica muy biodisponible
como un trigliceacuterido
La incorporacioacuten de Algatrium Plus en las membranas celulares no soacutelo no pro-
mueve la peroxidacioacuten lipiacutedica sino que actuacutea como un activador del sistema
antioxidante celular probablemente como consecuencia de una respuesta adap-
tativa de la ceacutelula
INFORMACIOacuteN LEGAL
ALGATRIUM es una Marca Internacional propiedad de BRUDY TECHNOLOGY
El uso de DHA de alta concentracioacuten para el tratamiento de enfermedades tu-
morales estaacute protegido por la Patente Internacional nordm200501141 Propiedad de
BRUDY TECHNOLOGY
La comercializacioacuten y el uso de Omega-3 Antioxidantes estaacute protegido por la
Patente Internacional nordm200503202 propiedad de BRUDY TECHNOLOGY
Dr Joan C Domingo Pedrol - Departamento de Bioquiacutemica y Biologiacutea Molecular - Universidad de Barcelona - Telf 934 021 214 - e-mail jcdomingoubedu
Fabricado en Espantildea por Brudy Technology - CRiera de Sant Miquel 3 - ordm ordf - 000 Barcelona - Tel 93 17 03
En este sentido conviene inicialmente situar el concepto omega-3 como valor nutri-
cional y terapeacuteutico
Es un hecho admitido por la comunidad cientiacutefica que la ingesta de aacutecidos grasos po-
liinsaturados (PUFAs) omega-3 representa un beneficio para la salud en general Una
gran cantidad de estudios con aacutecidos grasos omega-3 han demostrado su importancia
en la dieta aun cuando estos microalimentos no se consideran esenciales ya que son
sintetizados pero en cantidades excesivamente bajas para cubrir las necesidades del
cuerpo
Diversos estudios baacutesicos cliacutenicos y epidemioloacutegicos han reportado ventajas impor-
tantes en la ingesta de aacutecidos grasos omega-3 en campos tan diversos como car-
diologiacutea neurologiacutea oncologiacutea patologiacuteas inflamatorias croacutenicas oftalmologiacutea
Ademaacutes es un componente criacutetico para el desarrollo y funcionalidad del cerebro
BENEFICIOS NUTRICIONALES Y TERAPEacuteUTICOS DE LOS OMEGA-3
ESPECIALIDAD MEacuteDICA REDUCCIOacuteN EN EL RIESGO O IMPACTO
Cardiologiacutea Toda causa de mortalidad muerte suacutebita cardiacuteaca isquemia infarto cerebral reduccioacuten de trigliceacuteridos (especialmente con DHA) aumento de las HDL pero generalmente no modifica los niveles de liacutepidos a dosis bajas presioacuten arterial y reduccioacuten de taquicardias
Dermatologiacutea Soriasis melanoma
Gastroenterologiacutea Caacutencer de Colon enfermedad inflamatoria intestinal (Enfermedad de Crohn y colitis ulcerosa)
InmunologiacuteaEnfermedades infecciosasNefrologiacutea Asma hepatitis nefropatiacuteas
Neurologiacutea Enfermedad del Alzheimer (especialmente DHA) demencia autismo desorden de falta de atencioacuten-hiperactividad
ObstetriciaGinecologiacuteaPediatriacutea
Salud maternal e infantil (especialmente DHA) cognoscitiva (aumento del coeficiente intelectual) y la agudeza visual en recieacuten nacidos y adolescentes mejora la duracioacuten del embarazo y el peso del feto y una gran variedad de otros siacutentomas como por ejemplo la depresioacuten post-parto
Oncologiacutea Caacutencer de mama colorectal de endometrio leucemia melanoma de ovario de paacutencreas de proacutestata renal Puede mejorar el iacutendice tera-peacuteutico de los citostaacuteticos (5-fluorouracilo ciclofosfamida) e inhibe la caquexia asociada al tumor (reduce peacuterdida de peso)
Oftalmologiacutea Degeneracioacuten Macular asociada a la edad Renitis Pigmentosa
Ortopedia Osteoporosisfracturas inflamaciones de las articulaciones (artritis)
Psiquiatriacutea Depresioacuten desorden bipolar esquizofrenia desorden de falta de atencioacuten-hiperactividad
Reumatologiacutea Artritis reumatoide osteoartritis osteoporosis
Cirugiacutea Mejora la recuperacioacuten en el post-operatorio pero hay que tener precauciones en su administracioacuten a altas dosis (gt 10 gg) conjuntamente con anticoagulantes
Urologiacutea Caacutencer de proacutestata prostatitis hiperplasia prostaacutetica benigna
DESVENTAJAS
Un reciente meta-anaacutelisis realizado por Hooper et al ha concluido que no se
ha podido documentar de manera objetiva y estadiacutesticamente significativa
un efecto beneficioso en el consumo de PUFAs omega-3 en la mortalidad rela-
cionada con eventos cardiovasculares o caacutencer 1
Tampoco se ha documentado de manera objetiva y estadiacutesticamente signifi-
cativa el efecto de los omega-3 en la reduccioacuten del riesgo de desarrollar caacuten-
cer2
1 Hooper L et al Risks and benefits of omega 3 fats for mortality cardiovascular disease and cancer systematic review BMJ 2006 332752-760 Balk EM et al Effects of omega-3 fatty acids on serum markers of cardiovascu-lar disease risk A systematic review Atherosclerosis 2006 18919-302 MacLean CH et al Effects of omega-3 fatty acids on cancer risk a systematic review JAMA 2006 295403-15)
SIN EMBARGO
Los estudios anteriormente citados presentaban diferentes deficiencias en su
planteamiento relacionadas con la no separacioacuten de las intervenciones reali-
zadas con los diferentes aacutecidos omega-3 o mezclas de los mismos en forma de
aceite de pescado o suplementos alimenticios enriquecidos
Tambieacuten se ha observado una falta de homogeneidad en cuanto a la duracioacuten
y las dosis en cada tratamiento
Asiacute como tampoco se ha valorado la importancia de la estructura quiacutemica en
la que se ha administrado el aacutecido omega-3 trigliceacuterido (TG) eacutester etiacutelico (EE)
o aacutecido graso libre (FA)
RECOMENDACIONES
Teniendo en cuenta esta controversia la opinioacuten de diferentes expertos es que deberiacutean mantenerse
las actuales recomendaciones en el consumo de aacutecidos grasos omega-3 pero teniendo en cuenta una
serie de criterios que deberiacutean cumplir los aacutecidos grasos omega-3 para su aplicacioacuten nutricional y
terapeacuteutica como son
Manufacturar los PUFAs omega-3 siguiendo los criterios similares a los estaacutendares farma-
ceacuteuticos que incluyen controles de calidad en todas las etapas de produccioacuten para asegu-
rar su pureza y calidad
Utilizar compuestos con un contenido miacutenimo de 0 en PUFA omega-3 de todos los
aacutecidos grasos
La relacioacuten omega-3omega- debe ser mayor de 501
Estas recomendaciones estaacuten de acuerdo con las conclusiones de un workshop sobre aacutecidos grasos
omega-3 recientemente publicadas en la revista Journal American Clinical Nutrition que ademaacutes des-
taca como punto importante la necesidad de realizar maacutes ensayos cliacutenicos que permitan calibrar el
potencial real de los aacutecidos grasos omega-3 tanto a nivel preventivo como terapeacuteutico
iquestQUEacute AacuteCIDO GRASO OMEGA-3
0
5
10
15
20
25
g10
0 g
ALA
EPA
DHA
Adipose
Rectal epith
elium
CheekHeart
MuscleLiver
SpleenRBC
Cerbral c
ortex
SpemRetin
a
Estudio transversal del contenido en aacutecidos grasos en tejidos de adultos de Estados Uni-dos Canadaacute Australia y Europa
De acuerdo con estos criterios el primer punto a resolver es la eleccioacuten del
PUFA omega-3 maacutes adecuado para un determinado tratamiento Los tres aacuteci-
dos grasos de la serie 3 maacutes importantes fisioloacutegicamente hablando son
El alfa-linoleacutenico (ALA)
El eicosapentaenoico (EPA)
El docosahexaenoico (DHA)
El DHA es el aacutecido graso omega-3 maacutes abundante en las membranas y estaacute
presente en todos los oacuterganos Es particularmente el maacutes abundante en el sis-
tema nervioso central en el esperma y en la retina ademaacutes del maacutes variable
entre los oacuterganos
Soacutelo pequentildeas cantidades de ALA y de EPA estaacuten presentes en los tejidos y el
contenido en DHA es habitualmente entre 5-30 veces superior al del EPA en
la mayoriacutea de los oacuterganos Ademaacutes el DHA es unas 100 veces maacutes abundante
que el EPA en el cerebro y la retina
iquestQUEacute AacuteCIDO GRASO OMEGA-3
Aunque los tres aacutecidos grasos estaacuten relacionados metaboacutelicamente diversos estu-
dios han demostrado que la administracioacuten de ALA no genera las cantidades fisio-
loacutegicas necesarias de DHA y de EPA En cuanto a la administracioacuten de DHA o EPA las
uacuteltimas recomendaciones sugieren que la viacutea maacutes eficiente para el incremento de las
concentraciones de un aacutecido omega-3 es la administracioacuten de dicho aacutecido especiacutefi-
camente De todas maneras en un planteamiento maacutes general la administracioacuten de
DHA garantiza una concentracioacuten baacutesica de EPA mientras que la administracioacuten
exclusiva de este uacuteltimo disminuye la concentracioacuten de DHA
En humanos la capacidad endoacutegena de convertir ALA en DHA o EPA es muy baja
o inexistente por esta razoacuten el consumo de DHA en la dieta puede ser criacutetico para
mantener la concentracioacuten adecuada de DHA en las membranas celulares BrJ
Nutr2002 88355ndash363
Retroconversioacuten de DHA-EPA en el grupo de DHA su concentracioacuten aumento un
69 y la del EPA un 29 En el grupo de EPA este crecioacute un 297 mientras que el
DHA decrecioacute un 15 AmJ ClinNutr1997 66649-59 AmJ ClinNutr2000 711085ndash94 Am
J Clin Nutr 200479765ndash73
α-Linolenic acid (183n-3)
Stearidonic (184n-3)
(204n-3)
EPA (205n-3)
DPA (225n-3)
DHA (226n-3)
iquestQUEacute AacuteCIDO GRASO OMEGA-3
El DHA es el aacutecido graso n-3 en el sistema nervioso central
Por otra parte desde un punto de vista nutricional cuyo objetivo es el de recuperar los depoacutesitos de
aacutecidos grasos omega-3 la administracioacuten de DHA garantiza una intervencioacuten en el sistema nervioso
central ya que la concentracioacuten de EPA en este tejido es puramente testimonial
Dietas que contienen un 95 de DHA inhiben completamente la degeneracioacuten de la retina inducida
por la N-Metil-N-nitrosourea en cambio las dietas que contienen un 475 de DHA (grupo EPA+DHA) o
soacutelo EPA no tuvieron un efecto protector Exp Eye Res 2003 77167ndash173
El DHA es el precursor de los docosatrienos y las resolvinas de la serie D que regulan los procesos aso-
ciados a la inflamacioacuten y su resolucioacuten final J Biol Chem 2003 27814677ndash14687
El DHA hidrolizado de los fosfoliacutepidos de membrana es el precursor endoacutegeno de la respuesta neuro-
protectiva frente reperfusioacuten isqueacutemica J Biol Chem 2003 278 43807ndash43817
La siacutentesis del 1017S-docosatrieno neuroprotectina D1 protege a las ceacutelulas de la retina de la apop-
tosis inducida por estreacutes oxidativo de una manera similar se sugiere que protegeraacute a las neuronas Proc
Natl Acad Sci USA 2004 101 8491ndash8496
10
BIODISPONIBILIDAD
Otro aspecto interesante que puede condicionar la eficacia de un determina-
do tratamiento es la biodisponibilidad de los aacutecidos omega-3 Existen nume-
rosos estudios en animales que han demostrado que los gliceacuteridos son los
transportadores maacutes eficaces para los aacutecidos grasos Ademaacutes los gliceacuteridos
se consideran la forma quiacutemica maacutes favorable desde un punto de vista ali-
mentario superior a los eacutesteres etiacutelicos de aacutecidos grasos insaturados los cuales
presentan una absorcioacuten intestinal deteriorada de los aacutecidos grasos n-3 ob-
servados como se ha demostrado en animales de laboratorio Tambieacuten se ha
demostrado que los eacutesteres etiacutelicos de aacutecidos grasos no saturados se hidro-
lizan a una velocidad maacutes lenta que los gliceacuteridos correspondientes
Un estudio en humanos realizado por la empresa farmaceacuteutica SIGMA-TAU
demostroacute que los trigliceacuteridos obtenidos por reesterificacioacuten presentan una
biodisponibilidad similar al aceite de pescado natural y muy superior a la
de los aacutecidos grasos libres que ademaacutes generan problemas digestivos y tam-
bieacuten superior a la de los eacutesteres etiacutelicos cuya uacutenica ventaja es la pureza que se
puede alcanzar pero por contra generan etanol que puede ser toacutexico a dosis
elevadas
TIPO DE ACEITE CONTENIDO EN PUFA N-3 () BIODISPONIBILIDAD
Aceite de pescado 25-30 7-100
Eacutesteres etiacutelicos gt85 21-57
Aacutecidos grasos libres gt65 51
TrigliceacuteridosRe-esterificados min 70-75 9
En un estudio In vivo en 24 personas sanas comparando una sola toma oral de PUFAs n-3 en estructuras quiacutemicas diferentes se demostroacute un mayor nivel plasmaacutetico de PUFAs n-3 en el grupo tratado con aceite re-esterificado
Extraiacutedo de una publicacioacuten de la empresa SIGMA-TAU
BIOACTIVIDAD - SEGURIDAD
DHA TG QUIacuteMICO ALGATRIUM PLUS
bull pH extremosbull Temperaturas altas (destilacioacuten)bull Reactivos quiacutemicos
bull pH fisioloacutegicobull Temperaturas bajasbull Sin reactivos quiacutemicos
bull Nivel bajo de trigliceacuteridosbull Productos de reaccioacuten secundariosbull Purificacioacuten cromatograacutefica
bull Nivel alto de trigliceacuteridosbull Sin productos secundariosbull No necesita maacutes purificacioacuten
bull Migracioacuten de dobles enlacesbull Oxidacioacuten de dobles enlacesbull Isomerizaciones CisTrans
bull Preservacioacuten de dobles enlacesbull No oxidacioacuten de dobles enlacesbull No isomerizaciones Cis Trans
La siacutentesis industrial de trigliceacuteridos se puede realizar quiacutemicamente o por
viacutea enzimaacutetica Las diferencias en las condiciones de reaccioacuten entre un pro-
ceso de siacutentesis quiacutemico y uno enzimaacutetico determinaraacuten las calidades finales
para cada producto El uso de meacutetodos tradicionales quiacutemicos (separacioacuten
cromatograacutefica destilacioacuten molecular etc) para producir concentrados de
PUFAs omega-3 implican el uso de pHs extremos y de altas temperaturas que
pueden destruir parcialmente la estructura de los dobles enlaces todos cis del
PUFA omega-3 natural por oxidacioacuten isomerizacioacuten o migracioacuten
Por otra parte las condiciones suaves (temperatura menor de 50degC pH 6-8 y
menos productos quiacutemicos) usadas en la hidroacutelisis enzimaacutetica proporcionan
un alternativa prometedora que podriacutea tambieacuten ahorrar energiacutea y aumentar
la selectividad del producto La preservacioacuten de los enlaces dobles conferiraacute
a la moleacutecula una mayor bioactividad
1
ALGATRIUM PLUS
ESPECIFICACIOacuteN UNIDADES LIacuteMITES
Acidez mg KOHg 30 maacutex
Contenido antioxidante g100g 10 - 11
Densidad a 20ordmC Kgl 0930 - 0940
Aacutecido graso DHA (C n3) FA 70 miacuten
Aacutecido graso DPA (C22 5n3) FA 8 maacutex
Aacutecido graso EPA (C0 5n3) FA 10 maacutex
Aacutecidos grasos Omega-3 FA 5 miacuten
Iacutendice de Peroacutexidos meq O2Kg 50 maacutex
Residuo seco g100g 010 maacutex
Muchos estudios demuestran que la bioactividad de los aceites omega-3 y
principalmente del DHA estaacute relacionada directamente con su contenido res-
pecto a los aacutecidos grasos totales los cuaacuteles pueden competir con los omega-3
en un metabolismo concreto Para obtener el maacuteximo nivel de bioactividad
Brudy ha dirigido sus esfuerzos en dos objetivos baacutesicos
Tener el maacuteximo contenido de DHA en el trigliceacuterido
Reducir al maacuteximo el contenido de EPA
Ademaacutes este aceite cumple todos los requisitos legales en cuanto a iacutendice de
peroacutexidos acidez contenido antioxidante nivel de metales pesadoshellip
Especificaciones del aceite omega-3 utilizado en estos estudios
De todos los aceites que hay en el mercado Algatrium Plus (DHA 70e) es
el aceite enriquecido con un contenido en omega-3 global y en DHA maacutes
alto
0
10
20
30
40
50
Comparativa de diferentes aceites omega-3 en el mercado
DPA
EPA
Algatrium Plus
OMEGA-3
60
70
80
90
P M HSO DHA 50CHEM ALGATRIUM PLUS
ALGATRIUM PLUS
1
OMEGA-3 OMEGA-3 SIacuteNTESIS INSA MG DG CHOL PLM TG EE GTOTAL
A PLUS 70 ENZIMAacuteTICO 05 nd 71 nd nd 865 59 936
FISH 20 ATUacuteN 47 nd 22 42 nd 889 nd 911
DHA 50 QUIacuteMICO 27 43 103 35 228 401 140 532
DHA 50 QUIacuteMICO-PURIFICADO 21 nd 188 nd nd 664 52 852
La biodisponibilidad del aceite es directamente pro-
porcional al tipo de moleacuteculas que lo compongan
concretamente a su composicioacuten lipiacutedica Los acei-
tes naturales contienen maacutes del 90 de materia en
forma de gliceacuterido que proporciona una biodispo-
nibilidad maacutexima Algatrium Plus es muy similar a
un aceite natural (la composicioacuten lipiacutedica incluye un
90 de gliceacuteridos totales con un 5 en forma de
trigliceacuteridos y sin monogliceacuteridos) El DHA obteni-
do quiacutemicamente tiene un nivel bajo de trigliceacuteri-
dos (lt50) un mayor nivel de eacutesteres etiacutelicos y un
alto contenido de poliacutemeros (15-0) que no son
absorbibles y que se deben eliminar por cromatogra-
fiacutea en columna (QUIacuteMICO-PURIFICADO)
Especificaciones del aceite omega-3 utilizado en estos estudios
ALGATRIUM PLUS
Solamente los aceites de pescado o de algas naturales que no se han rees-
terificado satisfacen la legislacioacuten alimentaria en cuanto a su composicioacuten
y por lo tanto son un alimento El DHA obtenido quiacutemicamente no satisface los
requisitos de la farmacopea europea sobretodo relacionado con el nivel de
trigliceacuteridos gliceacuteridos totales y en el contenido en compuestos polimeacutericos
Es necesaria una purificacioacuten por cromatografiacutea en columna para que el pro-
ducto cumpla los requisitos de la legislacioacuten europea Algatrium Plus tiene la
misma composicioacuten que los aceites naturales y por lo tanto se consideran
un alimento
LEGISLACIOacuteN
0
10
20
30
40
50
Composicioacuten estructural Algatrium Plus
Farmacopea
DHA 50 QUIacuteMICO
DHA 50 QUIacuteMICO-PURIFICADO
60
70
80
90
INS DG PLM TG EE
100
MG FA GTotal
1
ACTIVIDAD ANTITUMORAL
Para valorar la actividad de Algatrium Plus nuestro primer obje-
tivo fue determinar su capacidad citotoacutexica antitumoral En este
sentido realizamos un estudio comparativo usando ceacutelulas tumo-
rales (HeLa) y ceacutelulas sanas como control (renales y de piel) Hemos
realizado estudios dosis-respuesta para determinar el valor de IC50
como criterio de toxicidad (es la concentracioacuten que mata al 50 de
las ceacutelulas) Hemos analizado dos variables el efecto de la estructu-
ra del liacutepido y del contenido en DHA Para un contenido en DHA del
70 de todos los aacutecidos grasos se obtuvo la misma toxicidad en
ceacutelulas tumorales con el eacutester etiacutelico (EE) el aacutecido graso libre (FA) o
el trigliceacuterido (TG) Pero en ceacutelulas renales sanas el EE tiene la mis-
ma toxicidad que en las ceacutelulas tumorales y en las ceacutelulas de piel el
FA demuestran una gran toxicidad siendo los TG la forma con un
mejor cociente de seguridad Para una misma estructura quiacutemica
el TG una disminucioacuten del contenido en DHA a 50 o al 20 (este
uacuteltimo es la concentracioacuten en el aceite de pescado) disminuye de
forma dramaacutetica el efecto citotoacutexico en las ceacutelulas del tumor Estos
resultados demuestran que la forma oacuteptima es el trigliceacuterido con
un alto contenido en DHA (Algatrium Plus)
Efectos del contenido en DHA y de la estructura quiacutemica Toxicidad celular
FA 70 1231 plusmn90 nd 722 plusmn58 17
EE 70 5663 plusmn539 726 plusmn83 710 plusmn97 798 -102
TG (Algatrium Plus) 70 7167 plusmn419 3927 plusmn375 586 plusmn88 1223 -670
TG (Quiacutemico) 50 19560 plusmn278 4136 plusmn256 5640 plusmn696 347 -073
TG (Pescado) 20 22676 plusmn279 31160 plusmn1582 13794 plusmn2864 164 -226
ESTRUCTURA DHA PIEL RENAL HeLa
RELACIOacuteNDE
SEGURIDAD
CEacuteLULASTUMORALESCEacuteLULAS SANAS
COMPOSICIOacuteNIC50 (μM)
Otra actividad interesante de los PUFAs omega-3 en caacutencer es su uso como
adyuvantes en la quimioterapia convencional En este sentido determina-
mos los efectos de Algatrium Plus a concentraciones subtoacutexicas sobre la toxi-
cidad de la Doxorrubicina y del 5-fluoroacilo La exposicioacuten simultaacutenea de las
ceacutelulas tumorales al DHA y a la droga aumenta la toxicidad de la misma dos
veces (disminuye el valor de la IC50) Por otra parte si Algatrium Plus se ha
incorporado previamente a la membrana celular este efecto potenciador au-
menta hasta 10 veces
ACTIVIDAD COMO ADYUVANTE ANTITUMORAL
Efecto del DHA sobre la actividad antitumoral de la Doxorrubicina o del 5-fluoroacilo Toxicidad celular
Este efecto potenciador depende del contenido en DHA ya que con el uso de
un aceite quiacutemico (50 en DHA) o de aceite de pescado (20 en DHA) se pier-
de progresivamente dicho efecto potenciador Tambieacuten es significativo que
este efecto no incrementa la toxicidad de los citostaacuteticos en ceacutelulas sanas
Efecto del contenido en dha sobre la actividad antitumoral de la doxorrubicina Toxicidad celular
Control 0 2953 plusmn316 (n=8)
Pre-incorporado15
10
301 plusmn54 (n=8)287 plusmn67 (n=8)370 plusmn44 (n=6)
Simultaacuteneo 5 1843 plusmn162 (n=4)
Control 0 2330 plusmn368 (n=12)
Pre-incorporado15
10
280 plusmn110 (n=7)238 plusmn101 (n=4)380 plusmn142 (n=6)
Simultaacuteneo 5 1480 plusmn801 (n=6)
LIacuteNEA CELULAR
HeLa-Epitelial (Dox)
HT-29-Colon (5-FU)
SISTEMADE ADICIOacuteN
ALGATRIUM PLUS μM IC50 (μM)
0 2953 plusmn316 11586 plusmn3699
5 287 plusmn67 10466 plusmn2304
10 370 plusmn44 10805 plusmn1742
5 1309 plusmn156 11633 plusmn1569
10 1063 plusmn207 9801 plusmn2709
5 2574 plusmn296 11575 plusmn1249
10 2365 plusmn157 15303 plusmn4813
CONTENIDOEN DHA
Control
DHAAlgatrium Plus
DHA TG 50Quiacutemico
DHA TG 20Pescado
DHA (μM)CEacuteLULA TUMORAL CEacuteLULA SANA
IC50 (nM)
1
BIOACTIVIDAD - SEGURIDAD
En los sistemas quiacutemicos puros las moleacuteculas maacutes susceptibles al ataque de los
radicales libres son los aacutecidos grasos poliinsaturados (PUFAs) como el aacutecido do-
cosahexaenoico (DHA n-3) y en general esta susceptibilidad aumenta con
el nuacutemero de dobles enlaces In vivo se supone el mismo comportamiento
Entonces iquestpor queacute el DHA una diana molecular de los radiaciones libres es el
aacutecido graso maacutes abundante en tejidos expuestos a un potencial estreacutes oxidativo
como la retina o en tejidos con un sistema antioxidante celular deficiente como
el sistema nervioso central
iquestACTIVIDAD PRO-O ANTIOXIDANTE
BIOACTIVIDAD - SEGURIDAD
En este contexto hemos estudiado la influencia de la presencia del DHA enzimaacutetico
en la membrana celular sobre la generacioacuten intracelular de radicales libres utilizando
como sistema experimental dos liacuteneas celulares humanas sanas fibroblastos de piel
(Foreskin ATC CRL 2076) y ceacutelulas epiteliales pigmentarias de la retina (ARPE-19 ATCC
CRL 2302)
La cuantificacioacuten de los radicales libres generados se ha realizado mediante metodolo-
giacuteas fluorescentes usando sondas moleculares como el HDCF-DA DHR y DHE
Como inductores exoacutegenos de estreacutes oxidativo se ha utilizado el AAPH y el sistema
xantinaxantin oxidasa y como inductores endoacutegenos la rotenona y la antimicina A
0
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE CELULAR
Como se muestra en la figura la presencia de Algatrium Plus en la
membrana celular disminuye la generacioacuten intracelular de radicales
libres despueacutes de estar sometidas las ceacutelulas a un estreacutes oxidativo
Este comportamiento es independiente de la ceacutelula en estudio (piel o
retina) y del marcador utilizado (H2DCF-DA o DHR) lo cual nos indica la
activacioacuten de un mecanismo general El nivel de proteccioacuten observado
tambieacuten es similar frente al mismo estiacutemulo oxidativo
0 50 100 150 200 250Tiempo (min)
Fluo
resc
enci
a (U
A)
-49
CEacuteLULAS DE RETINA
H2DCF-DA
0 50 100 150 200Tiempo (min)
Fluo
resc
enci
a (U
A)
-42
CEacuteLULAS DE PIEL
0 50 100 150 200 250Tiempo (min)
Fluo
resc
enci
a (U
A)
-56DHR
0 50 100 150 200 250Tiempo (min)
Fluo
resc
enci
a (U
A)
-50
Control
Algatrium Plus
Incr
emen
to
Pro
tecc
ioacuten
EFECTO ADITIVO
Algatrium Plus
0
0306
09
18
21
05 5
1215
Para determinar que la proteccioacuten antioxidante de Algatrium Plus era un
proceso general cambiamos el inductor de estreacutes oxidativo de un produc-
to quiacutemico (el AAPH) a un sistema enzimaacutetico (sistema XXO) o inductores
endoacutegenos (ROT y ANT A) Se ha observado el mismo comportamiento en
todos los casos
El efecto antioxidante de Algatrium Plus depende de la dosis mostrando
un comportamiento dosis-dependiente a la inversa El mayor efecto se ha
observado en una concentracioacuten baja de DHA mientras que a altas con-
centraciones el efecto antioxidante disminuye independientemente de la
potencia del estreacutes oxidativo
Tambieacuten el efecto antioxidante de Algatrium Plus presenta un efecto adi-
tivo con la frecuencia de la administracioacuten La administracioacuten de una do-
sis diaria inrementa el efecto antioxidante respecto a una sola administra-
cioacuten
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE CELULAR
0 50 100 150 200 250Tiempo (min)
Fluo
resc
enci
a (U
A)
-49
CEacuteLULAS DE RETINA AAPH
P
rote
ccioacute
n
ROT ANT A XXO0
10
20
3040
50
60
INDEPENDIENTE DEL INDUCTOR
P
rote
ccioacute
n
DEPENDENCIA DE LA DOSIS
Algatrium Plus
0
10
20
3040
50
60
05 5 50Dosis diaria
Una dosis
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE CELULAR
La generacioacuten intracelular de radicales libres se confirmoacute mediante
microscopia de fluorescencia confocal Las micrografiacuteas muestran una
acumulacioacuten progresiva en el tiempo de radicales libres en las ceacutelulas
control sin DHA mientras que en las que han incorporado Algatrium
Plus en su membrana el nivel intracelular de radicales libres no ha
aumentado
T= 0 min
T= 15 min
T= 30 min
CONTROL ALGATRIUM PLUS 05 μM
CEacuteLULAS DE PIEL
A nivel celular la generacioacuten de radicales libres parece ser dependiente de
la composicioacuten en aacutecidos grasos de la ceacutelula pero la influencia especiacutefica de
cada clase de aacutecido graso no ha sido estudiada
Por otra parte a nivel industrial el meacutetodo de siacutentesis usado para obtener
el aceite enriquecido en DHA puede ser muy importante en la calidad final
del producto En este sentido hemos estudiado la importancia del contenido
de DHA y del origen sinteacutetico en el efecto antioxidante
Como se puede observar en la figura una disminucioacuten del contenido en DHA
al 50 (origen quiacutemico) o al 20 (aceite de pescado) de los aacutecidos grasos to-
tales induce una disminucioacuten del efecto antioxidante en las ceacutelulas de retina
aunque en ninguacuten caso llega a ser pro-oxidante Sin embargo en ceacutelulas de
piel esta reduccioacuten es tan acusada que soacutelo Algatrium Plus es antioxidante
siendo los otros dos pro-oxidantes
Dado el caraacutecter multifactorial de un tratamiento nutricional no es aconseja-
ble administrar un producto que presente actividades divergentes en funcioacuten
del tejido al que se incorpore
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE CELULAR
CEacuteLULASDE PIEL
05 μM
5 μM
50 μM
ACEITE DE PESCADO
P
ROTE
CCIOacute
N
0
20
40
60
-20
-40
DHA TG50QUIacuteMICO
ALGATRIUMPLUS
P
ROTE
CCIOacute
N
60
20
0
CEacuteLULASDE RETINA
40
DHA quiacutemico vs Algatrium Plus
ACEITE DE PESCADO
DHA TG50QUIacuteMICO
ALGATRIUMPLUS
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE CELULAR
Si la baja actividad del aceite de origen quiacutemico (50 en DHA) pudie-
ra estar relacionado con la presencia de estructuras polimeacutericas su eli-
minacioacuten por cromatografiacutea en columna deberiacutea permitir recuperar su
actividad antioxidante Como se puede observar en la figura una mani-
pulacioacuten excesiva del producto original para eliminar contaminantes
o para mejorar sus caracteriacutesticas organoleacutepticas se traduce en una
peacuterdida de bioactividad
P
ROTE
CCIOacute
N
0
10
20
30
40
50
60
-10DHA TG50QUIacuteMICO
ALGATRIUMPLUS
DHA TG50 QUIacuteMICOPURIFICADO
(DHA)
05 μM
5 μM
50 μM
CEacuteLULAS DE RETINA
DHA quiacutemico vs Algatrium Plus
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE CELULAR
La actividad antioxidante del Algatrium Plus tambieacuten esta relacionada
con su mayor biodisponibilidad ya que un eacutester etiacutelico o un aacutecido graso
libre con el mismo contenido en DHA presenta una actividad antioxi-
dante como maacuteximo la mitad de la de Algatrium Plus
P
ROTE
CCIOacute
N
0
10
20
30
40
50
60
05 μM
(DHA)
FA-BSA
Algatrium Plus
CEacuteLULAS DE RETINA
Efecto de la estructura quiacutemica Fa vs Ee vs Tg
70
5 μM
TG 50 CHEM
EE 70
FA Aacutecido graso libre
EE Eacutester etiacutelico
TG Trigliceacuterido
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE CELULAR
Comparado con los antioxidantes normalmente utilizados en tratamien-
tos oculares a las concentraciones oacuteptimas descritas Algatrium Plus pre-
senta a todas las dosis estudiadas un efecto superior
P
ROTE
CCIOacute
N
0
10
20
30
40
50
60CEacuteLULAS DE RETINA
Algatrium Plus vs antioxidantes
Algatrium Plus
NAC mM
Cys 1 m
M
Co Q 100 μM
Vit E 100 μM
Vit C 100 μM
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE CELULAR
Incluso si estos antioxidantes se combinan o se incrementa su concen-
tracioacuten 10 oacute 100 veces
P
ROTE
CCIOacute
N
0
10
20
30
40
50
60CEacuteLULAS DE RETINA
Algatrium Plus vs antioxidantes
Algatrium Plus
ANT1
ANT1 x10
ANT1 x100ANT2
BIOACTIVIDAD
En este punto la cuestioacuten es iquestCuaacutel es el mecanismo por el cual el Algatrium Plus
ejerce este efecto antioxidante tan potente
Los Omega-3 pueden actuar a diferentes niveles en la fisiologiacutea celular La de-
fensa antioxidante celular se basa en la actividad de un nuacutemero de enzimas an-
tioxidantes junto con otros antioxidantes quiacutemicos conjuntamente previenen la
peroxidacioacuten lipiacutedica la proteiacuteca y el dantildeo en DNA Hemos estudiado el efecto de
Algatrium Plus en diversos aspectos del sistema antioxidante celular
Generacioacuten del anioacuten superoacutexido (O-)
La actividad superoacutexido dismutasa (SOD) y de la glutatioacuten peroxidasa (GPx)
La concentracioacuten intracelular de glutatioacuten (GSH)
La peroxidacioacuten lipiacutedica
Y el dantildeo en DNA
BIOACTIVIDAD
Mecanismo de actividad antioxidante
CellularRespiration
OxidativeBurst
EnvironmentalFactors
O-SOD
GSH
GPx
LipidPeroxidation
ProteinPeroxidation
DNA Damage
HO
HO + O
HO
GSSG
GRed
Catalase
OH
1 3
30
BIOACTIVIDAD
Mecanismo de actividad antioxidante
CellularRespiration
OxidativeBurst
EnvironmentalFactors
O-SOD
GSH
GPx
LipidPeroxidation
ProteinPeroxidation
DNA Damage
HO
HO + O
HO
GSSG
GRed
Catalase
OH
1 3
=
+
BIOACTIVIDAD
Hemos encontrado que la incorporacioacuten de Algatrium Plus en las ceacutelulas disminuye la genera-
cioacuten del anioacuten superoacutexido la peroxidacioacuten lipiacutedica de una manera dosis-dependiente inversa y
el dantildeo en DNA
Los niveles inferiores del anioacuten superoacutexido bajo estreacutes oxidativo en ceacutelulas tratadas con Alga-
trium Plus puede ser debido a la actividad maacutes alta de la SOD respecto al control
Por otra parte la actividad de la GPx en las ceacutelulas tratadas no era diferente de las ceacutelulas control
con o sin estreacutes oxidativo
El cambio maacutes significativo fue el incremento (300) de la concentracioacuten intracelular de GSH
relacionado con un incremento de la siacutentesis de novo
Estos resultados nos indican que Algatrium Plus ejerce su efecto antioxidante mediante un
incremento de la actividad del sistema antioxidante celular sin una participacioacuten directa en
el mismo que lo diferencia de los antioxidantes quiacutemicos convencionales
Esto sugiere que las ceacutelulas toleran cantidades pequentildeas de DHA y que eacuteste actuacutea a modo de
estiacutemulo para evitar cualquier acumulacioacuten de radicales libres la incorporacioacuten de Algatrium
Plus en las biomembranes provoca una respuesta celular antioxidante adaptativa
3
ESTUDIOS IN VIVO
Para valorar la accioacuten de Algatrium Plus se utilizoacute como modelo de es-
treacutes oxidativo el inducido por el ejercicio fiacutesico aerobio
Se sometioacute a deportistas a un esfuerzo continuado al 75 de su consu-
mo maacuteximo de oxiacutegeno durante 90 minutos lo cual supone una produc-
cioacuten suficiente de radicales libres y estreacutes oxidativo como para conocer
la capacidad antioxidante de cualquier manipulacioacuten dieteacutetica
Para dar credibilidad a los resultados obtenidos in vitro es necesario una
constatacioacuten de los mismos in vivo En este sentido se ha desarrollado
un ensayo cliacutenico controlado cruzadov de 4 meses de duracioacuten (N = 40
deportistas) a una dosis de 2 gdiacutea de Algatrium Plus
Las variables a estudiar fueron el dantildeo en DNA y paraacutemetros antioxidan-
tes seacutericos
Se observoacute un aumento estadiacutesticamente significativo en la capacidad
antioxidante total del serum (plt005) antes y despueacutes de la realizacioacuten
de las pruebas rectangulares en los deportistas que habiacutean ingerido Al-
gatrium Plus durante un periodo de tres semanas a cuatro meses
H2O
2 (n
mol
L m
in)
150
160
170
180
190
200
BASAL
CAPACIDAD ANTIOXIDANTE TOTAL
Paraacutemetros antioxidantes in vivo
4 MESES
ESTUDIOS IN VIVO
20 DIacuteAS
Algatrium Plus
Control
3
El nivel plasmaacutetico de MDA como iacutendice de peroxidacioacuten lipiacutedica fue
aumentando durante la realizacioacuten de todas las pruebas de esfuerzo
(plt0035) Despueacutes de la ingesta de Algatrium Plus durante 3 semanas
el dantildeo oxidativo a nivel lipiacutedico en las mismas condiciones disminuye
praacutecticamente a nivel basal (plt005) observaacutendose a los 4 meses de tra-
tamiento un efecto protector en esta variable MD
A (n
mol
L)
10
20
30
40
60
BASAL
PEROXIDACIOacuteN LIPIacuteDICA
Paraacutemetros antioxidantes in vivo
4 MESES
ESTUDIOS IN VIVO
20 DIacuteAS
50
0
-10
Hay un aumento en el dantildeo oxidativo del DNA durante la realizacioacuten de
las pruebas rectangulares del esfuerzo medidas como el nivel de 8-oxo-
dG en la orina (plt0011) La ingesta de Algatrium Plus durante 3 sema-
nas y hasta 4 meses protege el DNA del dantildeo oxidativo inducido por el
esfuerzo de una manera significativa (plt0035)
8-ox
o-dG
(pm
olK
gx24
h)
100
200
300
400
600
BASAL
DANtildeO MOLECULAR EN EL DNA
Paraacutemetros antioxidantes in vivo
4 MESES
ESTUDIOS IN VIVO
20 DIacuteAS
500
0
700
800
900
3
Como efectos colaterales en el rendimiento deportivo se ha observado
que los niveles de glicemia disminuyen durante la realizacioacuten de la prue-
ba rectangular de esfuerzo (plt00009) Esta reduccioacuten en la glicemia era
menor despueacutes de 3 semanas de ingesta de Algatrium Plus se traduciacutea
en un aumento del nivel de glicemia a los 4 meses de tratamiento con
Algatrium Plus
mg
dL
-6
-4
-2
BASAL
VARIACIOacuteN EN LA CONCENTRACIOacuteN DE GLUCOSA
Variables fisioloacutegicas de rendimiento deportivo
4 MESES
ESTUDIOS IN VIVO
3 SEMANAS
4
0
-8
2
mL
min
2600
2650
2700
BASAL
CONSUMO DE OXIacuteGENO
Variables fisioloacutegicas de rendimiento deportivo
4 MESES
ESTUDIOS IN VIVO
3 SEMANAS
2900
2550
2850Tambieacuten se ha observado un aumento significativo del consumo abso-
luto (plt0019) y relativo (plt0036) de oxiacutegeno determinado en el umbral
del esfuerzo triangular con la ingesta de Algatrium Plus hasta 4 meses
Estos resultados parecen indicar que la ingesta de Algatrium PLus pue-
de incrementar el rendimiento deportivo
2750
2800
3
CONCLUSIONES
Los aacutecidos grasos omega-3 son un concepto vigente tanto desde un punto de
vista nutricional como terapeacuteutico con un alto potencial de desarrollo
La aplicacioacuten de los aacutecidos grasos omega-3 en estos campos requiere de produc-
tos manufacturados de acuerdo con los estaacutendares que se aplican a productos
farmaceacuteuticos que incluyen controles de calidad para asegurar su pureza y cali-
dad estructural que condiciona su bioactividad Como estaacutendar es exigible una
riqueza miacutenima superior al 5 en una estructura quiacutemica muy biodisponible
como un trigliceacuterido
La incorporacioacuten de Algatrium Plus en las membranas celulares no soacutelo no pro-
mueve la peroxidacioacuten lipiacutedica sino que actuacutea como un activador del sistema
antioxidante celular probablemente como consecuencia de una respuesta adap-
tativa de la ceacutelula
INFORMACIOacuteN LEGAL
ALGATRIUM es una Marca Internacional propiedad de BRUDY TECHNOLOGY
El uso de DHA de alta concentracioacuten para el tratamiento de enfermedades tu-
morales estaacute protegido por la Patente Internacional nordm200501141 Propiedad de
BRUDY TECHNOLOGY
La comercializacioacuten y el uso de Omega-3 Antioxidantes estaacute protegido por la
Patente Internacional nordm200503202 propiedad de BRUDY TECHNOLOGY
Dr Joan C Domingo Pedrol - Departamento de Bioquiacutemica y Biologiacutea Molecular - Universidad de Barcelona - Telf 934 021 214 - e-mail jcdomingoubedu
Fabricado en Espantildea por Brudy Technology - CRiera de Sant Miquel 3 - ordm ordf - 000 Barcelona - Tel 93 17 03
BENEFICIOS NUTRICIONALES Y TERAPEacuteUTICOS DE LOS OMEGA-3
ESPECIALIDAD MEacuteDICA REDUCCIOacuteN EN EL RIESGO O IMPACTO
Cardiologiacutea Toda causa de mortalidad muerte suacutebita cardiacuteaca isquemia infarto cerebral reduccioacuten de trigliceacuteridos (especialmente con DHA) aumento de las HDL pero generalmente no modifica los niveles de liacutepidos a dosis bajas presioacuten arterial y reduccioacuten de taquicardias
Dermatologiacutea Soriasis melanoma
Gastroenterologiacutea Caacutencer de Colon enfermedad inflamatoria intestinal (Enfermedad de Crohn y colitis ulcerosa)
InmunologiacuteaEnfermedades infecciosasNefrologiacutea Asma hepatitis nefropatiacuteas
Neurologiacutea Enfermedad del Alzheimer (especialmente DHA) demencia autismo desorden de falta de atencioacuten-hiperactividad
ObstetriciaGinecologiacuteaPediatriacutea
Salud maternal e infantil (especialmente DHA) cognoscitiva (aumento del coeficiente intelectual) y la agudeza visual en recieacuten nacidos y adolescentes mejora la duracioacuten del embarazo y el peso del feto y una gran variedad de otros siacutentomas como por ejemplo la depresioacuten post-parto
Oncologiacutea Caacutencer de mama colorectal de endometrio leucemia melanoma de ovario de paacutencreas de proacutestata renal Puede mejorar el iacutendice tera-peacuteutico de los citostaacuteticos (5-fluorouracilo ciclofosfamida) e inhibe la caquexia asociada al tumor (reduce peacuterdida de peso)
Oftalmologiacutea Degeneracioacuten Macular asociada a la edad Renitis Pigmentosa
Ortopedia Osteoporosisfracturas inflamaciones de las articulaciones (artritis)
Psiquiatriacutea Depresioacuten desorden bipolar esquizofrenia desorden de falta de atencioacuten-hiperactividad
Reumatologiacutea Artritis reumatoide osteoartritis osteoporosis
Cirugiacutea Mejora la recuperacioacuten en el post-operatorio pero hay que tener precauciones en su administracioacuten a altas dosis (gt 10 gg) conjuntamente con anticoagulantes
Urologiacutea Caacutencer de proacutestata prostatitis hiperplasia prostaacutetica benigna
DESVENTAJAS
Un reciente meta-anaacutelisis realizado por Hooper et al ha concluido que no se
ha podido documentar de manera objetiva y estadiacutesticamente significativa
un efecto beneficioso en el consumo de PUFAs omega-3 en la mortalidad rela-
cionada con eventos cardiovasculares o caacutencer 1
Tampoco se ha documentado de manera objetiva y estadiacutesticamente signifi-
cativa el efecto de los omega-3 en la reduccioacuten del riesgo de desarrollar caacuten-
cer2
1 Hooper L et al Risks and benefits of omega 3 fats for mortality cardiovascular disease and cancer systematic review BMJ 2006 332752-760 Balk EM et al Effects of omega-3 fatty acids on serum markers of cardiovascu-lar disease risk A systematic review Atherosclerosis 2006 18919-302 MacLean CH et al Effects of omega-3 fatty acids on cancer risk a systematic review JAMA 2006 295403-15)
SIN EMBARGO
Los estudios anteriormente citados presentaban diferentes deficiencias en su
planteamiento relacionadas con la no separacioacuten de las intervenciones reali-
zadas con los diferentes aacutecidos omega-3 o mezclas de los mismos en forma de
aceite de pescado o suplementos alimenticios enriquecidos
Tambieacuten se ha observado una falta de homogeneidad en cuanto a la duracioacuten
y las dosis en cada tratamiento
Asiacute como tampoco se ha valorado la importancia de la estructura quiacutemica en
la que se ha administrado el aacutecido omega-3 trigliceacuterido (TG) eacutester etiacutelico (EE)
o aacutecido graso libre (FA)
RECOMENDACIONES
Teniendo en cuenta esta controversia la opinioacuten de diferentes expertos es que deberiacutean mantenerse
las actuales recomendaciones en el consumo de aacutecidos grasos omega-3 pero teniendo en cuenta una
serie de criterios que deberiacutean cumplir los aacutecidos grasos omega-3 para su aplicacioacuten nutricional y
terapeacuteutica como son
Manufacturar los PUFAs omega-3 siguiendo los criterios similares a los estaacutendares farma-
ceacuteuticos que incluyen controles de calidad en todas las etapas de produccioacuten para asegu-
rar su pureza y calidad
Utilizar compuestos con un contenido miacutenimo de 0 en PUFA omega-3 de todos los
aacutecidos grasos
La relacioacuten omega-3omega- debe ser mayor de 501
Estas recomendaciones estaacuten de acuerdo con las conclusiones de un workshop sobre aacutecidos grasos
omega-3 recientemente publicadas en la revista Journal American Clinical Nutrition que ademaacutes des-
taca como punto importante la necesidad de realizar maacutes ensayos cliacutenicos que permitan calibrar el
potencial real de los aacutecidos grasos omega-3 tanto a nivel preventivo como terapeacuteutico
iquestQUEacute AacuteCIDO GRASO OMEGA-3
0
5
10
15
20
25
g10
0 g
ALA
EPA
DHA
Adipose
Rectal epith
elium
CheekHeart
MuscleLiver
SpleenRBC
Cerbral c
ortex
SpemRetin
a
Estudio transversal del contenido en aacutecidos grasos en tejidos de adultos de Estados Uni-dos Canadaacute Australia y Europa
De acuerdo con estos criterios el primer punto a resolver es la eleccioacuten del
PUFA omega-3 maacutes adecuado para un determinado tratamiento Los tres aacuteci-
dos grasos de la serie 3 maacutes importantes fisioloacutegicamente hablando son
El alfa-linoleacutenico (ALA)
El eicosapentaenoico (EPA)
El docosahexaenoico (DHA)
El DHA es el aacutecido graso omega-3 maacutes abundante en las membranas y estaacute
presente en todos los oacuterganos Es particularmente el maacutes abundante en el sis-
tema nervioso central en el esperma y en la retina ademaacutes del maacutes variable
entre los oacuterganos
Soacutelo pequentildeas cantidades de ALA y de EPA estaacuten presentes en los tejidos y el
contenido en DHA es habitualmente entre 5-30 veces superior al del EPA en
la mayoriacutea de los oacuterganos Ademaacutes el DHA es unas 100 veces maacutes abundante
que el EPA en el cerebro y la retina
iquestQUEacute AacuteCIDO GRASO OMEGA-3
Aunque los tres aacutecidos grasos estaacuten relacionados metaboacutelicamente diversos estu-
dios han demostrado que la administracioacuten de ALA no genera las cantidades fisio-
loacutegicas necesarias de DHA y de EPA En cuanto a la administracioacuten de DHA o EPA las
uacuteltimas recomendaciones sugieren que la viacutea maacutes eficiente para el incremento de las
concentraciones de un aacutecido omega-3 es la administracioacuten de dicho aacutecido especiacutefi-
camente De todas maneras en un planteamiento maacutes general la administracioacuten de
DHA garantiza una concentracioacuten baacutesica de EPA mientras que la administracioacuten
exclusiva de este uacuteltimo disminuye la concentracioacuten de DHA
En humanos la capacidad endoacutegena de convertir ALA en DHA o EPA es muy baja
o inexistente por esta razoacuten el consumo de DHA en la dieta puede ser criacutetico para
mantener la concentracioacuten adecuada de DHA en las membranas celulares BrJ
Nutr2002 88355ndash363
Retroconversioacuten de DHA-EPA en el grupo de DHA su concentracioacuten aumento un
69 y la del EPA un 29 En el grupo de EPA este crecioacute un 297 mientras que el
DHA decrecioacute un 15 AmJ ClinNutr1997 66649-59 AmJ ClinNutr2000 711085ndash94 Am
J Clin Nutr 200479765ndash73
α-Linolenic acid (183n-3)
Stearidonic (184n-3)
(204n-3)
EPA (205n-3)
DPA (225n-3)
DHA (226n-3)
iquestQUEacute AacuteCIDO GRASO OMEGA-3
El DHA es el aacutecido graso n-3 en el sistema nervioso central
Por otra parte desde un punto de vista nutricional cuyo objetivo es el de recuperar los depoacutesitos de
aacutecidos grasos omega-3 la administracioacuten de DHA garantiza una intervencioacuten en el sistema nervioso
central ya que la concentracioacuten de EPA en este tejido es puramente testimonial
Dietas que contienen un 95 de DHA inhiben completamente la degeneracioacuten de la retina inducida
por la N-Metil-N-nitrosourea en cambio las dietas que contienen un 475 de DHA (grupo EPA+DHA) o
soacutelo EPA no tuvieron un efecto protector Exp Eye Res 2003 77167ndash173
El DHA es el precursor de los docosatrienos y las resolvinas de la serie D que regulan los procesos aso-
ciados a la inflamacioacuten y su resolucioacuten final J Biol Chem 2003 27814677ndash14687
El DHA hidrolizado de los fosfoliacutepidos de membrana es el precursor endoacutegeno de la respuesta neuro-
protectiva frente reperfusioacuten isqueacutemica J Biol Chem 2003 278 43807ndash43817
La siacutentesis del 1017S-docosatrieno neuroprotectina D1 protege a las ceacutelulas de la retina de la apop-
tosis inducida por estreacutes oxidativo de una manera similar se sugiere que protegeraacute a las neuronas Proc
Natl Acad Sci USA 2004 101 8491ndash8496
10
BIODISPONIBILIDAD
Otro aspecto interesante que puede condicionar la eficacia de un determina-
do tratamiento es la biodisponibilidad de los aacutecidos omega-3 Existen nume-
rosos estudios en animales que han demostrado que los gliceacuteridos son los
transportadores maacutes eficaces para los aacutecidos grasos Ademaacutes los gliceacuteridos
se consideran la forma quiacutemica maacutes favorable desde un punto de vista ali-
mentario superior a los eacutesteres etiacutelicos de aacutecidos grasos insaturados los cuales
presentan una absorcioacuten intestinal deteriorada de los aacutecidos grasos n-3 ob-
servados como se ha demostrado en animales de laboratorio Tambieacuten se ha
demostrado que los eacutesteres etiacutelicos de aacutecidos grasos no saturados se hidro-
lizan a una velocidad maacutes lenta que los gliceacuteridos correspondientes
Un estudio en humanos realizado por la empresa farmaceacuteutica SIGMA-TAU
demostroacute que los trigliceacuteridos obtenidos por reesterificacioacuten presentan una
biodisponibilidad similar al aceite de pescado natural y muy superior a la
de los aacutecidos grasos libres que ademaacutes generan problemas digestivos y tam-
bieacuten superior a la de los eacutesteres etiacutelicos cuya uacutenica ventaja es la pureza que se
puede alcanzar pero por contra generan etanol que puede ser toacutexico a dosis
elevadas
TIPO DE ACEITE CONTENIDO EN PUFA N-3 () BIODISPONIBILIDAD
Aceite de pescado 25-30 7-100
Eacutesteres etiacutelicos gt85 21-57
Aacutecidos grasos libres gt65 51
TrigliceacuteridosRe-esterificados min 70-75 9
En un estudio In vivo en 24 personas sanas comparando una sola toma oral de PUFAs n-3 en estructuras quiacutemicas diferentes se demostroacute un mayor nivel plasmaacutetico de PUFAs n-3 en el grupo tratado con aceite re-esterificado
Extraiacutedo de una publicacioacuten de la empresa SIGMA-TAU
BIOACTIVIDAD - SEGURIDAD
DHA TG QUIacuteMICO ALGATRIUM PLUS
bull pH extremosbull Temperaturas altas (destilacioacuten)bull Reactivos quiacutemicos
bull pH fisioloacutegicobull Temperaturas bajasbull Sin reactivos quiacutemicos
bull Nivel bajo de trigliceacuteridosbull Productos de reaccioacuten secundariosbull Purificacioacuten cromatograacutefica
bull Nivel alto de trigliceacuteridosbull Sin productos secundariosbull No necesita maacutes purificacioacuten
bull Migracioacuten de dobles enlacesbull Oxidacioacuten de dobles enlacesbull Isomerizaciones CisTrans
bull Preservacioacuten de dobles enlacesbull No oxidacioacuten de dobles enlacesbull No isomerizaciones Cis Trans
La siacutentesis industrial de trigliceacuteridos se puede realizar quiacutemicamente o por
viacutea enzimaacutetica Las diferencias en las condiciones de reaccioacuten entre un pro-
ceso de siacutentesis quiacutemico y uno enzimaacutetico determinaraacuten las calidades finales
para cada producto El uso de meacutetodos tradicionales quiacutemicos (separacioacuten
cromatograacutefica destilacioacuten molecular etc) para producir concentrados de
PUFAs omega-3 implican el uso de pHs extremos y de altas temperaturas que
pueden destruir parcialmente la estructura de los dobles enlaces todos cis del
PUFA omega-3 natural por oxidacioacuten isomerizacioacuten o migracioacuten
Por otra parte las condiciones suaves (temperatura menor de 50degC pH 6-8 y
menos productos quiacutemicos) usadas en la hidroacutelisis enzimaacutetica proporcionan
un alternativa prometedora que podriacutea tambieacuten ahorrar energiacutea y aumentar
la selectividad del producto La preservacioacuten de los enlaces dobles conferiraacute
a la moleacutecula una mayor bioactividad
1
ALGATRIUM PLUS
ESPECIFICACIOacuteN UNIDADES LIacuteMITES
Acidez mg KOHg 30 maacutex
Contenido antioxidante g100g 10 - 11
Densidad a 20ordmC Kgl 0930 - 0940
Aacutecido graso DHA (C n3) FA 70 miacuten
Aacutecido graso DPA (C22 5n3) FA 8 maacutex
Aacutecido graso EPA (C0 5n3) FA 10 maacutex
Aacutecidos grasos Omega-3 FA 5 miacuten
Iacutendice de Peroacutexidos meq O2Kg 50 maacutex
Residuo seco g100g 010 maacutex
Muchos estudios demuestran que la bioactividad de los aceites omega-3 y
principalmente del DHA estaacute relacionada directamente con su contenido res-
pecto a los aacutecidos grasos totales los cuaacuteles pueden competir con los omega-3
en un metabolismo concreto Para obtener el maacuteximo nivel de bioactividad
Brudy ha dirigido sus esfuerzos en dos objetivos baacutesicos
Tener el maacuteximo contenido de DHA en el trigliceacuterido
Reducir al maacuteximo el contenido de EPA
Ademaacutes este aceite cumple todos los requisitos legales en cuanto a iacutendice de
peroacutexidos acidez contenido antioxidante nivel de metales pesadoshellip
Especificaciones del aceite omega-3 utilizado en estos estudios
De todos los aceites que hay en el mercado Algatrium Plus (DHA 70e) es
el aceite enriquecido con un contenido en omega-3 global y en DHA maacutes
alto
0
10
20
30
40
50
Comparativa de diferentes aceites omega-3 en el mercado
DPA
EPA
Algatrium Plus
OMEGA-3
60
70
80
90
P M HSO DHA 50CHEM ALGATRIUM PLUS
ALGATRIUM PLUS
1
OMEGA-3 OMEGA-3 SIacuteNTESIS INSA MG DG CHOL PLM TG EE GTOTAL
A PLUS 70 ENZIMAacuteTICO 05 nd 71 nd nd 865 59 936
FISH 20 ATUacuteN 47 nd 22 42 nd 889 nd 911
DHA 50 QUIacuteMICO 27 43 103 35 228 401 140 532
DHA 50 QUIacuteMICO-PURIFICADO 21 nd 188 nd nd 664 52 852
La biodisponibilidad del aceite es directamente pro-
porcional al tipo de moleacuteculas que lo compongan
concretamente a su composicioacuten lipiacutedica Los acei-
tes naturales contienen maacutes del 90 de materia en
forma de gliceacuterido que proporciona una biodispo-
nibilidad maacutexima Algatrium Plus es muy similar a
un aceite natural (la composicioacuten lipiacutedica incluye un
90 de gliceacuteridos totales con un 5 en forma de
trigliceacuteridos y sin monogliceacuteridos) El DHA obteni-
do quiacutemicamente tiene un nivel bajo de trigliceacuteri-
dos (lt50) un mayor nivel de eacutesteres etiacutelicos y un
alto contenido de poliacutemeros (15-0) que no son
absorbibles y que se deben eliminar por cromatogra-
fiacutea en columna (QUIacuteMICO-PURIFICADO)
Especificaciones del aceite omega-3 utilizado en estos estudios
ALGATRIUM PLUS
Solamente los aceites de pescado o de algas naturales que no se han rees-
terificado satisfacen la legislacioacuten alimentaria en cuanto a su composicioacuten
y por lo tanto son un alimento El DHA obtenido quiacutemicamente no satisface los
requisitos de la farmacopea europea sobretodo relacionado con el nivel de
trigliceacuteridos gliceacuteridos totales y en el contenido en compuestos polimeacutericos
Es necesaria una purificacioacuten por cromatografiacutea en columna para que el pro-
ducto cumpla los requisitos de la legislacioacuten europea Algatrium Plus tiene la
misma composicioacuten que los aceites naturales y por lo tanto se consideran
un alimento
LEGISLACIOacuteN
0
10
20
30
40
50
Composicioacuten estructural Algatrium Plus
Farmacopea
DHA 50 QUIacuteMICO
DHA 50 QUIacuteMICO-PURIFICADO
60
70
80
90
INS DG PLM TG EE
100
MG FA GTotal
1
ACTIVIDAD ANTITUMORAL
Para valorar la actividad de Algatrium Plus nuestro primer obje-
tivo fue determinar su capacidad citotoacutexica antitumoral En este
sentido realizamos un estudio comparativo usando ceacutelulas tumo-
rales (HeLa) y ceacutelulas sanas como control (renales y de piel) Hemos
realizado estudios dosis-respuesta para determinar el valor de IC50
como criterio de toxicidad (es la concentracioacuten que mata al 50 de
las ceacutelulas) Hemos analizado dos variables el efecto de la estructu-
ra del liacutepido y del contenido en DHA Para un contenido en DHA del
70 de todos los aacutecidos grasos se obtuvo la misma toxicidad en
ceacutelulas tumorales con el eacutester etiacutelico (EE) el aacutecido graso libre (FA) o
el trigliceacuterido (TG) Pero en ceacutelulas renales sanas el EE tiene la mis-
ma toxicidad que en las ceacutelulas tumorales y en las ceacutelulas de piel el
FA demuestran una gran toxicidad siendo los TG la forma con un
mejor cociente de seguridad Para una misma estructura quiacutemica
el TG una disminucioacuten del contenido en DHA a 50 o al 20 (este
uacuteltimo es la concentracioacuten en el aceite de pescado) disminuye de
forma dramaacutetica el efecto citotoacutexico en las ceacutelulas del tumor Estos
resultados demuestran que la forma oacuteptima es el trigliceacuterido con
un alto contenido en DHA (Algatrium Plus)
Efectos del contenido en DHA y de la estructura quiacutemica Toxicidad celular
FA 70 1231 plusmn90 nd 722 plusmn58 17
EE 70 5663 plusmn539 726 plusmn83 710 plusmn97 798 -102
TG (Algatrium Plus) 70 7167 plusmn419 3927 plusmn375 586 plusmn88 1223 -670
TG (Quiacutemico) 50 19560 plusmn278 4136 plusmn256 5640 plusmn696 347 -073
TG (Pescado) 20 22676 plusmn279 31160 plusmn1582 13794 plusmn2864 164 -226
ESTRUCTURA DHA PIEL RENAL HeLa
RELACIOacuteNDE
SEGURIDAD
CEacuteLULASTUMORALESCEacuteLULAS SANAS
COMPOSICIOacuteNIC50 (μM)
Otra actividad interesante de los PUFAs omega-3 en caacutencer es su uso como
adyuvantes en la quimioterapia convencional En este sentido determina-
mos los efectos de Algatrium Plus a concentraciones subtoacutexicas sobre la toxi-
cidad de la Doxorrubicina y del 5-fluoroacilo La exposicioacuten simultaacutenea de las
ceacutelulas tumorales al DHA y a la droga aumenta la toxicidad de la misma dos
veces (disminuye el valor de la IC50) Por otra parte si Algatrium Plus se ha
incorporado previamente a la membrana celular este efecto potenciador au-
menta hasta 10 veces
ACTIVIDAD COMO ADYUVANTE ANTITUMORAL
Efecto del DHA sobre la actividad antitumoral de la Doxorrubicina o del 5-fluoroacilo Toxicidad celular
Este efecto potenciador depende del contenido en DHA ya que con el uso de
un aceite quiacutemico (50 en DHA) o de aceite de pescado (20 en DHA) se pier-
de progresivamente dicho efecto potenciador Tambieacuten es significativo que
este efecto no incrementa la toxicidad de los citostaacuteticos en ceacutelulas sanas
Efecto del contenido en dha sobre la actividad antitumoral de la doxorrubicina Toxicidad celular
Control 0 2953 plusmn316 (n=8)
Pre-incorporado15
10
301 plusmn54 (n=8)287 plusmn67 (n=8)370 plusmn44 (n=6)
Simultaacuteneo 5 1843 plusmn162 (n=4)
Control 0 2330 plusmn368 (n=12)
Pre-incorporado15
10
280 plusmn110 (n=7)238 plusmn101 (n=4)380 plusmn142 (n=6)
Simultaacuteneo 5 1480 plusmn801 (n=6)
LIacuteNEA CELULAR
HeLa-Epitelial (Dox)
HT-29-Colon (5-FU)
SISTEMADE ADICIOacuteN
ALGATRIUM PLUS μM IC50 (μM)
0 2953 plusmn316 11586 plusmn3699
5 287 plusmn67 10466 plusmn2304
10 370 plusmn44 10805 plusmn1742
5 1309 plusmn156 11633 plusmn1569
10 1063 plusmn207 9801 plusmn2709
5 2574 plusmn296 11575 plusmn1249
10 2365 plusmn157 15303 plusmn4813
CONTENIDOEN DHA
Control
DHAAlgatrium Plus
DHA TG 50Quiacutemico
DHA TG 20Pescado
DHA (μM)CEacuteLULA TUMORAL CEacuteLULA SANA
IC50 (nM)
1
BIOACTIVIDAD - SEGURIDAD
En los sistemas quiacutemicos puros las moleacuteculas maacutes susceptibles al ataque de los
radicales libres son los aacutecidos grasos poliinsaturados (PUFAs) como el aacutecido do-
cosahexaenoico (DHA n-3) y en general esta susceptibilidad aumenta con
el nuacutemero de dobles enlaces In vivo se supone el mismo comportamiento
Entonces iquestpor queacute el DHA una diana molecular de los radiaciones libres es el
aacutecido graso maacutes abundante en tejidos expuestos a un potencial estreacutes oxidativo
como la retina o en tejidos con un sistema antioxidante celular deficiente como
el sistema nervioso central
iquestACTIVIDAD PRO-O ANTIOXIDANTE
BIOACTIVIDAD - SEGURIDAD
En este contexto hemos estudiado la influencia de la presencia del DHA enzimaacutetico
en la membrana celular sobre la generacioacuten intracelular de radicales libres utilizando
como sistema experimental dos liacuteneas celulares humanas sanas fibroblastos de piel
(Foreskin ATC CRL 2076) y ceacutelulas epiteliales pigmentarias de la retina (ARPE-19 ATCC
CRL 2302)
La cuantificacioacuten de los radicales libres generados se ha realizado mediante metodolo-
giacuteas fluorescentes usando sondas moleculares como el HDCF-DA DHR y DHE
Como inductores exoacutegenos de estreacutes oxidativo se ha utilizado el AAPH y el sistema
xantinaxantin oxidasa y como inductores endoacutegenos la rotenona y la antimicina A
0
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE CELULAR
Como se muestra en la figura la presencia de Algatrium Plus en la
membrana celular disminuye la generacioacuten intracelular de radicales
libres despueacutes de estar sometidas las ceacutelulas a un estreacutes oxidativo
Este comportamiento es independiente de la ceacutelula en estudio (piel o
retina) y del marcador utilizado (H2DCF-DA o DHR) lo cual nos indica la
activacioacuten de un mecanismo general El nivel de proteccioacuten observado
tambieacuten es similar frente al mismo estiacutemulo oxidativo
0 50 100 150 200 250Tiempo (min)
Fluo
resc
enci
a (U
A)
-49
CEacuteLULAS DE RETINA
H2DCF-DA
0 50 100 150 200Tiempo (min)
Fluo
resc
enci
a (U
A)
-42
CEacuteLULAS DE PIEL
0 50 100 150 200 250Tiempo (min)
Fluo
resc
enci
a (U
A)
-56DHR
0 50 100 150 200 250Tiempo (min)
Fluo
resc
enci
a (U
A)
-50
Control
Algatrium Plus
Incr
emen
to
Pro
tecc
ioacuten
EFECTO ADITIVO
Algatrium Plus
0
0306
09
18
21
05 5
1215
Para determinar que la proteccioacuten antioxidante de Algatrium Plus era un
proceso general cambiamos el inductor de estreacutes oxidativo de un produc-
to quiacutemico (el AAPH) a un sistema enzimaacutetico (sistema XXO) o inductores
endoacutegenos (ROT y ANT A) Se ha observado el mismo comportamiento en
todos los casos
El efecto antioxidante de Algatrium Plus depende de la dosis mostrando
un comportamiento dosis-dependiente a la inversa El mayor efecto se ha
observado en una concentracioacuten baja de DHA mientras que a altas con-
centraciones el efecto antioxidante disminuye independientemente de la
potencia del estreacutes oxidativo
Tambieacuten el efecto antioxidante de Algatrium Plus presenta un efecto adi-
tivo con la frecuencia de la administracioacuten La administracioacuten de una do-
sis diaria inrementa el efecto antioxidante respecto a una sola administra-
cioacuten
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE CELULAR
0 50 100 150 200 250Tiempo (min)
Fluo
resc
enci
a (U
A)
-49
CEacuteLULAS DE RETINA AAPH
P
rote
ccioacute
n
ROT ANT A XXO0
10
20
3040
50
60
INDEPENDIENTE DEL INDUCTOR
P
rote
ccioacute
n
DEPENDENCIA DE LA DOSIS
Algatrium Plus
0
10
20
3040
50
60
05 5 50Dosis diaria
Una dosis
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE CELULAR
La generacioacuten intracelular de radicales libres se confirmoacute mediante
microscopia de fluorescencia confocal Las micrografiacuteas muestran una
acumulacioacuten progresiva en el tiempo de radicales libres en las ceacutelulas
control sin DHA mientras que en las que han incorporado Algatrium
Plus en su membrana el nivel intracelular de radicales libres no ha
aumentado
T= 0 min
T= 15 min
T= 30 min
CONTROL ALGATRIUM PLUS 05 μM
CEacuteLULAS DE PIEL
A nivel celular la generacioacuten de radicales libres parece ser dependiente de
la composicioacuten en aacutecidos grasos de la ceacutelula pero la influencia especiacutefica de
cada clase de aacutecido graso no ha sido estudiada
Por otra parte a nivel industrial el meacutetodo de siacutentesis usado para obtener
el aceite enriquecido en DHA puede ser muy importante en la calidad final
del producto En este sentido hemos estudiado la importancia del contenido
de DHA y del origen sinteacutetico en el efecto antioxidante
Como se puede observar en la figura una disminucioacuten del contenido en DHA
al 50 (origen quiacutemico) o al 20 (aceite de pescado) de los aacutecidos grasos to-
tales induce una disminucioacuten del efecto antioxidante en las ceacutelulas de retina
aunque en ninguacuten caso llega a ser pro-oxidante Sin embargo en ceacutelulas de
piel esta reduccioacuten es tan acusada que soacutelo Algatrium Plus es antioxidante
siendo los otros dos pro-oxidantes
Dado el caraacutecter multifactorial de un tratamiento nutricional no es aconseja-
ble administrar un producto que presente actividades divergentes en funcioacuten
del tejido al que se incorpore
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE CELULAR
CEacuteLULASDE PIEL
05 μM
5 μM
50 μM
ACEITE DE PESCADO
P
ROTE
CCIOacute
N
0
20
40
60
-20
-40
DHA TG50QUIacuteMICO
ALGATRIUMPLUS
P
ROTE
CCIOacute
N
60
20
0
CEacuteLULASDE RETINA
40
DHA quiacutemico vs Algatrium Plus
ACEITE DE PESCADO
DHA TG50QUIacuteMICO
ALGATRIUMPLUS
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE CELULAR
Si la baja actividad del aceite de origen quiacutemico (50 en DHA) pudie-
ra estar relacionado con la presencia de estructuras polimeacutericas su eli-
minacioacuten por cromatografiacutea en columna deberiacutea permitir recuperar su
actividad antioxidante Como se puede observar en la figura una mani-
pulacioacuten excesiva del producto original para eliminar contaminantes
o para mejorar sus caracteriacutesticas organoleacutepticas se traduce en una
peacuterdida de bioactividad
P
ROTE
CCIOacute
N
0
10
20
30
40
50
60
-10DHA TG50QUIacuteMICO
ALGATRIUMPLUS
DHA TG50 QUIacuteMICOPURIFICADO
(DHA)
05 μM
5 μM
50 μM
CEacuteLULAS DE RETINA
DHA quiacutemico vs Algatrium Plus
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE CELULAR
La actividad antioxidante del Algatrium Plus tambieacuten esta relacionada
con su mayor biodisponibilidad ya que un eacutester etiacutelico o un aacutecido graso
libre con el mismo contenido en DHA presenta una actividad antioxi-
dante como maacuteximo la mitad de la de Algatrium Plus
P
ROTE
CCIOacute
N
0
10
20
30
40
50
60
05 μM
(DHA)
FA-BSA
Algatrium Plus
CEacuteLULAS DE RETINA
Efecto de la estructura quiacutemica Fa vs Ee vs Tg
70
5 μM
TG 50 CHEM
EE 70
FA Aacutecido graso libre
EE Eacutester etiacutelico
TG Trigliceacuterido
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE CELULAR
Comparado con los antioxidantes normalmente utilizados en tratamien-
tos oculares a las concentraciones oacuteptimas descritas Algatrium Plus pre-
senta a todas las dosis estudiadas un efecto superior
P
ROTE
CCIOacute
N
0
10
20
30
40
50
60CEacuteLULAS DE RETINA
Algatrium Plus vs antioxidantes
Algatrium Plus
NAC mM
Cys 1 m
M
Co Q 100 μM
Vit E 100 μM
Vit C 100 μM
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE CELULAR
Incluso si estos antioxidantes se combinan o se incrementa su concen-
tracioacuten 10 oacute 100 veces
P
ROTE
CCIOacute
N
0
10
20
30
40
50
60CEacuteLULAS DE RETINA
Algatrium Plus vs antioxidantes
Algatrium Plus
ANT1
ANT1 x10
ANT1 x100ANT2
BIOACTIVIDAD
En este punto la cuestioacuten es iquestCuaacutel es el mecanismo por el cual el Algatrium Plus
ejerce este efecto antioxidante tan potente
Los Omega-3 pueden actuar a diferentes niveles en la fisiologiacutea celular La de-
fensa antioxidante celular se basa en la actividad de un nuacutemero de enzimas an-
tioxidantes junto con otros antioxidantes quiacutemicos conjuntamente previenen la
peroxidacioacuten lipiacutedica la proteiacuteca y el dantildeo en DNA Hemos estudiado el efecto de
Algatrium Plus en diversos aspectos del sistema antioxidante celular
Generacioacuten del anioacuten superoacutexido (O-)
La actividad superoacutexido dismutasa (SOD) y de la glutatioacuten peroxidasa (GPx)
La concentracioacuten intracelular de glutatioacuten (GSH)
La peroxidacioacuten lipiacutedica
Y el dantildeo en DNA
BIOACTIVIDAD
Mecanismo de actividad antioxidante
CellularRespiration
OxidativeBurst
EnvironmentalFactors
O-SOD
GSH
GPx
LipidPeroxidation
ProteinPeroxidation
DNA Damage
HO
HO + O
HO
GSSG
GRed
Catalase
OH
1 3
30
BIOACTIVIDAD
Mecanismo de actividad antioxidante
CellularRespiration
OxidativeBurst
EnvironmentalFactors
O-SOD
GSH
GPx
LipidPeroxidation
ProteinPeroxidation
DNA Damage
HO
HO + O
HO
GSSG
GRed
Catalase
OH
1 3
=
+
BIOACTIVIDAD
Hemos encontrado que la incorporacioacuten de Algatrium Plus en las ceacutelulas disminuye la genera-
cioacuten del anioacuten superoacutexido la peroxidacioacuten lipiacutedica de una manera dosis-dependiente inversa y
el dantildeo en DNA
Los niveles inferiores del anioacuten superoacutexido bajo estreacutes oxidativo en ceacutelulas tratadas con Alga-
trium Plus puede ser debido a la actividad maacutes alta de la SOD respecto al control
Por otra parte la actividad de la GPx en las ceacutelulas tratadas no era diferente de las ceacutelulas control
con o sin estreacutes oxidativo
El cambio maacutes significativo fue el incremento (300) de la concentracioacuten intracelular de GSH
relacionado con un incremento de la siacutentesis de novo
Estos resultados nos indican que Algatrium Plus ejerce su efecto antioxidante mediante un
incremento de la actividad del sistema antioxidante celular sin una participacioacuten directa en
el mismo que lo diferencia de los antioxidantes quiacutemicos convencionales
Esto sugiere que las ceacutelulas toleran cantidades pequentildeas de DHA y que eacuteste actuacutea a modo de
estiacutemulo para evitar cualquier acumulacioacuten de radicales libres la incorporacioacuten de Algatrium
Plus en las biomembranes provoca una respuesta celular antioxidante adaptativa
3
ESTUDIOS IN VIVO
Para valorar la accioacuten de Algatrium Plus se utilizoacute como modelo de es-
treacutes oxidativo el inducido por el ejercicio fiacutesico aerobio
Se sometioacute a deportistas a un esfuerzo continuado al 75 de su consu-
mo maacuteximo de oxiacutegeno durante 90 minutos lo cual supone una produc-
cioacuten suficiente de radicales libres y estreacutes oxidativo como para conocer
la capacidad antioxidante de cualquier manipulacioacuten dieteacutetica
Para dar credibilidad a los resultados obtenidos in vitro es necesario una
constatacioacuten de los mismos in vivo En este sentido se ha desarrollado
un ensayo cliacutenico controlado cruzadov de 4 meses de duracioacuten (N = 40
deportistas) a una dosis de 2 gdiacutea de Algatrium Plus
Las variables a estudiar fueron el dantildeo en DNA y paraacutemetros antioxidan-
tes seacutericos
Se observoacute un aumento estadiacutesticamente significativo en la capacidad
antioxidante total del serum (plt005) antes y despueacutes de la realizacioacuten
de las pruebas rectangulares en los deportistas que habiacutean ingerido Al-
gatrium Plus durante un periodo de tres semanas a cuatro meses
H2O
2 (n
mol
L m
in)
150
160
170
180
190
200
BASAL
CAPACIDAD ANTIOXIDANTE TOTAL
Paraacutemetros antioxidantes in vivo
4 MESES
ESTUDIOS IN VIVO
20 DIacuteAS
Algatrium Plus
Control
3
El nivel plasmaacutetico de MDA como iacutendice de peroxidacioacuten lipiacutedica fue
aumentando durante la realizacioacuten de todas las pruebas de esfuerzo
(plt0035) Despueacutes de la ingesta de Algatrium Plus durante 3 semanas
el dantildeo oxidativo a nivel lipiacutedico en las mismas condiciones disminuye
praacutecticamente a nivel basal (plt005) observaacutendose a los 4 meses de tra-
tamiento un efecto protector en esta variable MD
A (n
mol
L)
10
20
30
40
60
BASAL
PEROXIDACIOacuteN LIPIacuteDICA
Paraacutemetros antioxidantes in vivo
4 MESES
ESTUDIOS IN VIVO
20 DIacuteAS
50
0
-10
Hay un aumento en el dantildeo oxidativo del DNA durante la realizacioacuten de
las pruebas rectangulares del esfuerzo medidas como el nivel de 8-oxo-
dG en la orina (plt0011) La ingesta de Algatrium Plus durante 3 sema-
nas y hasta 4 meses protege el DNA del dantildeo oxidativo inducido por el
esfuerzo de una manera significativa (plt0035)
8-ox
o-dG
(pm
olK
gx24
h)
100
200
300
400
600
BASAL
DANtildeO MOLECULAR EN EL DNA
Paraacutemetros antioxidantes in vivo
4 MESES
ESTUDIOS IN VIVO
20 DIacuteAS
500
0
700
800
900
3
Como efectos colaterales en el rendimiento deportivo se ha observado
que los niveles de glicemia disminuyen durante la realizacioacuten de la prue-
ba rectangular de esfuerzo (plt00009) Esta reduccioacuten en la glicemia era
menor despueacutes de 3 semanas de ingesta de Algatrium Plus se traduciacutea
en un aumento del nivel de glicemia a los 4 meses de tratamiento con
Algatrium Plus
mg
dL
-6
-4
-2
BASAL
VARIACIOacuteN EN LA CONCENTRACIOacuteN DE GLUCOSA
Variables fisioloacutegicas de rendimiento deportivo
4 MESES
ESTUDIOS IN VIVO
3 SEMANAS
4
0
-8
2
mL
min
2600
2650
2700
BASAL
CONSUMO DE OXIacuteGENO
Variables fisioloacutegicas de rendimiento deportivo
4 MESES
ESTUDIOS IN VIVO
3 SEMANAS
2900
2550
2850Tambieacuten se ha observado un aumento significativo del consumo abso-
luto (plt0019) y relativo (plt0036) de oxiacutegeno determinado en el umbral
del esfuerzo triangular con la ingesta de Algatrium Plus hasta 4 meses
Estos resultados parecen indicar que la ingesta de Algatrium PLus pue-
de incrementar el rendimiento deportivo
2750
2800
3
CONCLUSIONES
Los aacutecidos grasos omega-3 son un concepto vigente tanto desde un punto de
vista nutricional como terapeacuteutico con un alto potencial de desarrollo
La aplicacioacuten de los aacutecidos grasos omega-3 en estos campos requiere de produc-
tos manufacturados de acuerdo con los estaacutendares que se aplican a productos
farmaceacuteuticos que incluyen controles de calidad para asegurar su pureza y cali-
dad estructural que condiciona su bioactividad Como estaacutendar es exigible una
riqueza miacutenima superior al 5 en una estructura quiacutemica muy biodisponible
como un trigliceacuterido
La incorporacioacuten de Algatrium Plus en las membranas celulares no soacutelo no pro-
mueve la peroxidacioacuten lipiacutedica sino que actuacutea como un activador del sistema
antioxidante celular probablemente como consecuencia de una respuesta adap-
tativa de la ceacutelula
INFORMACIOacuteN LEGAL
ALGATRIUM es una Marca Internacional propiedad de BRUDY TECHNOLOGY
El uso de DHA de alta concentracioacuten para el tratamiento de enfermedades tu-
morales estaacute protegido por la Patente Internacional nordm200501141 Propiedad de
BRUDY TECHNOLOGY
La comercializacioacuten y el uso de Omega-3 Antioxidantes estaacute protegido por la
Patente Internacional nordm200503202 propiedad de BRUDY TECHNOLOGY
Dr Joan C Domingo Pedrol - Departamento de Bioquiacutemica y Biologiacutea Molecular - Universidad de Barcelona - Telf 934 021 214 - e-mail jcdomingoubedu
Fabricado en Espantildea por Brudy Technology - CRiera de Sant Miquel 3 - ordm ordf - 000 Barcelona - Tel 93 17 03
DESVENTAJAS
Un reciente meta-anaacutelisis realizado por Hooper et al ha concluido que no se
ha podido documentar de manera objetiva y estadiacutesticamente significativa
un efecto beneficioso en el consumo de PUFAs omega-3 en la mortalidad rela-
cionada con eventos cardiovasculares o caacutencer 1
Tampoco se ha documentado de manera objetiva y estadiacutesticamente signifi-
cativa el efecto de los omega-3 en la reduccioacuten del riesgo de desarrollar caacuten-
cer2
1 Hooper L et al Risks and benefits of omega 3 fats for mortality cardiovascular disease and cancer systematic review BMJ 2006 332752-760 Balk EM et al Effects of omega-3 fatty acids on serum markers of cardiovascu-lar disease risk A systematic review Atherosclerosis 2006 18919-302 MacLean CH et al Effects of omega-3 fatty acids on cancer risk a systematic review JAMA 2006 295403-15)
SIN EMBARGO
Los estudios anteriormente citados presentaban diferentes deficiencias en su
planteamiento relacionadas con la no separacioacuten de las intervenciones reali-
zadas con los diferentes aacutecidos omega-3 o mezclas de los mismos en forma de
aceite de pescado o suplementos alimenticios enriquecidos
Tambieacuten se ha observado una falta de homogeneidad en cuanto a la duracioacuten
y las dosis en cada tratamiento
Asiacute como tampoco se ha valorado la importancia de la estructura quiacutemica en
la que se ha administrado el aacutecido omega-3 trigliceacuterido (TG) eacutester etiacutelico (EE)
o aacutecido graso libre (FA)
RECOMENDACIONES
Teniendo en cuenta esta controversia la opinioacuten de diferentes expertos es que deberiacutean mantenerse
las actuales recomendaciones en el consumo de aacutecidos grasos omega-3 pero teniendo en cuenta una
serie de criterios que deberiacutean cumplir los aacutecidos grasos omega-3 para su aplicacioacuten nutricional y
terapeacuteutica como son
Manufacturar los PUFAs omega-3 siguiendo los criterios similares a los estaacutendares farma-
ceacuteuticos que incluyen controles de calidad en todas las etapas de produccioacuten para asegu-
rar su pureza y calidad
Utilizar compuestos con un contenido miacutenimo de 0 en PUFA omega-3 de todos los
aacutecidos grasos
La relacioacuten omega-3omega- debe ser mayor de 501
Estas recomendaciones estaacuten de acuerdo con las conclusiones de un workshop sobre aacutecidos grasos
omega-3 recientemente publicadas en la revista Journal American Clinical Nutrition que ademaacutes des-
taca como punto importante la necesidad de realizar maacutes ensayos cliacutenicos que permitan calibrar el
potencial real de los aacutecidos grasos omega-3 tanto a nivel preventivo como terapeacuteutico
iquestQUEacute AacuteCIDO GRASO OMEGA-3
0
5
10
15
20
25
g10
0 g
ALA
EPA
DHA
Adipose
Rectal epith
elium
CheekHeart
MuscleLiver
SpleenRBC
Cerbral c
ortex
SpemRetin
a
Estudio transversal del contenido en aacutecidos grasos en tejidos de adultos de Estados Uni-dos Canadaacute Australia y Europa
De acuerdo con estos criterios el primer punto a resolver es la eleccioacuten del
PUFA omega-3 maacutes adecuado para un determinado tratamiento Los tres aacuteci-
dos grasos de la serie 3 maacutes importantes fisioloacutegicamente hablando son
El alfa-linoleacutenico (ALA)
El eicosapentaenoico (EPA)
El docosahexaenoico (DHA)
El DHA es el aacutecido graso omega-3 maacutes abundante en las membranas y estaacute
presente en todos los oacuterganos Es particularmente el maacutes abundante en el sis-
tema nervioso central en el esperma y en la retina ademaacutes del maacutes variable
entre los oacuterganos
Soacutelo pequentildeas cantidades de ALA y de EPA estaacuten presentes en los tejidos y el
contenido en DHA es habitualmente entre 5-30 veces superior al del EPA en
la mayoriacutea de los oacuterganos Ademaacutes el DHA es unas 100 veces maacutes abundante
que el EPA en el cerebro y la retina
iquestQUEacute AacuteCIDO GRASO OMEGA-3
Aunque los tres aacutecidos grasos estaacuten relacionados metaboacutelicamente diversos estu-
dios han demostrado que la administracioacuten de ALA no genera las cantidades fisio-
loacutegicas necesarias de DHA y de EPA En cuanto a la administracioacuten de DHA o EPA las
uacuteltimas recomendaciones sugieren que la viacutea maacutes eficiente para el incremento de las
concentraciones de un aacutecido omega-3 es la administracioacuten de dicho aacutecido especiacutefi-
camente De todas maneras en un planteamiento maacutes general la administracioacuten de
DHA garantiza una concentracioacuten baacutesica de EPA mientras que la administracioacuten
exclusiva de este uacuteltimo disminuye la concentracioacuten de DHA
En humanos la capacidad endoacutegena de convertir ALA en DHA o EPA es muy baja
o inexistente por esta razoacuten el consumo de DHA en la dieta puede ser criacutetico para
mantener la concentracioacuten adecuada de DHA en las membranas celulares BrJ
Nutr2002 88355ndash363
Retroconversioacuten de DHA-EPA en el grupo de DHA su concentracioacuten aumento un
69 y la del EPA un 29 En el grupo de EPA este crecioacute un 297 mientras que el
DHA decrecioacute un 15 AmJ ClinNutr1997 66649-59 AmJ ClinNutr2000 711085ndash94 Am
J Clin Nutr 200479765ndash73
α-Linolenic acid (183n-3)
Stearidonic (184n-3)
(204n-3)
EPA (205n-3)
DPA (225n-3)
DHA (226n-3)
iquestQUEacute AacuteCIDO GRASO OMEGA-3
El DHA es el aacutecido graso n-3 en el sistema nervioso central
Por otra parte desde un punto de vista nutricional cuyo objetivo es el de recuperar los depoacutesitos de
aacutecidos grasos omega-3 la administracioacuten de DHA garantiza una intervencioacuten en el sistema nervioso
central ya que la concentracioacuten de EPA en este tejido es puramente testimonial
Dietas que contienen un 95 de DHA inhiben completamente la degeneracioacuten de la retina inducida
por la N-Metil-N-nitrosourea en cambio las dietas que contienen un 475 de DHA (grupo EPA+DHA) o
soacutelo EPA no tuvieron un efecto protector Exp Eye Res 2003 77167ndash173
El DHA es el precursor de los docosatrienos y las resolvinas de la serie D que regulan los procesos aso-
ciados a la inflamacioacuten y su resolucioacuten final J Biol Chem 2003 27814677ndash14687
El DHA hidrolizado de los fosfoliacutepidos de membrana es el precursor endoacutegeno de la respuesta neuro-
protectiva frente reperfusioacuten isqueacutemica J Biol Chem 2003 278 43807ndash43817
La siacutentesis del 1017S-docosatrieno neuroprotectina D1 protege a las ceacutelulas de la retina de la apop-
tosis inducida por estreacutes oxidativo de una manera similar se sugiere que protegeraacute a las neuronas Proc
Natl Acad Sci USA 2004 101 8491ndash8496
10
BIODISPONIBILIDAD
Otro aspecto interesante que puede condicionar la eficacia de un determina-
do tratamiento es la biodisponibilidad de los aacutecidos omega-3 Existen nume-
rosos estudios en animales que han demostrado que los gliceacuteridos son los
transportadores maacutes eficaces para los aacutecidos grasos Ademaacutes los gliceacuteridos
se consideran la forma quiacutemica maacutes favorable desde un punto de vista ali-
mentario superior a los eacutesteres etiacutelicos de aacutecidos grasos insaturados los cuales
presentan una absorcioacuten intestinal deteriorada de los aacutecidos grasos n-3 ob-
servados como se ha demostrado en animales de laboratorio Tambieacuten se ha
demostrado que los eacutesteres etiacutelicos de aacutecidos grasos no saturados se hidro-
lizan a una velocidad maacutes lenta que los gliceacuteridos correspondientes
Un estudio en humanos realizado por la empresa farmaceacuteutica SIGMA-TAU
demostroacute que los trigliceacuteridos obtenidos por reesterificacioacuten presentan una
biodisponibilidad similar al aceite de pescado natural y muy superior a la
de los aacutecidos grasos libres que ademaacutes generan problemas digestivos y tam-
bieacuten superior a la de los eacutesteres etiacutelicos cuya uacutenica ventaja es la pureza que se
puede alcanzar pero por contra generan etanol que puede ser toacutexico a dosis
elevadas
TIPO DE ACEITE CONTENIDO EN PUFA N-3 () BIODISPONIBILIDAD
Aceite de pescado 25-30 7-100
Eacutesteres etiacutelicos gt85 21-57
Aacutecidos grasos libres gt65 51
TrigliceacuteridosRe-esterificados min 70-75 9
En un estudio In vivo en 24 personas sanas comparando una sola toma oral de PUFAs n-3 en estructuras quiacutemicas diferentes se demostroacute un mayor nivel plasmaacutetico de PUFAs n-3 en el grupo tratado con aceite re-esterificado
Extraiacutedo de una publicacioacuten de la empresa SIGMA-TAU
BIOACTIVIDAD - SEGURIDAD
DHA TG QUIacuteMICO ALGATRIUM PLUS
bull pH extremosbull Temperaturas altas (destilacioacuten)bull Reactivos quiacutemicos
bull pH fisioloacutegicobull Temperaturas bajasbull Sin reactivos quiacutemicos
bull Nivel bajo de trigliceacuteridosbull Productos de reaccioacuten secundariosbull Purificacioacuten cromatograacutefica
bull Nivel alto de trigliceacuteridosbull Sin productos secundariosbull No necesita maacutes purificacioacuten
bull Migracioacuten de dobles enlacesbull Oxidacioacuten de dobles enlacesbull Isomerizaciones CisTrans
bull Preservacioacuten de dobles enlacesbull No oxidacioacuten de dobles enlacesbull No isomerizaciones Cis Trans
La siacutentesis industrial de trigliceacuteridos se puede realizar quiacutemicamente o por
viacutea enzimaacutetica Las diferencias en las condiciones de reaccioacuten entre un pro-
ceso de siacutentesis quiacutemico y uno enzimaacutetico determinaraacuten las calidades finales
para cada producto El uso de meacutetodos tradicionales quiacutemicos (separacioacuten
cromatograacutefica destilacioacuten molecular etc) para producir concentrados de
PUFAs omega-3 implican el uso de pHs extremos y de altas temperaturas que
pueden destruir parcialmente la estructura de los dobles enlaces todos cis del
PUFA omega-3 natural por oxidacioacuten isomerizacioacuten o migracioacuten
Por otra parte las condiciones suaves (temperatura menor de 50degC pH 6-8 y
menos productos quiacutemicos) usadas en la hidroacutelisis enzimaacutetica proporcionan
un alternativa prometedora que podriacutea tambieacuten ahorrar energiacutea y aumentar
la selectividad del producto La preservacioacuten de los enlaces dobles conferiraacute
a la moleacutecula una mayor bioactividad
1
ALGATRIUM PLUS
ESPECIFICACIOacuteN UNIDADES LIacuteMITES
Acidez mg KOHg 30 maacutex
Contenido antioxidante g100g 10 - 11
Densidad a 20ordmC Kgl 0930 - 0940
Aacutecido graso DHA (C n3) FA 70 miacuten
Aacutecido graso DPA (C22 5n3) FA 8 maacutex
Aacutecido graso EPA (C0 5n3) FA 10 maacutex
Aacutecidos grasos Omega-3 FA 5 miacuten
Iacutendice de Peroacutexidos meq O2Kg 50 maacutex
Residuo seco g100g 010 maacutex
Muchos estudios demuestran que la bioactividad de los aceites omega-3 y
principalmente del DHA estaacute relacionada directamente con su contenido res-
pecto a los aacutecidos grasos totales los cuaacuteles pueden competir con los omega-3
en un metabolismo concreto Para obtener el maacuteximo nivel de bioactividad
Brudy ha dirigido sus esfuerzos en dos objetivos baacutesicos
Tener el maacuteximo contenido de DHA en el trigliceacuterido
Reducir al maacuteximo el contenido de EPA
Ademaacutes este aceite cumple todos los requisitos legales en cuanto a iacutendice de
peroacutexidos acidez contenido antioxidante nivel de metales pesadoshellip
Especificaciones del aceite omega-3 utilizado en estos estudios
De todos los aceites que hay en el mercado Algatrium Plus (DHA 70e) es
el aceite enriquecido con un contenido en omega-3 global y en DHA maacutes
alto
0
10
20
30
40
50
Comparativa de diferentes aceites omega-3 en el mercado
DPA
EPA
Algatrium Plus
OMEGA-3
60
70
80
90
P M HSO DHA 50CHEM ALGATRIUM PLUS
ALGATRIUM PLUS
1
OMEGA-3 OMEGA-3 SIacuteNTESIS INSA MG DG CHOL PLM TG EE GTOTAL
A PLUS 70 ENZIMAacuteTICO 05 nd 71 nd nd 865 59 936
FISH 20 ATUacuteN 47 nd 22 42 nd 889 nd 911
DHA 50 QUIacuteMICO 27 43 103 35 228 401 140 532
DHA 50 QUIacuteMICO-PURIFICADO 21 nd 188 nd nd 664 52 852
La biodisponibilidad del aceite es directamente pro-
porcional al tipo de moleacuteculas que lo compongan
concretamente a su composicioacuten lipiacutedica Los acei-
tes naturales contienen maacutes del 90 de materia en
forma de gliceacuterido que proporciona una biodispo-
nibilidad maacutexima Algatrium Plus es muy similar a
un aceite natural (la composicioacuten lipiacutedica incluye un
90 de gliceacuteridos totales con un 5 en forma de
trigliceacuteridos y sin monogliceacuteridos) El DHA obteni-
do quiacutemicamente tiene un nivel bajo de trigliceacuteri-
dos (lt50) un mayor nivel de eacutesteres etiacutelicos y un
alto contenido de poliacutemeros (15-0) que no son
absorbibles y que se deben eliminar por cromatogra-
fiacutea en columna (QUIacuteMICO-PURIFICADO)
Especificaciones del aceite omega-3 utilizado en estos estudios
ALGATRIUM PLUS
Solamente los aceites de pescado o de algas naturales que no se han rees-
terificado satisfacen la legislacioacuten alimentaria en cuanto a su composicioacuten
y por lo tanto son un alimento El DHA obtenido quiacutemicamente no satisface los
requisitos de la farmacopea europea sobretodo relacionado con el nivel de
trigliceacuteridos gliceacuteridos totales y en el contenido en compuestos polimeacutericos
Es necesaria una purificacioacuten por cromatografiacutea en columna para que el pro-
ducto cumpla los requisitos de la legislacioacuten europea Algatrium Plus tiene la
misma composicioacuten que los aceites naturales y por lo tanto se consideran
un alimento
LEGISLACIOacuteN
0
10
20
30
40
50
Composicioacuten estructural Algatrium Plus
Farmacopea
DHA 50 QUIacuteMICO
DHA 50 QUIacuteMICO-PURIFICADO
60
70
80
90
INS DG PLM TG EE
100
MG FA GTotal
1
ACTIVIDAD ANTITUMORAL
Para valorar la actividad de Algatrium Plus nuestro primer obje-
tivo fue determinar su capacidad citotoacutexica antitumoral En este
sentido realizamos un estudio comparativo usando ceacutelulas tumo-
rales (HeLa) y ceacutelulas sanas como control (renales y de piel) Hemos
realizado estudios dosis-respuesta para determinar el valor de IC50
como criterio de toxicidad (es la concentracioacuten que mata al 50 de
las ceacutelulas) Hemos analizado dos variables el efecto de la estructu-
ra del liacutepido y del contenido en DHA Para un contenido en DHA del
70 de todos los aacutecidos grasos se obtuvo la misma toxicidad en
ceacutelulas tumorales con el eacutester etiacutelico (EE) el aacutecido graso libre (FA) o
el trigliceacuterido (TG) Pero en ceacutelulas renales sanas el EE tiene la mis-
ma toxicidad que en las ceacutelulas tumorales y en las ceacutelulas de piel el
FA demuestran una gran toxicidad siendo los TG la forma con un
mejor cociente de seguridad Para una misma estructura quiacutemica
el TG una disminucioacuten del contenido en DHA a 50 o al 20 (este
uacuteltimo es la concentracioacuten en el aceite de pescado) disminuye de
forma dramaacutetica el efecto citotoacutexico en las ceacutelulas del tumor Estos
resultados demuestran que la forma oacuteptima es el trigliceacuterido con
un alto contenido en DHA (Algatrium Plus)
Efectos del contenido en DHA y de la estructura quiacutemica Toxicidad celular
FA 70 1231 plusmn90 nd 722 plusmn58 17
EE 70 5663 plusmn539 726 plusmn83 710 plusmn97 798 -102
TG (Algatrium Plus) 70 7167 plusmn419 3927 plusmn375 586 plusmn88 1223 -670
TG (Quiacutemico) 50 19560 plusmn278 4136 plusmn256 5640 plusmn696 347 -073
TG (Pescado) 20 22676 plusmn279 31160 plusmn1582 13794 plusmn2864 164 -226
ESTRUCTURA DHA PIEL RENAL HeLa
RELACIOacuteNDE
SEGURIDAD
CEacuteLULASTUMORALESCEacuteLULAS SANAS
COMPOSICIOacuteNIC50 (μM)
Otra actividad interesante de los PUFAs omega-3 en caacutencer es su uso como
adyuvantes en la quimioterapia convencional En este sentido determina-
mos los efectos de Algatrium Plus a concentraciones subtoacutexicas sobre la toxi-
cidad de la Doxorrubicina y del 5-fluoroacilo La exposicioacuten simultaacutenea de las
ceacutelulas tumorales al DHA y a la droga aumenta la toxicidad de la misma dos
veces (disminuye el valor de la IC50) Por otra parte si Algatrium Plus se ha
incorporado previamente a la membrana celular este efecto potenciador au-
menta hasta 10 veces
ACTIVIDAD COMO ADYUVANTE ANTITUMORAL
Efecto del DHA sobre la actividad antitumoral de la Doxorrubicina o del 5-fluoroacilo Toxicidad celular
Este efecto potenciador depende del contenido en DHA ya que con el uso de
un aceite quiacutemico (50 en DHA) o de aceite de pescado (20 en DHA) se pier-
de progresivamente dicho efecto potenciador Tambieacuten es significativo que
este efecto no incrementa la toxicidad de los citostaacuteticos en ceacutelulas sanas
Efecto del contenido en dha sobre la actividad antitumoral de la doxorrubicina Toxicidad celular
Control 0 2953 plusmn316 (n=8)
Pre-incorporado15
10
301 plusmn54 (n=8)287 plusmn67 (n=8)370 plusmn44 (n=6)
Simultaacuteneo 5 1843 plusmn162 (n=4)
Control 0 2330 plusmn368 (n=12)
Pre-incorporado15
10
280 plusmn110 (n=7)238 plusmn101 (n=4)380 plusmn142 (n=6)
Simultaacuteneo 5 1480 plusmn801 (n=6)
LIacuteNEA CELULAR
HeLa-Epitelial (Dox)
HT-29-Colon (5-FU)
SISTEMADE ADICIOacuteN
ALGATRIUM PLUS μM IC50 (μM)
0 2953 plusmn316 11586 plusmn3699
5 287 plusmn67 10466 plusmn2304
10 370 plusmn44 10805 plusmn1742
5 1309 plusmn156 11633 plusmn1569
10 1063 plusmn207 9801 plusmn2709
5 2574 plusmn296 11575 plusmn1249
10 2365 plusmn157 15303 plusmn4813
CONTENIDOEN DHA
Control
DHAAlgatrium Plus
DHA TG 50Quiacutemico
DHA TG 20Pescado
DHA (μM)CEacuteLULA TUMORAL CEacuteLULA SANA
IC50 (nM)
1
BIOACTIVIDAD - SEGURIDAD
En los sistemas quiacutemicos puros las moleacuteculas maacutes susceptibles al ataque de los
radicales libres son los aacutecidos grasos poliinsaturados (PUFAs) como el aacutecido do-
cosahexaenoico (DHA n-3) y en general esta susceptibilidad aumenta con
el nuacutemero de dobles enlaces In vivo se supone el mismo comportamiento
Entonces iquestpor queacute el DHA una diana molecular de los radiaciones libres es el
aacutecido graso maacutes abundante en tejidos expuestos a un potencial estreacutes oxidativo
como la retina o en tejidos con un sistema antioxidante celular deficiente como
el sistema nervioso central
iquestACTIVIDAD PRO-O ANTIOXIDANTE
BIOACTIVIDAD - SEGURIDAD
En este contexto hemos estudiado la influencia de la presencia del DHA enzimaacutetico
en la membrana celular sobre la generacioacuten intracelular de radicales libres utilizando
como sistema experimental dos liacuteneas celulares humanas sanas fibroblastos de piel
(Foreskin ATC CRL 2076) y ceacutelulas epiteliales pigmentarias de la retina (ARPE-19 ATCC
CRL 2302)
La cuantificacioacuten de los radicales libres generados se ha realizado mediante metodolo-
giacuteas fluorescentes usando sondas moleculares como el HDCF-DA DHR y DHE
Como inductores exoacutegenos de estreacutes oxidativo se ha utilizado el AAPH y el sistema
xantinaxantin oxidasa y como inductores endoacutegenos la rotenona y la antimicina A
0
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE CELULAR
Como se muestra en la figura la presencia de Algatrium Plus en la
membrana celular disminuye la generacioacuten intracelular de radicales
libres despueacutes de estar sometidas las ceacutelulas a un estreacutes oxidativo
Este comportamiento es independiente de la ceacutelula en estudio (piel o
retina) y del marcador utilizado (H2DCF-DA o DHR) lo cual nos indica la
activacioacuten de un mecanismo general El nivel de proteccioacuten observado
tambieacuten es similar frente al mismo estiacutemulo oxidativo
0 50 100 150 200 250Tiempo (min)
Fluo
resc
enci
a (U
A)
-49
CEacuteLULAS DE RETINA
H2DCF-DA
0 50 100 150 200Tiempo (min)
Fluo
resc
enci
a (U
A)
-42
CEacuteLULAS DE PIEL
0 50 100 150 200 250Tiempo (min)
Fluo
resc
enci
a (U
A)
-56DHR
0 50 100 150 200 250Tiempo (min)
Fluo
resc
enci
a (U
A)
-50
Control
Algatrium Plus
Incr
emen
to
Pro
tecc
ioacuten
EFECTO ADITIVO
Algatrium Plus
0
0306
09
18
21
05 5
1215
Para determinar que la proteccioacuten antioxidante de Algatrium Plus era un
proceso general cambiamos el inductor de estreacutes oxidativo de un produc-
to quiacutemico (el AAPH) a un sistema enzimaacutetico (sistema XXO) o inductores
endoacutegenos (ROT y ANT A) Se ha observado el mismo comportamiento en
todos los casos
El efecto antioxidante de Algatrium Plus depende de la dosis mostrando
un comportamiento dosis-dependiente a la inversa El mayor efecto se ha
observado en una concentracioacuten baja de DHA mientras que a altas con-
centraciones el efecto antioxidante disminuye independientemente de la
potencia del estreacutes oxidativo
Tambieacuten el efecto antioxidante de Algatrium Plus presenta un efecto adi-
tivo con la frecuencia de la administracioacuten La administracioacuten de una do-
sis diaria inrementa el efecto antioxidante respecto a una sola administra-
cioacuten
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE CELULAR
0 50 100 150 200 250Tiempo (min)
Fluo
resc
enci
a (U
A)
-49
CEacuteLULAS DE RETINA AAPH
P
rote
ccioacute
n
ROT ANT A XXO0
10
20
3040
50
60
INDEPENDIENTE DEL INDUCTOR
P
rote
ccioacute
n
DEPENDENCIA DE LA DOSIS
Algatrium Plus
0
10
20
3040
50
60
05 5 50Dosis diaria
Una dosis
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE CELULAR
La generacioacuten intracelular de radicales libres se confirmoacute mediante
microscopia de fluorescencia confocal Las micrografiacuteas muestran una
acumulacioacuten progresiva en el tiempo de radicales libres en las ceacutelulas
control sin DHA mientras que en las que han incorporado Algatrium
Plus en su membrana el nivel intracelular de radicales libres no ha
aumentado
T= 0 min
T= 15 min
T= 30 min
CONTROL ALGATRIUM PLUS 05 μM
CEacuteLULAS DE PIEL
A nivel celular la generacioacuten de radicales libres parece ser dependiente de
la composicioacuten en aacutecidos grasos de la ceacutelula pero la influencia especiacutefica de
cada clase de aacutecido graso no ha sido estudiada
Por otra parte a nivel industrial el meacutetodo de siacutentesis usado para obtener
el aceite enriquecido en DHA puede ser muy importante en la calidad final
del producto En este sentido hemos estudiado la importancia del contenido
de DHA y del origen sinteacutetico en el efecto antioxidante
Como se puede observar en la figura una disminucioacuten del contenido en DHA
al 50 (origen quiacutemico) o al 20 (aceite de pescado) de los aacutecidos grasos to-
tales induce una disminucioacuten del efecto antioxidante en las ceacutelulas de retina
aunque en ninguacuten caso llega a ser pro-oxidante Sin embargo en ceacutelulas de
piel esta reduccioacuten es tan acusada que soacutelo Algatrium Plus es antioxidante
siendo los otros dos pro-oxidantes
Dado el caraacutecter multifactorial de un tratamiento nutricional no es aconseja-
ble administrar un producto que presente actividades divergentes en funcioacuten
del tejido al que se incorpore
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE CELULAR
CEacuteLULASDE PIEL
05 μM
5 μM
50 μM
ACEITE DE PESCADO
P
ROTE
CCIOacute
N
0
20
40
60
-20
-40
DHA TG50QUIacuteMICO
ALGATRIUMPLUS
P
ROTE
CCIOacute
N
60
20
0
CEacuteLULASDE RETINA
40
DHA quiacutemico vs Algatrium Plus
ACEITE DE PESCADO
DHA TG50QUIacuteMICO
ALGATRIUMPLUS
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE CELULAR
Si la baja actividad del aceite de origen quiacutemico (50 en DHA) pudie-
ra estar relacionado con la presencia de estructuras polimeacutericas su eli-
minacioacuten por cromatografiacutea en columna deberiacutea permitir recuperar su
actividad antioxidante Como se puede observar en la figura una mani-
pulacioacuten excesiva del producto original para eliminar contaminantes
o para mejorar sus caracteriacutesticas organoleacutepticas se traduce en una
peacuterdida de bioactividad
P
ROTE
CCIOacute
N
0
10
20
30
40
50
60
-10DHA TG50QUIacuteMICO
ALGATRIUMPLUS
DHA TG50 QUIacuteMICOPURIFICADO
(DHA)
05 μM
5 μM
50 μM
CEacuteLULAS DE RETINA
DHA quiacutemico vs Algatrium Plus
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE CELULAR
La actividad antioxidante del Algatrium Plus tambieacuten esta relacionada
con su mayor biodisponibilidad ya que un eacutester etiacutelico o un aacutecido graso
libre con el mismo contenido en DHA presenta una actividad antioxi-
dante como maacuteximo la mitad de la de Algatrium Plus
P
ROTE
CCIOacute
N
0
10
20
30
40
50
60
05 μM
(DHA)
FA-BSA
Algatrium Plus
CEacuteLULAS DE RETINA
Efecto de la estructura quiacutemica Fa vs Ee vs Tg
70
5 μM
TG 50 CHEM
EE 70
FA Aacutecido graso libre
EE Eacutester etiacutelico
TG Trigliceacuterido
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE CELULAR
Comparado con los antioxidantes normalmente utilizados en tratamien-
tos oculares a las concentraciones oacuteptimas descritas Algatrium Plus pre-
senta a todas las dosis estudiadas un efecto superior
P
ROTE
CCIOacute
N
0
10
20
30
40
50
60CEacuteLULAS DE RETINA
Algatrium Plus vs antioxidantes
Algatrium Plus
NAC mM
Cys 1 m
M
Co Q 100 μM
Vit E 100 μM
Vit C 100 μM
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE CELULAR
Incluso si estos antioxidantes se combinan o se incrementa su concen-
tracioacuten 10 oacute 100 veces
P
ROTE
CCIOacute
N
0
10
20
30
40
50
60CEacuteLULAS DE RETINA
Algatrium Plus vs antioxidantes
Algatrium Plus
ANT1
ANT1 x10
ANT1 x100ANT2
BIOACTIVIDAD
En este punto la cuestioacuten es iquestCuaacutel es el mecanismo por el cual el Algatrium Plus
ejerce este efecto antioxidante tan potente
Los Omega-3 pueden actuar a diferentes niveles en la fisiologiacutea celular La de-
fensa antioxidante celular se basa en la actividad de un nuacutemero de enzimas an-
tioxidantes junto con otros antioxidantes quiacutemicos conjuntamente previenen la
peroxidacioacuten lipiacutedica la proteiacuteca y el dantildeo en DNA Hemos estudiado el efecto de
Algatrium Plus en diversos aspectos del sistema antioxidante celular
Generacioacuten del anioacuten superoacutexido (O-)
La actividad superoacutexido dismutasa (SOD) y de la glutatioacuten peroxidasa (GPx)
La concentracioacuten intracelular de glutatioacuten (GSH)
La peroxidacioacuten lipiacutedica
Y el dantildeo en DNA
BIOACTIVIDAD
Mecanismo de actividad antioxidante
CellularRespiration
OxidativeBurst
EnvironmentalFactors
O-SOD
GSH
GPx
LipidPeroxidation
ProteinPeroxidation
DNA Damage
HO
HO + O
HO
GSSG
GRed
Catalase
OH
1 3
30
BIOACTIVIDAD
Mecanismo de actividad antioxidante
CellularRespiration
OxidativeBurst
EnvironmentalFactors
O-SOD
GSH
GPx
LipidPeroxidation
ProteinPeroxidation
DNA Damage
HO
HO + O
HO
GSSG
GRed
Catalase
OH
1 3
=
+
BIOACTIVIDAD
Hemos encontrado que la incorporacioacuten de Algatrium Plus en las ceacutelulas disminuye la genera-
cioacuten del anioacuten superoacutexido la peroxidacioacuten lipiacutedica de una manera dosis-dependiente inversa y
el dantildeo en DNA
Los niveles inferiores del anioacuten superoacutexido bajo estreacutes oxidativo en ceacutelulas tratadas con Alga-
trium Plus puede ser debido a la actividad maacutes alta de la SOD respecto al control
Por otra parte la actividad de la GPx en las ceacutelulas tratadas no era diferente de las ceacutelulas control
con o sin estreacutes oxidativo
El cambio maacutes significativo fue el incremento (300) de la concentracioacuten intracelular de GSH
relacionado con un incremento de la siacutentesis de novo
Estos resultados nos indican que Algatrium Plus ejerce su efecto antioxidante mediante un
incremento de la actividad del sistema antioxidante celular sin una participacioacuten directa en
el mismo que lo diferencia de los antioxidantes quiacutemicos convencionales
Esto sugiere que las ceacutelulas toleran cantidades pequentildeas de DHA y que eacuteste actuacutea a modo de
estiacutemulo para evitar cualquier acumulacioacuten de radicales libres la incorporacioacuten de Algatrium
Plus en las biomembranes provoca una respuesta celular antioxidante adaptativa
3
ESTUDIOS IN VIVO
Para valorar la accioacuten de Algatrium Plus se utilizoacute como modelo de es-
treacutes oxidativo el inducido por el ejercicio fiacutesico aerobio
Se sometioacute a deportistas a un esfuerzo continuado al 75 de su consu-
mo maacuteximo de oxiacutegeno durante 90 minutos lo cual supone una produc-
cioacuten suficiente de radicales libres y estreacutes oxidativo como para conocer
la capacidad antioxidante de cualquier manipulacioacuten dieteacutetica
Para dar credibilidad a los resultados obtenidos in vitro es necesario una
constatacioacuten de los mismos in vivo En este sentido se ha desarrollado
un ensayo cliacutenico controlado cruzadov de 4 meses de duracioacuten (N = 40
deportistas) a una dosis de 2 gdiacutea de Algatrium Plus
Las variables a estudiar fueron el dantildeo en DNA y paraacutemetros antioxidan-
tes seacutericos
Se observoacute un aumento estadiacutesticamente significativo en la capacidad
antioxidante total del serum (plt005) antes y despueacutes de la realizacioacuten
de las pruebas rectangulares en los deportistas que habiacutean ingerido Al-
gatrium Plus durante un periodo de tres semanas a cuatro meses
H2O
2 (n
mol
L m
in)
150
160
170
180
190
200
BASAL
CAPACIDAD ANTIOXIDANTE TOTAL
Paraacutemetros antioxidantes in vivo
4 MESES
ESTUDIOS IN VIVO
20 DIacuteAS
Algatrium Plus
Control
3
El nivel plasmaacutetico de MDA como iacutendice de peroxidacioacuten lipiacutedica fue
aumentando durante la realizacioacuten de todas las pruebas de esfuerzo
(plt0035) Despueacutes de la ingesta de Algatrium Plus durante 3 semanas
el dantildeo oxidativo a nivel lipiacutedico en las mismas condiciones disminuye
praacutecticamente a nivel basal (plt005) observaacutendose a los 4 meses de tra-
tamiento un efecto protector en esta variable MD
A (n
mol
L)
10
20
30
40
60
BASAL
PEROXIDACIOacuteN LIPIacuteDICA
Paraacutemetros antioxidantes in vivo
4 MESES
ESTUDIOS IN VIVO
20 DIacuteAS
50
0
-10
Hay un aumento en el dantildeo oxidativo del DNA durante la realizacioacuten de
las pruebas rectangulares del esfuerzo medidas como el nivel de 8-oxo-
dG en la orina (plt0011) La ingesta de Algatrium Plus durante 3 sema-
nas y hasta 4 meses protege el DNA del dantildeo oxidativo inducido por el
esfuerzo de una manera significativa (plt0035)
8-ox
o-dG
(pm
olK
gx24
h)
100
200
300
400
600
BASAL
DANtildeO MOLECULAR EN EL DNA
Paraacutemetros antioxidantes in vivo
4 MESES
ESTUDIOS IN VIVO
20 DIacuteAS
500
0
700
800
900
3
Como efectos colaterales en el rendimiento deportivo se ha observado
que los niveles de glicemia disminuyen durante la realizacioacuten de la prue-
ba rectangular de esfuerzo (plt00009) Esta reduccioacuten en la glicemia era
menor despueacutes de 3 semanas de ingesta de Algatrium Plus se traduciacutea
en un aumento del nivel de glicemia a los 4 meses de tratamiento con
Algatrium Plus
mg
dL
-6
-4
-2
BASAL
VARIACIOacuteN EN LA CONCENTRACIOacuteN DE GLUCOSA
Variables fisioloacutegicas de rendimiento deportivo
4 MESES
ESTUDIOS IN VIVO
3 SEMANAS
4
0
-8
2
mL
min
2600
2650
2700
BASAL
CONSUMO DE OXIacuteGENO
Variables fisioloacutegicas de rendimiento deportivo
4 MESES
ESTUDIOS IN VIVO
3 SEMANAS
2900
2550
2850Tambieacuten se ha observado un aumento significativo del consumo abso-
luto (plt0019) y relativo (plt0036) de oxiacutegeno determinado en el umbral
del esfuerzo triangular con la ingesta de Algatrium Plus hasta 4 meses
Estos resultados parecen indicar que la ingesta de Algatrium PLus pue-
de incrementar el rendimiento deportivo
2750
2800
3
CONCLUSIONES
Los aacutecidos grasos omega-3 son un concepto vigente tanto desde un punto de
vista nutricional como terapeacuteutico con un alto potencial de desarrollo
La aplicacioacuten de los aacutecidos grasos omega-3 en estos campos requiere de produc-
tos manufacturados de acuerdo con los estaacutendares que se aplican a productos
farmaceacuteuticos que incluyen controles de calidad para asegurar su pureza y cali-
dad estructural que condiciona su bioactividad Como estaacutendar es exigible una
riqueza miacutenima superior al 5 en una estructura quiacutemica muy biodisponible
como un trigliceacuterido
La incorporacioacuten de Algatrium Plus en las membranas celulares no soacutelo no pro-
mueve la peroxidacioacuten lipiacutedica sino que actuacutea como un activador del sistema
antioxidante celular probablemente como consecuencia de una respuesta adap-
tativa de la ceacutelula
INFORMACIOacuteN LEGAL
ALGATRIUM es una Marca Internacional propiedad de BRUDY TECHNOLOGY
El uso de DHA de alta concentracioacuten para el tratamiento de enfermedades tu-
morales estaacute protegido por la Patente Internacional nordm200501141 Propiedad de
BRUDY TECHNOLOGY
La comercializacioacuten y el uso de Omega-3 Antioxidantes estaacute protegido por la
Patente Internacional nordm200503202 propiedad de BRUDY TECHNOLOGY
Dr Joan C Domingo Pedrol - Departamento de Bioquiacutemica y Biologiacutea Molecular - Universidad de Barcelona - Telf 934 021 214 - e-mail jcdomingoubedu
Fabricado en Espantildea por Brudy Technology - CRiera de Sant Miquel 3 - ordm ordf - 000 Barcelona - Tel 93 17 03
RECOMENDACIONES
Teniendo en cuenta esta controversia la opinioacuten de diferentes expertos es que deberiacutean mantenerse
las actuales recomendaciones en el consumo de aacutecidos grasos omega-3 pero teniendo en cuenta una
serie de criterios que deberiacutean cumplir los aacutecidos grasos omega-3 para su aplicacioacuten nutricional y
terapeacuteutica como son
Manufacturar los PUFAs omega-3 siguiendo los criterios similares a los estaacutendares farma-
ceacuteuticos que incluyen controles de calidad en todas las etapas de produccioacuten para asegu-
rar su pureza y calidad
Utilizar compuestos con un contenido miacutenimo de 0 en PUFA omega-3 de todos los
aacutecidos grasos
La relacioacuten omega-3omega- debe ser mayor de 501
Estas recomendaciones estaacuten de acuerdo con las conclusiones de un workshop sobre aacutecidos grasos
omega-3 recientemente publicadas en la revista Journal American Clinical Nutrition que ademaacutes des-
taca como punto importante la necesidad de realizar maacutes ensayos cliacutenicos que permitan calibrar el
potencial real de los aacutecidos grasos omega-3 tanto a nivel preventivo como terapeacuteutico
iquestQUEacute AacuteCIDO GRASO OMEGA-3
0
5
10
15
20
25
g10
0 g
ALA
EPA
DHA
Adipose
Rectal epith
elium
CheekHeart
MuscleLiver
SpleenRBC
Cerbral c
ortex
SpemRetin
a
Estudio transversal del contenido en aacutecidos grasos en tejidos de adultos de Estados Uni-dos Canadaacute Australia y Europa
De acuerdo con estos criterios el primer punto a resolver es la eleccioacuten del
PUFA omega-3 maacutes adecuado para un determinado tratamiento Los tres aacuteci-
dos grasos de la serie 3 maacutes importantes fisioloacutegicamente hablando son
El alfa-linoleacutenico (ALA)
El eicosapentaenoico (EPA)
El docosahexaenoico (DHA)
El DHA es el aacutecido graso omega-3 maacutes abundante en las membranas y estaacute
presente en todos los oacuterganos Es particularmente el maacutes abundante en el sis-
tema nervioso central en el esperma y en la retina ademaacutes del maacutes variable
entre los oacuterganos
Soacutelo pequentildeas cantidades de ALA y de EPA estaacuten presentes en los tejidos y el
contenido en DHA es habitualmente entre 5-30 veces superior al del EPA en
la mayoriacutea de los oacuterganos Ademaacutes el DHA es unas 100 veces maacutes abundante
que el EPA en el cerebro y la retina
iquestQUEacute AacuteCIDO GRASO OMEGA-3
Aunque los tres aacutecidos grasos estaacuten relacionados metaboacutelicamente diversos estu-
dios han demostrado que la administracioacuten de ALA no genera las cantidades fisio-
loacutegicas necesarias de DHA y de EPA En cuanto a la administracioacuten de DHA o EPA las
uacuteltimas recomendaciones sugieren que la viacutea maacutes eficiente para el incremento de las
concentraciones de un aacutecido omega-3 es la administracioacuten de dicho aacutecido especiacutefi-
camente De todas maneras en un planteamiento maacutes general la administracioacuten de
DHA garantiza una concentracioacuten baacutesica de EPA mientras que la administracioacuten
exclusiva de este uacuteltimo disminuye la concentracioacuten de DHA
En humanos la capacidad endoacutegena de convertir ALA en DHA o EPA es muy baja
o inexistente por esta razoacuten el consumo de DHA en la dieta puede ser criacutetico para
mantener la concentracioacuten adecuada de DHA en las membranas celulares BrJ
Nutr2002 88355ndash363
Retroconversioacuten de DHA-EPA en el grupo de DHA su concentracioacuten aumento un
69 y la del EPA un 29 En el grupo de EPA este crecioacute un 297 mientras que el
DHA decrecioacute un 15 AmJ ClinNutr1997 66649-59 AmJ ClinNutr2000 711085ndash94 Am
J Clin Nutr 200479765ndash73
α-Linolenic acid (183n-3)
Stearidonic (184n-3)
(204n-3)
EPA (205n-3)
DPA (225n-3)
DHA (226n-3)
iquestQUEacute AacuteCIDO GRASO OMEGA-3
El DHA es el aacutecido graso n-3 en el sistema nervioso central
Por otra parte desde un punto de vista nutricional cuyo objetivo es el de recuperar los depoacutesitos de
aacutecidos grasos omega-3 la administracioacuten de DHA garantiza una intervencioacuten en el sistema nervioso
central ya que la concentracioacuten de EPA en este tejido es puramente testimonial
Dietas que contienen un 95 de DHA inhiben completamente la degeneracioacuten de la retina inducida
por la N-Metil-N-nitrosourea en cambio las dietas que contienen un 475 de DHA (grupo EPA+DHA) o
soacutelo EPA no tuvieron un efecto protector Exp Eye Res 2003 77167ndash173
El DHA es el precursor de los docosatrienos y las resolvinas de la serie D que regulan los procesos aso-
ciados a la inflamacioacuten y su resolucioacuten final J Biol Chem 2003 27814677ndash14687
El DHA hidrolizado de los fosfoliacutepidos de membrana es el precursor endoacutegeno de la respuesta neuro-
protectiva frente reperfusioacuten isqueacutemica J Biol Chem 2003 278 43807ndash43817
La siacutentesis del 1017S-docosatrieno neuroprotectina D1 protege a las ceacutelulas de la retina de la apop-
tosis inducida por estreacutes oxidativo de una manera similar se sugiere que protegeraacute a las neuronas Proc
Natl Acad Sci USA 2004 101 8491ndash8496
10
BIODISPONIBILIDAD
Otro aspecto interesante que puede condicionar la eficacia de un determina-
do tratamiento es la biodisponibilidad de los aacutecidos omega-3 Existen nume-
rosos estudios en animales que han demostrado que los gliceacuteridos son los
transportadores maacutes eficaces para los aacutecidos grasos Ademaacutes los gliceacuteridos
se consideran la forma quiacutemica maacutes favorable desde un punto de vista ali-
mentario superior a los eacutesteres etiacutelicos de aacutecidos grasos insaturados los cuales
presentan una absorcioacuten intestinal deteriorada de los aacutecidos grasos n-3 ob-
servados como se ha demostrado en animales de laboratorio Tambieacuten se ha
demostrado que los eacutesteres etiacutelicos de aacutecidos grasos no saturados se hidro-
lizan a una velocidad maacutes lenta que los gliceacuteridos correspondientes
Un estudio en humanos realizado por la empresa farmaceacuteutica SIGMA-TAU
demostroacute que los trigliceacuteridos obtenidos por reesterificacioacuten presentan una
biodisponibilidad similar al aceite de pescado natural y muy superior a la
de los aacutecidos grasos libres que ademaacutes generan problemas digestivos y tam-
bieacuten superior a la de los eacutesteres etiacutelicos cuya uacutenica ventaja es la pureza que se
puede alcanzar pero por contra generan etanol que puede ser toacutexico a dosis
elevadas
TIPO DE ACEITE CONTENIDO EN PUFA N-3 () BIODISPONIBILIDAD
Aceite de pescado 25-30 7-100
Eacutesteres etiacutelicos gt85 21-57
Aacutecidos grasos libres gt65 51
TrigliceacuteridosRe-esterificados min 70-75 9
En un estudio In vivo en 24 personas sanas comparando una sola toma oral de PUFAs n-3 en estructuras quiacutemicas diferentes se demostroacute un mayor nivel plasmaacutetico de PUFAs n-3 en el grupo tratado con aceite re-esterificado
Extraiacutedo de una publicacioacuten de la empresa SIGMA-TAU
BIOACTIVIDAD - SEGURIDAD
DHA TG QUIacuteMICO ALGATRIUM PLUS
bull pH extremosbull Temperaturas altas (destilacioacuten)bull Reactivos quiacutemicos
bull pH fisioloacutegicobull Temperaturas bajasbull Sin reactivos quiacutemicos
bull Nivel bajo de trigliceacuteridosbull Productos de reaccioacuten secundariosbull Purificacioacuten cromatograacutefica
bull Nivel alto de trigliceacuteridosbull Sin productos secundariosbull No necesita maacutes purificacioacuten
bull Migracioacuten de dobles enlacesbull Oxidacioacuten de dobles enlacesbull Isomerizaciones CisTrans
bull Preservacioacuten de dobles enlacesbull No oxidacioacuten de dobles enlacesbull No isomerizaciones Cis Trans
La siacutentesis industrial de trigliceacuteridos se puede realizar quiacutemicamente o por
viacutea enzimaacutetica Las diferencias en las condiciones de reaccioacuten entre un pro-
ceso de siacutentesis quiacutemico y uno enzimaacutetico determinaraacuten las calidades finales
para cada producto El uso de meacutetodos tradicionales quiacutemicos (separacioacuten
cromatograacutefica destilacioacuten molecular etc) para producir concentrados de
PUFAs omega-3 implican el uso de pHs extremos y de altas temperaturas que
pueden destruir parcialmente la estructura de los dobles enlaces todos cis del
PUFA omega-3 natural por oxidacioacuten isomerizacioacuten o migracioacuten
Por otra parte las condiciones suaves (temperatura menor de 50degC pH 6-8 y
menos productos quiacutemicos) usadas en la hidroacutelisis enzimaacutetica proporcionan
un alternativa prometedora que podriacutea tambieacuten ahorrar energiacutea y aumentar
la selectividad del producto La preservacioacuten de los enlaces dobles conferiraacute
a la moleacutecula una mayor bioactividad
1
ALGATRIUM PLUS
ESPECIFICACIOacuteN UNIDADES LIacuteMITES
Acidez mg KOHg 30 maacutex
Contenido antioxidante g100g 10 - 11
Densidad a 20ordmC Kgl 0930 - 0940
Aacutecido graso DHA (C n3) FA 70 miacuten
Aacutecido graso DPA (C22 5n3) FA 8 maacutex
Aacutecido graso EPA (C0 5n3) FA 10 maacutex
Aacutecidos grasos Omega-3 FA 5 miacuten
Iacutendice de Peroacutexidos meq O2Kg 50 maacutex
Residuo seco g100g 010 maacutex
Muchos estudios demuestran que la bioactividad de los aceites omega-3 y
principalmente del DHA estaacute relacionada directamente con su contenido res-
pecto a los aacutecidos grasos totales los cuaacuteles pueden competir con los omega-3
en un metabolismo concreto Para obtener el maacuteximo nivel de bioactividad
Brudy ha dirigido sus esfuerzos en dos objetivos baacutesicos
Tener el maacuteximo contenido de DHA en el trigliceacuterido
Reducir al maacuteximo el contenido de EPA
Ademaacutes este aceite cumple todos los requisitos legales en cuanto a iacutendice de
peroacutexidos acidez contenido antioxidante nivel de metales pesadoshellip
Especificaciones del aceite omega-3 utilizado en estos estudios
De todos los aceites que hay en el mercado Algatrium Plus (DHA 70e) es
el aceite enriquecido con un contenido en omega-3 global y en DHA maacutes
alto
0
10
20
30
40
50
Comparativa de diferentes aceites omega-3 en el mercado
DPA
EPA
Algatrium Plus
OMEGA-3
60
70
80
90
P M HSO DHA 50CHEM ALGATRIUM PLUS
ALGATRIUM PLUS
1
OMEGA-3 OMEGA-3 SIacuteNTESIS INSA MG DG CHOL PLM TG EE GTOTAL
A PLUS 70 ENZIMAacuteTICO 05 nd 71 nd nd 865 59 936
FISH 20 ATUacuteN 47 nd 22 42 nd 889 nd 911
DHA 50 QUIacuteMICO 27 43 103 35 228 401 140 532
DHA 50 QUIacuteMICO-PURIFICADO 21 nd 188 nd nd 664 52 852
La biodisponibilidad del aceite es directamente pro-
porcional al tipo de moleacuteculas que lo compongan
concretamente a su composicioacuten lipiacutedica Los acei-
tes naturales contienen maacutes del 90 de materia en
forma de gliceacuterido que proporciona una biodispo-
nibilidad maacutexima Algatrium Plus es muy similar a
un aceite natural (la composicioacuten lipiacutedica incluye un
90 de gliceacuteridos totales con un 5 en forma de
trigliceacuteridos y sin monogliceacuteridos) El DHA obteni-
do quiacutemicamente tiene un nivel bajo de trigliceacuteri-
dos (lt50) un mayor nivel de eacutesteres etiacutelicos y un
alto contenido de poliacutemeros (15-0) que no son
absorbibles y que se deben eliminar por cromatogra-
fiacutea en columna (QUIacuteMICO-PURIFICADO)
Especificaciones del aceite omega-3 utilizado en estos estudios
ALGATRIUM PLUS
Solamente los aceites de pescado o de algas naturales que no se han rees-
terificado satisfacen la legislacioacuten alimentaria en cuanto a su composicioacuten
y por lo tanto son un alimento El DHA obtenido quiacutemicamente no satisface los
requisitos de la farmacopea europea sobretodo relacionado con el nivel de
trigliceacuteridos gliceacuteridos totales y en el contenido en compuestos polimeacutericos
Es necesaria una purificacioacuten por cromatografiacutea en columna para que el pro-
ducto cumpla los requisitos de la legislacioacuten europea Algatrium Plus tiene la
misma composicioacuten que los aceites naturales y por lo tanto se consideran
un alimento
LEGISLACIOacuteN
0
10
20
30
40
50
Composicioacuten estructural Algatrium Plus
Farmacopea
DHA 50 QUIacuteMICO
DHA 50 QUIacuteMICO-PURIFICADO
60
70
80
90
INS DG PLM TG EE
100
MG FA GTotal
1
ACTIVIDAD ANTITUMORAL
Para valorar la actividad de Algatrium Plus nuestro primer obje-
tivo fue determinar su capacidad citotoacutexica antitumoral En este
sentido realizamos un estudio comparativo usando ceacutelulas tumo-
rales (HeLa) y ceacutelulas sanas como control (renales y de piel) Hemos
realizado estudios dosis-respuesta para determinar el valor de IC50
como criterio de toxicidad (es la concentracioacuten que mata al 50 de
las ceacutelulas) Hemos analizado dos variables el efecto de la estructu-
ra del liacutepido y del contenido en DHA Para un contenido en DHA del
70 de todos los aacutecidos grasos se obtuvo la misma toxicidad en
ceacutelulas tumorales con el eacutester etiacutelico (EE) el aacutecido graso libre (FA) o
el trigliceacuterido (TG) Pero en ceacutelulas renales sanas el EE tiene la mis-
ma toxicidad que en las ceacutelulas tumorales y en las ceacutelulas de piel el
FA demuestran una gran toxicidad siendo los TG la forma con un
mejor cociente de seguridad Para una misma estructura quiacutemica
el TG una disminucioacuten del contenido en DHA a 50 o al 20 (este
uacuteltimo es la concentracioacuten en el aceite de pescado) disminuye de
forma dramaacutetica el efecto citotoacutexico en las ceacutelulas del tumor Estos
resultados demuestran que la forma oacuteptima es el trigliceacuterido con
un alto contenido en DHA (Algatrium Plus)
Efectos del contenido en DHA y de la estructura quiacutemica Toxicidad celular
FA 70 1231 plusmn90 nd 722 plusmn58 17
EE 70 5663 plusmn539 726 plusmn83 710 plusmn97 798 -102
TG (Algatrium Plus) 70 7167 plusmn419 3927 plusmn375 586 plusmn88 1223 -670
TG (Quiacutemico) 50 19560 plusmn278 4136 plusmn256 5640 plusmn696 347 -073
TG (Pescado) 20 22676 plusmn279 31160 plusmn1582 13794 plusmn2864 164 -226
ESTRUCTURA DHA PIEL RENAL HeLa
RELACIOacuteNDE
SEGURIDAD
CEacuteLULASTUMORALESCEacuteLULAS SANAS
COMPOSICIOacuteNIC50 (μM)
Otra actividad interesante de los PUFAs omega-3 en caacutencer es su uso como
adyuvantes en la quimioterapia convencional En este sentido determina-
mos los efectos de Algatrium Plus a concentraciones subtoacutexicas sobre la toxi-
cidad de la Doxorrubicina y del 5-fluoroacilo La exposicioacuten simultaacutenea de las
ceacutelulas tumorales al DHA y a la droga aumenta la toxicidad de la misma dos
veces (disminuye el valor de la IC50) Por otra parte si Algatrium Plus se ha
incorporado previamente a la membrana celular este efecto potenciador au-
menta hasta 10 veces
ACTIVIDAD COMO ADYUVANTE ANTITUMORAL
Efecto del DHA sobre la actividad antitumoral de la Doxorrubicina o del 5-fluoroacilo Toxicidad celular
Este efecto potenciador depende del contenido en DHA ya que con el uso de
un aceite quiacutemico (50 en DHA) o de aceite de pescado (20 en DHA) se pier-
de progresivamente dicho efecto potenciador Tambieacuten es significativo que
este efecto no incrementa la toxicidad de los citostaacuteticos en ceacutelulas sanas
Efecto del contenido en dha sobre la actividad antitumoral de la doxorrubicina Toxicidad celular
Control 0 2953 plusmn316 (n=8)
Pre-incorporado15
10
301 plusmn54 (n=8)287 plusmn67 (n=8)370 plusmn44 (n=6)
Simultaacuteneo 5 1843 plusmn162 (n=4)
Control 0 2330 plusmn368 (n=12)
Pre-incorporado15
10
280 plusmn110 (n=7)238 plusmn101 (n=4)380 plusmn142 (n=6)
Simultaacuteneo 5 1480 plusmn801 (n=6)
LIacuteNEA CELULAR
HeLa-Epitelial (Dox)
HT-29-Colon (5-FU)
SISTEMADE ADICIOacuteN
ALGATRIUM PLUS μM IC50 (μM)
0 2953 plusmn316 11586 plusmn3699
5 287 plusmn67 10466 plusmn2304
10 370 plusmn44 10805 plusmn1742
5 1309 plusmn156 11633 plusmn1569
10 1063 plusmn207 9801 plusmn2709
5 2574 plusmn296 11575 plusmn1249
10 2365 plusmn157 15303 plusmn4813
CONTENIDOEN DHA
Control
DHAAlgatrium Plus
DHA TG 50Quiacutemico
DHA TG 20Pescado
DHA (μM)CEacuteLULA TUMORAL CEacuteLULA SANA
IC50 (nM)
1
BIOACTIVIDAD - SEGURIDAD
En los sistemas quiacutemicos puros las moleacuteculas maacutes susceptibles al ataque de los
radicales libres son los aacutecidos grasos poliinsaturados (PUFAs) como el aacutecido do-
cosahexaenoico (DHA n-3) y en general esta susceptibilidad aumenta con
el nuacutemero de dobles enlaces In vivo se supone el mismo comportamiento
Entonces iquestpor queacute el DHA una diana molecular de los radiaciones libres es el
aacutecido graso maacutes abundante en tejidos expuestos a un potencial estreacutes oxidativo
como la retina o en tejidos con un sistema antioxidante celular deficiente como
el sistema nervioso central
iquestACTIVIDAD PRO-O ANTIOXIDANTE
BIOACTIVIDAD - SEGURIDAD
En este contexto hemos estudiado la influencia de la presencia del DHA enzimaacutetico
en la membrana celular sobre la generacioacuten intracelular de radicales libres utilizando
como sistema experimental dos liacuteneas celulares humanas sanas fibroblastos de piel
(Foreskin ATC CRL 2076) y ceacutelulas epiteliales pigmentarias de la retina (ARPE-19 ATCC
CRL 2302)
La cuantificacioacuten de los radicales libres generados se ha realizado mediante metodolo-
giacuteas fluorescentes usando sondas moleculares como el HDCF-DA DHR y DHE
Como inductores exoacutegenos de estreacutes oxidativo se ha utilizado el AAPH y el sistema
xantinaxantin oxidasa y como inductores endoacutegenos la rotenona y la antimicina A
0
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE CELULAR
Como se muestra en la figura la presencia de Algatrium Plus en la
membrana celular disminuye la generacioacuten intracelular de radicales
libres despueacutes de estar sometidas las ceacutelulas a un estreacutes oxidativo
Este comportamiento es independiente de la ceacutelula en estudio (piel o
retina) y del marcador utilizado (H2DCF-DA o DHR) lo cual nos indica la
activacioacuten de un mecanismo general El nivel de proteccioacuten observado
tambieacuten es similar frente al mismo estiacutemulo oxidativo
0 50 100 150 200 250Tiempo (min)
Fluo
resc
enci
a (U
A)
-49
CEacuteLULAS DE RETINA
H2DCF-DA
0 50 100 150 200Tiempo (min)
Fluo
resc
enci
a (U
A)
-42
CEacuteLULAS DE PIEL
0 50 100 150 200 250Tiempo (min)
Fluo
resc
enci
a (U
A)
-56DHR
0 50 100 150 200 250Tiempo (min)
Fluo
resc
enci
a (U
A)
-50
Control
Algatrium Plus
Incr
emen
to
Pro
tecc
ioacuten
EFECTO ADITIVO
Algatrium Plus
0
0306
09
18
21
05 5
1215
Para determinar que la proteccioacuten antioxidante de Algatrium Plus era un
proceso general cambiamos el inductor de estreacutes oxidativo de un produc-
to quiacutemico (el AAPH) a un sistema enzimaacutetico (sistema XXO) o inductores
endoacutegenos (ROT y ANT A) Se ha observado el mismo comportamiento en
todos los casos
El efecto antioxidante de Algatrium Plus depende de la dosis mostrando
un comportamiento dosis-dependiente a la inversa El mayor efecto se ha
observado en una concentracioacuten baja de DHA mientras que a altas con-
centraciones el efecto antioxidante disminuye independientemente de la
potencia del estreacutes oxidativo
Tambieacuten el efecto antioxidante de Algatrium Plus presenta un efecto adi-
tivo con la frecuencia de la administracioacuten La administracioacuten de una do-
sis diaria inrementa el efecto antioxidante respecto a una sola administra-
cioacuten
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE CELULAR
0 50 100 150 200 250Tiempo (min)
Fluo
resc
enci
a (U
A)
-49
CEacuteLULAS DE RETINA AAPH
P
rote
ccioacute
n
ROT ANT A XXO0
10
20
3040
50
60
INDEPENDIENTE DEL INDUCTOR
P
rote
ccioacute
n
DEPENDENCIA DE LA DOSIS
Algatrium Plus
0
10
20
3040
50
60
05 5 50Dosis diaria
Una dosis
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE CELULAR
La generacioacuten intracelular de radicales libres se confirmoacute mediante
microscopia de fluorescencia confocal Las micrografiacuteas muestran una
acumulacioacuten progresiva en el tiempo de radicales libres en las ceacutelulas
control sin DHA mientras que en las que han incorporado Algatrium
Plus en su membrana el nivel intracelular de radicales libres no ha
aumentado
T= 0 min
T= 15 min
T= 30 min
CONTROL ALGATRIUM PLUS 05 μM
CEacuteLULAS DE PIEL
A nivel celular la generacioacuten de radicales libres parece ser dependiente de
la composicioacuten en aacutecidos grasos de la ceacutelula pero la influencia especiacutefica de
cada clase de aacutecido graso no ha sido estudiada
Por otra parte a nivel industrial el meacutetodo de siacutentesis usado para obtener
el aceite enriquecido en DHA puede ser muy importante en la calidad final
del producto En este sentido hemos estudiado la importancia del contenido
de DHA y del origen sinteacutetico en el efecto antioxidante
Como se puede observar en la figura una disminucioacuten del contenido en DHA
al 50 (origen quiacutemico) o al 20 (aceite de pescado) de los aacutecidos grasos to-
tales induce una disminucioacuten del efecto antioxidante en las ceacutelulas de retina
aunque en ninguacuten caso llega a ser pro-oxidante Sin embargo en ceacutelulas de
piel esta reduccioacuten es tan acusada que soacutelo Algatrium Plus es antioxidante
siendo los otros dos pro-oxidantes
Dado el caraacutecter multifactorial de un tratamiento nutricional no es aconseja-
ble administrar un producto que presente actividades divergentes en funcioacuten
del tejido al que se incorpore
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE CELULAR
CEacuteLULASDE PIEL
05 μM
5 μM
50 μM
ACEITE DE PESCADO
P
ROTE
CCIOacute
N
0
20
40
60
-20
-40
DHA TG50QUIacuteMICO
ALGATRIUMPLUS
P
ROTE
CCIOacute
N
60
20
0
CEacuteLULASDE RETINA
40
DHA quiacutemico vs Algatrium Plus
ACEITE DE PESCADO
DHA TG50QUIacuteMICO
ALGATRIUMPLUS
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE CELULAR
Si la baja actividad del aceite de origen quiacutemico (50 en DHA) pudie-
ra estar relacionado con la presencia de estructuras polimeacutericas su eli-
minacioacuten por cromatografiacutea en columna deberiacutea permitir recuperar su
actividad antioxidante Como se puede observar en la figura una mani-
pulacioacuten excesiva del producto original para eliminar contaminantes
o para mejorar sus caracteriacutesticas organoleacutepticas se traduce en una
peacuterdida de bioactividad
P
ROTE
CCIOacute
N
0
10
20
30
40
50
60
-10DHA TG50QUIacuteMICO
ALGATRIUMPLUS
DHA TG50 QUIacuteMICOPURIFICADO
(DHA)
05 μM
5 μM
50 μM
CEacuteLULAS DE RETINA
DHA quiacutemico vs Algatrium Plus
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE CELULAR
La actividad antioxidante del Algatrium Plus tambieacuten esta relacionada
con su mayor biodisponibilidad ya que un eacutester etiacutelico o un aacutecido graso
libre con el mismo contenido en DHA presenta una actividad antioxi-
dante como maacuteximo la mitad de la de Algatrium Plus
P
ROTE
CCIOacute
N
0
10
20
30
40
50
60
05 μM
(DHA)
FA-BSA
Algatrium Plus
CEacuteLULAS DE RETINA
Efecto de la estructura quiacutemica Fa vs Ee vs Tg
70
5 μM
TG 50 CHEM
EE 70
FA Aacutecido graso libre
EE Eacutester etiacutelico
TG Trigliceacuterido
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE CELULAR
Comparado con los antioxidantes normalmente utilizados en tratamien-
tos oculares a las concentraciones oacuteptimas descritas Algatrium Plus pre-
senta a todas las dosis estudiadas un efecto superior
P
ROTE
CCIOacute
N
0
10
20
30
40
50
60CEacuteLULAS DE RETINA
Algatrium Plus vs antioxidantes
Algatrium Plus
NAC mM
Cys 1 m
M
Co Q 100 μM
Vit E 100 μM
Vit C 100 μM
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE CELULAR
Incluso si estos antioxidantes se combinan o se incrementa su concen-
tracioacuten 10 oacute 100 veces
P
ROTE
CCIOacute
N
0
10
20
30
40
50
60CEacuteLULAS DE RETINA
Algatrium Plus vs antioxidantes
Algatrium Plus
ANT1
ANT1 x10
ANT1 x100ANT2
BIOACTIVIDAD
En este punto la cuestioacuten es iquestCuaacutel es el mecanismo por el cual el Algatrium Plus
ejerce este efecto antioxidante tan potente
Los Omega-3 pueden actuar a diferentes niveles en la fisiologiacutea celular La de-
fensa antioxidante celular se basa en la actividad de un nuacutemero de enzimas an-
tioxidantes junto con otros antioxidantes quiacutemicos conjuntamente previenen la
peroxidacioacuten lipiacutedica la proteiacuteca y el dantildeo en DNA Hemos estudiado el efecto de
Algatrium Plus en diversos aspectos del sistema antioxidante celular
Generacioacuten del anioacuten superoacutexido (O-)
La actividad superoacutexido dismutasa (SOD) y de la glutatioacuten peroxidasa (GPx)
La concentracioacuten intracelular de glutatioacuten (GSH)
La peroxidacioacuten lipiacutedica
Y el dantildeo en DNA
BIOACTIVIDAD
Mecanismo de actividad antioxidante
CellularRespiration
OxidativeBurst
EnvironmentalFactors
O-SOD
GSH
GPx
LipidPeroxidation
ProteinPeroxidation
DNA Damage
HO
HO + O
HO
GSSG
GRed
Catalase
OH
1 3
30
BIOACTIVIDAD
Mecanismo de actividad antioxidante
CellularRespiration
OxidativeBurst
EnvironmentalFactors
O-SOD
GSH
GPx
LipidPeroxidation
ProteinPeroxidation
DNA Damage
HO
HO + O
HO
GSSG
GRed
Catalase
OH
1 3
=
+
BIOACTIVIDAD
Hemos encontrado que la incorporacioacuten de Algatrium Plus en las ceacutelulas disminuye la genera-
cioacuten del anioacuten superoacutexido la peroxidacioacuten lipiacutedica de una manera dosis-dependiente inversa y
el dantildeo en DNA
Los niveles inferiores del anioacuten superoacutexido bajo estreacutes oxidativo en ceacutelulas tratadas con Alga-
trium Plus puede ser debido a la actividad maacutes alta de la SOD respecto al control
Por otra parte la actividad de la GPx en las ceacutelulas tratadas no era diferente de las ceacutelulas control
con o sin estreacutes oxidativo
El cambio maacutes significativo fue el incremento (300) de la concentracioacuten intracelular de GSH
relacionado con un incremento de la siacutentesis de novo
Estos resultados nos indican que Algatrium Plus ejerce su efecto antioxidante mediante un
incremento de la actividad del sistema antioxidante celular sin una participacioacuten directa en
el mismo que lo diferencia de los antioxidantes quiacutemicos convencionales
Esto sugiere que las ceacutelulas toleran cantidades pequentildeas de DHA y que eacuteste actuacutea a modo de
estiacutemulo para evitar cualquier acumulacioacuten de radicales libres la incorporacioacuten de Algatrium
Plus en las biomembranes provoca una respuesta celular antioxidante adaptativa
3
ESTUDIOS IN VIVO
Para valorar la accioacuten de Algatrium Plus se utilizoacute como modelo de es-
treacutes oxidativo el inducido por el ejercicio fiacutesico aerobio
Se sometioacute a deportistas a un esfuerzo continuado al 75 de su consu-
mo maacuteximo de oxiacutegeno durante 90 minutos lo cual supone una produc-
cioacuten suficiente de radicales libres y estreacutes oxidativo como para conocer
la capacidad antioxidante de cualquier manipulacioacuten dieteacutetica
Para dar credibilidad a los resultados obtenidos in vitro es necesario una
constatacioacuten de los mismos in vivo En este sentido se ha desarrollado
un ensayo cliacutenico controlado cruzadov de 4 meses de duracioacuten (N = 40
deportistas) a una dosis de 2 gdiacutea de Algatrium Plus
Las variables a estudiar fueron el dantildeo en DNA y paraacutemetros antioxidan-
tes seacutericos
Se observoacute un aumento estadiacutesticamente significativo en la capacidad
antioxidante total del serum (plt005) antes y despueacutes de la realizacioacuten
de las pruebas rectangulares en los deportistas que habiacutean ingerido Al-
gatrium Plus durante un periodo de tres semanas a cuatro meses
H2O
2 (n
mol
L m
in)
150
160
170
180
190
200
BASAL
CAPACIDAD ANTIOXIDANTE TOTAL
Paraacutemetros antioxidantes in vivo
4 MESES
ESTUDIOS IN VIVO
20 DIacuteAS
Algatrium Plus
Control
3
El nivel plasmaacutetico de MDA como iacutendice de peroxidacioacuten lipiacutedica fue
aumentando durante la realizacioacuten de todas las pruebas de esfuerzo
(plt0035) Despueacutes de la ingesta de Algatrium Plus durante 3 semanas
el dantildeo oxidativo a nivel lipiacutedico en las mismas condiciones disminuye
praacutecticamente a nivel basal (plt005) observaacutendose a los 4 meses de tra-
tamiento un efecto protector en esta variable MD
A (n
mol
L)
10
20
30
40
60
BASAL
PEROXIDACIOacuteN LIPIacuteDICA
Paraacutemetros antioxidantes in vivo
4 MESES
ESTUDIOS IN VIVO
20 DIacuteAS
50
0
-10
Hay un aumento en el dantildeo oxidativo del DNA durante la realizacioacuten de
las pruebas rectangulares del esfuerzo medidas como el nivel de 8-oxo-
dG en la orina (plt0011) La ingesta de Algatrium Plus durante 3 sema-
nas y hasta 4 meses protege el DNA del dantildeo oxidativo inducido por el
esfuerzo de una manera significativa (plt0035)
8-ox
o-dG
(pm
olK
gx24
h)
100
200
300
400
600
BASAL
DANtildeO MOLECULAR EN EL DNA
Paraacutemetros antioxidantes in vivo
4 MESES
ESTUDIOS IN VIVO
20 DIacuteAS
500
0
700
800
900
3
Como efectos colaterales en el rendimiento deportivo se ha observado
que los niveles de glicemia disminuyen durante la realizacioacuten de la prue-
ba rectangular de esfuerzo (plt00009) Esta reduccioacuten en la glicemia era
menor despueacutes de 3 semanas de ingesta de Algatrium Plus se traduciacutea
en un aumento del nivel de glicemia a los 4 meses de tratamiento con
Algatrium Plus
mg
dL
-6
-4
-2
BASAL
VARIACIOacuteN EN LA CONCENTRACIOacuteN DE GLUCOSA
Variables fisioloacutegicas de rendimiento deportivo
4 MESES
ESTUDIOS IN VIVO
3 SEMANAS
4
0
-8
2
mL
min
2600
2650
2700
BASAL
CONSUMO DE OXIacuteGENO
Variables fisioloacutegicas de rendimiento deportivo
4 MESES
ESTUDIOS IN VIVO
3 SEMANAS
2900
2550
2850Tambieacuten se ha observado un aumento significativo del consumo abso-
luto (plt0019) y relativo (plt0036) de oxiacutegeno determinado en el umbral
del esfuerzo triangular con la ingesta de Algatrium Plus hasta 4 meses
Estos resultados parecen indicar que la ingesta de Algatrium PLus pue-
de incrementar el rendimiento deportivo
2750
2800
3
CONCLUSIONES
Los aacutecidos grasos omega-3 son un concepto vigente tanto desde un punto de
vista nutricional como terapeacuteutico con un alto potencial de desarrollo
La aplicacioacuten de los aacutecidos grasos omega-3 en estos campos requiere de produc-
tos manufacturados de acuerdo con los estaacutendares que se aplican a productos
farmaceacuteuticos que incluyen controles de calidad para asegurar su pureza y cali-
dad estructural que condiciona su bioactividad Como estaacutendar es exigible una
riqueza miacutenima superior al 5 en una estructura quiacutemica muy biodisponible
como un trigliceacuterido
La incorporacioacuten de Algatrium Plus en las membranas celulares no soacutelo no pro-
mueve la peroxidacioacuten lipiacutedica sino que actuacutea como un activador del sistema
antioxidante celular probablemente como consecuencia de una respuesta adap-
tativa de la ceacutelula
INFORMACIOacuteN LEGAL
ALGATRIUM es una Marca Internacional propiedad de BRUDY TECHNOLOGY
El uso de DHA de alta concentracioacuten para el tratamiento de enfermedades tu-
morales estaacute protegido por la Patente Internacional nordm200501141 Propiedad de
BRUDY TECHNOLOGY
La comercializacioacuten y el uso de Omega-3 Antioxidantes estaacute protegido por la
Patente Internacional nordm200503202 propiedad de BRUDY TECHNOLOGY
Dr Joan C Domingo Pedrol - Departamento de Bioquiacutemica y Biologiacutea Molecular - Universidad de Barcelona - Telf 934 021 214 - e-mail jcdomingoubedu
Fabricado en Espantildea por Brudy Technology - CRiera de Sant Miquel 3 - ordm ordf - 000 Barcelona - Tel 93 17 03
iquestQUEacute AacuteCIDO GRASO OMEGA-3
0
5
10
15
20
25
g10
0 g
ALA
EPA
DHA
Adipose
Rectal epith
elium
CheekHeart
MuscleLiver
SpleenRBC
Cerbral c
ortex
SpemRetin
a
Estudio transversal del contenido en aacutecidos grasos en tejidos de adultos de Estados Uni-dos Canadaacute Australia y Europa
De acuerdo con estos criterios el primer punto a resolver es la eleccioacuten del
PUFA omega-3 maacutes adecuado para un determinado tratamiento Los tres aacuteci-
dos grasos de la serie 3 maacutes importantes fisioloacutegicamente hablando son
El alfa-linoleacutenico (ALA)
El eicosapentaenoico (EPA)
El docosahexaenoico (DHA)
El DHA es el aacutecido graso omega-3 maacutes abundante en las membranas y estaacute
presente en todos los oacuterganos Es particularmente el maacutes abundante en el sis-
tema nervioso central en el esperma y en la retina ademaacutes del maacutes variable
entre los oacuterganos
Soacutelo pequentildeas cantidades de ALA y de EPA estaacuten presentes en los tejidos y el
contenido en DHA es habitualmente entre 5-30 veces superior al del EPA en
la mayoriacutea de los oacuterganos Ademaacutes el DHA es unas 100 veces maacutes abundante
que el EPA en el cerebro y la retina
iquestQUEacute AacuteCIDO GRASO OMEGA-3
Aunque los tres aacutecidos grasos estaacuten relacionados metaboacutelicamente diversos estu-
dios han demostrado que la administracioacuten de ALA no genera las cantidades fisio-
loacutegicas necesarias de DHA y de EPA En cuanto a la administracioacuten de DHA o EPA las
uacuteltimas recomendaciones sugieren que la viacutea maacutes eficiente para el incremento de las
concentraciones de un aacutecido omega-3 es la administracioacuten de dicho aacutecido especiacutefi-
camente De todas maneras en un planteamiento maacutes general la administracioacuten de
DHA garantiza una concentracioacuten baacutesica de EPA mientras que la administracioacuten
exclusiva de este uacuteltimo disminuye la concentracioacuten de DHA
En humanos la capacidad endoacutegena de convertir ALA en DHA o EPA es muy baja
o inexistente por esta razoacuten el consumo de DHA en la dieta puede ser criacutetico para
mantener la concentracioacuten adecuada de DHA en las membranas celulares BrJ
Nutr2002 88355ndash363
Retroconversioacuten de DHA-EPA en el grupo de DHA su concentracioacuten aumento un
69 y la del EPA un 29 En el grupo de EPA este crecioacute un 297 mientras que el
DHA decrecioacute un 15 AmJ ClinNutr1997 66649-59 AmJ ClinNutr2000 711085ndash94 Am
J Clin Nutr 200479765ndash73
α-Linolenic acid (183n-3)
Stearidonic (184n-3)
(204n-3)
EPA (205n-3)
DPA (225n-3)
DHA (226n-3)
iquestQUEacute AacuteCIDO GRASO OMEGA-3
El DHA es el aacutecido graso n-3 en el sistema nervioso central
Por otra parte desde un punto de vista nutricional cuyo objetivo es el de recuperar los depoacutesitos de
aacutecidos grasos omega-3 la administracioacuten de DHA garantiza una intervencioacuten en el sistema nervioso
central ya que la concentracioacuten de EPA en este tejido es puramente testimonial
Dietas que contienen un 95 de DHA inhiben completamente la degeneracioacuten de la retina inducida
por la N-Metil-N-nitrosourea en cambio las dietas que contienen un 475 de DHA (grupo EPA+DHA) o
soacutelo EPA no tuvieron un efecto protector Exp Eye Res 2003 77167ndash173
El DHA es el precursor de los docosatrienos y las resolvinas de la serie D que regulan los procesos aso-
ciados a la inflamacioacuten y su resolucioacuten final J Biol Chem 2003 27814677ndash14687
El DHA hidrolizado de los fosfoliacutepidos de membrana es el precursor endoacutegeno de la respuesta neuro-
protectiva frente reperfusioacuten isqueacutemica J Biol Chem 2003 278 43807ndash43817
La siacutentesis del 1017S-docosatrieno neuroprotectina D1 protege a las ceacutelulas de la retina de la apop-
tosis inducida por estreacutes oxidativo de una manera similar se sugiere que protegeraacute a las neuronas Proc
Natl Acad Sci USA 2004 101 8491ndash8496
10
BIODISPONIBILIDAD
Otro aspecto interesante que puede condicionar la eficacia de un determina-
do tratamiento es la biodisponibilidad de los aacutecidos omega-3 Existen nume-
rosos estudios en animales que han demostrado que los gliceacuteridos son los
transportadores maacutes eficaces para los aacutecidos grasos Ademaacutes los gliceacuteridos
se consideran la forma quiacutemica maacutes favorable desde un punto de vista ali-
mentario superior a los eacutesteres etiacutelicos de aacutecidos grasos insaturados los cuales
presentan una absorcioacuten intestinal deteriorada de los aacutecidos grasos n-3 ob-
servados como se ha demostrado en animales de laboratorio Tambieacuten se ha
demostrado que los eacutesteres etiacutelicos de aacutecidos grasos no saturados se hidro-
lizan a una velocidad maacutes lenta que los gliceacuteridos correspondientes
Un estudio en humanos realizado por la empresa farmaceacuteutica SIGMA-TAU
demostroacute que los trigliceacuteridos obtenidos por reesterificacioacuten presentan una
biodisponibilidad similar al aceite de pescado natural y muy superior a la
de los aacutecidos grasos libres que ademaacutes generan problemas digestivos y tam-
bieacuten superior a la de los eacutesteres etiacutelicos cuya uacutenica ventaja es la pureza que se
puede alcanzar pero por contra generan etanol que puede ser toacutexico a dosis
elevadas
TIPO DE ACEITE CONTENIDO EN PUFA N-3 () BIODISPONIBILIDAD
Aceite de pescado 25-30 7-100
Eacutesteres etiacutelicos gt85 21-57
Aacutecidos grasos libres gt65 51
TrigliceacuteridosRe-esterificados min 70-75 9
En un estudio In vivo en 24 personas sanas comparando una sola toma oral de PUFAs n-3 en estructuras quiacutemicas diferentes se demostroacute un mayor nivel plasmaacutetico de PUFAs n-3 en el grupo tratado con aceite re-esterificado
Extraiacutedo de una publicacioacuten de la empresa SIGMA-TAU
BIOACTIVIDAD - SEGURIDAD
DHA TG QUIacuteMICO ALGATRIUM PLUS
bull pH extremosbull Temperaturas altas (destilacioacuten)bull Reactivos quiacutemicos
bull pH fisioloacutegicobull Temperaturas bajasbull Sin reactivos quiacutemicos
bull Nivel bajo de trigliceacuteridosbull Productos de reaccioacuten secundariosbull Purificacioacuten cromatograacutefica
bull Nivel alto de trigliceacuteridosbull Sin productos secundariosbull No necesita maacutes purificacioacuten
bull Migracioacuten de dobles enlacesbull Oxidacioacuten de dobles enlacesbull Isomerizaciones CisTrans
bull Preservacioacuten de dobles enlacesbull No oxidacioacuten de dobles enlacesbull No isomerizaciones Cis Trans
La siacutentesis industrial de trigliceacuteridos se puede realizar quiacutemicamente o por
viacutea enzimaacutetica Las diferencias en las condiciones de reaccioacuten entre un pro-
ceso de siacutentesis quiacutemico y uno enzimaacutetico determinaraacuten las calidades finales
para cada producto El uso de meacutetodos tradicionales quiacutemicos (separacioacuten
cromatograacutefica destilacioacuten molecular etc) para producir concentrados de
PUFAs omega-3 implican el uso de pHs extremos y de altas temperaturas que
pueden destruir parcialmente la estructura de los dobles enlaces todos cis del
PUFA omega-3 natural por oxidacioacuten isomerizacioacuten o migracioacuten
Por otra parte las condiciones suaves (temperatura menor de 50degC pH 6-8 y
menos productos quiacutemicos) usadas en la hidroacutelisis enzimaacutetica proporcionan
un alternativa prometedora que podriacutea tambieacuten ahorrar energiacutea y aumentar
la selectividad del producto La preservacioacuten de los enlaces dobles conferiraacute
a la moleacutecula una mayor bioactividad
1
ALGATRIUM PLUS
ESPECIFICACIOacuteN UNIDADES LIacuteMITES
Acidez mg KOHg 30 maacutex
Contenido antioxidante g100g 10 - 11
Densidad a 20ordmC Kgl 0930 - 0940
Aacutecido graso DHA (C n3) FA 70 miacuten
Aacutecido graso DPA (C22 5n3) FA 8 maacutex
Aacutecido graso EPA (C0 5n3) FA 10 maacutex
Aacutecidos grasos Omega-3 FA 5 miacuten
Iacutendice de Peroacutexidos meq O2Kg 50 maacutex
Residuo seco g100g 010 maacutex
Muchos estudios demuestran que la bioactividad de los aceites omega-3 y
principalmente del DHA estaacute relacionada directamente con su contenido res-
pecto a los aacutecidos grasos totales los cuaacuteles pueden competir con los omega-3
en un metabolismo concreto Para obtener el maacuteximo nivel de bioactividad
Brudy ha dirigido sus esfuerzos en dos objetivos baacutesicos
Tener el maacuteximo contenido de DHA en el trigliceacuterido
Reducir al maacuteximo el contenido de EPA
Ademaacutes este aceite cumple todos los requisitos legales en cuanto a iacutendice de
peroacutexidos acidez contenido antioxidante nivel de metales pesadoshellip
Especificaciones del aceite omega-3 utilizado en estos estudios
De todos los aceites que hay en el mercado Algatrium Plus (DHA 70e) es
el aceite enriquecido con un contenido en omega-3 global y en DHA maacutes
alto
0
10
20
30
40
50
Comparativa de diferentes aceites omega-3 en el mercado
DPA
EPA
Algatrium Plus
OMEGA-3
60
70
80
90
P M HSO DHA 50CHEM ALGATRIUM PLUS
ALGATRIUM PLUS
1
OMEGA-3 OMEGA-3 SIacuteNTESIS INSA MG DG CHOL PLM TG EE GTOTAL
A PLUS 70 ENZIMAacuteTICO 05 nd 71 nd nd 865 59 936
FISH 20 ATUacuteN 47 nd 22 42 nd 889 nd 911
DHA 50 QUIacuteMICO 27 43 103 35 228 401 140 532
DHA 50 QUIacuteMICO-PURIFICADO 21 nd 188 nd nd 664 52 852
La biodisponibilidad del aceite es directamente pro-
porcional al tipo de moleacuteculas que lo compongan
concretamente a su composicioacuten lipiacutedica Los acei-
tes naturales contienen maacutes del 90 de materia en
forma de gliceacuterido que proporciona una biodispo-
nibilidad maacutexima Algatrium Plus es muy similar a
un aceite natural (la composicioacuten lipiacutedica incluye un
90 de gliceacuteridos totales con un 5 en forma de
trigliceacuteridos y sin monogliceacuteridos) El DHA obteni-
do quiacutemicamente tiene un nivel bajo de trigliceacuteri-
dos (lt50) un mayor nivel de eacutesteres etiacutelicos y un
alto contenido de poliacutemeros (15-0) que no son
absorbibles y que se deben eliminar por cromatogra-
fiacutea en columna (QUIacuteMICO-PURIFICADO)
Especificaciones del aceite omega-3 utilizado en estos estudios
ALGATRIUM PLUS
Solamente los aceites de pescado o de algas naturales que no se han rees-
terificado satisfacen la legislacioacuten alimentaria en cuanto a su composicioacuten
y por lo tanto son un alimento El DHA obtenido quiacutemicamente no satisface los
requisitos de la farmacopea europea sobretodo relacionado con el nivel de
trigliceacuteridos gliceacuteridos totales y en el contenido en compuestos polimeacutericos
Es necesaria una purificacioacuten por cromatografiacutea en columna para que el pro-
ducto cumpla los requisitos de la legislacioacuten europea Algatrium Plus tiene la
misma composicioacuten que los aceites naturales y por lo tanto se consideran
un alimento
LEGISLACIOacuteN
0
10
20
30
40
50
Composicioacuten estructural Algatrium Plus
Farmacopea
DHA 50 QUIacuteMICO
DHA 50 QUIacuteMICO-PURIFICADO
60
70
80
90
INS DG PLM TG EE
100
MG FA GTotal
1
ACTIVIDAD ANTITUMORAL
Para valorar la actividad de Algatrium Plus nuestro primer obje-
tivo fue determinar su capacidad citotoacutexica antitumoral En este
sentido realizamos un estudio comparativo usando ceacutelulas tumo-
rales (HeLa) y ceacutelulas sanas como control (renales y de piel) Hemos
realizado estudios dosis-respuesta para determinar el valor de IC50
como criterio de toxicidad (es la concentracioacuten que mata al 50 de
las ceacutelulas) Hemos analizado dos variables el efecto de la estructu-
ra del liacutepido y del contenido en DHA Para un contenido en DHA del
70 de todos los aacutecidos grasos se obtuvo la misma toxicidad en
ceacutelulas tumorales con el eacutester etiacutelico (EE) el aacutecido graso libre (FA) o
el trigliceacuterido (TG) Pero en ceacutelulas renales sanas el EE tiene la mis-
ma toxicidad que en las ceacutelulas tumorales y en las ceacutelulas de piel el
FA demuestran una gran toxicidad siendo los TG la forma con un
mejor cociente de seguridad Para una misma estructura quiacutemica
el TG una disminucioacuten del contenido en DHA a 50 o al 20 (este
uacuteltimo es la concentracioacuten en el aceite de pescado) disminuye de
forma dramaacutetica el efecto citotoacutexico en las ceacutelulas del tumor Estos
resultados demuestran que la forma oacuteptima es el trigliceacuterido con
un alto contenido en DHA (Algatrium Plus)
Efectos del contenido en DHA y de la estructura quiacutemica Toxicidad celular
FA 70 1231 plusmn90 nd 722 plusmn58 17
EE 70 5663 plusmn539 726 plusmn83 710 plusmn97 798 -102
TG (Algatrium Plus) 70 7167 plusmn419 3927 plusmn375 586 plusmn88 1223 -670
TG (Quiacutemico) 50 19560 plusmn278 4136 plusmn256 5640 plusmn696 347 -073
TG (Pescado) 20 22676 plusmn279 31160 plusmn1582 13794 plusmn2864 164 -226
ESTRUCTURA DHA PIEL RENAL HeLa
RELACIOacuteNDE
SEGURIDAD
CEacuteLULASTUMORALESCEacuteLULAS SANAS
COMPOSICIOacuteNIC50 (μM)
Otra actividad interesante de los PUFAs omega-3 en caacutencer es su uso como
adyuvantes en la quimioterapia convencional En este sentido determina-
mos los efectos de Algatrium Plus a concentraciones subtoacutexicas sobre la toxi-
cidad de la Doxorrubicina y del 5-fluoroacilo La exposicioacuten simultaacutenea de las
ceacutelulas tumorales al DHA y a la droga aumenta la toxicidad de la misma dos
veces (disminuye el valor de la IC50) Por otra parte si Algatrium Plus se ha
incorporado previamente a la membrana celular este efecto potenciador au-
menta hasta 10 veces
ACTIVIDAD COMO ADYUVANTE ANTITUMORAL
Efecto del DHA sobre la actividad antitumoral de la Doxorrubicina o del 5-fluoroacilo Toxicidad celular
Este efecto potenciador depende del contenido en DHA ya que con el uso de
un aceite quiacutemico (50 en DHA) o de aceite de pescado (20 en DHA) se pier-
de progresivamente dicho efecto potenciador Tambieacuten es significativo que
este efecto no incrementa la toxicidad de los citostaacuteticos en ceacutelulas sanas
Efecto del contenido en dha sobre la actividad antitumoral de la doxorrubicina Toxicidad celular
Control 0 2953 plusmn316 (n=8)
Pre-incorporado15
10
301 plusmn54 (n=8)287 plusmn67 (n=8)370 plusmn44 (n=6)
Simultaacuteneo 5 1843 plusmn162 (n=4)
Control 0 2330 plusmn368 (n=12)
Pre-incorporado15
10
280 plusmn110 (n=7)238 plusmn101 (n=4)380 plusmn142 (n=6)
Simultaacuteneo 5 1480 plusmn801 (n=6)
LIacuteNEA CELULAR
HeLa-Epitelial (Dox)
HT-29-Colon (5-FU)
SISTEMADE ADICIOacuteN
ALGATRIUM PLUS μM IC50 (μM)
0 2953 plusmn316 11586 plusmn3699
5 287 plusmn67 10466 plusmn2304
10 370 plusmn44 10805 plusmn1742
5 1309 plusmn156 11633 plusmn1569
10 1063 plusmn207 9801 plusmn2709
5 2574 plusmn296 11575 plusmn1249
10 2365 plusmn157 15303 plusmn4813
CONTENIDOEN DHA
Control
DHAAlgatrium Plus
DHA TG 50Quiacutemico
DHA TG 20Pescado
DHA (μM)CEacuteLULA TUMORAL CEacuteLULA SANA
IC50 (nM)
1
BIOACTIVIDAD - SEGURIDAD
En los sistemas quiacutemicos puros las moleacuteculas maacutes susceptibles al ataque de los
radicales libres son los aacutecidos grasos poliinsaturados (PUFAs) como el aacutecido do-
cosahexaenoico (DHA n-3) y en general esta susceptibilidad aumenta con
el nuacutemero de dobles enlaces In vivo se supone el mismo comportamiento
Entonces iquestpor queacute el DHA una diana molecular de los radiaciones libres es el
aacutecido graso maacutes abundante en tejidos expuestos a un potencial estreacutes oxidativo
como la retina o en tejidos con un sistema antioxidante celular deficiente como
el sistema nervioso central
iquestACTIVIDAD PRO-O ANTIOXIDANTE
BIOACTIVIDAD - SEGURIDAD
En este contexto hemos estudiado la influencia de la presencia del DHA enzimaacutetico
en la membrana celular sobre la generacioacuten intracelular de radicales libres utilizando
como sistema experimental dos liacuteneas celulares humanas sanas fibroblastos de piel
(Foreskin ATC CRL 2076) y ceacutelulas epiteliales pigmentarias de la retina (ARPE-19 ATCC
CRL 2302)
La cuantificacioacuten de los radicales libres generados se ha realizado mediante metodolo-
giacuteas fluorescentes usando sondas moleculares como el HDCF-DA DHR y DHE
Como inductores exoacutegenos de estreacutes oxidativo se ha utilizado el AAPH y el sistema
xantinaxantin oxidasa y como inductores endoacutegenos la rotenona y la antimicina A
0
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE CELULAR
Como se muestra en la figura la presencia de Algatrium Plus en la
membrana celular disminuye la generacioacuten intracelular de radicales
libres despueacutes de estar sometidas las ceacutelulas a un estreacutes oxidativo
Este comportamiento es independiente de la ceacutelula en estudio (piel o
retina) y del marcador utilizado (H2DCF-DA o DHR) lo cual nos indica la
activacioacuten de un mecanismo general El nivel de proteccioacuten observado
tambieacuten es similar frente al mismo estiacutemulo oxidativo
0 50 100 150 200 250Tiempo (min)
Fluo
resc
enci
a (U
A)
-49
CEacuteLULAS DE RETINA
H2DCF-DA
0 50 100 150 200Tiempo (min)
Fluo
resc
enci
a (U
A)
-42
CEacuteLULAS DE PIEL
0 50 100 150 200 250Tiempo (min)
Fluo
resc
enci
a (U
A)
-56DHR
0 50 100 150 200 250Tiempo (min)
Fluo
resc
enci
a (U
A)
-50
Control
Algatrium Plus
Incr
emen
to
Pro
tecc
ioacuten
EFECTO ADITIVO
Algatrium Plus
0
0306
09
18
21
05 5
1215
Para determinar que la proteccioacuten antioxidante de Algatrium Plus era un
proceso general cambiamos el inductor de estreacutes oxidativo de un produc-
to quiacutemico (el AAPH) a un sistema enzimaacutetico (sistema XXO) o inductores
endoacutegenos (ROT y ANT A) Se ha observado el mismo comportamiento en
todos los casos
El efecto antioxidante de Algatrium Plus depende de la dosis mostrando
un comportamiento dosis-dependiente a la inversa El mayor efecto se ha
observado en una concentracioacuten baja de DHA mientras que a altas con-
centraciones el efecto antioxidante disminuye independientemente de la
potencia del estreacutes oxidativo
Tambieacuten el efecto antioxidante de Algatrium Plus presenta un efecto adi-
tivo con la frecuencia de la administracioacuten La administracioacuten de una do-
sis diaria inrementa el efecto antioxidante respecto a una sola administra-
cioacuten
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE CELULAR
0 50 100 150 200 250Tiempo (min)
Fluo
resc
enci
a (U
A)
-49
CEacuteLULAS DE RETINA AAPH
P
rote
ccioacute
n
ROT ANT A XXO0
10
20
3040
50
60
INDEPENDIENTE DEL INDUCTOR
P
rote
ccioacute
n
DEPENDENCIA DE LA DOSIS
Algatrium Plus
0
10
20
3040
50
60
05 5 50Dosis diaria
Una dosis
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE CELULAR
La generacioacuten intracelular de radicales libres se confirmoacute mediante
microscopia de fluorescencia confocal Las micrografiacuteas muestran una
acumulacioacuten progresiva en el tiempo de radicales libres en las ceacutelulas
control sin DHA mientras que en las que han incorporado Algatrium
Plus en su membrana el nivel intracelular de radicales libres no ha
aumentado
T= 0 min
T= 15 min
T= 30 min
CONTROL ALGATRIUM PLUS 05 μM
CEacuteLULAS DE PIEL
A nivel celular la generacioacuten de radicales libres parece ser dependiente de
la composicioacuten en aacutecidos grasos de la ceacutelula pero la influencia especiacutefica de
cada clase de aacutecido graso no ha sido estudiada
Por otra parte a nivel industrial el meacutetodo de siacutentesis usado para obtener
el aceite enriquecido en DHA puede ser muy importante en la calidad final
del producto En este sentido hemos estudiado la importancia del contenido
de DHA y del origen sinteacutetico en el efecto antioxidante
Como se puede observar en la figura una disminucioacuten del contenido en DHA
al 50 (origen quiacutemico) o al 20 (aceite de pescado) de los aacutecidos grasos to-
tales induce una disminucioacuten del efecto antioxidante en las ceacutelulas de retina
aunque en ninguacuten caso llega a ser pro-oxidante Sin embargo en ceacutelulas de
piel esta reduccioacuten es tan acusada que soacutelo Algatrium Plus es antioxidante
siendo los otros dos pro-oxidantes
Dado el caraacutecter multifactorial de un tratamiento nutricional no es aconseja-
ble administrar un producto que presente actividades divergentes en funcioacuten
del tejido al que se incorpore
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE CELULAR
CEacuteLULASDE PIEL
05 μM
5 μM
50 μM
ACEITE DE PESCADO
P
ROTE
CCIOacute
N
0
20
40
60
-20
-40
DHA TG50QUIacuteMICO
ALGATRIUMPLUS
P
ROTE
CCIOacute
N
60
20
0
CEacuteLULASDE RETINA
40
DHA quiacutemico vs Algatrium Plus
ACEITE DE PESCADO
DHA TG50QUIacuteMICO
ALGATRIUMPLUS
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE CELULAR
Si la baja actividad del aceite de origen quiacutemico (50 en DHA) pudie-
ra estar relacionado con la presencia de estructuras polimeacutericas su eli-
minacioacuten por cromatografiacutea en columna deberiacutea permitir recuperar su
actividad antioxidante Como se puede observar en la figura una mani-
pulacioacuten excesiva del producto original para eliminar contaminantes
o para mejorar sus caracteriacutesticas organoleacutepticas se traduce en una
peacuterdida de bioactividad
P
ROTE
CCIOacute
N
0
10
20
30
40
50
60
-10DHA TG50QUIacuteMICO
ALGATRIUMPLUS
DHA TG50 QUIacuteMICOPURIFICADO
(DHA)
05 μM
5 μM
50 μM
CEacuteLULAS DE RETINA
DHA quiacutemico vs Algatrium Plus
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE CELULAR
La actividad antioxidante del Algatrium Plus tambieacuten esta relacionada
con su mayor biodisponibilidad ya que un eacutester etiacutelico o un aacutecido graso
libre con el mismo contenido en DHA presenta una actividad antioxi-
dante como maacuteximo la mitad de la de Algatrium Plus
P
ROTE
CCIOacute
N
0
10
20
30
40
50
60
05 μM
(DHA)
FA-BSA
Algatrium Plus
CEacuteLULAS DE RETINA
Efecto de la estructura quiacutemica Fa vs Ee vs Tg
70
5 μM
TG 50 CHEM
EE 70
FA Aacutecido graso libre
EE Eacutester etiacutelico
TG Trigliceacuterido
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE CELULAR
Comparado con los antioxidantes normalmente utilizados en tratamien-
tos oculares a las concentraciones oacuteptimas descritas Algatrium Plus pre-
senta a todas las dosis estudiadas un efecto superior
P
ROTE
CCIOacute
N
0
10
20
30
40
50
60CEacuteLULAS DE RETINA
Algatrium Plus vs antioxidantes
Algatrium Plus
NAC mM
Cys 1 m
M
Co Q 100 μM
Vit E 100 μM
Vit C 100 μM
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE CELULAR
Incluso si estos antioxidantes se combinan o se incrementa su concen-
tracioacuten 10 oacute 100 veces
P
ROTE
CCIOacute
N
0
10
20
30
40
50
60CEacuteLULAS DE RETINA
Algatrium Plus vs antioxidantes
Algatrium Plus
ANT1
ANT1 x10
ANT1 x100ANT2
BIOACTIVIDAD
En este punto la cuestioacuten es iquestCuaacutel es el mecanismo por el cual el Algatrium Plus
ejerce este efecto antioxidante tan potente
Los Omega-3 pueden actuar a diferentes niveles en la fisiologiacutea celular La de-
fensa antioxidante celular se basa en la actividad de un nuacutemero de enzimas an-
tioxidantes junto con otros antioxidantes quiacutemicos conjuntamente previenen la
peroxidacioacuten lipiacutedica la proteiacuteca y el dantildeo en DNA Hemos estudiado el efecto de
Algatrium Plus en diversos aspectos del sistema antioxidante celular
Generacioacuten del anioacuten superoacutexido (O-)
La actividad superoacutexido dismutasa (SOD) y de la glutatioacuten peroxidasa (GPx)
La concentracioacuten intracelular de glutatioacuten (GSH)
La peroxidacioacuten lipiacutedica
Y el dantildeo en DNA
BIOACTIVIDAD
Mecanismo de actividad antioxidante
CellularRespiration
OxidativeBurst
EnvironmentalFactors
O-SOD
GSH
GPx
LipidPeroxidation
ProteinPeroxidation
DNA Damage
HO
HO + O
HO
GSSG
GRed
Catalase
OH
1 3
30
BIOACTIVIDAD
Mecanismo de actividad antioxidante
CellularRespiration
OxidativeBurst
EnvironmentalFactors
O-SOD
GSH
GPx
LipidPeroxidation
ProteinPeroxidation
DNA Damage
HO
HO + O
HO
GSSG
GRed
Catalase
OH
1 3
=
+
BIOACTIVIDAD
Hemos encontrado que la incorporacioacuten de Algatrium Plus en las ceacutelulas disminuye la genera-
cioacuten del anioacuten superoacutexido la peroxidacioacuten lipiacutedica de una manera dosis-dependiente inversa y
el dantildeo en DNA
Los niveles inferiores del anioacuten superoacutexido bajo estreacutes oxidativo en ceacutelulas tratadas con Alga-
trium Plus puede ser debido a la actividad maacutes alta de la SOD respecto al control
Por otra parte la actividad de la GPx en las ceacutelulas tratadas no era diferente de las ceacutelulas control
con o sin estreacutes oxidativo
El cambio maacutes significativo fue el incremento (300) de la concentracioacuten intracelular de GSH
relacionado con un incremento de la siacutentesis de novo
Estos resultados nos indican que Algatrium Plus ejerce su efecto antioxidante mediante un
incremento de la actividad del sistema antioxidante celular sin una participacioacuten directa en
el mismo que lo diferencia de los antioxidantes quiacutemicos convencionales
Esto sugiere que las ceacutelulas toleran cantidades pequentildeas de DHA y que eacuteste actuacutea a modo de
estiacutemulo para evitar cualquier acumulacioacuten de radicales libres la incorporacioacuten de Algatrium
Plus en las biomembranes provoca una respuesta celular antioxidante adaptativa
3
ESTUDIOS IN VIVO
Para valorar la accioacuten de Algatrium Plus se utilizoacute como modelo de es-
treacutes oxidativo el inducido por el ejercicio fiacutesico aerobio
Se sometioacute a deportistas a un esfuerzo continuado al 75 de su consu-
mo maacuteximo de oxiacutegeno durante 90 minutos lo cual supone una produc-
cioacuten suficiente de radicales libres y estreacutes oxidativo como para conocer
la capacidad antioxidante de cualquier manipulacioacuten dieteacutetica
Para dar credibilidad a los resultados obtenidos in vitro es necesario una
constatacioacuten de los mismos in vivo En este sentido se ha desarrollado
un ensayo cliacutenico controlado cruzadov de 4 meses de duracioacuten (N = 40
deportistas) a una dosis de 2 gdiacutea de Algatrium Plus
Las variables a estudiar fueron el dantildeo en DNA y paraacutemetros antioxidan-
tes seacutericos
Se observoacute un aumento estadiacutesticamente significativo en la capacidad
antioxidante total del serum (plt005) antes y despueacutes de la realizacioacuten
de las pruebas rectangulares en los deportistas que habiacutean ingerido Al-
gatrium Plus durante un periodo de tres semanas a cuatro meses
H2O
2 (n
mol
L m
in)
150
160
170
180
190
200
BASAL
CAPACIDAD ANTIOXIDANTE TOTAL
Paraacutemetros antioxidantes in vivo
4 MESES
ESTUDIOS IN VIVO
20 DIacuteAS
Algatrium Plus
Control
3
El nivel plasmaacutetico de MDA como iacutendice de peroxidacioacuten lipiacutedica fue
aumentando durante la realizacioacuten de todas las pruebas de esfuerzo
(plt0035) Despueacutes de la ingesta de Algatrium Plus durante 3 semanas
el dantildeo oxidativo a nivel lipiacutedico en las mismas condiciones disminuye
praacutecticamente a nivel basal (plt005) observaacutendose a los 4 meses de tra-
tamiento un efecto protector en esta variable MD
A (n
mol
L)
10
20
30
40
60
BASAL
PEROXIDACIOacuteN LIPIacuteDICA
Paraacutemetros antioxidantes in vivo
4 MESES
ESTUDIOS IN VIVO
20 DIacuteAS
50
0
-10
Hay un aumento en el dantildeo oxidativo del DNA durante la realizacioacuten de
las pruebas rectangulares del esfuerzo medidas como el nivel de 8-oxo-
dG en la orina (plt0011) La ingesta de Algatrium Plus durante 3 sema-
nas y hasta 4 meses protege el DNA del dantildeo oxidativo inducido por el
esfuerzo de una manera significativa (plt0035)
8-ox
o-dG
(pm
olK
gx24
h)
100
200
300
400
600
BASAL
DANtildeO MOLECULAR EN EL DNA
Paraacutemetros antioxidantes in vivo
4 MESES
ESTUDIOS IN VIVO
20 DIacuteAS
500
0
700
800
900
3
Como efectos colaterales en el rendimiento deportivo se ha observado
que los niveles de glicemia disminuyen durante la realizacioacuten de la prue-
ba rectangular de esfuerzo (plt00009) Esta reduccioacuten en la glicemia era
menor despueacutes de 3 semanas de ingesta de Algatrium Plus se traduciacutea
en un aumento del nivel de glicemia a los 4 meses de tratamiento con
Algatrium Plus
mg
dL
-6
-4
-2
BASAL
VARIACIOacuteN EN LA CONCENTRACIOacuteN DE GLUCOSA
Variables fisioloacutegicas de rendimiento deportivo
4 MESES
ESTUDIOS IN VIVO
3 SEMANAS
4
0
-8
2
mL
min
2600
2650
2700
BASAL
CONSUMO DE OXIacuteGENO
Variables fisioloacutegicas de rendimiento deportivo
4 MESES
ESTUDIOS IN VIVO
3 SEMANAS
2900
2550
2850Tambieacuten se ha observado un aumento significativo del consumo abso-
luto (plt0019) y relativo (plt0036) de oxiacutegeno determinado en el umbral
del esfuerzo triangular con la ingesta de Algatrium Plus hasta 4 meses
Estos resultados parecen indicar que la ingesta de Algatrium PLus pue-
de incrementar el rendimiento deportivo
2750
2800
3
CONCLUSIONES
Los aacutecidos grasos omega-3 son un concepto vigente tanto desde un punto de
vista nutricional como terapeacuteutico con un alto potencial de desarrollo
La aplicacioacuten de los aacutecidos grasos omega-3 en estos campos requiere de produc-
tos manufacturados de acuerdo con los estaacutendares que se aplican a productos
farmaceacuteuticos que incluyen controles de calidad para asegurar su pureza y cali-
dad estructural que condiciona su bioactividad Como estaacutendar es exigible una
riqueza miacutenima superior al 5 en una estructura quiacutemica muy biodisponible
como un trigliceacuterido
La incorporacioacuten de Algatrium Plus en las membranas celulares no soacutelo no pro-
mueve la peroxidacioacuten lipiacutedica sino que actuacutea como un activador del sistema
antioxidante celular probablemente como consecuencia de una respuesta adap-
tativa de la ceacutelula
INFORMACIOacuteN LEGAL
ALGATRIUM es una Marca Internacional propiedad de BRUDY TECHNOLOGY
El uso de DHA de alta concentracioacuten para el tratamiento de enfermedades tu-
morales estaacute protegido por la Patente Internacional nordm200501141 Propiedad de
BRUDY TECHNOLOGY
La comercializacioacuten y el uso de Omega-3 Antioxidantes estaacute protegido por la
Patente Internacional nordm200503202 propiedad de BRUDY TECHNOLOGY
Dr Joan C Domingo Pedrol - Departamento de Bioquiacutemica y Biologiacutea Molecular - Universidad de Barcelona - Telf 934 021 214 - e-mail jcdomingoubedu
Fabricado en Espantildea por Brudy Technology - CRiera de Sant Miquel 3 - ordm ordf - 000 Barcelona - Tel 93 17 03
iquestQUEacute AacuteCIDO GRASO OMEGA-3
Aunque los tres aacutecidos grasos estaacuten relacionados metaboacutelicamente diversos estu-
dios han demostrado que la administracioacuten de ALA no genera las cantidades fisio-
loacutegicas necesarias de DHA y de EPA En cuanto a la administracioacuten de DHA o EPA las
uacuteltimas recomendaciones sugieren que la viacutea maacutes eficiente para el incremento de las
concentraciones de un aacutecido omega-3 es la administracioacuten de dicho aacutecido especiacutefi-
camente De todas maneras en un planteamiento maacutes general la administracioacuten de
DHA garantiza una concentracioacuten baacutesica de EPA mientras que la administracioacuten
exclusiva de este uacuteltimo disminuye la concentracioacuten de DHA
En humanos la capacidad endoacutegena de convertir ALA en DHA o EPA es muy baja
o inexistente por esta razoacuten el consumo de DHA en la dieta puede ser criacutetico para
mantener la concentracioacuten adecuada de DHA en las membranas celulares BrJ
Nutr2002 88355ndash363
Retroconversioacuten de DHA-EPA en el grupo de DHA su concentracioacuten aumento un
69 y la del EPA un 29 En el grupo de EPA este crecioacute un 297 mientras que el
DHA decrecioacute un 15 AmJ ClinNutr1997 66649-59 AmJ ClinNutr2000 711085ndash94 Am
J Clin Nutr 200479765ndash73
α-Linolenic acid (183n-3)
Stearidonic (184n-3)
(204n-3)
EPA (205n-3)
DPA (225n-3)
DHA (226n-3)
iquestQUEacute AacuteCIDO GRASO OMEGA-3
El DHA es el aacutecido graso n-3 en el sistema nervioso central
Por otra parte desde un punto de vista nutricional cuyo objetivo es el de recuperar los depoacutesitos de
aacutecidos grasos omega-3 la administracioacuten de DHA garantiza una intervencioacuten en el sistema nervioso
central ya que la concentracioacuten de EPA en este tejido es puramente testimonial
Dietas que contienen un 95 de DHA inhiben completamente la degeneracioacuten de la retina inducida
por la N-Metil-N-nitrosourea en cambio las dietas que contienen un 475 de DHA (grupo EPA+DHA) o
soacutelo EPA no tuvieron un efecto protector Exp Eye Res 2003 77167ndash173
El DHA es el precursor de los docosatrienos y las resolvinas de la serie D que regulan los procesos aso-
ciados a la inflamacioacuten y su resolucioacuten final J Biol Chem 2003 27814677ndash14687
El DHA hidrolizado de los fosfoliacutepidos de membrana es el precursor endoacutegeno de la respuesta neuro-
protectiva frente reperfusioacuten isqueacutemica J Biol Chem 2003 278 43807ndash43817
La siacutentesis del 1017S-docosatrieno neuroprotectina D1 protege a las ceacutelulas de la retina de la apop-
tosis inducida por estreacutes oxidativo de una manera similar se sugiere que protegeraacute a las neuronas Proc
Natl Acad Sci USA 2004 101 8491ndash8496
10
BIODISPONIBILIDAD
Otro aspecto interesante que puede condicionar la eficacia de un determina-
do tratamiento es la biodisponibilidad de los aacutecidos omega-3 Existen nume-
rosos estudios en animales que han demostrado que los gliceacuteridos son los
transportadores maacutes eficaces para los aacutecidos grasos Ademaacutes los gliceacuteridos
se consideran la forma quiacutemica maacutes favorable desde un punto de vista ali-
mentario superior a los eacutesteres etiacutelicos de aacutecidos grasos insaturados los cuales
presentan una absorcioacuten intestinal deteriorada de los aacutecidos grasos n-3 ob-
servados como se ha demostrado en animales de laboratorio Tambieacuten se ha
demostrado que los eacutesteres etiacutelicos de aacutecidos grasos no saturados se hidro-
lizan a una velocidad maacutes lenta que los gliceacuteridos correspondientes
Un estudio en humanos realizado por la empresa farmaceacuteutica SIGMA-TAU
demostroacute que los trigliceacuteridos obtenidos por reesterificacioacuten presentan una
biodisponibilidad similar al aceite de pescado natural y muy superior a la
de los aacutecidos grasos libres que ademaacutes generan problemas digestivos y tam-
bieacuten superior a la de los eacutesteres etiacutelicos cuya uacutenica ventaja es la pureza que se
puede alcanzar pero por contra generan etanol que puede ser toacutexico a dosis
elevadas
TIPO DE ACEITE CONTENIDO EN PUFA N-3 () BIODISPONIBILIDAD
Aceite de pescado 25-30 7-100
Eacutesteres etiacutelicos gt85 21-57
Aacutecidos grasos libres gt65 51
TrigliceacuteridosRe-esterificados min 70-75 9
En un estudio In vivo en 24 personas sanas comparando una sola toma oral de PUFAs n-3 en estructuras quiacutemicas diferentes se demostroacute un mayor nivel plasmaacutetico de PUFAs n-3 en el grupo tratado con aceite re-esterificado
Extraiacutedo de una publicacioacuten de la empresa SIGMA-TAU
BIOACTIVIDAD - SEGURIDAD
DHA TG QUIacuteMICO ALGATRIUM PLUS
bull pH extremosbull Temperaturas altas (destilacioacuten)bull Reactivos quiacutemicos
bull pH fisioloacutegicobull Temperaturas bajasbull Sin reactivos quiacutemicos
bull Nivel bajo de trigliceacuteridosbull Productos de reaccioacuten secundariosbull Purificacioacuten cromatograacutefica
bull Nivel alto de trigliceacuteridosbull Sin productos secundariosbull No necesita maacutes purificacioacuten
bull Migracioacuten de dobles enlacesbull Oxidacioacuten de dobles enlacesbull Isomerizaciones CisTrans
bull Preservacioacuten de dobles enlacesbull No oxidacioacuten de dobles enlacesbull No isomerizaciones Cis Trans
La siacutentesis industrial de trigliceacuteridos se puede realizar quiacutemicamente o por
viacutea enzimaacutetica Las diferencias en las condiciones de reaccioacuten entre un pro-
ceso de siacutentesis quiacutemico y uno enzimaacutetico determinaraacuten las calidades finales
para cada producto El uso de meacutetodos tradicionales quiacutemicos (separacioacuten
cromatograacutefica destilacioacuten molecular etc) para producir concentrados de
PUFAs omega-3 implican el uso de pHs extremos y de altas temperaturas que
pueden destruir parcialmente la estructura de los dobles enlaces todos cis del
PUFA omega-3 natural por oxidacioacuten isomerizacioacuten o migracioacuten
Por otra parte las condiciones suaves (temperatura menor de 50degC pH 6-8 y
menos productos quiacutemicos) usadas en la hidroacutelisis enzimaacutetica proporcionan
un alternativa prometedora que podriacutea tambieacuten ahorrar energiacutea y aumentar
la selectividad del producto La preservacioacuten de los enlaces dobles conferiraacute
a la moleacutecula una mayor bioactividad
1
ALGATRIUM PLUS
ESPECIFICACIOacuteN UNIDADES LIacuteMITES
Acidez mg KOHg 30 maacutex
Contenido antioxidante g100g 10 - 11
Densidad a 20ordmC Kgl 0930 - 0940
Aacutecido graso DHA (C n3) FA 70 miacuten
Aacutecido graso DPA (C22 5n3) FA 8 maacutex
Aacutecido graso EPA (C0 5n3) FA 10 maacutex
Aacutecidos grasos Omega-3 FA 5 miacuten
Iacutendice de Peroacutexidos meq O2Kg 50 maacutex
Residuo seco g100g 010 maacutex
Muchos estudios demuestran que la bioactividad de los aceites omega-3 y
principalmente del DHA estaacute relacionada directamente con su contenido res-
pecto a los aacutecidos grasos totales los cuaacuteles pueden competir con los omega-3
en un metabolismo concreto Para obtener el maacuteximo nivel de bioactividad
Brudy ha dirigido sus esfuerzos en dos objetivos baacutesicos
Tener el maacuteximo contenido de DHA en el trigliceacuterido
Reducir al maacuteximo el contenido de EPA
Ademaacutes este aceite cumple todos los requisitos legales en cuanto a iacutendice de
peroacutexidos acidez contenido antioxidante nivel de metales pesadoshellip
Especificaciones del aceite omega-3 utilizado en estos estudios
De todos los aceites que hay en el mercado Algatrium Plus (DHA 70e) es
el aceite enriquecido con un contenido en omega-3 global y en DHA maacutes
alto
0
10
20
30
40
50
Comparativa de diferentes aceites omega-3 en el mercado
DPA
EPA
Algatrium Plus
OMEGA-3
60
70
80
90
P M HSO DHA 50CHEM ALGATRIUM PLUS
ALGATRIUM PLUS
1
OMEGA-3 OMEGA-3 SIacuteNTESIS INSA MG DG CHOL PLM TG EE GTOTAL
A PLUS 70 ENZIMAacuteTICO 05 nd 71 nd nd 865 59 936
FISH 20 ATUacuteN 47 nd 22 42 nd 889 nd 911
DHA 50 QUIacuteMICO 27 43 103 35 228 401 140 532
DHA 50 QUIacuteMICO-PURIFICADO 21 nd 188 nd nd 664 52 852
La biodisponibilidad del aceite es directamente pro-
porcional al tipo de moleacuteculas que lo compongan
concretamente a su composicioacuten lipiacutedica Los acei-
tes naturales contienen maacutes del 90 de materia en
forma de gliceacuterido que proporciona una biodispo-
nibilidad maacutexima Algatrium Plus es muy similar a
un aceite natural (la composicioacuten lipiacutedica incluye un
90 de gliceacuteridos totales con un 5 en forma de
trigliceacuteridos y sin monogliceacuteridos) El DHA obteni-
do quiacutemicamente tiene un nivel bajo de trigliceacuteri-
dos (lt50) un mayor nivel de eacutesteres etiacutelicos y un
alto contenido de poliacutemeros (15-0) que no son
absorbibles y que se deben eliminar por cromatogra-
fiacutea en columna (QUIacuteMICO-PURIFICADO)
Especificaciones del aceite omega-3 utilizado en estos estudios
ALGATRIUM PLUS
Solamente los aceites de pescado o de algas naturales que no se han rees-
terificado satisfacen la legislacioacuten alimentaria en cuanto a su composicioacuten
y por lo tanto son un alimento El DHA obtenido quiacutemicamente no satisface los
requisitos de la farmacopea europea sobretodo relacionado con el nivel de
trigliceacuteridos gliceacuteridos totales y en el contenido en compuestos polimeacutericos
Es necesaria una purificacioacuten por cromatografiacutea en columna para que el pro-
ducto cumpla los requisitos de la legislacioacuten europea Algatrium Plus tiene la
misma composicioacuten que los aceites naturales y por lo tanto se consideran
un alimento
LEGISLACIOacuteN
0
10
20
30
40
50
Composicioacuten estructural Algatrium Plus
Farmacopea
DHA 50 QUIacuteMICO
DHA 50 QUIacuteMICO-PURIFICADO
60
70
80
90
INS DG PLM TG EE
100
MG FA GTotal
1
ACTIVIDAD ANTITUMORAL
Para valorar la actividad de Algatrium Plus nuestro primer obje-
tivo fue determinar su capacidad citotoacutexica antitumoral En este
sentido realizamos un estudio comparativo usando ceacutelulas tumo-
rales (HeLa) y ceacutelulas sanas como control (renales y de piel) Hemos
realizado estudios dosis-respuesta para determinar el valor de IC50
como criterio de toxicidad (es la concentracioacuten que mata al 50 de
las ceacutelulas) Hemos analizado dos variables el efecto de la estructu-
ra del liacutepido y del contenido en DHA Para un contenido en DHA del
70 de todos los aacutecidos grasos se obtuvo la misma toxicidad en
ceacutelulas tumorales con el eacutester etiacutelico (EE) el aacutecido graso libre (FA) o
el trigliceacuterido (TG) Pero en ceacutelulas renales sanas el EE tiene la mis-
ma toxicidad que en las ceacutelulas tumorales y en las ceacutelulas de piel el
FA demuestran una gran toxicidad siendo los TG la forma con un
mejor cociente de seguridad Para una misma estructura quiacutemica
el TG una disminucioacuten del contenido en DHA a 50 o al 20 (este
uacuteltimo es la concentracioacuten en el aceite de pescado) disminuye de
forma dramaacutetica el efecto citotoacutexico en las ceacutelulas del tumor Estos
resultados demuestran que la forma oacuteptima es el trigliceacuterido con
un alto contenido en DHA (Algatrium Plus)
Efectos del contenido en DHA y de la estructura quiacutemica Toxicidad celular
FA 70 1231 plusmn90 nd 722 plusmn58 17
EE 70 5663 plusmn539 726 plusmn83 710 plusmn97 798 -102
TG (Algatrium Plus) 70 7167 plusmn419 3927 plusmn375 586 plusmn88 1223 -670
TG (Quiacutemico) 50 19560 plusmn278 4136 plusmn256 5640 plusmn696 347 -073
TG (Pescado) 20 22676 plusmn279 31160 plusmn1582 13794 plusmn2864 164 -226
ESTRUCTURA DHA PIEL RENAL HeLa
RELACIOacuteNDE
SEGURIDAD
CEacuteLULASTUMORALESCEacuteLULAS SANAS
COMPOSICIOacuteNIC50 (μM)
Otra actividad interesante de los PUFAs omega-3 en caacutencer es su uso como
adyuvantes en la quimioterapia convencional En este sentido determina-
mos los efectos de Algatrium Plus a concentraciones subtoacutexicas sobre la toxi-
cidad de la Doxorrubicina y del 5-fluoroacilo La exposicioacuten simultaacutenea de las
ceacutelulas tumorales al DHA y a la droga aumenta la toxicidad de la misma dos
veces (disminuye el valor de la IC50) Por otra parte si Algatrium Plus se ha
incorporado previamente a la membrana celular este efecto potenciador au-
menta hasta 10 veces
ACTIVIDAD COMO ADYUVANTE ANTITUMORAL
Efecto del DHA sobre la actividad antitumoral de la Doxorrubicina o del 5-fluoroacilo Toxicidad celular
Este efecto potenciador depende del contenido en DHA ya que con el uso de
un aceite quiacutemico (50 en DHA) o de aceite de pescado (20 en DHA) se pier-
de progresivamente dicho efecto potenciador Tambieacuten es significativo que
este efecto no incrementa la toxicidad de los citostaacuteticos en ceacutelulas sanas
Efecto del contenido en dha sobre la actividad antitumoral de la doxorrubicina Toxicidad celular
Control 0 2953 plusmn316 (n=8)
Pre-incorporado15
10
301 plusmn54 (n=8)287 plusmn67 (n=8)370 plusmn44 (n=6)
Simultaacuteneo 5 1843 plusmn162 (n=4)
Control 0 2330 plusmn368 (n=12)
Pre-incorporado15
10
280 plusmn110 (n=7)238 plusmn101 (n=4)380 plusmn142 (n=6)
Simultaacuteneo 5 1480 plusmn801 (n=6)
LIacuteNEA CELULAR
HeLa-Epitelial (Dox)
HT-29-Colon (5-FU)
SISTEMADE ADICIOacuteN
ALGATRIUM PLUS μM IC50 (μM)
0 2953 plusmn316 11586 plusmn3699
5 287 plusmn67 10466 plusmn2304
10 370 plusmn44 10805 plusmn1742
5 1309 plusmn156 11633 plusmn1569
10 1063 plusmn207 9801 plusmn2709
5 2574 plusmn296 11575 plusmn1249
10 2365 plusmn157 15303 plusmn4813
CONTENIDOEN DHA
Control
DHAAlgatrium Plus
DHA TG 50Quiacutemico
DHA TG 20Pescado
DHA (μM)CEacuteLULA TUMORAL CEacuteLULA SANA
IC50 (nM)
1
BIOACTIVIDAD - SEGURIDAD
En los sistemas quiacutemicos puros las moleacuteculas maacutes susceptibles al ataque de los
radicales libres son los aacutecidos grasos poliinsaturados (PUFAs) como el aacutecido do-
cosahexaenoico (DHA n-3) y en general esta susceptibilidad aumenta con
el nuacutemero de dobles enlaces In vivo se supone el mismo comportamiento
Entonces iquestpor queacute el DHA una diana molecular de los radiaciones libres es el
aacutecido graso maacutes abundante en tejidos expuestos a un potencial estreacutes oxidativo
como la retina o en tejidos con un sistema antioxidante celular deficiente como
el sistema nervioso central
iquestACTIVIDAD PRO-O ANTIOXIDANTE
BIOACTIVIDAD - SEGURIDAD
En este contexto hemos estudiado la influencia de la presencia del DHA enzimaacutetico
en la membrana celular sobre la generacioacuten intracelular de radicales libres utilizando
como sistema experimental dos liacuteneas celulares humanas sanas fibroblastos de piel
(Foreskin ATC CRL 2076) y ceacutelulas epiteliales pigmentarias de la retina (ARPE-19 ATCC
CRL 2302)
La cuantificacioacuten de los radicales libres generados se ha realizado mediante metodolo-
giacuteas fluorescentes usando sondas moleculares como el HDCF-DA DHR y DHE
Como inductores exoacutegenos de estreacutes oxidativo se ha utilizado el AAPH y el sistema
xantinaxantin oxidasa y como inductores endoacutegenos la rotenona y la antimicina A
0
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE CELULAR
Como se muestra en la figura la presencia de Algatrium Plus en la
membrana celular disminuye la generacioacuten intracelular de radicales
libres despueacutes de estar sometidas las ceacutelulas a un estreacutes oxidativo
Este comportamiento es independiente de la ceacutelula en estudio (piel o
retina) y del marcador utilizado (H2DCF-DA o DHR) lo cual nos indica la
activacioacuten de un mecanismo general El nivel de proteccioacuten observado
tambieacuten es similar frente al mismo estiacutemulo oxidativo
0 50 100 150 200 250Tiempo (min)
Fluo
resc
enci
a (U
A)
-49
CEacuteLULAS DE RETINA
H2DCF-DA
0 50 100 150 200Tiempo (min)
Fluo
resc
enci
a (U
A)
-42
CEacuteLULAS DE PIEL
0 50 100 150 200 250Tiempo (min)
Fluo
resc
enci
a (U
A)
-56DHR
0 50 100 150 200 250Tiempo (min)
Fluo
resc
enci
a (U
A)
-50
Control
Algatrium Plus
Incr
emen
to
Pro
tecc
ioacuten
EFECTO ADITIVO
Algatrium Plus
0
0306
09
18
21
05 5
1215
Para determinar que la proteccioacuten antioxidante de Algatrium Plus era un
proceso general cambiamos el inductor de estreacutes oxidativo de un produc-
to quiacutemico (el AAPH) a un sistema enzimaacutetico (sistema XXO) o inductores
endoacutegenos (ROT y ANT A) Se ha observado el mismo comportamiento en
todos los casos
El efecto antioxidante de Algatrium Plus depende de la dosis mostrando
un comportamiento dosis-dependiente a la inversa El mayor efecto se ha
observado en una concentracioacuten baja de DHA mientras que a altas con-
centraciones el efecto antioxidante disminuye independientemente de la
potencia del estreacutes oxidativo
Tambieacuten el efecto antioxidante de Algatrium Plus presenta un efecto adi-
tivo con la frecuencia de la administracioacuten La administracioacuten de una do-
sis diaria inrementa el efecto antioxidante respecto a una sola administra-
cioacuten
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE CELULAR
0 50 100 150 200 250Tiempo (min)
Fluo
resc
enci
a (U
A)
-49
CEacuteLULAS DE RETINA AAPH
P
rote
ccioacute
n
ROT ANT A XXO0
10
20
3040
50
60
INDEPENDIENTE DEL INDUCTOR
P
rote
ccioacute
n
DEPENDENCIA DE LA DOSIS
Algatrium Plus
0
10
20
3040
50
60
05 5 50Dosis diaria
Una dosis
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE CELULAR
La generacioacuten intracelular de radicales libres se confirmoacute mediante
microscopia de fluorescencia confocal Las micrografiacuteas muestran una
acumulacioacuten progresiva en el tiempo de radicales libres en las ceacutelulas
control sin DHA mientras que en las que han incorporado Algatrium
Plus en su membrana el nivel intracelular de radicales libres no ha
aumentado
T= 0 min
T= 15 min
T= 30 min
CONTROL ALGATRIUM PLUS 05 μM
CEacuteLULAS DE PIEL
A nivel celular la generacioacuten de radicales libres parece ser dependiente de
la composicioacuten en aacutecidos grasos de la ceacutelula pero la influencia especiacutefica de
cada clase de aacutecido graso no ha sido estudiada
Por otra parte a nivel industrial el meacutetodo de siacutentesis usado para obtener
el aceite enriquecido en DHA puede ser muy importante en la calidad final
del producto En este sentido hemos estudiado la importancia del contenido
de DHA y del origen sinteacutetico en el efecto antioxidante
Como se puede observar en la figura una disminucioacuten del contenido en DHA
al 50 (origen quiacutemico) o al 20 (aceite de pescado) de los aacutecidos grasos to-
tales induce una disminucioacuten del efecto antioxidante en las ceacutelulas de retina
aunque en ninguacuten caso llega a ser pro-oxidante Sin embargo en ceacutelulas de
piel esta reduccioacuten es tan acusada que soacutelo Algatrium Plus es antioxidante
siendo los otros dos pro-oxidantes
Dado el caraacutecter multifactorial de un tratamiento nutricional no es aconseja-
ble administrar un producto que presente actividades divergentes en funcioacuten
del tejido al que se incorpore
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE CELULAR
CEacuteLULASDE PIEL
05 μM
5 μM
50 μM
ACEITE DE PESCADO
P
ROTE
CCIOacute
N
0
20
40
60
-20
-40
DHA TG50QUIacuteMICO
ALGATRIUMPLUS
P
ROTE
CCIOacute
N
60
20
0
CEacuteLULASDE RETINA
40
DHA quiacutemico vs Algatrium Plus
ACEITE DE PESCADO
DHA TG50QUIacuteMICO
ALGATRIUMPLUS
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE CELULAR
Si la baja actividad del aceite de origen quiacutemico (50 en DHA) pudie-
ra estar relacionado con la presencia de estructuras polimeacutericas su eli-
minacioacuten por cromatografiacutea en columna deberiacutea permitir recuperar su
actividad antioxidante Como se puede observar en la figura una mani-
pulacioacuten excesiva del producto original para eliminar contaminantes
o para mejorar sus caracteriacutesticas organoleacutepticas se traduce en una
peacuterdida de bioactividad
P
ROTE
CCIOacute
N
0
10
20
30
40
50
60
-10DHA TG50QUIacuteMICO
ALGATRIUMPLUS
DHA TG50 QUIacuteMICOPURIFICADO
(DHA)
05 μM
5 μM
50 μM
CEacuteLULAS DE RETINA
DHA quiacutemico vs Algatrium Plus
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE CELULAR
La actividad antioxidante del Algatrium Plus tambieacuten esta relacionada
con su mayor biodisponibilidad ya que un eacutester etiacutelico o un aacutecido graso
libre con el mismo contenido en DHA presenta una actividad antioxi-
dante como maacuteximo la mitad de la de Algatrium Plus
P
ROTE
CCIOacute
N
0
10
20
30
40
50
60
05 μM
(DHA)
FA-BSA
Algatrium Plus
CEacuteLULAS DE RETINA
Efecto de la estructura quiacutemica Fa vs Ee vs Tg
70
5 μM
TG 50 CHEM
EE 70
FA Aacutecido graso libre
EE Eacutester etiacutelico
TG Trigliceacuterido
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE CELULAR
Comparado con los antioxidantes normalmente utilizados en tratamien-
tos oculares a las concentraciones oacuteptimas descritas Algatrium Plus pre-
senta a todas las dosis estudiadas un efecto superior
P
ROTE
CCIOacute
N
0
10
20
30
40
50
60CEacuteLULAS DE RETINA
Algatrium Plus vs antioxidantes
Algatrium Plus
NAC mM
Cys 1 m
M
Co Q 100 μM
Vit E 100 μM
Vit C 100 μM
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE CELULAR
Incluso si estos antioxidantes se combinan o se incrementa su concen-
tracioacuten 10 oacute 100 veces
P
ROTE
CCIOacute
N
0
10
20
30
40
50
60CEacuteLULAS DE RETINA
Algatrium Plus vs antioxidantes
Algatrium Plus
ANT1
ANT1 x10
ANT1 x100ANT2
BIOACTIVIDAD
En este punto la cuestioacuten es iquestCuaacutel es el mecanismo por el cual el Algatrium Plus
ejerce este efecto antioxidante tan potente
Los Omega-3 pueden actuar a diferentes niveles en la fisiologiacutea celular La de-
fensa antioxidante celular se basa en la actividad de un nuacutemero de enzimas an-
tioxidantes junto con otros antioxidantes quiacutemicos conjuntamente previenen la
peroxidacioacuten lipiacutedica la proteiacuteca y el dantildeo en DNA Hemos estudiado el efecto de
Algatrium Plus en diversos aspectos del sistema antioxidante celular
Generacioacuten del anioacuten superoacutexido (O-)
La actividad superoacutexido dismutasa (SOD) y de la glutatioacuten peroxidasa (GPx)
La concentracioacuten intracelular de glutatioacuten (GSH)
La peroxidacioacuten lipiacutedica
Y el dantildeo en DNA
BIOACTIVIDAD
Mecanismo de actividad antioxidante
CellularRespiration
OxidativeBurst
EnvironmentalFactors
O-SOD
GSH
GPx
LipidPeroxidation
ProteinPeroxidation
DNA Damage
HO
HO + O
HO
GSSG
GRed
Catalase
OH
1 3
30
BIOACTIVIDAD
Mecanismo de actividad antioxidante
CellularRespiration
OxidativeBurst
EnvironmentalFactors
O-SOD
GSH
GPx
LipidPeroxidation
ProteinPeroxidation
DNA Damage
HO
HO + O
HO
GSSG
GRed
Catalase
OH
1 3
=
+
BIOACTIVIDAD
Hemos encontrado que la incorporacioacuten de Algatrium Plus en las ceacutelulas disminuye la genera-
cioacuten del anioacuten superoacutexido la peroxidacioacuten lipiacutedica de una manera dosis-dependiente inversa y
el dantildeo en DNA
Los niveles inferiores del anioacuten superoacutexido bajo estreacutes oxidativo en ceacutelulas tratadas con Alga-
trium Plus puede ser debido a la actividad maacutes alta de la SOD respecto al control
Por otra parte la actividad de la GPx en las ceacutelulas tratadas no era diferente de las ceacutelulas control
con o sin estreacutes oxidativo
El cambio maacutes significativo fue el incremento (300) de la concentracioacuten intracelular de GSH
relacionado con un incremento de la siacutentesis de novo
Estos resultados nos indican que Algatrium Plus ejerce su efecto antioxidante mediante un
incremento de la actividad del sistema antioxidante celular sin una participacioacuten directa en
el mismo que lo diferencia de los antioxidantes quiacutemicos convencionales
Esto sugiere que las ceacutelulas toleran cantidades pequentildeas de DHA y que eacuteste actuacutea a modo de
estiacutemulo para evitar cualquier acumulacioacuten de radicales libres la incorporacioacuten de Algatrium
Plus en las biomembranes provoca una respuesta celular antioxidante adaptativa
3
ESTUDIOS IN VIVO
Para valorar la accioacuten de Algatrium Plus se utilizoacute como modelo de es-
treacutes oxidativo el inducido por el ejercicio fiacutesico aerobio
Se sometioacute a deportistas a un esfuerzo continuado al 75 de su consu-
mo maacuteximo de oxiacutegeno durante 90 minutos lo cual supone una produc-
cioacuten suficiente de radicales libres y estreacutes oxidativo como para conocer
la capacidad antioxidante de cualquier manipulacioacuten dieteacutetica
Para dar credibilidad a los resultados obtenidos in vitro es necesario una
constatacioacuten de los mismos in vivo En este sentido se ha desarrollado
un ensayo cliacutenico controlado cruzadov de 4 meses de duracioacuten (N = 40
deportistas) a una dosis de 2 gdiacutea de Algatrium Plus
Las variables a estudiar fueron el dantildeo en DNA y paraacutemetros antioxidan-
tes seacutericos
Se observoacute un aumento estadiacutesticamente significativo en la capacidad
antioxidante total del serum (plt005) antes y despueacutes de la realizacioacuten
de las pruebas rectangulares en los deportistas que habiacutean ingerido Al-
gatrium Plus durante un periodo de tres semanas a cuatro meses
H2O
2 (n
mol
L m
in)
150
160
170
180
190
200
BASAL
CAPACIDAD ANTIOXIDANTE TOTAL
Paraacutemetros antioxidantes in vivo
4 MESES
ESTUDIOS IN VIVO
20 DIacuteAS
Algatrium Plus
Control
3
El nivel plasmaacutetico de MDA como iacutendice de peroxidacioacuten lipiacutedica fue
aumentando durante la realizacioacuten de todas las pruebas de esfuerzo
(plt0035) Despueacutes de la ingesta de Algatrium Plus durante 3 semanas
el dantildeo oxidativo a nivel lipiacutedico en las mismas condiciones disminuye
praacutecticamente a nivel basal (plt005) observaacutendose a los 4 meses de tra-
tamiento un efecto protector en esta variable MD
A (n
mol
L)
10
20
30
40
60
BASAL
PEROXIDACIOacuteN LIPIacuteDICA
Paraacutemetros antioxidantes in vivo
4 MESES
ESTUDIOS IN VIVO
20 DIacuteAS
50
0
-10
Hay un aumento en el dantildeo oxidativo del DNA durante la realizacioacuten de
las pruebas rectangulares del esfuerzo medidas como el nivel de 8-oxo-
dG en la orina (plt0011) La ingesta de Algatrium Plus durante 3 sema-
nas y hasta 4 meses protege el DNA del dantildeo oxidativo inducido por el
esfuerzo de una manera significativa (plt0035)
8-ox
o-dG
(pm
olK
gx24
h)
100
200
300
400
600
BASAL
DANtildeO MOLECULAR EN EL DNA
Paraacutemetros antioxidantes in vivo
4 MESES
ESTUDIOS IN VIVO
20 DIacuteAS
500
0
700
800
900
3
Como efectos colaterales en el rendimiento deportivo se ha observado
que los niveles de glicemia disminuyen durante la realizacioacuten de la prue-
ba rectangular de esfuerzo (plt00009) Esta reduccioacuten en la glicemia era
menor despueacutes de 3 semanas de ingesta de Algatrium Plus se traduciacutea
en un aumento del nivel de glicemia a los 4 meses de tratamiento con
Algatrium Plus
mg
dL
-6
-4
-2
BASAL
VARIACIOacuteN EN LA CONCENTRACIOacuteN DE GLUCOSA
Variables fisioloacutegicas de rendimiento deportivo
4 MESES
ESTUDIOS IN VIVO
3 SEMANAS
4
0
-8
2
mL
min
2600
2650
2700
BASAL
CONSUMO DE OXIacuteGENO
Variables fisioloacutegicas de rendimiento deportivo
4 MESES
ESTUDIOS IN VIVO
3 SEMANAS
2900
2550
2850Tambieacuten se ha observado un aumento significativo del consumo abso-
luto (plt0019) y relativo (plt0036) de oxiacutegeno determinado en el umbral
del esfuerzo triangular con la ingesta de Algatrium Plus hasta 4 meses
Estos resultados parecen indicar que la ingesta de Algatrium PLus pue-
de incrementar el rendimiento deportivo
2750
2800
3
CONCLUSIONES
Los aacutecidos grasos omega-3 son un concepto vigente tanto desde un punto de
vista nutricional como terapeacuteutico con un alto potencial de desarrollo
La aplicacioacuten de los aacutecidos grasos omega-3 en estos campos requiere de produc-
tos manufacturados de acuerdo con los estaacutendares que se aplican a productos
farmaceacuteuticos que incluyen controles de calidad para asegurar su pureza y cali-
dad estructural que condiciona su bioactividad Como estaacutendar es exigible una
riqueza miacutenima superior al 5 en una estructura quiacutemica muy biodisponible
como un trigliceacuterido
La incorporacioacuten de Algatrium Plus en las membranas celulares no soacutelo no pro-
mueve la peroxidacioacuten lipiacutedica sino que actuacutea como un activador del sistema
antioxidante celular probablemente como consecuencia de una respuesta adap-
tativa de la ceacutelula
INFORMACIOacuteN LEGAL
ALGATRIUM es una Marca Internacional propiedad de BRUDY TECHNOLOGY
El uso de DHA de alta concentracioacuten para el tratamiento de enfermedades tu-
morales estaacute protegido por la Patente Internacional nordm200501141 Propiedad de
BRUDY TECHNOLOGY
La comercializacioacuten y el uso de Omega-3 Antioxidantes estaacute protegido por la
Patente Internacional nordm200503202 propiedad de BRUDY TECHNOLOGY
Dr Joan C Domingo Pedrol - Departamento de Bioquiacutemica y Biologiacutea Molecular - Universidad de Barcelona - Telf 934 021 214 - e-mail jcdomingoubedu
Fabricado en Espantildea por Brudy Technology - CRiera de Sant Miquel 3 - ordm ordf - 000 Barcelona - Tel 93 17 03
iquestQUEacute AacuteCIDO GRASO OMEGA-3
El DHA es el aacutecido graso n-3 en el sistema nervioso central
Por otra parte desde un punto de vista nutricional cuyo objetivo es el de recuperar los depoacutesitos de
aacutecidos grasos omega-3 la administracioacuten de DHA garantiza una intervencioacuten en el sistema nervioso
central ya que la concentracioacuten de EPA en este tejido es puramente testimonial
Dietas que contienen un 95 de DHA inhiben completamente la degeneracioacuten de la retina inducida
por la N-Metil-N-nitrosourea en cambio las dietas que contienen un 475 de DHA (grupo EPA+DHA) o
soacutelo EPA no tuvieron un efecto protector Exp Eye Res 2003 77167ndash173
El DHA es el precursor de los docosatrienos y las resolvinas de la serie D que regulan los procesos aso-
ciados a la inflamacioacuten y su resolucioacuten final J Biol Chem 2003 27814677ndash14687
El DHA hidrolizado de los fosfoliacutepidos de membrana es el precursor endoacutegeno de la respuesta neuro-
protectiva frente reperfusioacuten isqueacutemica J Biol Chem 2003 278 43807ndash43817
La siacutentesis del 1017S-docosatrieno neuroprotectina D1 protege a las ceacutelulas de la retina de la apop-
tosis inducida por estreacutes oxidativo de una manera similar se sugiere que protegeraacute a las neuronas Proc
Natl Acad Sci USA 2004 101 8491ndash8496
10
BIODISPONIBILIDAD
Otro aspecto interesante que puede condicionar la eficacia de un determina-
do tratamiento es la biodisponibilidad de los aacutecidos omega-3 Existen nume-
rosos estudios en animales que han demostrado que los gliceacuteridos son los
transportadores maacutes eficaces para los aacutecidos grasos Ademaacutes los gliceacuteridos
se consideran la forma quiacutemica maacutes favorable desde un punto de vista ali-
mentario superior a los eacutesteres etiacutelicos de aacutecidos grasos insaturados los cuales
presentan una absorcioacuten intestinal deteriorada de los aacutecidos grasos n-3 ob-
servados como se ha demostrado en animales de laboratorio Tambieacuten se ha
demostrado que los eacutesteres etiacutelicos de aacutecidos grasos no saturados se hidro-
lizan a una velocidad maacutes lenta que los gliceacuteridos correspondientes
Un estudio en humanos realizado por la empresa farmaceacuteutica SIGMA-TAU
demostroacute que los trigliceacuteridos obtenidos por reesterificacioacuten presentan una
biodisponibilidad similar al aceite de pescado natural y muy superior a la
de los aacutecidos grasos libres que ademaacutes generan problemas digestivos y tam-
bieacuten superior a la de los eacutesteres etiacutelicos cuya uacutenica ventaja es la pureza que se
puede alcanzar pero por contra generan etanol que puede ser toacutexico a dosis
elevadas
TIPO DE ACEITE CONTENIDO EN PUFA N-3 () BIODISPONIBILIDAD
Aceite de pescado 25-30 7-100
Eacutesteres etiacutelicos gt85 21-57
Aacutecidos grasos libres gt65 51
TrigliceacuteridosRe-esterificados min 70-75 9
En un estudio In vivo en 24 personas sanas comparando una sola toma oral de PUFAs n-3 en estructuras quiacutemicas diferentes se demostroacute un mayor nivel plasmaacutetico de PUFAs n-3 en el grupo tratado con aceite re-esterificado
Extraiacutedo de una publicacioacuten de la empresa SIGMA-TAU
BIOACTIVIDAD - SEGURIDAD
DHA TG QUIacuteMICO ALGATRIUM PLUS
bull pH extremosbull Temperaturas altas (destilacioacuten)bull Reactivos quiacutemicos
bull pH fisioloacutegicobull Temperaturas bajasbull Sin reactivos quiacutemicos
bull Nivel bajo de trigliceacuteridosbull Productos de reaccioacuten secundariosbull Purificacioacuten cromatograacutefica
bull Nivel alto de trigliceacuteridosbull Sin productos secundariosbull No necesita maacutes purificacioacuten
bull Migracioacuten de dobles enlacesbull Oxidacioacuten de dobles enlacesbull Isomerizaciones CisTrans
bull Preservacioacuten de dobles enlacesbull No oxidacioacuten de dobles enlacesbull No isomerizaciones Cis Trans
La siacutentesis industrial de trigliceacuteridos se puede realizar quiacutemicamente o por
viacutea enzimaacutetica Las diferencias en las condiciones de reaccioacuten entre un pro-
ceso de siacutentesis quiacutemico y uno enzimaacutetico determinaraacuten las calidades finales
para cada producto El uso de meacutetodos tradicionales quiacutemicos (separacioacuten
cromatograacutefica destilacioacuten molecular etc) para producir concentrados de
PUFAs omega-3 implican el uso de pHs extremos y de altas temperaturas que
pueden destruir parcialmente la estructura de los dobles enlaces todos cis del
PUFA omega-3 natural por oxidacioacuten isomerizacioacuten o migracioacuten
Por otra parte las condiciones suaves (temperatura menor de 50degC pH 6-8 y
menos productos quiacutemicos) usadas en la hidroacutelisis enzimaacutetica proporcionan
un alternativa prometedora que podriacutea tambieacuten ahorrar energiacutea y aumentar
la selectividad del producto La preservacioacuten de los enlaces dobles conferiraacute
a la moleacutecula una mayor bioactividad
1
ALGATRIUM PLUS
ESPECIFICACIOacuteN UNIDADES LIacuteMITES
Acidez mg KOHg 30 maacutex
Contenido antioxidante g100g 10 - 11
Densidad a 20ordmC Kgl 0930 - 0940
Aacutecido graso DHA (C n3) FA 70 miacuten
Aacutecido graso DPA (C22 5n3) FA 8 maacutex
Aacutecido graso EPA (C0 5n3) FA 10 maacutex
Aacutecidos grasos Omega-3 FA 5 miacuten
Iacutendice de Peroacutexidos meq O2Kg 50 maacutex
Residuo seco g100g 010 maacutex
Muchos estudios demuestran que la bioactividad de los aceites omega-3 y
principalmente del DHA estaacute relacionada directamente con su contenido res-
pecto a los aacutecidos grasos totales los cuaacuteles pueden competir con los omega-3
en un metabolismo concreto Para obtener el maacuteximo nivel de bioactividad
Brudy ha dirigido sus esfuerzos en dos objetivos baacutesicos
Tener el maacuteximo contenido de DHA en el trigliceacuterido
Reducir al maacuteximo el contenido de EPA
Ademaacutes este aceite cumple todos los requisitos legales en cuanto a iacutendice de
peroacutexidos acidez contenido antioxidante nivel de metales pesadoshellip
Especificaciones del aceite omega-3 utilizado en estos estudios
De todos los aceites que hay en el mercado Algatrium Plus (DHA 70e) es
el aceite enriquecido con un contenido en omega-3 global y en DHA maacutes
alto
0
10
20
30
40
50
Comparativa de diferentes aceites omega-3 en el mercado
DPA
EPA
Algatrium Plus
OMEGA-3
60
70
80
90
P M HSO DHA 50CHEM ALGATRIUM PLUS
ALGATRIUM PLUS
1
OMEGA-3 OMEGA-3 SIacuteNTESIS INSA MG DG CHOL PLM TG EE GTOTAL
A PLUS 70 ENZIMAacuteTICO 05 nd 71 nd nd 865 59 936
FISH 20 ATUacuteN 47 nd 22 42 nd 889 nd 911
DHA 50 QUIacuteMICO 27 43 103 35 228 401 140 532
DHA 50 QUIacuteMICO-PURIFICADO 21 nd 188 nd nd 664 52 852
La biodisponibilidad del aceite es directamente pro-
porcional al tipo de moleacuteculas que lo compongan
concretamente a su composicioacuten lipiacutedica Los acei-
tes naturales contienen maacutes del 90 de materia en
forma de gliceacuterido que proporciona una biodispo-
nibilidad maacutexima Algatrium Plus es muy similar a
un aceite natural (la composicioacuten lipiacutedica incluye un
90 de gliceacuteridos totales con un 5 en forma de
trigliceacuteridos y sin monogliceacuteridos) El DHA obteni-
do quiacutemicamente tiene un nivel bajo de trigliceacuteri-
dos (lt50) un mayor nivel de eacutesteres etiacutelicos y un
alto contenido de poliacutemeros (15-0) que no son
absorbibles y que se deben eliminar por cromatogra-
fiacutea en columna (QUIacuteMICO-PURIFICADO)
Especificaciones del aceite omega-3 utilizado en estos estudios
ALGATRIUM PLUS
Solamente los aceites de pescado o de algas naturales que no se han rees-
terificado satisfacen la legislacioacuten alimentaria en cuanto a su composicioacuten
y por lo tanto son un alimento El DHA obtenido quiacutemicamente no satisface los
requisitos de la farmacopea europea sobretodo relacionado con el nivel de
trigliceacuteridos gliceacuteridos totales y en el contenido en compuestos polimeacutericos
Es necesaria una purificacioacuten por cromatografiacutea en columna para que el pro-
ducto cumpla los requisitos de la legislacioacuten europea Algatrium Plus tiene la
misma composicioacuten que los aceites naturales y por lo tanto se consideran
un alimento
LEGISLACIOacuteN
0
10
20
30
40
50
Composicioacuten estructural Algatrium Plus
Farmacopea
DHA 50 QUIacuteMICO
DHA 50 QUIacuteMICO-PURIFICADO
60
70
80
90
INS DG PLM TG EE
100
MG FA GTotal
1
ACTIVIDAD ANTITUMORAL
Para valorar la actividad de Algatrium Plus nuestro primer obje-
tivo fue determinar su capacidad citotoacutexica antitumoral En este
sentido realizamos un estudio comparativo usando ceacutelulas tumo-
rales (HeLa) y ceacutelulas sanas como control (renales y de piel) Hemos
realizado estudios dosis-respuesta para determinar el valor de IC50
como criterio de toxicidad (es la concentracioacuten que mata al 50 de
las ceacutelulas) Hemos analizado dos variables el efecto de la estructu-
ra del liacutepido y del contenido en DHA Para un contenido en DHA del
70 de todos los aacutecidos grasos se obtuvo la misma toxicidad en
ceacutelulas tumorales con el eacutester etiacutelico (EE) el aacutecido graso libre (FA) o
el trigliceacuterido (TG) Pero en ceacutelulas renales sanas el EE tiene la mis-
ma toxicidad que en las ceacutelulas tumorales y en las ceacutelulas de piel el
FA demuestran una gran toxicidad siendo los TG la forma con un
mejor cociente de seguridad Para una misma estructura quiacutemica
el TG una disminucioacuten del contenido en DHA a 50 o al 20 (este
uacuteltimo es la concentracioacuten en el aceite de pescado) disminuye de
forma dramaacutetica el efecto citotoacutexico en las ceacutelulas del tumor Estos
resultados demuestran que la forma oacuteptima es el trigliceacuterido con
un alto contenido en DHA (Algatrium Plus)
Efectos del contenido en DHA y de la estructura quiacutemica Toxicidad celular
FA 70 1231 plusmn90 nd 722 plusmn58 17
EE 70 5663 plusmn539 726 plusmn83 710 plusmn97 798 -102
TG (Algatrium Plus) 70 7167 plusmn419 3927 plusmn375 586 plusmn88 1223 -670
TG (Quiacutemico) 50 19560 plusmn278 4136 plusmn256 5640 plusmn696 347 -073
TG (Pescado) 20 22676 plusmn279 31160 plusmn1582 13794 plusmn2864 164 -226
ESTRUCTURA DHA PIEL RENAL HeLa
RELACIOacuteNDE
SEGURIDAD
CEacuteLULASTUMORALESCEacuteLULAS SANAS
COMPOSICIOacuteNIC50 (μM)
Otra actividad interesante de los PUFAs omega-3 en caacutencer es su uso como
adyuvantes en la quimioterapia convencional En este sentido determina-
mos los efectos de Algatrium Plus a concentraciones subtoacutexicas sobre la toxi-
cidad de la Doxorrubicina y del 5-fluoroacilo La exposicioacuten simultaacutenea de las
ceacutelulas tumorales al DHA y a la droga aumenta la toxicidad de la misma dos
veces (disminuye el valor de la IC50) Por otra parte si Algatrium Plus se ha
incorporado previamente a la membrana celular este efecto potenciador au-
menta hasta 10 veces
ACTIVIDAD COMO ADYUVANTE ANTITUMORAL
Efecto del DHA sobre la actividad antitumoral de la Doxorrubicina o del 5-fluoroacilo Toxicidad celular
Este efecto potenciador depende del contenido en DHA ya que con el uso de
un aceite quiacutemico (50 en DHA) o de aceite de pescado (20 en DHA) se pier-
de progresivamente dicho efecto potenciador Tambieacuten es significativo que
este efecto no incrementa la toxicidad de los citostaacuteticos en ceacutelulas sanas
Efecto del contenido en dha sobre la actividad antitumoral de la doxorrubicina Toxicidad celular
Control 0 2953 plusmn316 (n=8)
Pre-incorporado15
10
301 plusmn54 (n=8)287 plusmn67 (n=8)370 plusmn44 (n=6)
Simultaacuteneo 5 1843 plusmn162 (n=4)
Control 0 2330 plusmn368 (n=12)
Pre-incorporado15
10
280 plusmn110 (n=7)238 plusmn101 (n=4)380 plusmn142 (n=6)
Simultaacuteneo 5 1480 plusmn801 (n=6)
LIacuteNEA CELULAR
HeLa-Epitelial (Dox)
HT-29-Colon (5-FU)
SISTEMADE ADICIOacuteN
ALGATRIUM PLUS μM IC50 (μM)
0 2953 plusmn316 11586 plusmn3699
5 287 plusmn67 10466 plusmn2304
10 370 plusmn44 10805 plusmn1742
5 1309 plusmn156 11633 plusmn1569
10 1063 plusmn207 9801 plusmn2709
5 2574 plusmn296 11575 plusmn1249
10 2365 plusmn157 15303 plusmn4813
CONTENIDOEN DHA
Control
DHAAlgatrium Plus
DHA TG 50Quiacutemico
DHA TG 20Pescado
DHA (μM)CEacuteLULA TUMORAL CEacuteLULA SANA
IC50 (nM)
1
BIOACTIVIDAD - SEGURIDAD
En los sistemas quiacutemicos puros las moleacuteculas maacutes susceptibles al ataque de los
radicales libres son los aacutecidos grasos poliinsaturados (PUFAs) como el aacutecido do-
cosahexaenoico (DHA n-3) y en general esta susceptibilidad aumenta con
el nuacutemero de dobles enlaces In vivo se supone el mismo comportamiento
Entonces iquestpor queacute el DHA una diana molecular de los radiaciones libres es el
aacutecido graso maacutes abundante en tejidos expuestos a un potencial estreacutes oxidativo
como la retina o en tejidos con un sistema antioxidante celular deficiente como
el sistema nervioso central
iquestACTIVIDAD PRO-O ANTIOXIDANTE
BIOACTIVIDAD - SEGURIDAD
En este contexto hemos estudiado la influencia de la presencia del DHA enzimaacutetico
en la membrana celular sobre la generacioacuten intracelular de radicales libres utilizando
como sistema experimental dos liacuteneas celulares humanas sanas fibroblastos de piel
(Foreskin ATC CRL 2076) y ceacutelulas epiteliales pigmentarias de la retina (ARPE-19 ATCC
CRL 2302)
La cuantificacioacuten de los radicales libres generados se ha realizado mediante metodolo-
giacuteas fluorescentes usando sondas moleculares como el HDCF-DA DHR y DHE
Como inductores exoacutegenos de estreacutes oxidativo se ha utilizado el AAPH y el sistema
xantinaxantin oxidasa y como inductores endoacutegenos la rotenona y la antimicina A
0
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE CELULAR
Como se muestra en la figura la presencia de Algatrium Plus en la
membrana celular disminuye la generacioacuten intracelular de radicales
libres despueacutes de estar sometidas las ceacutelulas a un estreacutes oxidativo
Este comportamiento es independiente de la ceacutelula en estudio (piel o
retina) y del marcador utilizado (H2DCF-DA o DHR) lo cual nos indica la
activacioacuten de un mecanismo general El nivel de proteccioacuten observado
tambieacuten es similar frente al mismo estiacutemulo oxidativo
0 50 100 150 200 250Tiempo (min)
Fluo
resc
enci
a (U
A)
-49
CEacuteLULAS DE RETINA
H2DCF-DA
0 50 100 150 200Tiempo (min)
Fluo
resc
enci
a (U
A)
-42
CEacuteLULAS DE PIEL
0 50 100 150 200 250Tiempo (min)
Fluo
resc
enci
a (U
A)
-56DHR
0 50 100 150 200 250Tiempo (min)
Fluo
resc
enci
a (U
A)
-50
Control
Algatrium Plus
Incr
emen
to
Pro
tecc
ioacuten
EFECTO ADITIVO
Algatrium Plus
0
0306
09
18
21
05 5
1215
Para determinar que la proteccioacuten antioxidante de Algatrium Plus era un
proceso general cambiamos el inductor de estreacutes oxidativo de un produc-
to quiacutemico (el AAPH) a un sistema enzimaacutetico (sistema XXO) o inductores
endoacutegenos (ROT y ANT A) Se ha observado el mismo comportamiento en
todos los casos
El efecto antioxidante de Algatrium Plus depende de la dosis mostrando
un comportamiento dosis-dependiente a la inversa El mayor efecto se ha
observado en una concentracioacuten baja de DHA mientras que a altas con-
centraciones el efecto antioxidante disminuye independientemente de la
potencia del estreacutes oxidativo
Tambieacuten el efecto antioxidante de Algatrium Plus presenta un efecto adi-
tivo con la frecuencia de la administracioacuten La administracioacuten de una do-
sis diaria inrementa el efecto antioxidante respecto a una sola administra-
cioacuten
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE CELULAR
0 50 100 150 200 250Tiempo (min)
Fluo
resc
enci
a (U
A)
-49
CEacuteLULAS DE RETINA AAPH
P
rote
ccioacute
n
ROT ANT A XXO0
10
20
3040
50
60
INDEPENDIENTE DEL INDUCTOR
P
rote
ccioacute
n
DEPENDENCIA DE LA DOSIS
Algatrium Plus
0
10
20
3040
50
60
05 5 50Dosis diaria
Una dosis
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE CELULAR
La generacioacuten intracelular de radicales libres se confirmoacute mediante
microscopia de fluorescencia confocal Las micrografiacuteas muestran una
acumulacioacuten progresiva en el tiempo de radicales libres en las ceacutelulas
control sin DHA mientras que en las que han incorporado Algatrium
Plus en su membrana el nivel intracelular de radicales libres no ha
aumentado
T= 0 min
T= 15 min
T= 30 min
CONTROL ALGATRIUM PLUS 05 μM
CEacuteLULAS DE PIEL
A nivel celular la generacioacuten de radicales libres parece ser dependiente de
la composicioacuten en aacutecidos grasos de la ceacutelula pero la influencia especiacutefica de
cada clase de aacutecido graso no ha sido estudiada
Por otra parte a nivel industrial el meacutetodo de siacutentesis usado para obtener
el aceite enriquecido en DHA puede ser muy importante en la calidad final
del producto En este sentido hemos estudiado la importancia del contenido
de DHA y del origen sinteacutetico en el efecto antioxidante
Como se puede observar en la figura una disminucioacuten del contenido en DHA
al 50 (origen quiacutemico) o al 20 (aceite de pescado) de los aacutecidos grasos to-
tales induce una disminucioacuten del efecto antioxidante en las ceacutelulas de retina
aunque en ninguacuten caso llega a ser pro-oxidante Sin embargo en ceacutelulas de
piel esta reduccioacuten es tan acusada que soacutelo Algatrium Plus es antioxidante
siendo los otros dos pro-oxidantes
Dado el caraacutecter multifactorial de un tratamiento nutricional no es aconseja-
ble administrar un producto que presente actividades divergentes en funcioacuten
del tejido al que se incorpore
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE CELULAR
CEacuteLULASDE PIEL
05 μM
5 μM
50 μM
ACEITE DE PESCADO
P
ROTE
CCIOacute
N
0
20
40
60
-20
-40
DHA TG50QUIacuteMICO
ALGATRIUMPLUS
P
ROTE
CCIOacute
N
60
20
0
CEacuteLULASDE RETINA
40
DHA quiacutemico vs Algatrium Plus
ACEITE DE PESCADO
DHA TG50QUIacuteMICO
ALGATRIUMPLUS
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE CELULAR
Si la baja actividad del aceite de origen quiacutemico (50 en DHA) pudie-
ra estar relacionado con la presencia de estructuras polimeacutericas su eli-
minacioacuten por cromatografiacutea en columna deberiacutea permitir recuperar su
actividad antioxidante Como se puede observar en la figura una mani-
pulacioacuten excesiva del producto original para eliminar contaminantes
o para mejorar sus caracteriacutesticas organoleacutepticas se traduce en una
peacuterdida de bioactividad
P
ROTE
CCIOacute
N
0
10
20
30
40
50
60
-10DHA TG50QUIacuteMICO
ALGATRIUMPLUS
DHA TG50 QUIacuteMICOPURIFICADO
(DHA)
05 μM
5 μM
50 μM
CEacuteLULAS DE RETINA
DHA quiacutemico vs Algatrium Plus
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE CELULAR
La actividad antioxidante del Algatrium Plus tambieacuten esta relacionada
con su mayor biodisponibilidad ya que un eacutester etiacutelico o un aacutecido graso
libre con el mismo contenido en DHA presenta una actividad antioxi-
dante como maacuteximo la mitad de la de Algatrium Plus
P
ROTE
CCIOacute
N
0
10
20
30
40
50
60
05 μM
(DHA)
FA-BSA
Algatrium Plus
CEacuteLULAS DE RETINA
Efecto de la estructura quiacutemica Fa vs Ee vs Tg
70
5 μM
TG 50 CHEM
EE 70
FA Aacutecido graso libre
EE Eacutester etiacutelico
TG Trigliceacuterido
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE CELULAR
Comparado con los antioxidantes normalmente utilizados en tratamien-
tos oculares a las concentraciones oacuteptimas descritas Algatrium Plus pre-
senta a todas las dosis estudiadas un efecto superior
P
ROTE
CCIOacute
N
0
10
20
30
40
50
60CEacuteLULAS DE RETINA
Algatrium Plus vs antioxidantes
Algatrium Plus
NAC mM
Cys 1 m
M
Co Q 100 μM
Vit E 100 μM
Vit C 100 μM
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE CELULAR
Incluso si estos antioxidantes se combinan o se incrementa su concen-
tracioacuten 10 oacute 100 veces
P
ROTE
CCIOacute
N
0
10
20
30
40
50
60CEacuteLULAS DE RETINA
Algatrium Plus vs antioxidantes
Algatrium Plus
ANT1
ANT1 x10
ANT1 x100ANT2
BIOACTIVIDAD
En este punto la cuestioacuten es iquestCuaacutel es el mecanismo por el cual el Algatrium Plus
ejerce este efecto antioxidante tan potente
Los Omega-3 pueden actuar a diferentes niveles en la fisiologiacutea celular La de-
fensa antioxidante celular se basa en la actividad de un nuacutemero de enzimas an-
tioxidantes junto con otros antioxidantes quiacutemicos conjuntamente previenen la
peroxidacioacuten lipiacutedica la proteiacuteca y el dantildeo en DNA Hemos estudiado el efecto de
Algatrium Plus en diversos aspectos del sistema antioxidante celular
Generacioacuten del anioacuten superoacutexido (O-)
La actividad superoacutexido dismutasa (SOD) y de la glutatioacuten peroxidasa (GPx)
La concentracioacuten intracelular de glutatioacuten (GSH)
La peroxidacioacuten lipiacutedica
Y el dantildeo en DNA
BIOACTIVIDAD
Mecanismo de actividad antioxidante
CellularRespiration
OxidativeBurst
EnvironmentalFactors
O-SOD
GSH
GPx
LipidPeroxidation
ProteinPeroxidation
DNA Damage
HO
HO + O
HO
GSSG
GRed
Catalase
OH
1 3
30
BIOACTIVIDAD
Mecanismo de actividad antioxidante
CellularRespiration
OxidativeBurst
EnvironmentalFactors
O-SOD
GSH
GPx
LipidPeroxidation
ProteinPeroxidation
DNA Damage
HO
HO + O
HO
GSSG
GRed
Catalase
OH
1 3
=
+
BIOACTIVIDAD
Hemos encontrado que la incorporacioacuten de Algatrium Plus en las ceacutelulas disminuye la genera-
cioacuten del anioacuten superoacutexido la peroxidacioacuten lipiacutedica de una manera dosis-dependiente inversa y
el dantildeo en DNA
Los niveles inferiores del anioacuten superoacutexido bajo estreacutes oxidativo en ceacutelulas tratadas con Alga-
trium Plus puede ser debido a la actividad maacutes alta de la SOD respecto al control
Por otra parte la actividad de la GPx en las ceacutelulas tratadas no era diferente de las ceacutelulas control
con o sin estreacutes oxidativo
El cambio maacutes significativo fue el incremento (300) de la concentracioacuten intracelular de GSH
relacionado con un incremento de la siacutentesis de novo
Estos resultados nos indican que Algatrium Plus ejerce su efecto antioxidante mediante un
incremento de la actividad del sistema antioxidante celular sin una participacioacuten directa en
el mismo que lo diferencia de los antioxidantes quiacutemicos convencionales
Esto sugiere que las ceacutelulas toleran cantidades pequentildeas de DHA y que eacuteste actuacutea a modo de
estiacutemulo para evitar cualquier acumulacioacuten de radicales libres la incorporacioacuten de Algatrium
Plus en las biomembranes provoca una respuesta celular antioxidante adaptativa
3
ESTUDIOS IN VIVO
Para valorar la accioacuten de Algatrium Plus se utilizoacute como modelo de es-
treacutes oxidativo el inducido por el ejercicio fiacutesico aerobio
Se sometioacute a deportistas a un esfuerzo continuado al 75 de su consu-
mo maacuteximo de oxiacutegeno durante 90 minutos lo cual supone una produc-
cioacuten suficiente de radicales libres y estreacutes oxidativo como para conocer
la capacidad antioxidante de cualquier manipulacioacuten dieteacutetica
Para dar credibilidad a los resultados obtenidos in vitro es necesario una
constatacioacuten de los mismos in vivo En este sentido se ha desarrollado
un ensayo cliacutenico controlado cruzadov de 4 meses de duracioacuten (N = 40
deportistas) a una dosis de 2 gdiacutea de Algatrium Plus
Las variables a estudiar fueron el dantildeo en DNA y paraacutemetros antioxidan-
tes seacutericos
Se observoacute un aumento estadiacutesticamente significativo en la capacidad
antioxidante total del serum (plt005) antes y despueacutes de la realizacioacuten
de las pruebas rectangulares en los deportistas que habiacutean ingerido Al-
gatrium Plus durante un periodo de tres semanas a cuatro meses
H2O
2 (n
mol
L m
in)
150
160
170
180
190
200
BASAL
CAPACIDAD ANTIOXIDANTE TOTAL
Paraacutemetros antioxidantes in vivo
4 MESES
ESTUDIOS IN VIVO
20 DIacuteAS
Algatrium Plus
Control
3
El nivel plasmaacutetico de MDA como iacutendice de peroxidacioacuten lipiacutedica fue
aumentando durante la realizacioacuten de todas las pruebas de esfuerzo
(plt0035) Despueacutes de la ingesta de Algatrium Plus durante 3 semanas
el dantildeo oxidativo a nivel lipiacutedico en las mismas condiciones disminuye
praacutecticamente a nivel basal (plt005) observaacutendose a los 4 meses de tra-
tamiento un efecto protector en esta variable MD
A (n
mol
L)
10
20
30
40
60
BASAL
PEROXIDACIOacuteN LIPIacuteDICA
Paraacutemetros antioxidantes in vivo
4 MESES
ESTUDIOS IN VIVO
20 DIacuteAS
50
0
-10
Hay un aumento en el dantildeo oxidativo del DNA durante la realizacioacuten de
las pruebas rectangulares del esfuerzo medidas como el nivel de 8-oxo-
dG en la orina (plt0011) La ingesta de Algatrium Plus durante 3 sema-
nas y hasta 4 meses protege el DNA del dantildeo oxidativo inducido por el
esfuerzo de una manera significativa (plt0035)
8-ox
o-dG
(pm
olK
gx24
h)
100
200
300
400
600
BASAL
DANtildeO MOLECULAR EN EL DNA
Paraacutemetros antioxidantes in vivo
4 MESES
ESTUDIOS IN VIVO
20 DIacuteAS
500
0
700
800
900
3
Como efectos colaterales en el rendimiento deportivo se ha observado
que los niveles de glicemia disminuyen durante la realizacioacuten de la prue-
ba rectangular de esfuerzo (plt00009) Esta reduccioacuten en la glicemia era
menor despueacutes de 3 semanas de ingesta de Algatrium Plus se traduciacutea
en un aumento del nivel de glicemia a los 4 meses de tratamiento con
Algatrium Plus
mg
dL
-6
-4
-2
BASAL
VARIACIOacuteN EN LA CONCENTRACIOacuteN DE GLUCOSA
Variables fisioloacutegicas de rendimiento deportivo
4 MESES
ESTUDIOS IN VIVO
3 SEMANAS
4
0
-8
2
mL
min
2600
2650
2700
BASAL
CONSUMO DE OXIacuteGENO
Variables fisioloacutegicas de rendimiento deportivo
4 MESES
ESTUDIOS IN VIVO
3 SEMANAS
2900
2550
2850Tambieacuten se ha observado un aumento significativo del consumo abso-
luto (plt0019) y relativo (plt0036) de oxiacutegeno determinado en el umbral
del esfuerzo triangular con la ingesta de Algatrium Plus hasta 4 meses
Estos resultados parecen indicar que la ingesta de Algatrium PLus pue-
de incrementar el rendimiento deportivo
2750
2800
3
CONCLUSIONES
Los aacutecidos grasos omega-3 son un concepto vigente tanto desde un punto de
vista nutricional como terapeacuteutico con un alto potencial de desarrollo
La aplicacioacuten de los aacutecidos grasos omega-3 en estos campos requiere de produc-
tos manufacturados de acuerdo con los estaacutendares que se aplican a productos
farmaceacuteuticos que incluyen controles de calidad para asegurar su pureza y cali-
dad estructural que condiciona su bioactividad Como estaacutendar es exigible una
riqueza miacutenima superior al 5 en una estructura quiacutemica muy biodisponible
como un trigliceacuterido
La incorporacioacuten de Algatrium Plus en las membranas celulares no soacutelo no pro-
mueve la peroxidacioacuten lipiacutedica sino que actuacutea como un activador del sistema
antioxidante celular probablemente como consecuencia de una respuesta adap-
tativa de la ceacutelula
INFORMACIOacuteN LEGAL
ALGATRIUM es una Marca Internacional propiedad de BRUDY TECHNOLOGY
El uso de DHA de alta concentracioacuten para el tratamiento de enfermedades tu-
morales estaacute protegido por la Patente Internacional nordm200501141 Propiedad de
BRUDY TECHNOLOGY
La comercializacioacuten y el uso de Omega-3 Antioxidantes estaacute protegido por la
Patente Internacional nordm200503202 propiedad de BRUDY TECHNOLOGY
Dr Joan C Domingo Pedrol - Departamento de Bioquiacutemica y Biologiacutea Molecular - Universidad de Barcelona - Telf 934 021 214 - e-mail jcdomingoubedu
Fabricado en Espantildea por Brudy Technology - CRiera de Sant Miquel 3 - ordm ordf - 000 Barcelona - Tel 93 17 03
10
BIODISPONIBILIDAD
Otro aspecto interesante que puede condicionar la eficacia de un determina-
do tratamiento es la biodisponibilidad de los aacutecidos omega-3 Existen nume-
rosos estudios en animales que han demostrado que los gliceacuteridos son los
transportadores maacutes eficaces para los aacutecidos grasos Ademaacutes los gliceacuteridos
se consideran la forma quiacutemica maacutes favorable desde un punto de vista ali-
mentario superior a los eacutesteres etiacutelicos de aacutecidos grasos insaturados los cuales
presentan una absorcioacuten intestinal deteriorada de los aacutecidos grasos n-3 ob-
servados como se ha demostrado en animales de laboratorio Tambieacuten se ha
demostrado que los eacutesteres etiacutelicos de aacutecidos grasos no saturados se hidro-
lizan a una velocidad maacutes lenta que los gliceacuteridos correspondientes
Un estudio en humanos realizado por la empresa farmaceacuteutica SIGMA-TAU
demostroacute que los trigliceacuteridos obtenidos por reesterificacioacuten presentan una
biodisponibilidad similar al aceite de pescado natural y muy superior a la
de los aacutecidos grasos libres que ademaacutes generan problemas digestivos y tam-
bieacuten superior a la de los eacutesteres etiacutelicos cuya uacutenica ventaja es la pureza que se
puede alcanzar pero por contra generan etanol que puede ser toacutexico a dosis
elevadas
TIPO DE ACEITE CONTENIDO EN PUFA N-3 () BIODISPONIBILIDAD
Aceite de pescado 25-30 7-100
Eacutesteres etiacutelicos gt85 21-57
Aacutecidos grasos libres gt65 51
TrigliceacuteridosRe-esterificados min 70-75 9
En un estudio In vivo en 24 personas sanas comparando una sola toma oral de PUFAs n-3 en estructuras quiacutemicas diferentes se demostroacute un mayor nivel plasmaacutetico de PUFAs n-3 en el grupo tratado con aceite re-esterificado
Extraiacutedo de una publicacioacuten de la empresa SIGMA-TAU
BIOACTIVIDAD - SEGURIDAD
DHA TG QUIacuteMICO ALGATRIUM PLUS
bull pH extremosbull Temperaturas altas (destilacioacuten)bull Reactivos quiacutemicos
bull pH fisioloacutegicobull Temperaturas bajasbull Sin reactivos quiacutemicos
bull Nivel bajo de trigliceacuteridosbull Productos de reaccioacuten secundariosbull Purificacioacuten cromatograacutefica
bull Nivel alto de trigliceacuteridosbull Sin productos secundariosbull No necesita maacutes purificacioacuten
bull Migracioacuten de dobles enlacesbull Oxidacioacuten de dobles enlacesbull Isomerizaciones CisTrans
bull Preservacioacuten de dobles enlacesbull No oxidacioacuten de dobles enlacesbull No isomerizaciones Cis Trans
La siacutentesis industrial de trigliceacuteridos se puede realizar quiacutemicamente o por
viacutea enzimaacutetica Las diferencias en las condiciones de reaccioacuten entre un pro-
ceso de siacutentesis quiacutemico y uno enzimaacutetico determinaraacuten las calidades finales
para cada producto El uso de meacutetodos tradicionales quiacutemicos (separacioacuten
cromatograacutefica destilacioacuten molecular etc) para producir concentrados de
PUFAs omega-3 implican el uso de pHs extremos y de altas temperaturas que
pueden destruir parcialmente la estructura de los dobles enlaces todos cis del
PUFA omega-3 natural por oxidacioacuten isomerizacioacuten o migracioacuten
Por otra parte las condiciones suaves (temperatura menor de 50degC pH 6-8 y
menos productos quiacutemicos) usadas en la hidroacutelisis enzimaacutetica proporcionan
un alternativa prometedora que podriacutea tambieacuten ahorrar energiacutea y aumentar
la selectividad del producto La preservacioacuten de los enlaces dobles conferiraacute
a la moleacutecula una mayor bioactividad
1
ALGATRIUM PLUS
ESPECIFICACIOacuteN UNIDADES LIacuteMITES
Acidez mg KOHg 30 maacutex
Contenido antioxidante g100g 10 - 11
Densidad a 20ordmC Kgl 0930 - 0940
Aacutecido graso DHA (C n3) FA 70 miacuten
Aacutecido graso DPA (C22 5n3) FA 8 maacutex
Aacutecido graso EPA (C0 5n3) FA 10 maacutex
Aacutecidos grasos Omega-3 FA 5 miacuten
Iacutendice de Peroacutexidos meq O2Kg 50 maacutex
Residuo seco g100g 010 maacutex
Muchos estudios demuestran que la bioactividad de los aceites omega-3 y
principalmente del DHA estaacute relacionada directamente con su contenido res-
pecto a los aacutecidos grasos totales los cuaacuteles pueden competir con los omega-3
en un metabolismo concreto Para obtener el maacuteximo nivel de bioactividad
Brudy ha dirigido sus esfuerzos en dos objetivos baacutesicos
Tener el maacuteximo contenido de DHA en el trigliceacuterido
Reducir al maacuteximo el contenido de EPA
Ademaacutes este aceite cumple todos los requisitos legales en cuanto a iacutendice de
peroacutexidos acidez contenido antioxidante nivel de metales pesadoshellip
Especificaciones del aceite omega-3 utilizado en estos estudios
De todos los aceites que hay en el mercado Algatrium Plus (DHA 70e) es
el aceite enriquecido con un contenido en omega-3 global y en DHA maacutes
alto
0
10
20
30
40
50
Comparativa de diferentes aceites omega-3 en el mercado
DPA
EPA
Algatrium Plus
OMEGA-3
60
70
80
90
P M HSO DHA 50CHEM ALGATRIUM PLUS
ALGATRIUM PLUS
1
OMEGA-3 OMEGA-3 SIacuteNTESIS INSA MG DG CHOL PLM TG EE GTOTAL
A PLUS 70 ENZIMAacuteTICO 05 nd 71 nd nd 865 59 936
FISH 20 ATUacuteN 47 nd 22 42 nd 889 nd 911
DHA 50 QUIacuteMICO 27 43 103 35 228 401 140 532
DHA 50 QUIacuteMICO-PURIFICADO 21 nd 188 nd nd 664 52 852
La biodisponibilidad del aceite es directamente pro-
porcional al tipo de moleacuteculas que lo compongan
concretamente a su composicioacuten lipiacutedica Los acei-
tes naturales contienen maacutes del 90 de materia en
forma de gliceacuterido que proporciona una biodispo-
nibilidad maacutexima Algatrium Plus es muy similar a
un aceite natural (la composicioacuten lipiacutedica incluye un
90 de gliceacuteridos totales con un 5 en forma de
trigliceacuteridos y sin monogliceacuteridos) El DHA obteni-
do quiacutemicamente tiene un nivel bajo de trigliceacuteri-
dos (lt50) un mayor nivel de eacutesteres etiacutelicos y un
alto contenido de poliacutemeros (15-0) que no son
absorbibles y que se deben eliminar por cromatogra-
fiacutea en columna (QUIacuteMICO-PURIFICADO)
Especificaciones del aceite omega-3 utilizado en estos estudios
ALGATRIUM PLUS
Solamente los aceites de pescado o de algas naturales que no se han rees-
terificado satisfacen la legislacioacuten alimentaria en cuanto a su composicioacuten
y por lo tanto son un alimento El DHA obtenido quiacutemicamente no satisface los
requisitos de la farmacopea europea sobretodo relacionado con el nivel de
trigliceacuteridos gliceacuteridos totales y en el contenido en compuestos polimeacutericos
Es necesaria una purificacioacuten por cromatografiacutea en columna para que el pro-
ducto cumpla los requisitos de la legislacioacuten europea Algatrium Plus tiene la
misma composicioacuten que los aceites naturales y por lo tanto se consideran
un alimento
LEGISLACIOacuteN
0
10
20
30
40
50
Composicioacuten estructural Algatrium Plus
Farmacopea
DHA 50 QUIacuteMICO
DHA 50 QUIacuteMICO-PURIFICADO
60
70
80
90
INS DG PLM TG EE
100
MG FA GTotal
1
ACTIVIDAD ANTITUMORAL
Para valorar la actividad de Algatrium Plus nuestro primer obje-
tivo fue determinar su capacidad citotoacutexica antitumoral En este
sentido realizamos un estudio comparativo usando ceacutelulas tumo-
rales (HeLa) y ceacutelulas sanas como control (renales y de piel) Hemos
realizado estudios dosis-respuesta para determinar el valor de IC50
como criterio de toxicidad (es la concentracioacuten que mata al 50 de
las ceacutelulas) Hemos analizado dos variables el efecto de la estructu-
ra del liacutepido y del contenido en DHA Para un contenido en DHA del
70 de todos los aacutecidos grasos se obtuvo la misma toxicidad en
ceacutelulas tumorales con el eacutester etiacutelico (EE) el aacutecido graso libre (FA) o
el trigliceacuterido (TG) Pero en ceacutelulas renales sanas el EE tiene la mis-
ma toxicidad que en las ceacutelulas tumorales y en las ceacutelulas de piel el
FA demuestran una gran toxicidad siendo los TG la forma con un
mejor cociente de seguridad Para una misma estructura quiacutemica
el TG una disminucioacuten del contenido en DHA a 50 o al 20 (este
uacuteltimo es la concentracioacuten en el aceite de pescado) disminuye de
forma dramaacutetica el efecto citotoacutexico en las ceacutelulas del tumor Estos
resultados demuestran que la forma oacuteptima es el trigliceacuterido con
un alto contenido en DHA (Algatrium Plus)
Efectos del contenido en DHA y de la estructura quiacutemica Toxicidad celular
FA 70 1231 plusmn90 nd 722 plusmn58 17
EE 70 5663 plusmn539 726 plusmn83 710 plusmn97 798 -102
TG (Algatrium Plus) 70 7167 plusmn419 3927 plusmn375 586 plusmn88 1223 -670
TG (Quiacutemico) 50 19560 plusmn278 4136 plusmn256 5640 plusmn696 347 -073
TG (Pescado) 20 22676 plusmn279 31160 plusmn1582 13794 plusmn2864 164 -226
ESTRUCTURA DHA PIEL RENAL HeLa
RELACIOacuteNDE
SEGURIDAD
CEacuteLULASTUMORALESCEacuteLULAS SANAS
COMPOSICIOacuteNIC50 (μM)
Otra actividad interesante de los PUFAs omega-3 en caacutencer es su uso como
adyuvantes en la quimioterapia convencional En este sentido determina-
mos los efectos de Algatrium Plus a concentraciones subtoacutexicas sobre la toxi-
cidad de la Doxorrubicina y del 5-fluoroacilo La exposicioacuten simultaacutenea de las
ceacutelulas tumorales al DHA y a la droga aumenta la toxicidad de la misma dos
veces (disminuye el valor de la IC50) Por otra parte si Algatrium Plus se ha
incorporado previamente a la membrana celular este efecto potenciador au-
menta hasta 10 veces
ACTIVIDAD COMO ADYUVANTE ANTITUMORAL
Efecto del DHA sobre la actividad antitumoral de la Doxorrubicina o del 5-fluoroacilo Toxicidad celular
Este efecto potenciador depende del contenido en DHA ya que con el uso de
un aceite quiacutemico (50 en DHA) o de aceite de pescado (20 en DHA) se pier-
de progresivamente dicho efecto potenciador Tambieacuten es significativo que
este efecto no incrementa la toxicidad de los citostaacuteticos en ceacutelulas sanas
Efecto del contenido en dha sobre la actividad antitumoral de la doxorrubicina Toxicidad celular
Control 0 2953 plusmn316 (n=8)
Pre-incorporado15
10
301 plusmn54 (n=8)287 plusmn67 (n=8)370 plusmn44 (n=6)
Simultaacuteneo 5 1843 plusmn162 (n=4)
Control 0 2330 plusmn368 (n=12)
Pre-incorporado15
10
280 plusmn110 (n=7)238 plusmn101 (n=4)380 plusmn142 (n=6)
Simultaacuteneo 5 1480 plusmn801 (n=6)
LIacuteNEA CELULAR
HeLa-Epitelial (Dox)
HT-29-Colon (5-FU)
SISTEMADE ADICIOacuteN
ALGATRIUM PLUS μM IC50 (μM)
0 2953 plusmn316 11586 plusmn3699
5 287 plusmn67 10466 plusmn2304
10 370 plusmn44 10805 plusmn1742
5 1309 plusmn156 11633 plusmn1569
10 1063 plusmn207 9801 plusmn2709
5 2574 plusmn296 11575 plusmn1249
10 2365 plusmn157 15303 plusmn4813
CONTENIDOEN DHA
Control
DHAAlgatrium Plus
DHA TG 50Quiacutemico
DHA TG 20Pescado
DHA (μM)CEacuteLULA TUMORAL CEacuteLULA SANA
IC50 (nM)
1
BIOACTIVIDAD - SEGURIDAD
En los sistemas quiacutemicos puros las moleacuteculas maacutes susceptibles al ataque de los
radicales libres son los aacutecidos grasos poliinsaturados (PUFAs) como el aacutecido do-
cosahexaenoico (DHA n-3) y en general esta susceptibilidad aumenta con
el nuacutemero de dobles enlaces In vivo se supone el mismo comportamiento
Entonces iquestpor queacute el DHA una diana molecular de los radiaciones libres es el
aacutecido graso maacutes abundante en tejidos expuestos a un potencial estreacutes oxidativo
como la retina o en tejidos con un sistema antioxidante celular deficiente como
el sistema nervioso central
iquestACTIVIDAD PRO-O ANTIOXIDANTE
BIOACTIVIDAD - SEGURIDAD
En este contexto hemos estudiado la influencia de la presencia del DHA enzimaacutetico
en la membrana celular sobre la generacioacuten intracelular de radicales libres utilizando
como sistema experimental dos liacuteneas celulares humanas sanas fibroblastos de piel
(Foreskin ATC CRL 2076) y ceacutelulas epiteliales pigmentarias de la retina (ARPE-19 ATCC
CRL 2302)
La cuantificacioacuten de los radicales libres generados se ha realizado mediante metodolo-
giacuteas fluorescentes usando sondas moleculares como el HDCF-DA DHR y DHE
Como inductores exoacutegenos de estreacutes oxidativo se ha utilizado el AAPH y el sistema
xantinaxantin oxidasa y como inductores endoacutegenos la rotenona y la antimicina A
0
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE CELULAR
Como se muestra en la figura la presencia de Algatrium Plus en la
membrana celular disminuye la generacioacuten intracelular de radicales
libres despueacutes de estar sometidas las ceacutelulas a un estreacutes oxidativo
Este comportamiento es independiente de la ceacutelula en estudio (piel o
retina) y del marcador utilizado (H2DCF-DA o DHR) lo cual nos indica la
activacioacuten de un mecanismo general El nivel de proteccioacuten observado
tambieacuten es similar frente al mismo estiacutemulo oxidativo
0 50 100 150 200 250Tiempo (min)
Fluo
resc
enci
a (U
A)
-49
CEacuteLULAS DE RETINA
H2DCF-DA
0 50 100 150 200Tiempo (min)
Fluo
resc
enci
a (U
A)
-42
CEacuteLULAS DE PIEL
0 50 100 150 200 250Tiempo (min)
Fluo
resc
enci
a (U
A)
-56DHR
0 50 100 150 200 250Tiempo (min)
Fluo
resc
enci
a (U
A)
-50
Control
Algatrium Plus
Incr
emen
to
Pro
tecc
ioacuten
EFECTO ADITIVO
Algatrium Plus
0
0306
09
18
21
05 5
1215
Para determinar que la proteccioacuten antioxidante de Algatrium Plus era un
proceso general cambiamos el inductor de estreacutes oxidativo de un produc-
to quiacutemico (el AAPH) a un sistema enzimaacutetico (sistema XXO) o inductores
endoacutegenos (ROT y ANT A) Se ha observado el mismo comportamiento en
todos los casos
El efecto antioxidante de Algatrium Plus depende de la dosis mostrando
un comportamiento dosis-dependiente a la inversa El mayor efecto se ha
observado en una concentracioacuten baja de DHA mientras que a altas con-
centraciones el efecto antioxidante disminuye independientemente de la
potencia del estreacutes oxidativo
Tambieacuten el efecto antioxidante de Algatrium Plus presenta un efecto adi-
tivo con la frecuencia de la administracioacuten La administracioacuten de una do-
sis diaria inrementa el efecto antioxidante respecto a una sola administra-
cioacuten
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE CELULAR
0 50 100 150 200 250Tiempo (min)
Fluo
resc
enci
a (U
A)
-49
CEacuteLULAS DE RETINA AAPH
P
rote
ccioacute
n
ROT ANT A XXO0
10
20
3040
50
60
INDEPENDIENTE DEL INDUCTOR
P
rote
ccioacute
n
DEPENDENCIA DE LA DOSIS
Algatrium Plus
0
10
20
3040
50
60
05 5 50Dosis diaria
Una dosis
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE CELULAR
La generacioacuten intracelular de radicales libres se confirmoacute mediante
microscopia de fluorescencia confocal Las micrografiacuteas muestran una
acumulacioacuten progresiva en el tiempo de radicales libres en las ceacutelulas
control sin DHA mientras que en las que han incorporado Algatrium
Plus en su membrana el nivel intracelular de radicales libres no ha
aumentado
T= 0 min
T= 15 min
T= 30 min
CONTROL ALGATRIUM PLUS 05 μM
CEacuteLULAS DE PIEL
A nivel celular la generacioacuten de radicales libres parece ser dependiente de
la composicioacuten en aacutecidos grasos de la ceacutelula pero la influencia especiacutefica de
cada clase de aacutecido graso no ha sido estudiada
Por otra parte a nivel industrial el meacutetodo de siacutentesis usado para obtener
el aceite enriquecido en DHA puede ser muy importante en la calidad final
del producto En este sentido hemos estudiado la importancia del contenido
de DHA y del origen sinteacutetico en el efecto antioxidante
Como se puede observar en la figura una disminucioacuten del contenido en DHA
al 50 (origen quiacutemico) o al 20 (aceite de pescado) de los aacutecidos grasos to-
tales induce una disminucioacuten del efecto antioxidante en las ceacutelulas de retina
aunque en ninguacuten caso llega a ser pro-oxidante Sin embargo en ceacutelulas de
piel esta reduccioacuten es tan acusada que soacutelo Algatrium Plus es antioxidante
siendo los otros dos pro-oxidantes
Dado el caraacutecter multifactorial de un tratamiento nutricional no es aconseja-
ble administrar un producto que presente actividades divergentes en funcioacuten
del tejido al que se incorpore
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE CELULAR
CEacuteLULASDE PIEL
05 μM
5 μM
50 μM
ACEITE DE PESCADO
P
ROTE
CCIOacute
N
0
20
40
60
-20
-40
DHA TG50QUIacuteMICO
ALGATRIUMPLUS
P
ROTE
CCIOacute
N
60
20
0
CEacuteLULASDE RETINA
40
DHA quiacutemico vs Algatrium Plus
ACEITE DE PESCADO
DHA TG50QUIacuteMICO
ALGATRIUMPLUS
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE CELULAR
Si la baja actividad del aceite de origen quiacutemico (50 en DHA) pudie-
ra estar relacionado con la presencia de estructuras polimeacutericas su eli-
minacioacuten por cromatografiacutea en columna deberiacutea permitir recuperar su
actividad antioxidante Como se puede observar en la figura una mani-
pulacioacuten excesiva del producto original para eliminar contaminantes
o para mejorar sus caracteriacutesticas organoleacutepticas se traduce en una
peacuterdida de bioactividad
P
ROTE
CCIOacute
N
0
10
20
30
40
50
60
-10DHA TG50QUIacuteMICO
ALGATRIUMPLUS
DHA TG50 QUIacuteMICOPURIFICADO
(DHA)
05 μM
5 μM
50 μM
CEacuteLULAS DE RETINA
DHA quiacutemico vs Algatrium Plus
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE CELULAR
La actividad antioxidante del Algatrium Plus tambieacuten esta relacionada
con su mayor biodisponibilidad ya que un eacutester etiacutelico o un aacutecido graso
libre con el mismo contenido en DHA presenta una actividad antioxi-
dante como maacuteximo la mitad de la de Algatrium Plus
P
ROTE
CCIOacute
N
0
10
20
30
40
50
60
05 μM
(DHA)
FA-BSA
Algatrium Plus
CEacuteLULAS DE RETINA
Efecto de la estructura quiacutemica Fa vs Ee vs Tg
70
5 μM
TG 50 CHEM
EE 70
FA Aacutecido graso libre
EE Eacutester etiacutelico
TG Trigliceacuterido
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE CELULAR
Comparado con los antioxidantes normalmente utilizados en tratamien-
tos oculares a las concentraciones oacuteptimas descritas Algatrium Plus pre-
senta a todas las dosis estudiadas un efecto superior
P
ROTE
CCIOacute
N
0
10
20
30
40
50
60CEacuteLULAS DE RETINA
Algatrium Plus vs antioxidantes
Algatrium Plus
NAC mM
Cys 1 m
M
Co Q 100 μM
Vit E 100 μM
Vit C 100 μM
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE CELULAR
Incluso si estos antioxidantes se combinan o se incrementa su concen-
tracioacuten 10 oacute 100 veces
P
ROTE
CCIOacute
N
0
10
20
30
40
50
60CEacuteLULAS DE RETINA
Algatrium Plus vs antioxidantes
Algatrium Plus
ANT1
ANT1 x10
ANT1 x100ANT2
BIOACTIVIDAD
En este punto la cuestioacuten es iquestCuaacutel es el mecanismo por el cual el Algatrium Plus
ejerce este efecto antioxidante tan potente
Los Omega-3 pueden actuar a diferentes niveles en la fisiologiacutea celular La de-
fensa antioxidante celular se basa en la actividad de un nuacutemero de enzimas an-
tioxidantes junto con otros antioxidantes quiacutemicos conjuntamente previenen la
peroxidacioacuten lipiacutedica la proteiacuteca y el dantildeo en DNA Hemos estudiado el efecto de
Algatrium Plus en diversos aspectos del sistema antioxidante celular
Generacioacuten del anioacuten superoacutexido (O-)
La actividad superoacutexido dismutasa (SOD) y de la glutatioacuten peroxidasa (GPx)
La concentracioacuten intracelular de glutatioacuten (GSH)
La peroxidacioacuten lipiacutedica
Y el dantildeo en DNA
BIOACTIVIDAD
Mecanismo de actividad antioxidante
CellularRespiration
OxidativeBurst
EnvironmentalFactors
O-SOD
GSH
GPx
LipidPeroxidation
ProteinPeroxidation
DNA Damage
HO
HO + O
HO
GSSG
GRed
Catalase
OH
1 3
30
BIOACTIVIDAD
Mecanismo de actividad antioxidante
CellularRespiration
OxidativeBurst
EnvironmentalFactors
O-SOD
GSH
GPx
LipidPeroxidation
ProteinPeroxidation
DNA Damage
HO
HO + O
HO
GSSG
GRed
Catalase
OH
1 3
=
+
BIOACTIVIDAD
Hemos encontrado que la incorporacioacuten de Algatrium Plus en las ceacutelulas disminuye la genera-
cioacuten del anioacuten superoacutexido la peroxidacioacuten lipiacutedica de una manera dosis-dependiente inversa y
el dantildeo en DNA
Los niveles inferiores del anioacuten superoacutexido bajo estreacutes oxidativo en ceacutelulas tratadas con Alga-
trium Plus puede ser debido a la actividad maacutes alta de la SOD respecto al control
Por otra parte la actividad de la GPx en las ceacutelulas tratadas no era diferente de las ceacutelulas control
con o sin estreacutes oxidativo
El cambio maacutes significativo fue el incremento (300) de la concentracioacuten intracelular de GSH
relacionado con un incremento de la siacutentesis de novo
Estos resultados nos indican que Algatrium Plus ejerce su efecto antioxidante mediante un
incremento de la actividad del sistema antioxidante celular sin una participacioacuten directa en
el mismo que lo diferencia de los antioxidantes quiacutemicos convencionales
Esto sugiere que las ceacutelulas toleran cantidades pequentildeas de DHA y que eacuteste actuacutea a modo de
estiacutemulo para evitar cualquier acumulacioacuten de radicales libres la incorporacioacuten de Algatrium
Plus en las biomembranes provoca una respuesta celular antioxidante adaptativa
3
ESTUDIOS IN VIVO
Para valorar la accioacuten de Algatrium Plus se utilizoacute como modelo de es-
treacutes oxidativo el inducido por el ejercicio fiacutesico aerobio
Se sometioacute a deportistas a un esfuerzo continuado al 75 de su consu-
mo maacuteximo de oxiacutegeno durante 90 minutos lo cual supone una produc-
cioacuten suficiente de radicales libres y estreacutes oxidativo como para conocer
la capacidad antioxidante de cualquier manipulacioacuten dieteacutetica
Para dar credibilidad a los resultados obtenidos in vitro es necesario una
constatacioacuten de los mismos in vivo En este sentido se ha desarrollado
un ensayo cliacutenico controlado cruzadov de 4 meses de duracioacuten (N = 40
deportistas) a una dosis de 2 gdiacutea de Algatrium Plus
Las variables a estudiar fueron el dantildeo en DNA y paraacutemetros antioxidan-
tes seacutericos
Se observoacute un aumento estadiacutesticamente significativo en la capacidad
antioxidante total del serum (plt005) antes y despueacutes de la realizacioacuten
de las pruebas rectangulares en los deportistas que habiacutean ingerido Al-
gatrium Plus durante un periodo de tres semanas a cuatro meses
H2O
2 (n
mol
L m
in)
150
160
170
180
190
200
BASAL
CAPACIDAD ANTIOXIDANTE TOTAL
Paraacutemetros antioxidantes in vivo
4 MESES
ESTUDIOS IN VIVO
20 DIacuteAS
Algatrium Plus
Control
3
El nivel plasmaacutetico de MDA como iacutendice de peroxidacioacuten lipiacutedica fue
aumentando durante la realizacioacuten de todas las pruebas de esfuerzo
(plt0035) Despueacutes de la ingesta de Algatrium Plus durante 3 semanas
el dantildeo oxidativo a nivel lipiacutedico en las mismas condiciones disminuye
praacutecticamente a nivel basal (plt005) observaacutendose a los 4 meses de tra-
tamiento un efecto protector en esta variable MD
A (n
mol
L)
10
20
30
40
60
BASAL
PEROXIDACIOacuteN LIPIacuteDICA
Paraacutemetros antioxidantes in vivo
4 MESES
ESTUDIOS IN VIVO
20 DIacuteAS
50
0
-10
Hay un aumento en el dantildeo oxidativo del DNA durante la realizacioacuten de
las pruebas rectangulares del esfuerzo medidas como el nivel de 8-oxo-
dG en la orina (plt0011) La ingesta de Algatrium Plus durante 3 sema-
nas y hasta 4 meses protege el DNA del dantildeo oxidativo inducido por el
esfuerzo de una manera significativa (plt0035)
8-ox
o-dG
(pm
olK
gx24
h)
100
200
300
400
600
BASAL
DANtildeO MOLECULAR EN EL DNA
Paraacutemetros antioxidantes in vivo
4 MESES
ESTUDIOS IN VIVO
20 DIacuteAS
500
0
700
800
900
3
Como efectos colaterales en el rendimiento deportivo se ha observado
que los niveles de glicemia disminuyen durante la realizacioacuten de la prue-
ba rectangular de esfuerzo (plt00009) Esta reduccioacuten en la glicemia era
menor despueacutes de 3 semanas de ingesta de Algatrium Plus se traduciacutea
en un aumento del nivel de glicemia a los 4 meses de tratamiento con
Algatrium Plus
mg
dL
-6
-4
-2
BASAL
VARIACIOacuteN EN LA CONCENTRACIOacuteN DE GLUCOSA
Variables fisioloacutegicas de rendimiento deportivo
4 MESES
ESTUDIOS IN VIVO
3 SEMANAS
4
0
-8
2
mL
min
2600
2650
2700
BASAL
CONSUMO DE OXIacuteGENO
Variables fisioloacutegicas de rendimiento deportivo
4 MESES
ESTUDIOS IN VIVO
3 SEMANAS
2900
2550
2850Tambieacuten se ha observado un aumento significativo del consumo abso-
luto (plt0019) y relativo (plt0036) de oxiacutegeno determinado en el umbral
del esfuerzo triangular con la ingesta de Algatrium Plus hasta 4 meses
Estos resultados parecen indicar que la ingesta de Algatrium PLus pue-
de incrementar el rendimiento deportivo
2750
2800
3
CONCLUSIONES
Los aacutecidos grasos omega-3 son un concepto vigente tanto desde un punto de
vista nutricional como terapeacuteutico con un alto potencial de desarrollo
La aplicacioacuten de los aacutecidos grasos omega-3 en estos campos requiere de produc-
tos manufacturados de acuerdo con los estaacutendares que se aplican a productos
farmaceacuteuticos que incluyen controles de calidad para asegurar su pureza y cali-
dad estructural que condiciona su bioactividad Como estaacutendar es exigible una
riqueza miacutenima superior al 5 en una estructura quiacutemica muy biodisponible
como un trigliceacuterido
La incorporacioacuten de Algatrium Plus en las membranas celulares no soacutelo no pro-
mueve la peroxidacioacuten lipiacutedica sino que actuacutea como un activador del sistema
antioxidante celular probablemente como consecuencia de una respuesta adap-
tativa de la ceacutelula
INFORMACIOacuteN LEGAL
ALGATRIUM es una Marca Internacional propiedad de BRUDY TECHNOLOGY
El uso de DHA de alta concentracioacuten para el tratamiento de enfermedades tu-
morales estaacute protegido por la Patente Internacional nordm200501141 Propiedad de
BRUDY TECHNOLOGY
La comercializacioacuten y el uso de Omega-3 Antioxidantes estaacute protegido por la
Patente Internacional nordm200503202 propiedad de BRUDY TECHNOLOGY
Dr Joan C Domingo Pedrol - Departamento de Bioquiacutemica y Biologiacutea Molecular - Universidad de Barcelona - Telf 934 021 214 - e-mail jcdomingoubedu
Fabricado en Espantildea por Brudy Technology - CRiera de Sant Miquel 3 - ordm ordf - 000 Barcelona - Tel 93 17 03
BIOACTIVIDAD - SEGURIDAD
DHA TG QUIacuteMICO ALGATRIUM PLUS
bull pH extremosbull Temperaturas altas (destilacioacuten)bull Reactivos quiacutemicos
bull pH fisioloacutegicobull Temperaturas bajasbull Sin reactivos quiacutemicos
bull Nivel bajo de trigliceacuteridosbull Productos de reaccioacuten secundariosbull Purificacioacuten cromatograacutefica
bull Nivel alto de trigliceacuteridosbull Sin productos secundariosbull No necesita maacutes purificacioacuten
bull Migracioacuten de dobles enlacesbull Oxidacioacuten de dobles enlacesbull Isomerizaciones CisTrans
bull Preservacioacuten de dobles enlacesbull No oxidacioacuten de dobles enlacesbull No isomerizaciones Cis Trans
La siacutentesis industrial de trigliceacuteridos se puede realizar quiacutemicamente o por
viacutea enzimaacutetica Las diferencias en las condiciones de reaccioacuten entre un pro-
ceso de siacutentesis quiacutemico y uno enzimaacutetico determinaraacuten las calidades finales
para cada producto El uso de meacutetodos tradicionales quiacutemicos (separacioacuten
cromatograacutefica destilacioacuten molecular etc) para producir concentrados de
PUFAs omega-3 implican el uso de pHs extremos y de altas temperaturas que
pueden destruir parcialmente la estructura de los dobles enlaces todos cis del
PUFA omega-3 natural por oxidacioacuten isomerizacioacuten o migracioacuten
Por otra parte las condiciones suaves (temperatura menor de 50degC pH 6-8 y
menos productos quiacutemicos) usadas en la hidroacutelisis enzimaacutetica proporcionan
un alternativa prometedora que podriacutea tambieacuten ahorrar energiacutea y aumentar
la selectividad del producto La preservacioacuten de los enlaces dobles conferiraacute
a la moleacutecula una mayor bioactividad
1
ALGATRIUM PLUS
ESPECIFICACIOacuteN UNIDADES LIacuteMITES
Acidez mg KOHg 30 maacutex
Contenido antioxidante g100g 10 - 11
Densidad a 20ordmC Kgl 0930 - 0940
Aacutecido graso DHA (C n3) FA 70 miacuten
Aacutecido graso DPA (C22 5n3) FA 8 maacutex
Aacutecido graso EPA (C0 5n3) FA 10 maacutex
Aacutecidos grasos Omega-3 FA 5 miacuten
Iacutendice de Peroacutexidos meq O2Kg 50 maacutex
Residuo seco g100g 010 maacutex
Muchos estudios demuestran que la bioactividad de los aceites omega-3 y
principalmente del DHA estaacute relacionada directamente con su contenido res-
pecto a los aacutecidos grasos totales los cuaacuteles pueden competir con los omega-3
en un metabolismo concreto Para obtener el maacuteximo nivel de bioactividad
Brudy ha dirigido sus esfuerzos en dos objetivos baacutesicos
Tener el maacuteximo contenido de DHA en el trigliceacuterido
Reducir al maacuteximo el contenido de EPA
Ademaacutes este aceite cumple todos los requisitos legales en cuanto a iacutendice de
peroacutexidos acidez contenido antioxidante nivel de metales pesadoshellip
Especificaciones del aceite omega-3 utilizado en estos estudios
De todos los aceites que hay en el mercado Algatrium Plus (DHA 70e) es
el aceite enriquecido con un contenido en omega-3 global y en DHA maacutes
alto
0
10
20
30
40
50
Comparativa de diferentes aceites omega-3 en el mercado
DPA
EPA
Algatrium Plus
OMEGA-3
60
70
80
90
P M HSO DHA 50CHEM ALGATRIUM PLUS
ALGATRIUM PLUS
1
OMEGA-3 OMEGA-3 SIacuteNTESIS INSA MG DG CHOL PLM TG EE GTOTAL
A PLUS 70 ENZIMAacuteTICO 05 nd 71 nd nd 865 59 936
FISH 20 ATUacuteN 47 nd 22 42 nd 889 nd 911
DHA 50 QUIacuteMICO 27 43 103 35 228 401 140 532
DHA 50 QUIacuteMICO-PURIFICADO 21 nd 188 nd nd 664 52 852
La biodisponibilidad del aceite es directamente pro-
porcional al tipo de moleacuteculas que lo compongan
concretamente a su composicioacuten lipiacutedica Los acei-
tes naturales contienen maacutes del 90 de materia en
forma de gliceacuterido que proporciona una biodispo-
nibilidad maacutexima Algatrium Plus es muy similar a
un aceite natural (la composicioacuten lipiacutedica incluye un
90 de gliceacuteridos totales con un 5 en forma de
trigliceacuteridos y sin monogliceacuteridos) El DHA obteni-
do quiacutemicamente tiene un nivel bajo de trigliceacuteri-
dos (lt50) un mayor nivel de eacutesteres etiacutelicos y un
alto contenido de poliacutemeros (15-0) que no son
absorbibles y que se deben eliminar por cromatogra-
fiacutea en columna (QUIacuteMICO-PURIFICADO)
Especificaciones del aceite omega-3 utilizado en estos estudios
ALGATRIUM PLUS
Solamente los aceites de pescado o de algas naturales que no se han rees-
terificado satisfacen la legislacioacuten alimentaria en cuanto a su composicioacuten
y por lo tanto son un alimento El DHA obtenido quiacutemicamente no satisface los
requisitos de la farmacopea europea sobretodo relacionado con el nivel de
trigliceacuteridos gliceacuteridos totales y en el contenido en compuestos polimeacutericos
Es necesaria una purificacioacuten por cromatografiacutea en columna para que el pro-
ducto cumpla los requisitos de la legislacioacuten europea Algatrium Plus tiene la
misma composicioacuten que los aceites naturales y por lo tanto se consideran
un alimento
LEGISLACIOacuteN
0
10
20
30
40
50
Composicioacuten estructural Algatrium Plus
Farmacopea
DHA 50 QUIacuteMICO
DHA 50 QUIacuteMICO-PURIFICADO
60
70
80
90
INS DG PLM TG EE
100
MG FA GTotal
1
ACTIVIDAD ANTITUMORAL
Para valorar la actividad de Algatrium Plus nuestro primer obje-
tivo fue determinar su capacidad citotoacutexica antitumoral En este
sentido realizamos un estudio comparativo usando ceacutelulas tumo-
rales (HeLa) y ceacutelulas sanas como control (renales y de piel) Hemos
realizado estudios dosis-respuesta para determinar el valor de IC50
como criterio de toxicidad (es la concentracioacuten que mata al 50 de
las ceacutelulas) Hemos analizado dos variables el efecto de la estructu-
ra del liacutepido y del contenido en DHA Para un contenido en DHA del
70 de todos los aacutecidos grasos se obtuvo la misma toxicidad en
ceacutelulas tumorales con el eacutester etiacutelico (EE) el aacutecido graso libre (FA) o
el trigliceacuterido (TG) Pero en ceacutelulas renales sanas el EE tiene la mis-
ma toxicidad que en las ceacutelulas tumorales y en las ceacutelulas de piel el
FA demuestran una gran toxicidad siendo los TG la forma con un
mejor cociente de seguridad Para una misma estructura quiacutemica
el TG una disminucioacuten del contenido en DHA a 50 o al 20 (este
uacuteltimo es la concentracioacuten en el aceite de pescado) disminuye de
forma dramaacutetica el efecto citotoacutexico en las ceacutelulas del tumor Estos
resultados demuestran que la forma oacuteptima es el trigliceacuterido con
un alto contenido en DHA (Algatrium Plus)
Efectos del contenido en DHA y de la estructura quiacutemica Toxicidad celular
FA 70 1231 plusmn90 nd 722 plusmn58 17
EE 70 5663 plusmn539 726 plusmn83 710 plusmn97 798 -102
TG (Algatrium Plus) 70 7167 plusmn419 3927 plusmn375 586 plusmn88 1223 -670
TG (Quiacutemico) 50 19560 plusmn278 4136 plusmn256 5640 plusmn696 347 -073
TG (Pescado) 20 22676 plusmn279 31160 plusmn1582 13794 plusmn2864 164 -226
ESTRUCTURA DHA PIEL RENAL HeLa
RELACIOacuteNDE
SEGURIDAD
CEacuteLULASTUMORALESCEacuteLULAS SANAS
COMPOSICIOacuteNIC50 (μM)
Otra actividad interesante de los PUFAs omega-3 en caacutencer es su uso como
adyuvantes en la quimioterapia convencional En este sentido determina-
mos los efectos de Algatrium Plus a concentraciones subtoacutexicas sobre la toxi-
cidad de la Doxorrubicina y del 5-fluoroacilo La exposicioacuten simultaacutenea de las
ceacutelulas tumorales al DHA y a la droga aumenta la toxicidad de la misma dos
veces (disminuye el valor de la IC50) Por otra parte si Algatrium Plus se ha
incorporado previamente a la membrana celular este efecto potenciador au-
menta hasta 10 veces
ACTIVIDAD COMO ADYUVANTE ANTITUMORAL
Efecto del DHA sobre la actividad antitumoral de la Doxorrubicina o del 5-fluoroacilo Toxicidad celular
Este efecto potenciador depende del contenido en DHA ya que con el uso de
un aceite quiacutemico (50 en DHA) o de aceite de pescado (20 en DHA) se pier-
de progresivamente dicho efecto potenciador Tambieacuten es significativo que
este efecto no incrementa la toxicidad de los citostaacuteticos en ceacutelulas sanas
Efecto del contenido en dha sobre la actividad antitumoral de la doxorrubicina Toxicidad celular
Control 0 2953 plusmn316 (n=8)
Pre-incorporado15
10
301 plusmn54 (n=8)287 plusmn67 (n=8)370 plusmn44 (n=6)
Simultaacuteneo 5 1843 plusmn162 (n=4)
Control 0 2330 plusmn368 (n=12)
Pre-incorporado15
10
280 plusmn110 (n=7)238 plusmn101 (n=4)380 plusmn142 (n=6)
Simultaacuteneo 5 1480 plusmn801 (n=6)
LIacuteNEA CELULAR
HeLa-Epitelial (Dox)
HT-29-Colon (5-FU)
SISTEMADE ADICIOacuteN
ALGATRIUM PLUS μM IC50 (μM)
0 2953 plusmn316 11586 plusmn3699
5 287 plusmn67 10466 plusmn2304
10 370 plusmn44 10805 plusmn1742
5 1309 plusmn156 11633 plusmn1569
10 1063 plusmn207 9801 plusmn2709
5 2574 plusmn296 11575 plusmn1249
10 2365 plusmn157 15303 plusmn4813
CONTENIDOEN DHA
Control
DHAAlgatrium Plus
DHA TG 50Quiacutemico
DHA TG 20Pescado
DHA (μM)CEacuteLULA TUMORAL CEacuteLULA SANA
IC50 (nM)
1
BIOACTIVIDAD - SEGURIDAD
En los sistemas quiacutemicos puros las moleacuteculas maacutes susceptibles al ataque de los
radicales libres son los aacutecidos grasos poliinsaturados (PUFAs) como el aacutecido do-
cosahexaenoico (DHA n-3) y en general esta susceptibilidad aumenta con
el nuacutemero de dobles enlaces In vivo se supone el mismo comportamiento
Entonces iquestpor queacute el DHA una diana molecular de los radiaciones libres es el
aacutecido graso maacutes abundante en tejidos expuestos a un potencial estreacutes oxidativo
como la retina o en tejidos con un sistema antioxidante celular deficiente como
el sistema nervioso central
iquestACTIVIDAD PRO-O ANTIOXIDANTE
BIOACTIVIDAD - SEGURIDAD
En este contexto hemos estudiado la influencia de la presencia del DHA enzimaacutetico
en la membrana celular sobre la generacioacuten intracelular de radicales libres utilizando
como sistema experimental dos liacuteneas celulares humanas sanas fibroblastos de piel
(Foreskin ATC CRL 2076) y ceacutelulas epiteliales pigmentarias de la retina (ARPE-19 ATCC
CRL 2302)
La cuantificacioacuten de los radicales libres generados se ha realizado mediante metodolo-
giacuteas fluorescentes usando sondas moleculares como el HDCF-DA DHR y DHE
Como inductores exoacutegenos de estreacutes oxidativo se ha utilizado el AAPH y el sistema
xantinaxantin oxidasa y como inductores endoacutegenos la rotenona y la antimicina A
0
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE CELULAR
Como se muestra en la figura la presencia de Algatrium Plus en la
membrana celular disminuye la generacioacuten intracelular de radicales
libres despueacutes de estar sometidas las ceacutelulas a un estreacutes oxidativo
Este comportamiento es independiente de la ceacutelula en estudio (piel o
retina) y del marcador utilizado (H2DCF-DA o DHR) lo cual nos indica la
activacioacuten de un mecanismo general El nivel de proteccioacuten observado
tambieacuten es similar frente al mismo estiacutemulo oxidativo
0 50 100 150 200 250Tiempo (min)
Fluo
resc
enci
a (U
A)
-49
CEacuteLULAS DE RETINA
H2DCF-DA
0 50 100 150 200Tiempo (min)
Fluo
resc
enci
a (U
A)
-42
CEacuteLULAS DE PIEL
0 50 100 150 200 250Tiempo (min)
Fluo
resc
enci
a (U
A)
-56DHR
0 50 100 150 200 250Tiempo (min)
Fluo
resc
enci
a (U
A)
-50
Control
Algatrium Plus
Incr
emen
to
Pro
tecc
ioacuten
EFECTO ADITIVO
Algatrium Plus
0
0306
09
18
21
05 5
1215
Para determinar que la proteccioacuten antioxidante de Algatrium Plus era un
proceso general cambiamos el inductor de estreacutes oxidativo de un produc-
to quiacutemico (el AAPH) a un sistema enzimaacutetico (sistema XXO) o inductores
endoacutegenos (ROT y ANT A) Se ha observado el mismo comportamiento en
todos los casos
El efecto antioxidante de Algatrium Plus depende de la dosis mostrando
un comportamiento dosis-dependiente a la inversa El mayor efecto se ha
observado en una concentracioacuten baja de DHA mientras que a altas con-
centraciones el efecto antioxidante disminuye independientemente de la
potencia del estreacutes oxidativo
Tambieacuten el efecto antioxidante de Algatrium Plus presenta un efecto adi-
tivo con la frecuencia de la administracioacuten La administracioacuten de una do-
sis diaria inrementa el efecto antioxidante respecto a una sola administra-
cioacuten
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE CELULAR
0 50 100 150 200 250Tiempo (min)
Fluo
resc
enci
a (U
A)
-49
CEacuteLULAS DE RETINA AAPH
P
rote
ccioacute
n
ROT ANT A XXO0
10
20
3040
50
60
INDEPENDIENTE DEL INDUCTOR
P
rote
ccioacute
n
DEPENDENCIA DE LA DOSIS
Algatrium Plus
0
10
20
3040
50
60
05 5 50Dosis diaria
Una dosis
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE CELULAR
La generacioacuten intracelular de radicales libres se confirmoacute mediante
microscopia de fluorescencia confocal Las micrografiacuteas muestran una
acumulacioacuten progresiva en el tiempo de radicales libres en las ceacutelulas
control sin DHA mientras que en las que han incorporado Algatrium
Plus en su membrana el nivel intracelular de radicales libres no ha
aumentado
T= 0 min
T= 15 min
T= 30 min
CONTROL ALGATRIUM PLUS 05 μM
CEacuteLULAS DE PIEL
A nivel celular la generacioacuten de radicales libres parece ser dependiente de
la composicioacuten en aacutecidos grasos de la ceacutelula pero la influencia especiacutefica de
cada clase de aacutecido graso no ha sido estudiada
Por otra parte a nivel industrial el meacutetodo de siacutentesis usado para obtener
el aceite enriquecido en DHA puede ser muy importante en la calidad final
del producto En este sentido hemos estudiado la importancia del contenido
de DHA y del origen sinteacutetico en el efecto antioxidante
Como se puede observar en la figura una disminucioacuten del contenido en DHA
al 50 (origen quiacutemico) o al 20 (aceite de pescado) de los aacutecidos grasos to-
tales induce una disminucioacuten del efecto antioxidante en las ceacutelulas de retina
aunque en ninguacuten caso llega a ser pro-oxidante Sin embargo en ceacutelulas de
piel esta reduccioacuten es tan acusada que soacutelo Algatrium Plus es antioxidante
siendo los otros dos pro-oxidantes
Dado el caraacutecter multifactorial de un tratamiento nutricional no es aconseja-
ble administrar un producto que presente actividades divergentes en funcioacuten
del tejido al que se incorpore
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE CELULAR
CEacuteLULASDE PIEL
05 μM
5 μM
50 μM
ACEITE DE PESCADO
P
ROTE
CCIOacute
N
0
20
40
60
-20
-40
DHA TG50QUIacuteMICO
ALGATRIUMPLUS
P
ROTE
CCIOacute
N
60
20
0
CEacuteLULASDE RETINA
40
DHA quiacutemico vs Algatrium Plus
ACEITE DE PESCADO
DHA TG50QUIacuteMICO
ALGATRIUMPLUS
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE CELULAR
Si la baja actividad del aceite de origen quiacutemico (50 en DHA) pudie-
ra estar relacionado con la presencia de estructuras polimeacutericas su eli-
minacioacuten por cromatografiacutea en columna deberiacutea permitir recuperar su
actividad antioxidante Como se puede observar en la figura una mani-
pulacioacuten excesiva del producto original para eliminar contaminantes
o para mejorar sus caracteriacutesticas organoleacutepticas se traduce en una
peacuterdida de bioactividad
P
ROTE
CCIOacute
N
0
10
20
30
40
50
60
-10DHA TG50QUIacuteMICO
ALGATRIUMPLUS
DHA TG50 QUIacuteMICOPURIFICADO
(DHA)
05 μM
5 μM
50 μM
CEacuteLULAS DE RETINA
DHA quiacutemico vs Algatrium Plus
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE CELULAR
La actividad antioxidante del Algatrium Plus tambieacuten esta relacionada
con su mayor biodisponibilidad ya que un eacutester etiacutelico o un aacutecido graso
libre con el mismo contenido en DHA presenta una actividad antioxi-
dante como maacuteximo la mitad de la de Algatrium Plus
P
ROTE
CCIOacute
N
0
10
20
30
40
50
60
05 μM
(DHA)
FA-BSA
Algatrium Plus
CEacuteLULAS DE RETINA
Efecto de la estructura quiacutemica Fa vs Ee vs Tg
70
5 μM
TG 50 CHEM
EE 70
FA Aacutecido graso libre
EE Eacutester etiacutelico
TG Trigliceacuterido
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE CELULAR
Comparado con los antioxidantes normalmente utilizados en tratamien-
tos oculares a las concentraciones oacuteptimas descritas Algatrium Plus pre-
senta a todas las dosis estudiadas un efecto superior
P
ROTE
CCIOacute
N
0
10
20
30
40
50
60CEacuteLULAS DE RETINA
Algatrium Plus vs antioxidantes
Algatrium Plus
NAC mM
Cys 1 m
M
Co Q 100 μM
Vit E 100 μM
Vit C 100 μM
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE CELULAR
Incluso si estos antioxidantes se combinan o se incrementa su concen-
tracioacuten 10 oacute 100 veces
P
ROTE
CCIOacute
N
0
10
20
30
40
50
60CEacuteLULAS DE RETINA
Algatrium Plus vs antioxidantes
Algatrium Plus
ANT1
ANT1 x10
ANT1 x100ANT2
BIOACTIVIDAD
En este punto la cuestioacuten es iquestCuaacutel es el mecanismo por el cual el Algatrium Plus
ejerce este efecto antioxidante tan potente
Los Omega-3 pueden actuar a diferentes niveles en la fisiologiacutea celular La de-
fensa antioxidante celular se basa en la actividad de un nuacutemero de enzimas an-
tioxidantes junto con otros antioxidantes quiacutemicos conjuntamente previenen la
peroxidacioacuten lipiacutedica la proteiacuteca y el dantildeo en DNA Hemos estudiado el efecto de
Algatrium Plus en diversos aspectos del sistema antioxidante celular
Generacioacuten del anioacuten superoacutexido (O-)
La actividad superoacutexido dismutasa (SOD) y de la glutatioacuten peroxidasa (GPx)
La concentracioacuten intracelular de glutatioacuten (GSH)
La peroxidacioacuten lipiacutedica
Y el dantildeo en DNA
BIOACTIVIDAD
Mecanismo de actividad antioxidante
CellularRespiration
OxidativeBurst
EnvironmentalFactors
O-SOD
GSH
GPx
LipidPeroxidation
ProteinPeroxidation
DNA Damage
HO
HO + O
HO
GSSG
GRed
Catalase
OH
1 3
30
BIOACTIVIDAD
Mecanismo de actividad antioxidante
CellularRespiration
OxidativeBurst
EnvironmentalFactors
O-SOD
GSH
GPx
LipidPeroxidation
ProteinPeroxidation
DNA Damage
HO
HO + O
HO
GSSG
GRed
Catalase
OH
1 3
=
+
BIOACTIVIDAD
Hemos encontrado que la incorporacioacuten de Algatrium Plus en las ceacutelulas disminuye la genera-
cioacuten del anioacuten superoacutexido la peroxidacioacuten lipiacutedica de una manera dosis-dependiente inversa y
el dantildeo en DNA
Los niveles inferiores del anioacuten superoacutexido bajo estreacutes oxidativo en ceacutelulas tratadas con Alga-
trium Plus puede ser debido a la actividad maacutes alta de la SOD respecto al control
Por otra parte la actividad de la GPx en las ceacutelulas tratadas no era diferente de las ceacutelulas control
con o sin estreacutes oxidativo
El cambio maacutes significativo fue el incremento (300) de la concentracioacuten intracelular de GSH
relacionado con un incremento de la siacutentesis de novo
Estos resultados nos indican que Algatrium Plus ejerce su efecto antioxidante mediante un
incremento de la actividad del sistema antioxidante celular sin una participacioacuten directa en
el mismo que lo diferencia de los antioxidantes quiacutemicos convencionales
Esto sugiere que las ceacutelulas toleran cantidades pequentildeas de DHA y que eacuteste actuacutea a modo de
estiacutemulo para evitar cualquier acumulacioacuten de radicales libres la incorporacioacuten de Algatrium
Plus en las biomembranes provoca una respuesta celular antioxidante adaptativa
3
ESTUDIOS IN VIVO
Para valorar la accioacuten de Algatrium Plus se utilizoacute como modelo de es-
treacutes oxidativo el inducido por el ejercicio fiacutesico aerobio
Se sometioacute a deportistas a un esfuerzo continuado al 75 de su consu-
mo maacuteximo de oxiacutegeno durante 90 minutos lo cual supone una produc-
cioacuten suficiente de radicales libres y estreacutes oxidativo como para conocer
la capacidad antioxidante de cualquier manipulacioacuten dieteacutetica
Para dar credibilidad a los resultados obtenidos in vitro es necesario una
constatacioacuten de los mismos in vivo En este sentido se ha desarrollado
un ensayo cliacutenico controlado cruzadov de 4 meses de duracioacuten (N = 40
deportistas) a una dosis de 2 gdiacutea de Algatrium Plus
Las variables a estudiar fueron el dantildeo en DNA y paraacutemetros antioxidan-
tes seacutericos
Se observoacute un aumento estadiacutesticamente significativo en la capacidad
antioxidante total del serum (plt005) antes y despueacutes de la realizacioacuten
de las pruebas rectangulares en los deportistas que habiacutean ingerido Al-
gatrium Plus durante un periodo de tres semanas a cuatro meses
H2O
2 (n
mol
L m
in)
150
160
170
180
190
200
BASAL
CAPACIDAD ANTIOXIDANTE TOTAL
Paraacutemetros antioxidantes in vivo
4 MESES
ESTUDIOS IN VIVO
20 DIacuteAS
Algatrium Plus
Control
3
El nivel plasmaacutetico de MDA como iacutendice de peroxidacioacuten lipiacutedica fue
aumentando durante la realizacioacuten de todas las pruebas de esfuerzo
(plt0035) Despueacutes de la ingesta de Algatrium Plus durante 3 semanas
el dantildeo oxidativo a nivel lipiacutedico en las mismas condiciones disminuye
praacutecticamente a nivel basal (plt005) observaacutendose a los 4 meses de tra-
tamiento un efecto protector en esta variable MD
A (n
mol
L)
10
20
30
40
60
BASAL
PEROXIDACIOacuteN LIPIacuteDICA
Paraacutemetros antioxidantes in vivo
4 MESES
ESTUDIOS IN VIVO
20 DIacuteAS
50
0
-10
Hay un aumento en el dantildeo oxidativo del DNA durante la realizacioacuten de
las pruebas rectangulares del esfuerzo medidas como el nivel de 8-oxo-
dG en la orina (plt0011) La ingesta de Algatrium Plus durante 3 sema-
nas y hasta 4 meses protege el DNA del dantildeo oxidativo inducido por el
esfuerzo de una manera significativa (plt0035)
8-ox
o-dG
(pm
olK
gx24
h)
100
200
300
400
600
BASAL
DANtildeO MOLECULAR EN EL DNA
Paraacutemetros antioxidantes in vivo
4 MESES
ESTUDIOS IN VIVO
20 DIacuteAS
500
0
700
800
900
3
Como efectos colaterales en el rendimiento deportivo se ha observado
que los niveles de glicemia disminuyen durante la realizacioacuten de la prue-
ba rectangular de esfuerzo (plt00009) Esta reduccioacuten en la glicemia era
menor despueacutes de 3 semanas de ingesta de Algatrium Plus se traduciacutea
en un aumento del nivel de glicemia a los 4 meses de tratamiento con
Algatrium Plus
mg
dL
-6
-4
-2
BASAL
VARIACIOacuteN EN LA CONCENTRACIOacuteN DE GLUCOSA
Variables fisioloacutegicas de rendimiento deportivo
4 MESES
ESTUDIOS IN VIVO
3 SEMANAS
4
0
-8
2
mL
min
2600
2650
2700
BASAL
CONSUMO DE OXIacuteGENO
Variables fisioloacutegicas de rendimiento deportivo
4 MESES
ESTUDIOS IN VIVO
3 SEMANAS
2900
2550
2850Tambieacuten se ha observado un aumento significativo del consumo abso-
luto (plt0019) y relativo (plt0036) de oxiacutegeno determinado en el umbral
del esfuerzo triangular con la ingesta de Algatrium Plus hasta 4 meses
Estos resultados parecen indicar que la ingesta de Algatrium PLus pue-
de incrementar el rendimiento deportivo
2750
2800
3
CONCLUSIONES
Los aacutecidos grasos omega-3 son un concepto vigente tanto desde un punto de
vista nutricional como terapeacuteutico con un alto potencial de desarrollo
La aplicacioacuten de los aacutecidos grasos omega-3 en estos campos requiere de produc-
tos manufacturados de acuerdo con los estaacutendares que se aplican a productos
farmaceacuteuticos que incluyen controles de calidad para asegurar su pureza y cali-
dad estructural que condiciona su bioactividad Como estaacutendar es exigible una
riqueza miacutenima superior al 5 en una estructura quiacutemica muy biodisponible
como un trigliceacuterido
La incorporacioacuten de Algatrium Plus en las membranas celulares no soacutelo no pro-
mueve la peroxidacioacuten lipiacutedica sino que actuacutea como un activador del sistema
antioxidante celular probablemente como consecuencia de una respuesta adap-
tativa de la ceacutelula
INFORMACIOacuteN LEGAL
ALGATRIUM es una Marca Internacional propiedad de BRUDY TECHNOLOGY
El uso de DHA de alta concentracioacuten para el tratamiento de enfermedades tu-
morales estaacute protegido por la Patente Internacional nordm200501141 Propiedad de
BRUDY TECHNOLOGY
La comercializacioacuten y el uso de Omega-3 Antioxidantes estaacute protegido por la
Patente Internacional nordm200503202 propiedad de BRUDY TECHNOLOGY
Dr Joan C Domingo Pedrol - Departamento de Bioquiacutemica y Biologiacutea Molecular - Universidad de Barcelona - Telf 934 021 214 - e-mail jcdomingoubedu
Fabricado en Espantildea por Brudy Technology - CRiera de Sant Miquel 3 - ordm ordf - 000 Barcelona - Tel 93 17 03
1
ALGATRIUM PLUS
ESPECIFICACIOacuteN UNIDADES LIacuteMITES
Acidez mg KOHg 30 maacutex
Contenido antioxidante g100g 10 - 11
Densidad a 20ordmC Kgl 0930 - 0940
Aacutecido graso DHA (C n3) FA 70 miacuten
Aacutecido graso DPA (C22 5n3) FA 8 maacutex
Aacutecido graso EPA (C0 5n3) FA 10 maacutex
Aacutecidos grasos Omega-3 FA 5 miacuten
Iacutendice de Peroacutexidos meq O2Kg 50 maacutex
Residuo seco g100g 010 maacutex
Muchos estudios demuestran que la bioactividad de los aceites omega-3 y
principalmente del DHA estaacute relacionada directamente con su contenido res-
pecto a los aacutecidos grasos totales los cuaacuteles pueden competir con los omega-3
en un metabolismo concreto Para obtener el maacuteximo nivel de bioactividad
Brudy ha dirigido sus esfuerzos en dos objetivos baacutesicos
Tener el maacuteximo contenido de DHA en el trigliceacuterido
Reducir al maacuteximo el contenido de EPA
Ademaacutes este aceite cumple todos los requisitos legales en cuanto a iacutendice de
peroacutexidos acidez contenido antioxidante nivel de metales pesadoshellip
Especificaciones del aceite omega-3 utilizado en estos estudios
De todos los aceites que hay en el mercado Algatrium Plus (DHA 70e) es
el aceite enriquecido con un contenido en omega-3 global y en DHA maacutes
alto
0
10
20
30
40
50
Comparativa de diferentes aceites omega-3 en el mercado
DPA
EPA
Algatrium Plus
OMEGA-3
60
70
80
90
P M HSO DHA 50CHEM ALGATRIUM PLUS
ALGATRIUM PLUS
1
OMEGA-3 OMEGA-3 SIacuteNTESIS INSA MG DG CHOL PLM TG EE GTOTAL
A PLUS 70 ENZIMAacuteTICO 05 nd 71 nd nd 865 59 936
FISH 20 ATUacuteN 47 nd 22 42 nd 889 nd 911
DHA 50 QUIacuteMICO 27 43 103 35 228 401 140 532
DHA 50 QUIacuteMICO-PURIFICADO 21 nd 188 nd nd 664 52 852
La biodisponibilidad del aceite es directamente pro-
porcional al tipo de moleacuteculas que lo compongan
concretamente a su composicioacuten lipiacutedica Los acei-
tes naturales contienen maacutes del 90 de materia en
forma de gliceacuterido que proporciona una biodispo-
nibilidad maacutexima Algatrium Plus es muy similar a
un aceite natural (la composicioacuten lipiacutedica incluye un
90 de gliceacuteridos totales con un 5 en forma de
trigliceacuteridos y sin monogliceacuteridos) El DHA obteni-
do quiacutemicamente tiene un nivel bajo de trigliceacuteri-
dos (lt50) un mayor nivel de eacutesteres etiacutelicos y un
alto contenido de poliacutemeros (15-0) que no son
absorbibles y que se deben eliminar por cromatogra-
fiacutea en columna (QUIacuteMICO-PURIFICADO)
Especificaciones del aceite omega-3 utilizado en estos estudios
ALGATRIUM PLUS
Solamente los aceites de pescado o de algas naturales que no se han rees-
terificado satisfacen la legislacioacuten alimentaria en cuanto a su composicioacuten
y por lo tanto son un alimento El DHA obtenido quiacutemicamente no satisface los
requisitos de la farmacopea europea sobretodo relacionado con el nivel de
trigliceacuteridos gliceacuteridos totales y en el contenido en compuestos polimeacutericos
Es necesaria una purificacioacuten por cromatografiacutea en columna para que el pro-
ducto cumpla los requisitos de la legislacioacuten europea Algatrium Plus tiene la
misma composicioacuten que los aceites naturales y por lo tanto se consideran
un alimento
LEGISLACIOacuteN
0
10
20
30
40
50
Composicioacuten estructural Algatrium Plus
Farmacopea
DHA 50 QUIacuteMICO
DHA 50 QUIacuteMICO-PURIFICADO
60
70
80
90
INS DG PLM TG EE
100
MG FA GTotal
1
ACTIVIDAD ANTITUMORAL
Para valorar la actividad de Algatrium Plus nuestro primer obje-
tivo fue determinar su capacidad citotoacutexica antitumoral En este
sentido realizamos un estudio comparativo usando ceacutelulas tumo-
rales (HeLa) y ceacutelulas sanas como control (renales y de piel) Hemos
realizado estudios dosis-respuesta para determinar el valor de IC50
como criterio de toxicidad (es la concentracioacuten que mata al 50 de
las ceacutelulas) Hemos analizado dos variables el efecto de la estructu-
ra del liacutepido y del contenido en DHA Para un contenido en DHA del
70 de todos los aacutecidos grasos se obtuvo la misma toxicidad en
ceacutelulas tumorales con el eacutester etiacutelico (EE) el aacutecido graso libre (FA) o
el trigliceacuterido (TG) Pero en ceacutelulas renales sanas el EE tiene la mis-
ma toxicidad que en las ceacutelulas tumorales y en las ceacutelulas de piel el
FA demuestran una gran toxicidad siendo los TG la forma con un
mejor cociente de seguridad Para una misma estructura quiacutemica
el TG una disminucioacuten del contenido en DHA a 50 o al 20 (este
uacuteltimo es la concentracioacuten en el aceite de pescado) disminuye de
forma dramaacutetica el efecto citotoacutexico en las ceacutelulas del tumor Estos
resultados demuestran que la forma oacuteptima es el trigliceacuterido con
un alto contenido en DHA (Algatrium Plus)
Efectos del contenido en DHA y de la estructura quiacutemica Toxicidad celular
FA 70 1231 plusmn90 nd 722 plusmn58 17
EE 70 5663 plusmn539 726 plusmn83 710 plusmn97 798 -102
TG (Algatrium Plus) 70 7167 plusmn419 3927 plusmn375 586 plusmn88 1223 -670
TG (Quiacutemico) 50 19560 plusmn278 4136 plusmn256 5640 plusmn696 347 -073
TG (Pescado) 20 22676 plusmn279 31160 plusmn1582 13794 plusmn2864 164 -226
ESTRUCTURA DHA PIEL RENAL HeLa
RELACIOacuteNDE
SEGURIDAD
CEacuteLULASTUMORALESCEacuteLULAS SANAS
COMPOSICIOacuteNIC50 (μM)
Otra actividad interesante de los PUFAs omega-3 en caacutencer es su uso como
adyuvantes en la quimioterapia convencional En este sentido determina-
mos los efectos de Algatrium Plus a concentraciones subtoacutexicas sobre la toxi-
cidad de la Doxorrubicina y del 5-fluoroacilo La exposicioacuten simultaacutenea de las
ceacutelulas tumorales al DHA y a la droga aumenta la toxicidad de la misma dos
veces (disminuye el valor de la IC50) Por otra parte si Algatrium Plus se ha
incorporado previamente a la membrana celular este efecto potenciador au-
menta hasta 10 veces
ACTIVIDAD COMO ADYUVANTE ANTITUMORAL
Efecto del DHA sobre la actividad antitumoral de la Doxorrubicina o del 5-fluoroacilo Toxicidad celular
Este efecto potenciador depende del contenido en DHA ya que con el uso de
un aceite quiacutemico (50 en DHA) o de aceite de pescado (20 en DHA) se pier-
de progresivamente dicho efecto potenciador Tambieacuten es significativo que
este efecto no incrementa la toxicidad de los citostaacuteticos en ceacutelulas sanas
Efecto del contenido en dha sobre la actividad antitumoral de la doxorrubicina Toxicidad celular
Control 0 2953 plusmn316 (n=8)
Pre-incorporado15
10
301 plusmn54 (n=8)287 plusmn67 (n=8)370 plusmn44 (n=6)
Simultaacuteneo 5 1843 plusmn162 (n=4)
Control 0 2330 plusmn368 (n=12)
Pre-incorporado15
10
280 plusmn110 (n=7)238 plusmn101 (n=4)380 plusmn142 (n=6)
Simultaacuteneo 5 1480 plusmn801 (n=6)
LIacuteNEA CELULAR
HeLa-Epitelial (Dox)
HT-29-Colon (5-FU)
SISTEMADE ADICIOacuteN
ALGATRIUM PLUS μM IC50 (μM)
0 2953 plusmn316 11586 plusmn3699
5 287 plusmn67 10466 plusmn2304
10 370 plusmn44 10805 plusmn1742
5 1309 plusmn156 11633 plusmn1569
10 1063 plusmn207 9801 plusmn2709
5 2574 plusmn296 11575 plusmn1249
10 2365 plusmn157 15303 plusmn4813
CONTENIDOEN DHA
Control
DHAAlgatrium Plus
DHA TG 50Quiacutemico
DHA TG 20Pescado
DHA (μM)CEacuteLULA TUMORAL CEacuteLULA SANA
IC50 (nM)
1
BIOACTIVIDAD - SEGURIDAD
En los sistemas quiacutemicos puros las moleacuteculas maacutes susceptibles al ataque de los
radicales libres son los aacutecidos grasos poliinsaturados (PUFAs) como el aacutecido do-
cosahexaenoico (DHA n-3) y en general esta susceptibilidad aumenta con
el nuacutemero de dobles enlaces In vivo se supone el mismo comportamiento
Entonces iquestpor queacute el DHA una diana molecular de los radiaciones libres es el
aacutecido graso maacutes abundante en tejidos expuestos a un potencial estreacutes oxidativo
como la retina o en tejidos con un sistema antioxidante celular deficiente como
el sistema nervioso central
iquestACTIVIDAD PRO-O ANTIOXIDANTE
BIOACTIVIDAD - SEGURIDAD
En este contexto hemos estudiado la influencia de la presencia del DHA enzimaacutetico
en la membrana celular sobre la generacioacuten intracelular de radicales libres utilizando
como sistema experimental dos liacuteneas celulares humanas sanas fibroblastos de piel
(Foreskin ATC CRL 2076) y ceacutelulas epiteliales pigmentarias de la retina (ARPE-19 ATCC
CRL 2302)
La cuantificacioacuten de los radicales libres generados se ha realizado mediante metodolo-
giacuteas fluorescentes usando sondas moleculares como el HDCF-DA DHR y DHE
Como inductores exoacutegenos de estreacutes oxidativo se ha utilizado el AAPH y el sistema
xantinaxantin oxidasa y como inductores endoacutegenos la rotenona y la antimicina A
0
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE CELULAR
Como se muestra en la figura la presencia de Algatrium Plus en la
membrana celular disminuye la generacioacuten intracelular de radicales
libres despueacutes de estar sometidas las ceacutelulas a un estreacutes oxidativo
Este comportamiento es independiente de la ceacutelula en estudio (piel o
retina) y del marcador utilizado (H2DCF-DA o DHR) lo cual nos indica la
activacioacuten de un mecanismo general El nivel de proteccioacuten observado
tambieacuten es similar frente al mismo estiacutemulo oxidativo
0 50 100 150 200 250Tiempo (min)
Fluo
resc
enci
a (U
A)
-49
CEacuteLULAS DE RETINA
H2DCF-DA
0 50 100 150 200Tiempo (min)
Fluo
resc
enci
a (U
A)
-42
CEacuteLULAS DE PIEL
0 50 100 150 200 250Tiempo (min)
Fluo
resc
enci
a (U
A)
-56DHR
0 50 100 150 200 250Tiempo (min)
Fluo
resc
enci
a (U
A)
-50
Control
Algatrium Plus
Incr
emen
to
Pro
tecc
ioacuten
EFECTO ADITIVO
Algatrium Plus
0
0306
09
18
21
05 5
1215
Para determinar que la proteccioacuten antioxidante de Algatrium Plus era un
proceso general cambiamos el inductor de estreacutes oxidativo de un produc-
to quiacutemico (el AAPH) a un sistema enzimaacutetico (sistema XXO) o inductores
endoacutegenos (ROT y ANT A) Se ha observado el mismo comportamiento en
todos los casos
El efecto antioxidante de Algatrium Plus depende de la dosis mostrando
un comportamiento dosis-dependiente a la inversa El mayor efecto se ha
observado en una concentracioacuten baja de DHA mientras que a altas con-
centraciones el efecto antioxidante disminuye independientemente de la
potencia del estreacutes oxidativo
Tambieacuten el efecto antioxidante de Algatrium Plus presenta un efecto adi-
tivo con la frecuencia de la administracioacuten La administracioacuten de una do-
sis diaria inrementa el efecto antioxidante respecto a una sola administra-
cioacuten
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE CELULAR
0 50 100 150 200 250Tiempo (min)
Fluo
resc
enci
a (U
A)
-49
CEacuteLULAS DE RETINA AAPH
P
rote
ccioacute
n
ROT ANT A XXO0
10
20
3040
50
60
INDEPENDIENTE DEL INDUCTOR
P
rote
ccioacute
n
DEPENDENCIA DE LA DOSIS
Algatrium Plus
0
10
20
3040
50
60
05 5 50Dosis diaria
Una dosis
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE CELULAR
La generacioacuten intracelular de radicales libres se confirmoacute mediante
microscopia de fluorescencia confocal Las micrografiacuteas muestran una
acumulacioacuten progresiva en el tiempo de radicales libres en las ceacutelulas
control sin DHA mientras que en las que han incorporado Algatrium
Plus en su membrana el nivel intracelular de radicales libres no ha
aumentado
T= 0 min
T= 15 min
T= 30 min
CONTROL ALGATRIUM PLUS 05 μM
CEacuteLULAS DE PIEL
A nivel celular la generacioacuten de radicales libres parece ser dependiente de
la composicioacuten en aacutecidos grasos de la ceacutelula pero la influencia especiacutefica de
cada clase de aacutecido graso no ha sido estudiada
Por otra parte a nivel industrial el meacutetodo de siacutentesis usado para obtener
el aceite enriquecido en DHA puede ser muy importante en la calidad final
del producto En este sentido hemos estudiado la importancia del contenido
de DHA y del origen sinteacutetico en el efecto antioxidante
Como se puede observar en la figura una disminucioacuten del contenido en DHA
al 50 (origen quiacutemico) o al 20 (aceite de pescado) de los aacutecidos grasos to-
tales induce una disminucioacuten del efecto antioxidante en las ceacutelulas de retina
aunque en ninguacuten caso llega a ser pro-oxidante Sin embargo en ceacutelulas de
piel esta reduccioacuten es tan acusada que soacutelo Algatrium Plus es antioxidante
siendo los otros dos pro-oxidantes
Dado el caraacutecter multifactorial de un tratamiento nutricional no es aconseja-
ble administrar un producto que presente actividades divergentes en funcioacuten
del tejido al que se incorpore
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE CELULAR
CEacuteLULASDE PIEL
05 μM
5 μM
50 μM
ACEITE DE PESCADO
P
ROTE
CCIOacute
N
0
20
40
60
-20
-40
DHA TG50QUIacuteMICO
ALGATRIUMPLUS
P
ROTE
CCIOacute
N
60
20
0
CEacuteLULASDE RETINA
40
DHA quiacutemico vs Algatrium Plus
ACEITE DE PESCADO
DHA TG50QUIacuteMICO
ALGATRIUMPLUS
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE CELULAR
Si la baja actividad del aceite de origen quiacutemico (50 en DHA) pudie-
ra estar relacionado con la presencia de estructuras polimeacutericas su eli-
minacioacuten por cromatografiacutea en columna deberiacutea permitir recuperar su
actividad antioxidante Como se puede observar en la figura una mani-
pulacioacuten excesiva del producto original para eliminar contaminantes
o para mejorar sus caracteriacutesticas organoleacutepticas se traduce en una
peacuterdida de bioactividad
P
ROTE
CCIOacute
N
0
10
20
30
40
50
60
-10DHA TG50QUIacuteMICO
ALGATRIUMPLUS
DHA TG50 QUIacuteMICOPURIFICADO
(DHA)
05 μM
5 μM
50 μM
CEacuteLULAS DE RETINA
DHA quiacutemico vs Algatrium Plus
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE CELULAR
La actividad antioxidante del Algatrium Plus tambieacuten esta relacionada
con su mayor biodisponibilidad ya que un eacutester etiacutelico o un aacutecido graso
libre con el mismo contenido en DHA presenta una actividad antioxi-
dante como maacuteximo la mitad de la de Algatrium Plus
P
ROTE
CCIOacute
N
0
10
20
30
40
50
60
05 μM
(DHA)
FA-BSA
Algatrium Plus
CEacuteLULAS DE RETINA
Efecto de la estructura quiacutemica Fa vs Ee vs Tg
70
5 μM
TG 50 CHEM
EE 70
FA Aacutecido graso libre
EE Eacutester etiacutelico
TG Trigliceacuterido
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE CELULAR
Comparado con los antioxidantes normalmente utilizados en tratamien-
tos oculares a las concentraciones oacuteptimas descritas Algatrium Plus pre-
senta a todas las dosis estudiadas un efecto superior
P
ROTE
CCIOacute
N
0
10
20
30
40
50
60CEacuteLULAS DE RETINA
Algatrium Plus vs antioxidantes
Algatrium Plus
NAC mM
Cys 1 m
M
Co Q 100 μM
Vit E 100 μM
Vit C 100 μM
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE CELULAR
Incluso si estos antioxidantes se combinan o se incrementa su concen-
tracioacuten 10 oacute 100 veces
P
ROTE
CCIOacute
N
0
10
20
30
40
50
60CEacuteLULAS DE RETINA
Algatrium Plus vs antioxidantes
Algatrium Plus
ANT1
ANT1 x10
ANT1 x100ANT2
BIOACTIVIDAD
En este punto la cuestioacuten es iquestCuaacutel es el mecanismo por el cual el Algatrium Plus
ejerce este efecto antioxidante tan potente
Los Omega-3 pueden actuar a diferentes niveles en la fisiologiacutea celular La de-
fensa antioxidante celular se basa en la actividad de un nuacutemero de enzimas an-
tioxidantes junto con otros antioxidantes quiacutemicos conjuntamente previenen la
peroxidacioacuten lipiacutedica la proteiacuteca y el dantildeo en DNA Hemos estudiado el efecto de
Algatrium Plus en diversos aspectos del sistema antioxidante celular
Generacioacuten del anioacuten superoacutexido (O-)
La actividad superoacutexido dismutasa (SOD) y de la glutatioacuten peroxidasa (GPx)
La concentracioacuten intracelular de glutatioacuten (GSH)
La peroxidacioacuten lipiacutedica
Y el dantildeo en DNA
BIOACTIVIDAD
Mecanismo de actividad antioxidante
CellularRespiration
OxidativeBurst
EnvironmentalFactors
O-SOD
GSH
GPx
LipidPeroxidation
ProteinPeroxidation
DNA Damage
HO
HO + O
HO
GSSG
GRed
Catalase
OH
1 3
30
BIOACTIVIDAD
Mecanismo de actividad antioxidante
CellularRespiration
OxidativeBurst
EnvironmentalFactors
O-SOD
GSH
GPx
LipidPeroxidation
ProteinPeroxidation
DNA Damage
HO
HO + O
HO
GSSG
GRed
Catalase
OH
1 3
=
+
BIOACTIVIDAD
Hemos encontrado que la incorporacioacuten de Algatrium Plus en las ceacutelulas disminuye la genera-
cioacuten del anioacuten superoacutexido la peroxidacioacuten lipiacutedica de una manera dosis-dependiente inversa y
el dantildeo en DNA
Los niveles inferiores del anioacuten superoacutexido bajo estreacutes oxidativo en ceacutelulas tratadas con Alga-
trium Plus puede ser debido a la actividad maacutes alta de la SOD respecto al control
Por otra parte la actividad de la GPx en las ceacutelulas tratadas no era diferente de las ceacutelulas control
con o sin estreacutes oxidativo
El cambio maacutes significativo fue el incremento (300) de la concentracioacuten intracelular de GSH
relacionado con un incremento de la siacutentesis de novo
Estos resultados nos indican que Algatrium Plus ejerce su efecto antioxidante mediante un
incremento de la actividad del sistema antioxidante celular sin una participacioacuten directa en
el mismo que lo diferencia de los antioxidantes quiacutemicos convencionales
Esto sugiere que las ceacutelulas toleran cantidades pequentildeas de DHA y que eacuteste actuacutea a modo de
estiacutemulo para evitar cualquier acumulacioacuten de radicales libres la incorporacioacuten de Algatrium
Plus en las biomembranes provoca una respuesta celular antioxidante adaptativa
3
ESTUDIOS IN VIVO
Para valorar la accioacuten de Algatrium Plus se utilizoacute como modelo de es-
treacutes oxidativo el inducido por el ejercicio fiacutesico aerobio
Se sometioacute a deportistas a un esfuerzo continuado al 75 de su consu-
mo maacuteximo de oxiacutegeno durante 90 minutos lo cual supone una produc-
cioacuten suficiente de radicales libres y estreacutes oxidativo como para conocer
la capacidad antioxidante de cualquier manipulacioacuten dieteacutetica
Para dar credibilidad a los resultados obtenidos in vitro es necesario una
constatacioacuten de los mismos in vivo En este sentido se ha desarrollado
un ensayo cliacutenico controlado cruzadov de 4 meses de duracioacuten (N = 40
deportistas) a una dosis de 2 gdiacutea de Algatrium Plus
Las variables a estudiar fueron el dantildeo en DNA y paraacutemetros antioxidan-
tes seacutericos
Se observoacute un aumento estadiacutesticamente significativo en la capacidad
antioxidante total del serum (plt005) antes y despueacutes de la realizacioacuten
de las pruebas rectangulares en los deportistas que habiacutean ingerido Al-
gatrium Plus durante un periodo de tres semanas a cuatro meses
H2O
2 (n
mol
L m
in)
150
160
170
180
190
200
BASAL
CAPACIDAD ANTIOXIDANTE TOTAL
Paraacutemetros antioxidantes in vivo
4 MESES
ESTUDIOS IN VIVO
20 DIacuteAS
Algatrium Plus
Control
3
El nivel plasmaacutetico de MDA como iacutendice de peroxidacioacuten lipiacutedica fue
aumentando durante la realizacioacuten de todas las pruebas de esfuerzo
(plt0035) Despueacutes de la ingesta de Algatrium Plus durante 3 semanas
el dantildeo oxidativo a nivel lipiacutedico en las mismas condiciones disminuye
praacutecticamente a nivel basal (plt005) observaacutendose a los 4 meses de tra-
tamiento un efecto protector en esta variable MD
A (n
mol
L)
10
20
30
40
60
BASAL
PEROXIDACIOacuteN LIPIacuteDICA
Paraacutemetros antioxidantes in vivo
4 MESES
ESTUDIOS IN VIVO
20 DIacuteAS
50
0
-10
Hay un aumento en el dantildeo oxidativo del DNA durante la realizacioacuten de
las pruebas rectangulares del esfuerzo medidas como el nivel de 8-oxo-
dG en la orina (plt0011) La ingesta de Algatrium Plus durante 3 sema-
nas y hasta 4 meses protege el DNA del dantildeo oxidativo inducido por el
esfuerzo de una manera significativa (plt0035)
8-ox
o-dG
(pm
olK
gx24
h)
100
200
300
400
600
BASAL
DANtildeO MOLECULAR EN EL DNA
Paraacutemetros antioxidantes in vivo
4 MESES
ESTUDIOS IN VIVO
20 DIacuteAS
500
0
700
800
900
3
Como efectos colaterales en el rendimiento deportivo se ha observado
que los niveles de glicemia disminuyen durante la realizacioacuten de la prue-
ba rectangular de esfuerzo (plt00009) Esta reduccioacuten en la glicemia era
menor despueacutes de 3 semanas de ingesta de Algatrium Plus se traduciacutea
en un aumento del nivel de glicemia a los 4 meses de tratamiento con
Algatrium Plus
mg
dL
-6
-4
-2
BASAL
VARIACIOacuteN EN LA CONCENTRACIOacuteN DE GLUCOSA
Variables fisioloacutegicas de rendimiento deportivo
4 MESES
ESTUDIOS IN VIVO
3 SEMANAS
4
0
-8
2
mL
min
2600
2650
2700
BASAL
CONSUMO DE OXIacuteGENO
Variables fisioloacutegicas de rendimiento deportivo
4 MESES
ESTUDIOS IN VIVO
3 SEMANAS
2900
2550
2850Tambieacuten se ha observado un aumento significativo del consumo abso-
luto (plt0019) y relativo (plt0036) de oxiacutegeno determinado en el umbral
del esfuerzo triangular con la ingesta de Algatrium Plus hasta 4 meses
Estos resultados parecen indicar que la ingesta de Algatrium PLus pue-
de incrementar el rendimiento deportivo
2750
2800
3
CONCLUSIONES
Los aacutecidos grasos omega-3 son un concepto vigente tanto desde un punto de
vista nutricional como terapeacuteutico con un alto potencial de desarrollo
La aplicacioacuten de los aacutecidos grasos omega-3 en estos campos requiere de produc-
tos manufacturados de acuerdo con los estaacutendares que se aplican a productos
farmaceacuteuticos que incluyen controles de calidad para asegurar su pureza y cali-
dad estructural que condiciona su bioactividad Como estaacutendar es exigible una
riqueza miacutenima superior al 5 en una estructura quiacutemica muy biodisponible
como un trigliceacuterido
La incorporacioacuten de Algatrium Plus en las membranas celulares no soacutelo no pro-
mueve la peroxidacioacuten lipiacutedica sino que actuacutea como un activador del sistema
antioxidante celular probablemente como consecuencia de una respuesta adap-
tativa de la ceacutelula
INFORMACIOacuteN LEGAL
ALGATRIUM es una Marca Internacional propiedad de BRUDY TECHNOLOGY
El uso de DHA de alta concentracioacuten para el tratamiento de enfermedades tu-
morales estaacute protegido por la Patente Internacional nordm200501141 Propiedad de
BRUDY TECHNOLOGY
La comercializacioacuten y el uso de Omega-3 Antioxidantes estaacute protegido por la
Patente Internacional nordm200503202 propiedad de BRUDY TECHNOLOGY
Dr Joan C Domingo Pedrol - Departamento de Bioquiacutemica y Biologiacutea Molecular - Universidad de Barcelona - Telf 934 021 214 - e-mail jcdomingoubedu
Fabricado en Espantildea por Brudy Technology - CRiera de Sant Miquel 3 - ordm ordf - 000 Barcelona - Tel 93 17 03
De todos los aceites que hay en el mercado Algatrium Plus (DHA 70e) es
el aceite enriquecido con un contenido en omega-3 global y en DHA maacutes
alto
0
10
20
30
40
50
Comparativa de diferentes aceites omega-3 en el mercado
DPA
EPA
Algatrium Plus
OMEGA-3
60
70
80
90
P M HSO DHA 50CHEM ALGATRIUM PLUS
ALGATRIUM PLUS
1
OMEGA-3 OMEGA-3 SIacuteNTESIS INSA MG DG CHOL PLM TG EE GTOTAL
A PLUS 70 ENZIMAacuteTICO 05 nd 71 nd nd 865 59 936
FISH 20 ATUacuteN 47 nd 22 42 nd 889 nd 911
DHA 50 QUIacuteMICO 27 43 103 35 228 401 140 532
DHA 50 QUIacuteMICO-PURIFICADO 21 nd 188 nd nd 664 52 852
La biodisponibilidad del aceite es directamente pro-
porcional al tipo de moleacuteculas que lo compongan
concretamente a su composicioacuten lipiacutedica Los acei-
tes naturales contienen maacutes del 90 de materia en
forma de gliceacuterido que proporciona una biodispo-
nibilidad maacutexima Algatrium Plus es muy similar a
un aceite natural (la composicioacuten lipiacutedica incluye un
90 de gliceacuteridos totales con un 5 en forma de
trigliceacuteridos y sin monogliceacuteridos) El DHA obteni-
do quiacutemicamente tiene un nivel bajo de trigliceacuteri-
dos (lt50) un mayor nivel de eacutesteres etiacutelicos y un
alto contenido de poliacutemeros (15-0) que no son
absorbibles y que se deben eliminar por cromatogra-
fiacutea en columna (QUIacuteMICO-PURIFICADO)
Especificaciones del aceite omega-3 utilizado en estos estudios
ALGATRIUM PLUS
Solamente los aceites de pescado o de algas naturales que no se han rees-
terificado satisfacen la legislacioacuten alimentaria en cuanto a su composicioacuten
y por lo tanto son un alimento El DHA obtenido quiacutemicamente no satisface los
requisitos de la farmacopea europea sobretodo relacionado con el nivel de
trigliceacuteridos gliceacuteridos totales y en el contenido en compuestos polimeacutericos
Es necesaria una purificacioacuten por cromatografiacutea en columna para que el pro-
ducto cumpla los requisitos de la legislacioacuten europea Algatrium Plus tiene la
misma composicioacuten que los aceites naturales y por lo tanto se consideran
un alimento
LEGISLACIOacuteN
0
10
20
30
40
50
Composicioacuten estructural Algatrium Plus
Farmacopea
DHA 50 QUIacuteMICO
DHA 50 QUIacuteMICO-PURIFICADO
60
70
80
90
INS DG PLM TG EE
100
MG FA GTotal
1
ACTIVIDAD ANTITUMORAL
Para valorar la actividad de Algatrium Plus nuestro primer obje-
tivo fue determinar su capacidad citotoacutexica antitumoral En este
sentido realizamos un estudio comparativo usando ceacutelulas tumo-
rales (HeLa) y ceacutelulas sanas como control (renales y de piel) Hemos
realizado estudios dosis-respuesta para determinar el valor de IC50
como criterio de toxicidad (es la concentracioacuten que mata al 50 de
las ceacutelulas) Hemos analizado dos variables el efecto de la estructu-
ra del liacutepido y del contenido en DHA Para un contenido en DHA del
70 de todos los aacutecidos grasos se obtuvo la misma toxicidad en
ceacutelulas tumorales con el eacutester etiacutelico (EE) el aacutecido graso libre (FA) o
el trigliceacuterido (TG) Pero en ceacutelulas renales sanas el EE tiene la mis-
ma toxicidad que en las ceacutelulas tumorales y en las ceacutelulas de piel el
FA demuestran una gran toxicidad siendo los TG la forma con un
mejor cociente de seguridad Para una misma estructura quiacutemica
el TG una disminucioacuten del contenido en DHA a 50 o al 20 (este
uacuteltimo es la concentracioacuten en el aceite de pescado) disminuye de
forma dramaacutetica el efecto citotoacutexico en las ceacutelulas del tumor Estos
resultados demuestran que la forma oacuteptima es el trigliceacuterido con
un alto contenido en DHA (Algatrium Plus)
Efectos del contenido en DHA y de la estructura quiacutemica Toxicidad celular
FA 70 1231 plusmn90 nd 722 plusmn58 17
EE 70 5663 plusmn539 726 plusmn83 710 plusmn97 798 -102
TG (Algatrium Plus) 70 7167 plusmn419 3927 plusmn375 586 plusmn88 1223 -670
TG (Quiacutemico) 50 19560 plusmn278 4136 plusmn256 5640 plusmn696 347 -073
TG (Pescado) 20 22676 plusmn279 31160 plusmn1582 13794 plusmn2864 164 -226
ESTRUCTURA DHA PIEL RENAL HeLa
RELACIOacuteNDE
SEGURIDAD
CEacuteLULASTUMORALESCEacuteLULAS SANAS
COMPOSICIOacuteNIC50 (μM)
Otra actividad interesante de los PUFAs omega-3 en caacutencer es su uso como
adyuvantes en la quimioterapia convencional En este sentido determina-
mos los efectos de Algatrium Plus a concentraciones subtoacutexicas sobre la toxi-
cidad de la Doxorrubicina y del 5-fluoroacilo La exposicioacuten simultaacutenea de las
ceacutelulas tumorales al DHA y a la droga aumenta la toxicidad de la misma dos
veces (disminuye el valor de la IC50) Por otra parte si Algatrium Plus se ha
incorporado previamente a la membrana celular este efecto potenciador au-
menta hasta 10 veces
ACTIVIDAD COMO ADYUVANTE ANTITUMORAL
Efecto del DHA sobre la actividad antitumoral de la Doxorrubicina o del 5-fluoroacilo Toxicidad celular
Este efecto potenciador depende del contenido en DHA ya que con el uso de
un aceite quiacutemico (50 en DHA) o de aceite de pescado (20 en DHA) se pier-
de progresivamente dicho efecto potenciador Tambieacuten es significativo que
este efecto no incrementa la toxicidad de los citostaacuteticos en ceacutelulas sanas
Efecto del contenido en dha sobre la actividad antitumoral de la doxorrubicina Toxicidad celular
Control 0 2953 plusmn316 (n=8)
Pre-incorporado15
10
301 plusmn54 (n=8)287 plusmn67 (n=8)370 plusmn44 (n=6)
Simultaacuteneo 5 1843 plusmn162 (n=4)
Control 0 2330 plusmn368 (n=12)
Pre-incorporado15
10
280 plusmn110 (n=7)238 plusmn101 (n=4)380 plusmn142 (n=6)
Simultaacuteneo 5 1480 plusmn801 (n=6)
LIacuteNEA CELULAR
HeLa-Epitelial (Dox)
HT-29-Colon (5-FU)
SISTEMADE ADICIOacuteN
ALGATRIUM PLUS μM IC50 (μM)
0 2953 plusmn316 11586 plusmn3699
5 287 plusmn67 10466 plusmn2304
10 370 plusmn44 10805 plusmn1742
5 1309 plusmn156 11633 plusmn1569
10 1063 plusmn207 9801 plusmn2709
5 2574 plusmn296 11575 plusmn1249
10 2365 plusmn157 15303 plusmn4813
CONTENIDOEN DHA
Control
DHAAlgatrium Plus
DHA TG 50Quiacutemico
DHA TG 20Pescado
DHA (μM)CEacuteLULA TUMORAL CEacuteLULA SANA
IC50 (nM)
1
BIOACTIVIDAD - SEGURIDAD
En los sistemas quiacutemicos puros las moleacuteculas maacutes susceptibles al ataque de los
radicales libres son los aacutecidos grasos poliinsaturados (PUFAs) como el aacutecido do-
cosahexaenoico (DHA n-3) y en general esta susceptibilidad aumenta con
el nuacutemero de dobles enlaces In vivo se supone el mismo comportamiento
Entonces iquestpor queacute el DHA una diana molecular de los radiaciones libres es el
aacutecido graso maacutes abundante en tejidos expuestos a un potencial estreacutes oxidativo
como la retina o en tejidos con un sistema antioxidante celular deficiente como
el sistema nervioso central
iquestACTIVIDAD PRO-O ANTIOXIDANTE
BIOACTIVIDAD - SEGURIDAD
En este contexto hemos estudiado la influencia de la presencia del DHA enzimaacutetico
en la membrana celular sobre la generacioacuten intracelular de radicales libres utilizando
como sistema experimental dos liacuteneas celulares humanas sanas fibroblastos de piel
(Foreskin ATC CRL 2076) y ceacutelulas epiteliales pigmentarias de la retina (ARPE-19 ATCC
CRL 2302)
La cuantificacioacuten de los radicales libres generados se ha realizado mediante metodolo-
giacuteas fluorescentes usando sondas moleculares como el HDCF-DA DHR y DHE
Como inductores exoacutegenos de estreacutes oxidativo se ha utilizado el AAPH y el sistema
xantinaxantin oxidasa y como inductores endoacutegenos la rotenona y la antimicina A
0
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE CELULAR
Como se muestra en la figura la presencia de Algatrium Plus en la
membrana celular disminuye la generacioacuten intracelular de radicales
libres despueacutes de estar sometidas las ceacutelulas a un estreacutes oxidativo
Este comportamiento es independiente de la ceacutelula en estudio (piel o
retina) y del marcador utilizado (H2DCF-DA o DHR) lo cual nos indica la
activacioacuten de un mecanismo general El nivel de proteccioacuten observado
tambieacuten es similar frente al mismo estiacutemulo oxidativo
0 50 100 150 200 250Tiempo (min)
Fluo
resc
enci
a (U
A)
-49
CEacuteLULAS DE RETINA
H2DCF-DA
0 50 100 150 200Tiempo (min)
Fluo
resc
enci
a (U
A)
-42
CEacuteLULAS DE PIEL
0 50 100 150 200 250Tiempo (min)
Fluo
resc
enci
a (U
A)
-56DHR
0 50 100 150 200 250Tiempo (min)
Fluo
resc
enci
a (U
A)
-50
Control
Algatrium Plus
Incr
emen
to
Pro
tecc
ioacuten
EFECTO ADITIVO
Algatrium Plus
0
0306
09
18
21
05 5
1215
Para determinar que la proteccioacuten antioxidante de Algatrium Plus era un
proceso general cambiamos el inductor de estreacutes oxidativo de un produc-
to quiacutemico (el AAPH) a un sistema enzimaacutetico (sistema XXO) o inductores
endoacutegenos (ROT y ANT A) Se ha observado el mismo comportamiento en
todos los casos
El efecto antioxidante de Algatrium Plus depende de la dosis mostrando
un comportamiento dosis-dependiente a la inversa El mayor efecto se ha
observado en una concentracioacuten baja de DHA mientras que a altas con-
centraciones el efecto antioxidante disminuye independientemente de la
potencia del estreacutes oxidativo
Tambieacuten el efecto antioxidante de Algatrium Plus presenta un efecto adi-
tivo con la frecuencia de la administracioacuten La administracioacuten de una do-
sis diaria inrementa el efecto antioxidante respecto a una sola administra-
cioacuten
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE CELULAR
0 50 100 150 200 250Tiempo (min)
Fluo
resc
enci
a (U
A)
-49
CEacuteLULAS DE RETINA AAPH
P
rote
ccioacute
n
ROT ANT A XXO0
10
20
3040
50
60
INDEPENDIENTE DEL INDUCTOR
P
rote
ccioacute
n
DEPENDENCIA DE LA DOSIS
Algatrium Plus
0
10
20
3040
50
60
05 5 50Dosis diaria
Una dosis
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE CELULAR
La generacioacuten intracelular de radicales libres se confirmoacute mediante
microscopia de fluorescencia confocal Las micrografiacuteas muestran una
acumulacioacuten progresiva en el tiempo de radicales libres en las ceacutelulas
control sin DHA mientras que en las que han incorporado Algatrium
Plus en su membrana el nivel intracelular de radicales libres no ha
aumentado
T= 0 min
T= 15 min
T= 30 min
CONTROL ALGATRIUM PLUS 05 μM
CEacuteLULAS DE PIEL
A nivel celular la generacioacuten de radicales libres parece ser dependiente de
la composicioacuten en aacutecidos grasos de la ceacutelula pero la influencia especiacutefica de
cada clase de aacutecido graso no ha sido estudiada
Por otra parte a nivel industrial el meacutetodo de siacutentesis usado para obtener
el aceite enriquecido en DHA puede ser muy importante en la calidad final
del producto En este sentido hemos estudiado la importancia del contenido
de DHA y del origen sinteacutetico en el efecto antioxidante
Como se puede observar en la figura una disminucioacuten del contenido en DHA
al 50 (origen quiacutemico) o al 20 (aceite de pescado) de los aacutecidos grasos to-
tales induce una disminucioacuten del efecto antioxidante en las ceacutelulas de retina
aunque en ninguacuten caso llega a ser pro-oxidante Sin embargo en ceacutelulas de
piel esta reduccioacuten es tan acusada que soacutelo Algatrium Plus es antioxidante
siendo los otros dos pro-oxidantes
Dado el caraacutecter multifactorial de un tratamiento nutricional no es aconseja-
ble administrar un producto que presente actividades divergentes en funcioacuten
del tejido al que se incorpore
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE CELULAR
CEacuteLULASDE PIEL
05 μM
5 μM
50 μM
ACEITE DE PESCADO
P
ROTE
CCIOacute
N
0
20
40
60
-20
-40
DHA TG50QUIacuteMICO
ALGATRIUMPLUS
P
ROTE
CCIOacute
N
60
20
0
CEacuteLULASDE RETINA
40
DHA quiacutemico vs Algatrium Plus
ACEITE DE PESCADO
DHA TG50QUIacuteMICO
ALGATRIUMPLUS
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE CELULAR
Si la baja actividad del aceite de origen quiacutemico (50 en DHA) pudie-
ra estar relacionado con la presencia de estructuras polimeacutericas su eli-
minacioacuten por cromatografiacutea en columna deberiacutea permitir recuperar su
actividad antioxidante Como se puede observar en la figura una mani-
pulacioacuten excesiva del producto original para eliminar contaminantes
o para mejorar sus caracteriacutesticas organoleacutepticas se traduce en una
peacuterdida de bioactividad
P
ROTE
CCIOacute
N
0
10
20
30
40
50
60
-10DHA TG50QUIacuteMICO
ALGATRIUMPLUS
DHA TG50 QUIacuteMICOPURIFICADO
(DHA)
05 μM
5 μM
50 μM
CEacuteLULAS DE RETINA
DHA quiacutemico vs Algatrium Plus
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE CELULAR
La actividad antioxidante del Algatrium Plus tambieacuten esta relacionada
con su mayor biodisponibilidad ya que un eacutester etiacutelico o un aacutecido graso
libre con el mismo contenido en DHA presenta una actividad antioxi-
dante como maacuteximo la mitad de la de Algatrium Plus
P
ROTE
CCIOacute
N
0
10
20
30
40
50
60
05 μM
(DHA)
FA-BSA
Algatrium Plus
CEacuteLULAS DE RETINA
Efecto de la estructura quiacutemica Fa vs Ee vs Tg
70
5 μM
TG 50 CHEM
EE 70
FA Aacutecido graso libre
EE Eacutester etiacutelico
TG Trigliceacuterido
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE CELULAR
Comparado con los antioxidantes normalmente utilizados en tratamien-
tos oculares a las concentraciones oacuteptimas descritas Algatrium Plus pre-
senta a todas las dosis estudiadas un efecto superior
P
ROTE
CCIOacute
N
0
10
20
30
40
50
60CEacuteLULAS DE RETINA
Algatrium Plus vs antioxidantes
Algatrium Plus
NAC mM
Cys 1 m
M
Co Q 100 μM
Vit E 100 μM
Vit C 100 μM
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE CELULAR
Incluso si estos antioxidantes se combinan o se incrementa su concen-
tracioacuten 10 oacute 100 veces
P
ROTE
CCIOacute
N
0
10
20
30
40
50
60CEacuteLULAS DE RETINA
Algatrium Plus vs antioxidantes
Algatrium Plus
ANT1
ANT1 x10
ANT1 x100ANT2
BIOACTIVIDAD
En este punto la cuestioacuten es iquestCuaacutel es el mecanismo por el cual el Algatrium Plus
ejerce este efecto antioxidante tan potente
Los Omega-3 pueden actuar a diferentes niveles en la fisiologiacutea celular La de-
fensa antioxidante celular se basa en la actividad de un nuacutemero de enzimas an-
tioxidantes junto con otros antioxidantes quiacutemicos conjuntamente previenen la
peroxidacioacuten lipiacutedica la proteiacuteca y el dantildeo en DNA Hemos estudiado el efecto de
Algatrium Plus en diversos aspectos del sistema antioxidante celular
Generacioacuten del anioacuten superoacutexido (O-)
La actividad superoacutexido dismutasa (SOD) y de la glutatioacuten peroxidasa (GPx)
La concentracioacuten intracelular de glutatioacuten (GSH)
La peroxidacioacuten lipiacutedica
Y el dantildeo en DNA
BIOACTIVIDAD
Mecanismo de actividad antioxidante
CellularRespiration
OxidativeBurst
EnvironmentalFactors
O-SOD
GSH
GPx
LipidPeroxidation
ProteinPeroxidation
DNA Damage
HO
HO + O
HO
GSSG
GRed
Catalase
OH
1 3
30
BIOACTIVIDAD
Mecanismo de actividad antioxidante
CellularRespiration
OxidativeBurst
EnvironmentalFactors
O-SOD
GSH
GPx
LipidPeroxidation
ProteinPeroxidation
DNA Damage
HO
HO + O
HO
GSSG
GRed
Catalase
OH
1 3
=
+
BIOACTIVIDAD
Hemos encontrado que la incorporacioacuten de Algatrium Plus en las ceacutelulas disminuye la genera-
cioacuten del anioacuten superoacutexido la peroxidacioacuten lipiacutedica de una manera dosis-dependiente inversa y
el dantildeo en DNA
Los niveles inferiores del anioacuten superoacutexido bajo estreacutes oxidativo en ceacutelulas tratadas con Alga-
trium Plus puede ser debido a la actividad maacutes alta de la SOD respecto al control
Por otra parte la actividad de la GPx en las ceacutelulas tratadas no era diferente de las ceacutelulas control
con o sin estreacutes oxidativo
El cambio maacutes significativo fue el incremento (300) de la concentracioacuten intracelular de GSH
relacionado con un incremento de la siacutentesis de novo
Estos resultados nos indican que Algatrium Plus ejerce su efecto antioxidante mediante un
incremento de la actividad del sistema antioxidante celular sin una participacioacuten directa en
el mismo que lo diferencia de los antioxidantes quiacutemicos convencionales
Esto sugiere que las ceacutelulas toleran cantidades pequentildeas de DHA y que eacuteste actuacutea a modo de
estiacutemulo para evitar cualquier acumulacioacuten de radicales libres la incorporacioacuten de Algatrium
Plus en las biomembranes provoca una respuesta celular antioxidante adaptativa
3
ESTUDIOS IN VIVO
Para valorar la accioacuten de Algatrium Plus se utilizoacute como modelo de es-
treacutes oxidativo el inducido por el ejercicio fiacutesico aerobio
Se sometioacute a deportistas a un esfuerzo continuado al 75 de su consu-
mo maacuteximo de oxiacutegeno durante 90 minutos lo cual supone una produc-
cioacuten suficiente de radicales libres y estreacutes oxidativo como para conocer
la capacidad antioxidante de cualquier manipulacioacuten dieteacutetica
Para dar credibilidad a los resultados obtenidos in vitro es necesario una
constatacioacuten de los mismos in vivo En este sentido se ha desarrollado
un ensayo cliacutenico controlado cruzadov de 4 meses de duracioacuten (N = 40
deportistas) a una dosis de 2 gdiacutea de Algatrium Plus
Las variables a estudiar fueron el dantildeo en DNA y paraacutemetros antioxidan-
tes seacutericos
Se observoacute un aumento estadiacutesticamente significativo en la capacidad
antioxidante total del serum (plt005) antes y despueacutes de la realizacioacuten
de las pruebas rectangulares en los deportistas que habiacutean ingerido Al-
gatrium Plus durante un periodo de tres semanas a cuatro meses
H2O
2 (n
mol
L m
in)
150
160
170
180
190
200
BASAL
CAPACIDAD ANTIOXIDANTE TOTAL
Paraacutemetros antioxidantes in vivo
4 MESES
ESTUDIOS IN VIVO
20 DIacuteAS
Algatrium Plus
Control
3
El nivel plasmaacutetico de MDA como iacutendice de peroxidacioacuten lipiacutedica fue
aumentando durante la realizacioacuten de todas las pruebas de esfuerzo
(plt0035) Despueacutes de la ingesta de Algatrium Plus durante 3 semanas
el dantildeo oxidativo a nivel lipiacutedico en las mismas condiciones disminuye
praacutecticamente a nivel basal (plt005) observaacutendose a los 4 meses de tra-
tamiento un efecto protector en esta variable MD
A (n
mol
L)
10
20
30
40
60
BASAL
PEROXIDACIOacuteN LIPIacuteDICA
Paraacutemetros antioxidantes in vivo
4 MESES
ESTUDIOS IN VIVO
20 DIacuteAS
50
0
-10
Hay un aumento en el dantildeo oxidativo del DNA durante la realizacioacuten de
las pruebas rectangulares del esfuerzo medidas como el nivel de 8-oxo-
dG en la orina (plt0011) La ingesta de Algatrium Plus durante 3 sema-
nas y hasta 4 meses protege el DNA del dantildeo oxidativo inducido por el
esfuerzo de una manera significativa (plt0035)
8-ox
o-dG
(pm
olK
gx24
h)
100
200
300
400
600
BASAL
DANtildeO MOLECULAR EN EL DNA
Paraacutemetros antioxidantes in vivo
4 MESES
ESTUDIOS IN VIVO
20 DIacuteAS
500
0
700
800
900
3
Como efectos colaterales en el rendimiento deportivo se ha observado
que los niveles de glicemia disminuyen durante la realizacioacuten de la prue-
ba rectangular de esfuerzo (plt00009) Esta reduccioacuten en la glicemia era
menor despueacutes de 3 semanas de ingesta de Algatrium Plus se traduciacutea
en un aumento del nivel de glicemia a los 4 meses de tratamiento con
Algatrium Plus
mg
dL
-6
-4
-2
BASAL
VARIACIOacuteN EN LA CONCENTRACIOacuteN DE GLUCOSA
Variables fisioloacutegicas de rendimiento deportivo
4 MESES
ESTUDIOS IN VIVO
3 SEMANAS
4
0
-8
2
mL
min
2600
2650
2700
BASAL
CONSUMO DE OXIacuteGENO
Variables fisioloacutegicas de rendimiento deportivo
4 MESES
ESTUDIOS IN VIVO
3 SEMANAS
2900
2550
2850Tambieacuten se ha observado un aumento significativo del consumo abso-
luto (plt0019) y relativo (plt0036) de oxiacutegeno determinado en el umbral
del esfuerzo triangular con la ingesta de Algatrium Plus hasta 4 meses
Estos resultados parecen indicar que la ingesta de Algatrium PLus pue-
de incrementar el rendimiento deportivo
2750
2800
3
CONCLUSIONES
Los aacutecidos grasos omega-3 son un concepto vigente tanto desde un punto de
vista nutricional como terapeacuteutico con un alto potencial de desarrollo
La aplicacioacuten de los aacutecidos grasos omega-3 en estos campos requiere de produc-
tos manufacturados de acuerdo con los estaacutendares que se aplican a productos
farmaceacuteuticos que incluyen controles de calidad para asegurar su pureza y cali-
dad estructural que condiciona su bioactividad Como estaacutendar es exigible una
riqueza miacutenima superior al 5 en una estructura quiacutemica muy biodisponible
como un trigliceacuterido
La incorporacioacuten de Algatrium Plus en las membranas celulares no soacutelo no pro-
mueve la peroxidacioacuten lipiacutedica sino que actuacutea como un activador del sistema
antioxidante celular probablemente como consecuencia de una respuesta adap-
tativa de la ceacutelula
INFORMACIOacuteN LEGAL
ALGATRIUM es una Marca Internacional propiedad de BRUDY TECHNOLOGY
El uso de DHA de alta concentracioacuten para el tratamiento de enfermedades tu-
morales estaacute protegido por la Patente Internacional nordm200501141 Propiedad de
BRUDY TECHNOLOGY
La comercializacioacuten y el uso de Omega-3 Antioxidantes estaacute protegido por la
Patente Internacional nordm200503202 propiedad de BRUDY TECHNOLOGY
Dr Joan C Domingo Pedrol - Departamento de Bioquiacutemica y Biologiacutea Molecular - Universidad de Barcelona - Telf 934 021 214 - e-mail jcdomingoubedu
Fabricado en Espantildea por Brudy Technology - CRiera de Sant Miquel 3 - ordm ordf - 000 Barcelona - Tel 93 17 03
1
OMEGA-3 OMEGA-3 SIacuteNTESIS INSA MG DG CHOL PLM TG EE GTOTAL
A PLUS 70 ENZIMAacuteTICO 05 nd 71 nd nd 865 59 936
FISH 20 ATUacuteN 47 nd 22 42 nd 889 nd 911
DHA 50 QUIacuteMICO 27 43 103 35 228 401 140 532
DHA 50 QUIacuteMICO-PURIFICADO 21 nd 188 nd nd 664 52 852
La biodisponibilidad del aceite es directamente pro-
porcional al tipo de moleacuteculas que lo compongan
concretamente a su composicioacuten lipiacutedica Los acei-
tes naturales contienen maacutes del 90 de materia en
forma de gliceacuterido que proporciona una biodispo-
nibilidad maacutexima Algatrium Plus es muy similar a
un aceite natural (la composicioacuten lipiacutedica incluye un
90 de gliceacuteridos totales con un 5 en forma de
trigliceacuteridos y sin monogliceacuteridos) El DHA obteni-
do quiacutemicamente tiene un nivel bajo de trigliceacuteri-
dos (lt50) un mayor nivel de eacutesteres etiacutelicos y un
alto contenido de poliacutemeros (15-0) que no son
absorbibles y que se deben eliminar por cromatogra-
fiacutea en columna (QUIacuteMICO-PURIFICADO)
Especificaciones del aceite omega-3 utilizado en estos estudios
ALGATRIUM PLUS
Solamente los aceites de pescado o de algas naturales que no se han rees-
terificado satisfacen la legislacioacuten alimentaria en cuanto a su composicioacuten
y por lo tanto son un alimento El DHA obtenido quiacutemicamente no satisface los
requisitos de la farmacopea europea sobretodo relacionado con el nivel de
trigliceacuteridos gliceacuteridos totales y en el contenido en compuestos polimeacutericos
Es necesaria una purificacioacuten por cromatografiacutea en columna para que el pro-
ducto cumpla los requisitos de la legislacioacuten europea Algatrium Plus tiene la
misma composicioacuten que los aceites naturales y por lo tanto se consideran
un alimento
LEGISLACIOacuteN
0
10
20
30
40
50
Composicioacuten estructural Algatrium Plus
Farmacopea
DHA 50 QUIacuteMICO
DHA 50 QUIacuteMICO-PURIFICADO
60
70
80
90
INS DG PLM TG EE
100
MG FA GTotal
1
ACTIVIDAD ANTITUMORAL
Para valorar la actividad de Algatrium Plus nuestro primer obje-
tivo fue determinar su capacidad citotoacutexica antitumoral En este
sentido realizamos un estudio comparativo usando ceacutelulas tumo-
rales (HeLa) y ceacutelulas sanas como control (renales y de piel) Hemos
realizado estudios dosis-respuesta para determinar el valor de IC50
como criterio de toxicidad (es la concentracioacuten que mata al 50 de
las ceacutelulas) Hemos analizado dos variables el efecto de la estructu-
ra del liacutepido y del contenido en DHA Para un contenido en DHA del
70 de todos los aacutecidos grasos se obtuvo la misma toxicidad en
ceacutelulas tumorales con el eacutester etiacutelico (EE) el aacutecido graso libre (FA) o
el trigliceacuterido (TG) Pero en ceacutelulas renales sanas el EE tiene la mis-
ma toxicidad que en las ceacutelulas tumorales y en las ceacutelulas de piel el
FA demuestran una gran toxicidad siendo los TG la forma con un
mejor cociente de seguridad Para una misma estructura quiacutemica
el TG una disminucioacuten del contenido en DHA a 50 o al 20 (este
uacuteltimo es la concentracioacuten en el aceite de pescado) disminuye de
forma dramaacutetica el efecto citotoacutexico en las ceacutelulas del tumor Estos
resultados demuestran que la forma oacuteptima es el trigliceacuterido con
un alto contenido en DHA (Algatrium Plus)
Efectos del contenido en DHA y de la estructura quiacutemica Toxicidad celular
FA 70 1231 plusmn90 nd 722 plusmn58 17
EE 70 5663 plusmn539 726 plusmn83 710 plusmn97 798 -102
TG (Algatrium Plus) 70 7167 plusmn419 3927 plusmn375 586 plusmn88 1223 -670
TG (Quiacutemico) 50 19560 plusmn278 4136 plusmn256 5640 plusmn696 347 -073
TG (Pescado) 20 22676 plusmn279 31160 plusmn1582 13794 plusmn2864 164 -226
ESTRUCTURA DHA PIEL RENAL HeLa
RELACIOacuteNDE
SEGURIDAD
CEacuteLULASTUMORALESCEacuteLULAS SANAS
COMPOSICIOacuteNIC50 (μM)
Otra actividad interesante de los PUFAs omega-3 en caacutencer es su uso como
adyuvantes en la quimioterapia convencional En este sentido determina-
mos los efectos de Algatrium Plus a concentraciones subtoacutexicas sobre la toxi-
cidad de la Doxorrubicina y del 5-fluoroacilo La exposicioacuten simultaacutenea de las
ceacutelulas tumorales al DHA y a la droga aumenta la toxicidad de la misma dos
veces (disminuye el valor de la IC50) Por otra parte si Algatrium Plus se ha
incorporado previamente a la membrana celular este efecto potenciador au-
menta hasta 10 veces
ACTIVIDAD COMO ADYUVANTE ANTITUMORAL
Efecto del DHA sobre la actividad antitumoral de la Doxorrubicina o del 5-fluoroacilo Toxicidad celular
Este efecto potenciador depende del contenido en DHA ya que con el uso de
un aceite quiacutemico (50 en DHA) o de aceite de pescado (20 en DHA) se pier-
de progresivamente dicho efecto potenciador Tambieacuten es significativo que
este efecto no incrementa la toxicidad de los citostaacuteticos en ceacutelulas sanas
Efecto del contenido en dha sobre la actividad antitumoral de la doxorrubicina Toxicidad celular
Control 0 2953 plusmn316 (n=8)
Pre-incorporado15
10
301 plusmn54 (n=8)287 plusmn67 (n=8)370 plusmn44 (n=6)
Simultaacuteneo 5 1843 plusmn162 (n=4)
Control 0 2330 plusmn368 (n=12)
Pre-incorporado15
10
280 plusmn110 (n=7)238 plusmn101 (n=4)380 plusmn142 (n=6)
Simultaacuteneo 5 1480 plusmn801 (n=6)
LIacuteNEA CELULAR
HeLa-Epitelial (Dox)
HT-29-Colon (5-FU)
SISTEMADE ADICIOacuteN
ALGATRIUM PLUS μM IC50 (μM)
0 2953 plusmn316 11586 plusmn3699
5 287 plusmn67 10466 plusmn2304
10 370 plusmn44 10805 plusmn1742
5 1309 plusmn156 11633 plusmn1569
10 1063 plusmn207 9801 plusmn2709
5 2574 plusmn296 11575 plusmn1249
10 2365 plusmn157 15303 plusmn4813
CONTENIDOEN DHA
Control
DHAAlgatrium Plus
DHA TG 50Quiacutemico
DHA TG 20Pescado
DHA (μM)CEacuteLULA TUMORAL CEacuteLULA SANA
IC50 (nM)
1
BIOACTIVIDAD - SEGURIDAD
En los sistemas quiacutemicos puros las moleacuteculas maacutes susceptibles al ataque de los
radicales libres son los aacutecidos grasos poliinsaturados (PUFAs) como el aacutecido do-
cosahexaenoico (DHA n-3) y en general esta susceptibilidad aumenta con
el nuacutemero de dobles enlaces In vivo se supone el mismo comportamiento
Entonces iquestpor queacute el DHA una diana molecular de los radiaciones libres es el
aacutecido graso maacutes abundante en tejidos expuestos a un potencial estreacutes oxidativo
como la retina o en tejidos con un sistema antioxidante celular deficiente como
el sistema nervioso central
iquestACTIVIDAD PRO-O ANTIOXIDANTE
BIOACTIVIDAD - SEGURIDAD
En este contexto hemos estudiado la influencia de la presencia del DHA enzimaacutetico
en la membrana celular sobre la generacioacuten intracelular de radicales libres utilizando
como sistema experimental dos liacuteneas celulares humanas sanas fibroblastos de piel
(Foreskin ATC CRL 2076) y ceacutelulas epiteliales pigmentarias de la retina (ARPE-19 ATCC
CRL 2302)
La cuantificacioacuten de los radicales libres generados se ha realizado mediante metodolo-
giacuteas fluorescentes usando sondas moleculares como el HDCF-DA DHR y DHE
Como inductores exoacutegenos de estreacutes oxidativo se ha utilizado el AAPH y el sistema
xantinaxantin oxidasa y como inductores endoacutegenos la rotenona y la antimicina A
0
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE CELULAR
Como se muestra en la figura la presencia de Algatrium Plus en la
membrana celular disminuye la generacioacuten intracelular de radicales
libres despueacutes de estar sometidas las ceacutelulas a un estreacutes oxidativo
Este comportamiento es independiente de la ceacutelula en estudio (piel o
retina) y del marcador utilizado (H2DCF-DA o DHR) lo cual nos indica la
activacioacuten de un mecanismo general El nivel de proteccioacuten observado
tambieacuten es similar frente al mismo estiacutemulo oxidativo
0 50 100 150 200 250Tiempo (min)
Fluo
resc
enci
a (U
A)
-49
CEacuteLULAS DE RETINA
H2DCF-DA
0 50 100 150 200Tiempo (min)
Fluo
resc
enci
a (U
A)
-42
CEacuteLULAS DE PIEL
0 50 100 150 200 250Tiempo (min)
Fluo
resc
enci
a (U
A)
-56DHR
0 50 100 150 200 250Tiempo (min)
Fluo
resc
enci
a (U
A)
-50
Control
Algatrium Plus
Incr
emen
to
Pro
tecc
ioacuten
EFECTO ADITIVO
Algatrium Plus
0
0306
09
18
21
05 5
1215
Para determinar que la proteccioacuten antioxidante de Algatrium Plus era un
proceso general cambiamos el inductor de estreacutes oxidativo de un produc-
to quiacutemico (el AAPH) a un sistema enzimaacutetico (sistema XXO) o inductores
endoacutegenos (ROT y ANT A) Se ha observado el mismo comportamiento en
todos los casos
El efecto antioxidante de Algatrium Plus depende de la dosis mostrando
un comportamiento dosis-dependiente a la inversa El mayor efecto se ha
observado en una concentracioacuten baja de DHA mientras que a altas con-
centraciones el efecto antioxidante disminuye independientemente de la
potencia del estreacutes oxidativo
Tambieacuten el efecto antioxidante de Algatrium Plus presenta un efecto adi-
tivo con la frecuencia de la administracioacuten La administracioacuten de una do-
sis diaria inrementa el efecto antioxidante respecto a una sola administra-
cioacuten
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE CELULAR
0 50 100 150 200 250Tiempo (min)
Fluo
resc
enci
a (U
A)
-49
CEacuteLULAS DE RETINA AAPH
P
rote
ccioacute
n
ROT ANT A XXO0
10
20
3040
50
60
INDEPENDIENTE DEL INDUCTOR
P
rote
ccioacute
n
DEPENDENCIA DE LA DOSIS
Algatrium Plus
0
10
20
3040
50
60
05 5 50Dosis diaria
Una dosis
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE CELULAR
La generacioacuten intracelular de radicales libres se confirmoacute mediante
microscopia de fluorescencia confocal Las micrografiacuteas muestran una
acumulacioacuten progresiva en el tiempo de radicales libres en las ceacutelulas
control sin DHA mientras que en las que han incorporado Algatrium
Plus en su membrana el nivel intracelular de radicales libres no ha
aumentado
T= 0 min
T= 15 min
T= 30 min
CONTROL ALGATRIUM PLUS 05 μM
CEacuteLULAS DE PIEL
A nivel celular la generacioacuten de radicales libres parece ser dependiente de
la composicioacuten en aacutecidos grasos de la ceacutelula pero la influencia especiacutefica de
cada clase de aacutecido graso no ha sido estudiada
Por otra parte a nivel industrial el meacutetodo de siacutentesis usado para obtener
el aceite enriquecido en DHA puede ser muy importante en la calidad final
del producto En este sentido hemos estudiado la importancia del contenido
de DHA y del origen sinteacutetico en el efecto antioxidante
Como se puede observar en la figura una disminucioacuten del contenido en DHA
al 50 (origen quiacutemico) o al 20 (aceite de pescado) de los aacutecidos grasos to-
tales induce una disminucioacuten del efecto antioxidante en las ceacutelulas de retina
aunque en ninguacuten caso llega a ser pro-oxidante Sin embargo en ceacutelulas de
piel esta reduccioacuten es tan acusada que soacutelo Algatrium Plus es antioxidante
siendo los otros dos pro-oxidantes
Dado el caraacutecter multifactorial de un tratamiento nutricional no es aconseja-
ble administrar un producto que presente actividades divergentes en funcioacuten
del tejido al que se incorpore
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE CELULAR
CEacuteLULASDE PIEL
05 μM
5 μM
50 μM
ACEITE DE PESCADO
P
ROTE
CCIOacute
N
0
20
40
60
-20
-40
DHA TG50QUIacuteMICO
ALGATRIUMPLUS
P
ROTE
CCIOacute
N
60
20
0
CEacuteLULASDE RETINA
40
DHA quiacutemico vs Algatrium Plus
ACEITE DE PESCADO
DHA TG50QUIacuteMICO
ALGATRIUMPLUS
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE CELULAR
Si la baja actividad del aceite de origen quiacutemico (50 en DHA) pudie-
ra estar relacionado con la presencia de estructuras polimeacutericas su eli-
minacioacuten por cromatografiacutea en columna deberiacutea permitir recuperar su
actividad antioxidante Como se puede observar en la figura una mani-
pulacioacuten excesiva del producto original para eliminar contaminantes
o para mejorar sus caracteriacutesticas organoleacutepticas se traduce en una
peacuterdida de bioactividad
P
ROTE
CCIOacute
N
0
10
20
30
40
50
60
-10DHA TG50QUIacuteMICO
ALGATRIUMPLUS
DHA TG50 QUIacuteMICOPURIFICADO
(DHA)
05 μM
5 μM
50 μM
CEacuteLULAS DE RETINA
DHA quiacutemico vs Algatrium Plus
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE CELULAR
La actividad antioxidante del Algatrium Plus tambieacuten esta relacionada
con su mayor biodisponibilidad ya que un eacutester etiacutelico o un aacutecido graso
libre con el mismo contenido en DHA presenta una actividad antioxi-
dante como maacuteximo la mitad de la de Algatrium Plus
P
ROTE
CCIOacute
N
0
10
20
30
40
50
60
05 μM
(DHA)
FA-BSA
Algatrium Plus
CEacuteLULAS DE RETINA
Efecto de la estructura quiacutemica Fa vs Ee vs Tg
70
5 μM
TG 50 CHEM
EE 70
FA Aacutecido graso libre
EE Eacutester etiacutelico
TG Trigliceacuterido
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE CELULAR
Comparado con los antioxidantes normalmente utilizados en tratamien-
tos oculares a las concentraciones oacuteptimas descritas Algatrium Plus pre-
senta a todas las dosis estudiadas un efecto superior
P
ROTE
CCIOacute
N
0
10
20
30
40
50
60CEacuteLULAS DE RETINA
Algatrium Plus vs antioxidantes
Algatrium Plus
NAC mM
Cys 1 m
M
Co Q 100 μM
Vit E 100 μM
Vit C 100 μM
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE CELULAR
Incluso si estos antioxidantes se combinan o se incrementa su concen-
tracioacuten 10 oacute 100 veces
P
ROTE
CCIOacute
N
0
10
20
30
40
50
60CEacuteLULAS DE RETINA
Algatrium Plus vs antioxidantes
Algatrium Plus
ANT1
ANT1 x10
ANT1 x100ANT2
BIOACTIVIDAD
En este punto la cuestioacuten es iquestCuaacutel es el mecanismo por el cual el Algatrium Plus
ejerce este efecto antioxidante tan potente
Los Omega-3 pueden actuar a diferentes niveles en la fisiologiacutea celular La de-
fensa antioxidante celular se basa en la actividad de un nuacutemero de enzimas an-
tioxidantes junto con otros antioxidantes quiacutemicos conjuntamente previenen la
peroxidacioacuten lipiacutedica la proteiacuteca y el dantildeo en DNA Hemos estudiado el efecto de
Algatrium Plus en diversos aspectos del sistema antioxidante celular
Generacioacuten del anioacuten superoacutexido (O-)
La actividad superoacutexido dismutasa (SOD) y de la glutatioacuten peroxidasa (GPx)
La concentracioacuten intracelular de glutatioacuten (GSH)
La peroxidacioacuten lipiacutedica
Y el dantildeo en DNA
BIOACTIVIDAD
Mecanismo de actividad antioxidante
CellularRespiration
OxidativeBurst
EnvironmentalFactors
O-SOD
GSH
GPx
LipidPeroxidation
ProteinPeroxidation
DNA Damage
HO
HO + O
HO
GSSG
GRed
Catalase
OH
1 3
30
BIOACTIVIDAD
Mecanismo de actividad antioxidante
CellularRespiration
OxidativeBurst
EnvironmentalFactors
O-SOD
GSH
GPx
LipidPeroxidation
ProteinPeroxidation
DNA Damage
HO
HO + O
HO
GSSG
GRed
Catalase
OH
1 3
=
+
BIOACTIVIDAD
Hemos encontrado que la incorporacioacuten de Algatrium Plus en las ceacutelulas disminuye la genera-
cioacuten del anioacuten superoacutexido la peroxidacioacuten lipiacutedica de una manera dosis-dependiente inversa y
el dantildeo en DNA
Los niveles inferiores del anioacuten superoacutexido bajo estreacutes oxidativo en ceacutelulas tratadas con Alga-
trium Plus puede ser debido a la actividad maacutes alta de la SOD respecto al control
Por otra parte la actividad de la GPx en las ceacutelulas tratadas no era diferente de las ceacutelulas control
con o sin estreacutes oxidativo
El cambio maacutes significativo fue el incremento (300) de la concentracioacuten intracelular de GSH
relacionado con un incremento de la siacutentesis de novo
Estos resultados nos indican que Algatrium Plus ejerce su efecto antioxidante mediante un
incremento de la actividad del sistema antioxidante celular sin una participacioacuten directa en
el mismo que lo diferencia de los antioxidantes quiacutemicos convencionales
Esto sugiere que las ceacutelulas toleran cantidades pequentildeas de DHA y que eacuteste actuacutea a modo de
estiacutemulo para evitar cualquier acumulacioacuten de radicales libres la incorporacioacuten de Algatrium
Plus en las biomembranes provoca una respuesta celular antioxidante adaptativa
3
ESTUDIOS IN VIVO
Para valorar la accioacuten de Algatrium Plus se utilizoacute como modelo de es-
treacutes oxidativo el inducido por el ejercicio fiacutesico aerobio
Se sometioacute a deportistas a un esfuerzo continuado al 75 de su consu-
mo maacuteximo de oxiacutegeno durante 90 minutos lo cual supone una produc-
cioacuten suficiente de radicales libres y estreacutes oxidativo como para conocer
la capacidad antioxidante de cualquier manipulacioacuten dieteacutetica
Para dar credibilidad a los resultados obtenidos in vitro es necesario una
constatacioacuten de los mismos in vivo En este sentido se ha desarrollado
un ensayo cliacutenico controlado cruzadov de 4 meses de duracioacuten (N = 40
deportistas) a una dosis de 2 gdiacutea de Algatrium Plus
Las variables a estudiar fueron el dantildeo en DNA y paraacutemetros antioxidan-
tes seacutericos
Se observoacute un aumento estadiacutesticamente significativo en la capacidad
antioxidante total del serum (plt005) antes y despueacutes de la realizacioacuten
de las pruebas rectangulares en los deportistas que habiacutean ingerido Al-
gatrium Plus durante un periodo de tres semanas a cuatro meses
H2O
2 (n
mol
L m
in)
150
160
170
180
190
200
BASAL
CAPACIDAD ANTIOXIDANTE TOTAL
Paraacutemetros antioxidantes in vivo
4 MESES
ESTUDIOS IN VIVO
20 DIacuteAS
Algatrium Plus
Control
3
El nivel plasmaacutetico de MDA como iacutendice de peroxidacioacuten lipiacutedica fue
aumentando durante la realizacioacuten de todas las pruebas de esfuerzo
(plt0035) Despueacutes de la ingesta de Algatrium Plus durante 3 semanas
el dantildeo oxidativo a nivel lipiacutedico en las mismas condiciones disminuye
praacutecticamente a nivel basal (plt005) observaacutendose a los 4 meses de tra-
tamiento un efecto protector en esta variable MD
A (n
mol
L)
10
20
30
40
60
BASAL
PEROXIDACIOacuteN LIPIacuteDICA
Paraacutemetros antioxidantes in vivo
4 MESES
ESTUDIOS IN VIVO
20 DIacuteAS
50
0
-10
Hay un aumento en el dantildeo oxidativo del DNA durante la realizacioacuten de
las pruebas rectangulares del esfuerzo medidas como el nivel de 8-oxo-
dG en la orina (plt0011) La ingesta de Algatrium Plus durante 3 sema-
nas y hasta 4 meses protege el DNA del dantildeo oxidativo inducido por el
esfuerzo de una manera significativa (plt0035)
8-ox
o-dG
(pm
olK
gx24
h)
100
200
300
400
600
BASAL
DANtildeO MOLECULAR EN EL DNA
Paraacutemetros antioxidantes in vivo
4 MESES
ESTUDIOS IN VIVO
20 DIacuteAS
500
0
700
800
900
3
Como efectos colaterales en el rendimiento deportivo se ha observado
que los niveles de glicemia disminuyen durante la realizacioacuten de la prue-
ba rectangular de esfuerzo (plt00009) Esta reduccioacuten en la glicemia era
menor despueacutes de 3 semanas de ingesta de Algatrium Plus se traduciacutea
en un aumento del nivel de glicemia a los 4 meses de tratamiento con
Algatrium Plus
mg
dL
-6
-4
-2
BASAL
VARIACIOacuteN EN LA CONCENTRACIOacuteN DE GLUCOSA
Variables fisioloacutegicas de rendimiento deportivo
4 MESES
ESTUDIOS IN VIVO
3 SEMANAS
4
0
-8
2
mL
min
2600
2650
2700
BASAL
CONSUMO DE OXIacuteGENO
Variables fisioloacutegicas de rendimiento deportivo
4 MESES
ESTUDIOS IN VIVO
3 SEMANAS
2900
2550
2850Tambieacuten se ha observado un aumento significativo del consumo abso-
luto (plt0019) y relativo (plt0036) de oxiacutegeno determinado en el umbral
del esfuerzo triangular con la ingesta de Algatrium Plus hasta 4 meses
Estos resultados parecen indicar que la ingesta de Algatrium PLus pue-
de incrementar el rendimiento deportivo
2750
2800
3
CONCLUSIONES
Los aacutecidos grasos omega-3 son un concepto vigente tanto desde un punto de
vista nutricional como terapeacuteutico con un alto potencial de desarrollo
La aplicacioacuten de los aacutecidos grasos omega-3 en estos campos requiere de produc-
tos manufacturados de acuerdo con los estaacutendares que se aplican a productos
farmaceacuteuticos que incluyen controles de calidad para asegurar su pureza y cali-
dad estructural que condiciona su bioactividad Como estaacutendar es exigible una
riqueza miacutenima superior al 5 en una estructura quiacutemica muy biodisponible
como un trigliceacuterido
La incorporacioacuten de Algatrium Plus en las membranas celulares no soacutelo no pro-
mueve la peroxidacioacuten lipiacutedica sino que actuacutea como un activador del sistema
antioxidante celular probablemente como consecuencia de una respuesta adap-
tativa de la ceacutelula
INFORMACIOacuteN LEGAL
ALGATRIUM es una Marca Internacional propiedad de BRUDY TECHNOLOGY
El uso de DHA de alta concentracioacuten para el tratamiento de enfermedades tu-
morales estaacute protegido por la Patente Internacional nordm200501141 Propiedad de
BRUDY TECHNOLOGY
La comercializacioacuten y el uso de Omega-3 Antioxidantes estaacute protegido por la
Patente Internacional nordm200503202 propiedad de BRUDY TECHNOLOGY
Dr Joan C Domingo Pedrol - Departamento de Bioquiacutemica y Biologiacutea Molecular - Universidad de Barcelona - Telf 934 021 214 - e-mail jcdomingoubedu
Fabricado en Espantildea por Brudy Technology - CRiera de Sant Miquel 3 - ordm ordf - 000 Barcelona - Tel 93 17 03
Solamente los aceites de pescado o de algas naturales que no se han rees-
terificado satisfacen la legislacioacuten alimentaria en cuanto a su composicioacuten
y por lo tanto son un alimento El DHA obtenido quiacutemicamente no satisface los
requisitos de la farmacopea europea sobretodo relacionado con el nivel de
trigliceacuteridos gliceacuteridos totales y en el contenido en compuestos polimeacutericos
Es necesaria una purificacioacuten por cromatografiacutea en columna para que el pro-
ducto cumpla los requisitos de la legislacioacuten europea Algatrium Plus tiene la
misma composicioacuten que los aceites naturales y por lo tanto se consideran
un alimento
LEGISLACIOacuteN
0
10
20
30
40
50
Composicioacuten estructural Algatrium Plus
Farmacopea
DHA 50 QUIacuteMICO
DHA 50 QUIacuteMICO-PURIFICADO
60
70
80
90
INS DG PLM TG EE
100
MG FA GTotal
1
ACTIVIDAD ANTITUMORAL
Para valorar la actividad de Algatrium Plus nuestro primer obje-
tivo fue determinar su capacidad citotoacutexica antitumoral En este
sentido realizamos un estudio comparativo usando ceacutelulas tumo-
rales (HeLa) y ceacutelulas sanas como control (renales y de piel) Hemos
realizado estudios dosis-respuesta para determinar el valor de IC50
como criterio de toxicidad (es la concentracioacuten que mata al 50 de
las ceacutelulas) Hemos analizado dos variables el efecto de la estructu-
ra del liacutepido y del contenido en DHA Para un contenido en DHA del
70 de todos los aacutecidos grasos se obtuvo la misma toxicidad en
ceacutelulas tumorales con el eacutester etiacutelico (EE) el aacutecido graso libre (FA) o
el trigliceacuterido (TG) Pero en ceacutelulas renales sanas el EE tiene la mis-
ma toxicidad que en las ceacutelulas tumorales y en las ceacutelulas de piel el
FA demuestran una gran toxicidad siendo los TG la forma con un
mejor cociente de seguridad Para una misma estructura quiacutemica
el TG una disminucioacuten del contenido en DHA a 50 o al 20 (este
uacuteltimo es la concentracioacuten en el aceite de pescado) disminuye de
forma dramaacutetica el efecto citotoacutexico en las ceacutelulas del tumor Estos
resultados demuestran que la forma oacuteptima es el trigliceacuterido con
un alto contenido en DHA (Algatrium Plus)
Efectos del contenido en DHA y de la estructura quiacutemica Toxicidad celular
FA 70 1231 plusmn90 nd 722 plusmn58 17
EE 70 5663 plusmn539 726 plusmn83 710 plusmn97 798 -102
TG (Algatrium Plus) 70 7167 plusmn419 3927 plusmn375 586 plusmn88 1223 -670
TG (Quiacutemico) 50 19560 plusmn278 4136 plusmn256 5640 plusmn696 347 -073
TG (Pescado) 20 22676 plusmn279 31160 plusmn1582 13794 plusmn2864 164 -226
ESTRUCTURA DHA PIEL RENAL HeLa
RELACIOacuteNDE
SEGURIDAD
CEacuteLULASTUMORALESCEacuteLULAS SANAS
COMPOSICIOacuteNIC50 (μM)
Otra actividad interesante de los PUFAs omega-3 en caacutencer es su uso como
adyuvantes en la quimioterapia convencional En este sentido determina-
mos los efectos de Algatrium Plus a concentraciones subtoacutexicas sobre la toxi-
cidad de la Doxorrubicina y del 5-fluoroacilo La exposicioacuten simultaacutenea de las
ceacutelulas tumorales al DHA y a la droga aumenta la toxicidad de la misma dos
veces (disminuye el valor de la IC50) Por otra parte si Algatrium Plus se ha
incorporado previamente a la membrana celular este efecto potenciador au-
menta hasta 10 veces
ACTIVIDAD COMO ADYUVANTE ANTITUMORAL
Efecto del DHA sobre la actividad antitumoral de la Doxorrubicina o del 5-fluoroacilo Toxicidad celular
Este efecto potenciador depende del contenido en DHA ya que con el uso de
un aceite quiacutemico (50 en DHA) o de aceite de pescado (20 en DHA) se pier-
de progresivamente dicho efecto potenciador Tambieacuten es significativo que
este efecto no incrementa la toxicidad de los citostaacuteticos en ceacutelulas sanas
Efecto del contenido en dha sobre la actividad antitumoral de la doxorrubicina Toxicidad celular
Control 0 2953 plusmn316 (n=8)
Pre-incorporado15
10
301 plusmn54 (n=8)287 plusmn67 (n=8)370 plusmn44 (n=6)
Simultaacuteneo 5 1843 plusmn162 (n=4)
Control 0 2330 plusmn368 (n=12)
Pre-incorporado15
10
280 plusmn110 (n=7)238 plusmn101 (n=4)380 plusmn142 (n=6)
Simultaacuteneo 5 1480 plusmn801 (n=6)
LIacuteNEA CELULAR
HeLa-Epitelial (Dox)
HT-29-Colon (5-FU)
SISTEMADE ADICIOacuteN
ALGATRIUM PLUS μM IC50 (μM)
0 2953 plusmn316 11586 plusmn3699
5 287 plusmn67 10466 plusmn2304
10 370 plusmn44 10805 plusmn1742
5 1309 plusmn156 11633 plusmn1569
10 1063 plusmn207 9801 plusmn2709
5 2574 plusmn296 11575 plusmn1249
10 2365 plusmn157 15303 plusmn4813
CONTENIDOEN DHA
Control
DHAAlgatrium Plus
DHA TG 50Quiacutemico
DHA TG 20Pescado
DHA (μM)CEacuteLULA TUMORAL CEacuteLULA SANA
IC50 (nM)
1
BIOACTIVIDAD - SEGURIDAD
En los sistemas quiacutemicos puros las moleacuteculas maacutes susceptibles al ataque de los
radicales libres son los aacutecidos grasos poliinsaturados (PUFAs) como el aacutecido do-
cosahexaenoico (DHA n-3) y en general esta susceptibilidad aumenta con
el nuacutemero de dobles enlaces In vivo se supone el mismo comportamiento
Entonces iquestpor queacute el DHA una diana molecular de los radiaciones libres es el
aacutecido graso maacutes abundante en tejidos expuestos a un potencial estreacutes oxidativo
como la retina o en tejidos con un sistema antioxidante celular deficiente como
el sistema nervioso central
iquestACTIVIDAD PRO-O ANTIOXIDANTE
BIOACTIVIDAD - SEGURIDAD
En este contexto hemos estudiado la influencia de la presencia del DHA enzimaacutetico
en la membrana celular sobre la generacioacuten intracelular de radicales libres utilizando
como sistema experimental dos liacuteneas celulares humanas sanas fibroblastos de piel
(Foreskin ATC CRL 2076) y ceacutelulas epiteliales pigmentarias de la retina (ARPE-19 ATCC
CRL 2302)
La cuantificacioacuten de los radicales libres generados se ha realizado mediante metodolo-
giacuteas fluorescentes usando sondas moleculares como el HDCF-DA DHR y DHE
Como inductores exoacutegenos de estreacutes oxidativo se ha utilizado el AAPH y el sistema
xantinaxantin oxidasa y como inductores endoacutegenos la rotenona y la antimicina A
0
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE CELULAR
Como se muestra en la figura la presencia de Algatrium Plus en la
membrana celular disminuye la generacioacuten intracelular de radicales
libres despueacutes de estar sometidas las ceacutelulas a un estreacutes oxidativo
Este comportamiento es independiente de la ceacutelula en estudio (piel o
retina) y del marcador utilizado (H2DCF-DA o DHR) lo cual nos indica la
activacioacuten de un mecanismo general El nivel de proteccioacuten observado
tambieacuten es similar frente al mismo estiacutemulo oxidativo
0 50 100 150 200 250Tiempo (min)
Fluo
resc
enci
a (U
A)
-49
CEacuteLULAS DE RETINA
H2DCF-DA
0 50 100 150 200Tiempo (min)
Fluo
resc
enci
a (U
A)
-42
CEacuteLULAS DE PIEL
0 50 100 150 200 250Tiempo (min)
Fluo
resc
enci
a (U
A)
-56DHR
0 50 100 150 200 250Tiempo (min)
Fluo
resc
enci
a (U
A)
-50
Control
Algatrium Plus
Incr
emen
to
Pro
tecc
ioacuten
EFECTO ADITIVO
Algatrium Plus
0
0306
09
18
21
05 5
1215
Para determinar que la proteccioacuten antioxidante de Algatrium Plus era un
proceso general cambiamos el inductor de estreacutes oxidativo de un produc-
to quiacutemico (el AAPH) a un sistema enzimaacutetico (sistema XXO) o inductores
endoacutegenos (ROT y ANT A) Se ha observado el mismo comportamiento en
todos los casos
El efecto antioxidante de Algatrium Plus depende de la dosis mostrando
un comportamiento dosis-dependiente a la inversa El mayor efecto se ha
observado en una concentracioacuten baja de DHA mientras que a altas con-
centraciones el efecto antioxidante disminuye independientemente de la
potencia del estreacutes oxidativo
Tambieacuten el efecto antioxidante de Algatrium Plus presenta un efecto adi-
tivo con la frecuencia de la administracioacuten La administracioacuten de una do-
sis diaria inrementa el efecto antioxidante respecto a una sola administra-
cioacuten
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE CELULAR
0 50 100 150 200 250Tiempo (min)
Fluo
resc
enci
a (U
A)
-49
CEacuteLULAS DE RETINA AAPH
P
rote
ccioacute
n
ROT ANT A XXO0
10
20
3040
50
60
INDEPENDIENTE DEL INDUCTOR
P
rote
ccioacute
n
DEPENDENCIA DE LA DOSIS
Algatrium Plus
0
10
20
3040
50
60
05 5 50Dosis diaria
Una dosis
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE CELULAR
La generacioacuten intracelular de radicales libres se confirmoacute mediante
microscopia de fluorescencia confocal Las micrografiacuteas muestran una
acumulacioacuten progresiva en el tiempo de radicales libres en las ceacutelulas
control sin DHA mientras que en las que han incorporado Algatrium
Plus en su membrana el nivel intracelular de radicales libres no ha
aumentado
T= 0 min
T= 15 min
T= 30 min
CONTROL ALGATRIUM PLUS 05 μM
CEacuteLULAS DE PIEL
A nivel celular la generacioacuten de radicales libres parece ser dependiente de
la composicioacuten en aacutecidos grasos de la ceacutelula pero la influencia especiacutefica de
cada clase de aacutecido graso no ha sido estudiada
Por otra parte a nivel industrial el meacutetodo de siacutentesis usado para obtener
el aceite enriquecido en DHA puede ser muy importante en la calidad final
del producto En este sentido hemos estudiado la importancia del contenido
de DHA y del origen sinteacutetico en el efecto antioxidante
Como se puede observar en la figura una disminucioacuten del contenido en DHA
al 50 (origen quiacutemico) o al 20 (aceite de pescado) de los aacutecidos grasos to-
tales induce una disminucioacuten del efecto antioxidante en las ceacutelulas de retina
aunque en ninguacuten caso llega a ser pro-oxidante Sin embargo en ceacutelulas de
piel esta reduccioacuten es tan acusada que soacutelo Algatrium Plus es antioxidante
siendo los otros dos pro-oxidantes
Dado el caraacutecter multifactorial de un tratamiento nutricional no es aconseja-
ble administrar un producto que presente actividades divergentes en funcioacuten
del tejido al que se incorpore
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE CELULAR
CEacuteLULASDE PIEL
05 μM
5 μM
50 μM
ACEITE DE PESCADO
P
ROTE
CCIOacute
N
0
20
40
60
-20
-40
DHA TG50QUIacuteMICO
ALGATRIUMPLUS
P
ROTE
CCIOacute
N
60
20
0
CEacuteLULASDE RETINA
40
DHA quiacutemico vs Algatrium Plus
ACEITE DE PESCADO
DHA TG50QUIacuteMICO
ALGATRIUMPLUS
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE CELULAR
Si la baja actividad del aceite de origen quiacutemico (50 en DHA) pudie-
ra estar relacionado con la presencia de estructuras polimeacutericas su eli-
minacioacuten por cromatografiacutea en columna deberiacutea permitir recuperar su
actividad antioxidante Como se puede observar en la figura una mani-
pulacioacuten excesiva del producto original para eliminar contaminantes
o para mejorar sus caracteriacutesticas organoleacutepticas se traduce en una
peacuterdida de bioactividad
P
ROTE
CCIOacute
N
0
10
20
30
40
50
60
-10DHA TG50QUIacuteMICO
ALGATRIUMPLUS
DHA TG50 QUIacuteMICOPURIFICADO
(DHA)
05 μM
5 μM
50 μM
CEacuteLULAS DE RETINA
DHA quiacutemico vs Algatrium Plus
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE CELULAR
La actividad antioxidante del Algatrium Plus tambieacuten esta relacionada
con su mayor biodisponibilidad ya que un eacutester etiacutelico o un aacutecido graso
libre con el mismo contenido en DHA presenta una actividad antioxi-
dante como maacuteximo la mitad de la de Algatrium Plus
P
ROTE
CCIOacute
N
0
10
20
30
40
50
60
05 μM
(DHA)
FA-BSA
Algatrium Plus
CEacuteLULAS DE RETINA
Efecto de la estructura quiacutemica Fa vs Ee vs Tg
70
5 μM
TG 50 CHEM
EE 70
FA Aacutecido graso libre
EE Eacutester etiacutelico
TG Trigliceacuterido
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE CELULAR
Comparado con los antioxidantes normalmente utilizados en tratamien-
tos oculares a las concentraciones oacuteptimas descritas Algatrium Plus pre-
senta a todas las dosis estudiadas un efecto superior
P
ROTE
CCIOacute
N
0
10
20
30
40
50
60CEacuteLULAS DE RETINA
Algatrium Plus vs antioxidantes
Algatrium Plus
NAC mM
Cys 1 m
M
Co Q 100 μM
Vit E 100 μM
Vit C 100 μM
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE CELULAR
Incluso si estos antioxidantes se combinan o se incrementa su concen-
tracioacuten 10 oacute 100 veces
P
ROTE
CCIOacute
N
0
10
20
30
40
50
60CEacuteLULAS DE RETINA
Algatrium Plus vs antioxidantes
Algatrium Plus
ANT1
ANT1 x10
ANT1 x100ANT2
BIOACTIVIDAD
En este punto la cuestioacuten es iquestCuaacutel es el mecanismo por el cual el Algatrium Plus
ejerce este efecto antioxidante tan potente
Los Omega-3 pueden actuar a diferentes niveles en la fisiologiacutea celular La de-
fensa antioxidante celular se basa en la actividad de un nuacutemero de enzimas an-
tioxidantes junto con otros antioxidantes quiacutemicos conjuntamente previenen la
peroxidacioacuten lipiacutedica la proteiacuteca y el dantildeo en DNA Hemos estudiado el efecto de
Algatrium Plus en diversos aspectos del sistema antioxidante celular
Generacioacuten del anioacuten superoacutexido (O-)
La actividad superoacutexido dismutasa (SOD) y de la glutatioacuten peroxidasa (GPx)
La concentracioacuten intracelular de glutatioacuten (GSH)
La peroxidacioacuten lipiacutedica
Y el dantildeo en DNA
BIOACTIVIDAD
Mecanismo de actividad antioxidante
CellularRespiration
OxidativeBurst
EnvironmentalFactors
O-SOD
GSH
GPx
LipidPeroxidation
ProteinPeroxidation
DNA Damage
HO
HO + O
HO
GSSG
GRed
Catalase
OH
1 3
30
BIOACTIVIDAD
Mecanismo de actividad antioxidante
CellularRespiration
OxidativeBurst
EnvironmentalFactors
O-SOD
GSH
GPx
LipidPeroxidation
ProteinPeroxidation
DNA Damage
HO
HO + O
HO
GSSG
GRed
Catalase
OH
1 3
=
+
BIOACTIVIDAD
Hemos encontrado que la incorporacioacuten de Algatrium Plus en las ceacutelulas disminuye la genera-
cioacuten del anioacuten superoacutexido la peroxidacioacuten lipiacutedica de una manera dosis-dependiente inversa y
el dantildeo en DNA
Los niveles inferiores del anioacuten superoacutexido bajo estreacutes oxidativo en ceacutelulas tratadas con Alga-
trium Plus puede ser debido a la actividad maacutes alta de la SOD respecto al control
Por otra parte la actividad de la GPx en las ceacutelulas tratadas no era diferente de las ceacutelulas control
con o sin estreacutes oxidativo
El cambio maacutes significativo fue el incremento (300) de la concentracioacuten intracelular de GSH
relacionado con un incremento de la siacutentesis de novo
Estos resultados nos indican que Algatrium Plus ejerce su efecto antioxidante mediante un
incremento de la actividad del sistema antioxidante celular sin una participacioacuten directa en
el mismo que lo diferencia de los antioxidantes quiacutemicos convencionales
Esto sugiere que las ceacutelulas toleran cantidades pequentildeas de DHA y que eacuteste actuacutea a modo de
estiacutemulo para evitar cualquier acumulacioacuten de radicales libres la incorporacioacuten de Algatrium
Plus en las biomembranes provoca una respuesta celular antioxidante adaptativa
3
ESTUDIOS IN VIVO
Para valorar la accioacuten de Algatrium Plus se utilizoacute como modelo de es-
treacutes oxidativo el inducido por el ejercicio fiacutesico aerobio
Se sometioacute a deportistas a un esfuerzo continuado al 75 de su consu-
mo maacuteximo de oxiacutegeno durante 90 minutos lo cual supone una produc-
cioacuten suficiente de radicales libres y estreacutes oxidativo como para conocer
la capacidad antioxidante de cualquier manipulacioacuten dieteacutetica
Para dar credibilidad a los resultados obtenidos in vitro es necesario una
constatacioacuten de los mismos in vivo En este sentido se ha desarrollado
un ensayo cliacutenico controlado cruzadov de 4 meses de duracioacuten (N = 40
deportistas) a una dosis de 2 gdiacutea de Algatrium Plus
Las variables a estudiar fueron el dantildeo en DNA y paraacutemetros antioxidan-
tes seacutericos
Se observoacute un aumento estadiacutesticamente significativo en la capacidad
antioxidante total del serum (plt005) antes y despueacutes de la realizacioacuten
de las pruebas rectangulares en los deportistas que habiacutean ingerido Al-
gatrium Plus durante un periodo de tres semanas a cuatro meses
H2O
2 (n
mol
L m
in)
150
160
170
180
190
200
BASAL
CAPACIDAD ANTIOXIDANTE TOTAL
Paraacutemetros antioxidantes in vivo
4 MESES
ESTUDIOS IN VIVO
20 DIacuteAS
Algatrium Plus
Control
3
El nivel plasmaacutetico de MDA como iacutendice de peroxidacioacuten lipiacutedica fue
aumentando durante la realizacioacuten de todas las pruebas de esfuerzo
(plt0035) Despueacutes de la ingesta de Algatrium Plus durante 3 semanas
el dantildeo oxidativo a nivel lipiacutedico en las mismas condiciones disminuye
praacutecticamente a nivel basal (plt005) observaacutendose a los 4 meses de tra-
tamiento un efecto protector en esta variable MD
A (n
mol
L)
10
20
30
40
60
BASAL
PEROXIDACIOacuteN LIPIacuteDICA
Paraacutemetros antioxidantes in vivo
4 MESES
ESTUDIOS IN VIVO
20 DIacuteAS
50
0
-10
Hay un aumento en el dantildeo oxidativo del DNA durante la realizacioacuten de
las pruebas rectangulares del esfuerzo medidas como el nivel de 8-oxo-
dG en la orina (plt0011) La ingesta de Algatrium Plus durante 3 sema-
nas y hasta 4 meses protege el DNA del dantildeo oxidativo inducido por el
esfuerzo de una manera significativa (plt0035)
8-ox
o-dG
(pm
olK
gx24
h)
100
200
300
400
600
BASAL
DANtildeO MOLECULAR EN EL DNA
Paraacutemetros antioxidantes in vivo
4 MESES
ESTUDIOS IN VIVO
20 DIacuteAS
500
0
700
800
900
3
Como efectos colaterales en el rendimiento deportivo se ha observado
que los niveles de glicemia disminuyen durante la realizacioacuten de la prue-
ba rectangular de esfuerzo (plt00009) Esta reduccioacuten en la glicemia era
menor despueacutes de 3 semanas de ingesta de Algatrium Plus se traduciacutea
en un aumento del nivel de glicemia a los 4 meses de tratamiento con
Algatrium Plus
mg
dL
-6
-4
-2
BASAL
VARIACIOacuteN EN LA CONCENTRACIOacuteN DE GLUCOSA
Variables fisioloacutegicas de rendimiento deportivo
4 MESES
ESTUDIOS IN VIVO
3 SEMANAS
4
0
-8
2
mL
min
2600
2650
2700
BASAL
CONSUMO DE OXIacuteGENO
Variables fisioloacutegicas de rendimiento deportivo
4 MESES
ESTUDIOS IN VIVO
3 SEMANAS
2900
2550
2850Tambieacuten se ha observado un aumento significativo del consumo abso-
luto (plt0019) y relativo (plt0036) de oxiacutegeno determinado en el umbral
del esfuerzo triangular con la ingesta de Algatrium Plus hasta 4 meses
Estos resultados parecen indicar que la ingesta de Algatrium PLus pue-
de incrementar el rendimiento deportivo
2750
2800
3
CONCLUSIONES
Los aacutecidos grasos omega-3 son un concepto vigente tanto desde un punto de
vista nutricional como terapeacuteutico con un alto potencial de desarrollo
La aplicacioacuten de los aacutecidos grasos omega-3 en estos campos requiere de produc-
tos manufacturados de acuerdo con los estaacutendares que se aplican a productos
farmaceacuteuticos que incluyen controles de calidad para asegurar su pureza y cali-
dad estructural que condiciona su bioactividad Como estaacutendar es exigible una
riqueza miacutenima superior al 5 en una estructura quiacutemica muy biodisponible
como un trigliceacuterido
La incorporacioacuten de Algatrium Plus en las membranas celulares no soacutelo no pro-
mueve la peroxidacioacuten lipiacutedica sino que actuacutea como un activador del sistema
antioxidante celular probablemente como consecuencia de una respuesta adap-
tativa de la ceacutelula
INFORMACIOacuteN LEGAL
ALGATRIUM es una Marca Internacional propiedad de BRUDY TECHNOLOGY
El uso de DHA de alta concentracioacuten para el tratamiento de enfermedades tu-
morales estaacute protegido por la Patente Internacional nordm200501141 Propiedad de
BRUDY TECHNOLOGY
La comercializacioacuten y el uso de Omega-3 Antioxidantes estaacute protegido por la
Patente Internacional nordm200503202 propiedad de BRUDY TECHNOLOGY
Dr Joan C Domingo Pedrol - Departamento de Bioquiacutemica y Biologiacutea Molecular - Universidad de Barcelona - Telf 934 021 214 - e-mail jcdomingoubedu
Fabricado en Espantildea por Brudy Technology - CRiera de Sant Miquel 3 - ordm ordf - 000 Barcelona - Tel 93 17 03
1
ACTIVIDAD ANTITUMORAL
Para valorar la actividad de Algatrium Plus nuestro primer obje-
tivo fue determinar su capacidad citotoacutexica antitumoral En este
sentido realizamos un estudio comparativo usando ceacutelulas tumo-
rales (HeLa) y ceacutelulas sanas como control (renales y de piel) Hemos
realizado estudios dosis-respuesta para determinar el valor de IC50
como criterio de toxicidad (es la concentracioacuten que mata al 50 de
las ceacutelulas) Hemos analizado dos variables el efecto de la estructu-
ra del liacutepido y del contenido en DHA Para un contenido en DHA del
70 de todos los aacutecidos grasos se obtuvo la misma toxicidad en
ceacutelulas tumorales con el eacutester etiacutelico (EE) el aacutecido graso libre (FA) o
el trigliceacuterido (TG) Pero en ceacutelulas renales sanas el EE tiene la mis-
ma toxicidad que en las ceacutelulas tumorales y en las ceacutelulas de piel el
FA demuestran una gran toxicidad siendo los TG la forma con un
mejor cociente de seguridad Para una misma estructura quiacutemica
el TG una disminucioacuten del contenido en DHA a 50 o al 20 (este
uacuteltimo es la concentracioacuten en el aceite de pescado) disminuye de
forma dramaacutetica el efecto citotoacutexico en las ceacutelulas del tumor Estos
resultados demuestran que la forma oacuteptima es el trigliceacuterido con
un alto contenido en DHA (Algatrium Plus)
Efectos del contenido en DHA y de la estructura quiacutemica Toxicidad celular
FA 70 1231 plusmn90 nd 722 plusmn58 17
EE 70 5663 plusmn539 726 plusmn83 710 plusmn97 798 -102
TG (Algatrium Plus) 70 7167 plusmn419 3927 plusmn375 586 plusmn88 1223 -670
TG (Quiacutemico) 50 19560 plusmn278 4136 plusmn256 5640 plusmn696 347 -073
TG (Pescado) 20 22676 plusmn279 31160 plusmn1582 13794 plusmn2864 164 -226
ESTRUCTURA DHA PIEL RENAL HeLa
RELACIOacuteNDE
SEGURIDAD
CEacuteLULASTUMORALESCEacuteLULAS SANAS
COMPOSICIOacuteNIC50 (μM)
Otra actividad interesante de los PUFAs omega-3 en caacutencer es su uso como
adyuvantes en la quimioterapia convencional En este sentido determina-
mos los efectos de Algatrium Plus a concentraciones subtoacutexicas sobre la toxi-
cidad de la Doxorrubicina y del 5-fluoroacilo La exposicioacuten simultaacutenea de las
ceacutelulas tumorales al DHA y a la droga aumenta la toxicidad de la misma dos
veces (disminuye el valor de la IC50) Por otra parte si Algatrium Plus se ha
incorporado previamente a la membrana celular este efecto potenciador au-
menta hasta 10 veces
ACTIVIDAD COMO ADYUVANTE ANTITUMORAL
Efecto del DHA sobre la actividad antitumoral de la Doxorrubicina o del 5-fluoroacilo Toxicidad celular
Este efecto potenciador depende del contenido en DHA ya que con el uso de
un aceite quiacutemico (50 en DHA) o de aceite de pescado (20 en DHA) se pier-
de progresivamente dicho efecto potenciador Tambieacuten es significativo que
este efecto no incrementa la toxicidad de los citostaacuteticos en ceacutelulas sanas
Efecto del contenido en dha sobre la actividad antitumoral de la doxorrubicina Toxicidad celular
Control 0 2953 plusmn316 (n=8)
Pre-incorporado15
10
301 plusmn54 (n=8)287 plusmn67 (n=8)370 plusmn44 (n=6)
Simultaacuteneo 5 1843 plusmn162 (n=4)
Control 0 2330 plusmn368 (n=12)
Pre-incorporado15
10
280 plusmn110 (n=7)238 plusmn101 (n=4)380 plusmn142 (n=6)
Simultaacuteneo 5 1480 plusmn801 (n=6)
LIacuteNEA CELULAR
HeLa-Epitelial (Dox)
HT-29-Colon (5-FU)
SISTEMADE ADICIOacuteN
ALGATRIUM PLUS μM IC50 (μM)
0 2953 plusmn316 11586 plusmn3699
5 287 plusmn67 10466 plusmn2304
10 370 plusmn44 10805 plusmn1742
5 1309 plusmn156 11633 plusmn1569
10 1063 plusmn207 9801 plusmn2709
5 2574 plusmn296 11575 plusmn1249
10 2365 plusmn157 15303 plusmn4813
CONTENIDOEN DHA
Control
DHAAlgatrium Plus
DHA TG 50Quiacutemico
DHA TG 20Pescado
DHA (μM)CEacuteLULA TUMORAL CEacuteLULA SANA
IC50 (nM)
1
BIOACTIVIDAD - SEGURIDAD
En los sistemas quiacutemicos puros las moleacuteculas maacutes susceptibles al ataque de los
radicales libres son los aacutecidos grasos poliinsaturados (PUFAs) como el aacutecido do-
cosahexaenoico (DHA n-3) y en general esta susceptibilidad aumenta con
el nuacutemero de dobles enlaces In vivo se supone el mismo comportamiento
Entonces iquestpor queacute el DHA una diana molecular de los radiaciones libres es el
aacutecido graso maacutes abundante en tejidos expuestos a un potencial estreacutes oxidativo
como la retina o en tejidos con un sistema antioxidante celular deficiente como
el sistema nervioso central
iquestACTIVIDAD PRO-O ANTIOXIDANTE
BIOACTIVIDAD - SEGURIDAD
En este contexto hemos estudiado la influencia de la presencia del DHA enzimaacutetico
en la membrana celular sobre la generacioacuten intracelular de radicales libres utilizando
como sistema experimental dos liacuteneas celulares humanas sanas fibroblastos de piel
(Foreskin ATC CRL 2076) y ceacutelulas epiteliales pigmentarias de la retina (ARPE-19 ATCC
CRL 2302)
La cuantificacioacuten de los radicales libres generados se ha realizado mediante metodolo-
giacuteas fluorescentes usando sondas moleculares como el HDCF-DA DHR y DHE
Como inductores exoacutegenos de estreacutes oxidativo se ha utilizado el AAPH y el sistema
xantinaxantin oxidasa y como inductores endoacutegenos la rotenona y la antimicina A
0
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE CELULAR
Como se muestra en la figura la presencia de Algatrium Plus en la
membrana celular disminuye la generacioacuten intracelular de radicales
libres despueacutes de estar sometidas las ceacutelulas a un estreacutes oxidativo
Este comportamiento es independiente de la ceacutelula en estudio (piel o
retina) y del marcador utilizado (H2DCF-DA o DHR) lo cual nos indica la
activacioacuten de un mecanismo general El nivel de proteccioacuten observado
tambieacuten es similar frente al mismo estiacutemulo oxidativo
0 50 100 150 200 250Tiempo (min)
Fluo
resc
enci
a (U
A)
-49
CEacuteLULAS DE RETINA
H2DCF-DA
0 50 100 150 200Tiempo (min)
Fluo
resc
enci
a (U
A)
-42
CEacuteLULAS DE PIEL
0 50 100 150 200 250Tiempo (min)
Fluo
resc
enci
a (U
A)
-56DHR
0 50 100 150 200 250Tiempo (min)
Fluo
resc
enci
a (U
A)
-50
Control
Algatrium Plus
Incr
emen
to
Pro
tecc
ioacuten
EFECTO ADITIVO
Algatrium Plus
0
0306
09
18
21
05 5
1215
Para determinar que la proteccioacuten antioxidante de Algatrium Plus era un
proceso general cambiamos el inductor de estreacutes oxidativo de un produc-
to quiacutemico (el AAPH) a un sistema enzimaacutetico (sistema XXO) o inductores
endoacutegenos (ROT y ANT A) Se ha observado el mismo comportamiento en
todos los casos
El efecto antioxidante de Algatrium Plus depende de la dosis mostrando
un comportamiento dosis-dependiente a la inversa El mayor efecto se ha
observado en una concentracioacuten baja de DHA mientras que a altas con-
centraciones el efecto antioxidante disminuye independientemente de la
potencia del estreacutes oxidativo
Tambieacuten el efecto antioxidante de Algatrium Plus presenta un efecto adi-
tivo con la frecuencia de la administracioacuten La administracioacuten de una do-
sis diaria inrementa el efecto antioxidante respecto a una sola administra-
cioacuten
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE CELULAR
0 50 100 150 200 250Tiempo (min)
Fluo
resc
enci
a (U
A)
-49
CEacuteLULAS DE RETINA AAPH
P
rote
ccioacute
n
ROT ANT A XXO0
10
20
3040
50
60
INDEPENDIENTE DEL INDUCTOR
P
rote
ccioacute
n
DEPENDENCIA DE LA DOSIS
Algatrium Plus
0
10
20
3040
50
60
05 5 50Dosis diaria
Una dosis
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE CELULAR
La generacioacuten intracelular de radicales libres se confirmoacute mediante
microscopia de fluorescencia confocal Las micrografiacuteas muestran una
acumulacioacuten progresiva en el tiempo de radicales libres en las ceacutelulas
control sin DHA mientras que en las que han incorporado Algatrium
Plus en su membrana el nivel intracelular de radicales libres no ha
aumentado
T= 0 min
T= 15 min
T= 30 min
CONTROL ALGATRIUM PLUS 05 μM
CEacuteLULAS DE PIEL
A nivel celular la generacioacuten de radicales libres parece ser dependiente de
la composicioacuten en aacutecidos grasos de la ceacutelula pero la influencia especiacutefica de
cada clase de aacutecido graso no ha sido estudiada
Por otra parte a nivel industrial el meacutetodo de siacutentesis usado para obtener
el aceite enriquecido en DHA puede ser muy importante en la calidad final
del producto En este sentido hemos estudiado la importancia del contenido
de DHA y del origen sinteacutetico en el efecto antioxidante
Como se puede observar en la figura una disminucioacuten del contenido en DHA
al 50 (origen quiacutemico) o al 20 (aceite de pescado) de los aacutecidos grasos to-
tales induce una disminucioacuten del efecto antioxidante en las ceacutelulas de retina
aunque en ninguacuten caso llega a ser pro-oxidante Sin embargo en ceacutelulas de
piel esta reduccioacuten es tan acusada que soacutelo Algatrium Plus es antioxidante
siendo los otros dos pro-oxidantes
Dado el caraacutecter multifactorial de un tratamiento nutricional no es aconseja-
ble administrar un producto que presente actividades divergentes en funcioacuten
del tejido al que se incorpore
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE CELULAR
CEacuteLULASDE PIEL
05 μM
5 μM
50 μM
ACEITE DE PESCADO
P
ROTE
CCIOacute
N
0
20
40
60
-20
-40
DHA TG50QUIacuteMICO
ALGATRIUMPLUS
P
ROTE
CCIOacute
N
60
20
0
CEacuteLULASDE RETINA
40
DHA quiacutemico vs Algatrium Plus
ACEITE DE PESCADO
DHA TG50QUIacuteMICO
ALGATRIUMPLUS
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE CELULAR
Si la baja actividad del aceite de origen quiacutemico (50 en DHA) pudie-
ra estar relacionado con la presencia de estructuras polimeacutericas su eli-
minacioacuten por cromatografiacutea en columna deberiacutea permitir recuperar su
actividad antioxidante Como se puede observar en la figura una mani-
pulacioacuten excesiva del producto original para eliminar contaminantes
o para mejorar sus caracteriacutesticas organoleacutepticas se traduce en una
peacuterdida de bioactividad
P
ROTE
CCIOacute
N
0
10
20
30
40
50
60
-10DHA TG50QUIacuteMICO
ALGATRIUMPLUS
DHA TG50 QUIacuteMICOPURIFICADO
(DHA)
05 μM
5 μM
50 μM
CEacuteLULAS DE RETINA
DHA quiacutemico vs Algatrium Plus
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE CELULAR
La actividad antioxidante del Algatrium Plus tambieacuten esta relacionada
con su mayor biodisponibilidad ya que un eacutester etiacutelico o un aacutecido graso
libre con el mismo contenido en DHA presenta una actividad antioxi-
dante como maacuteximo la mitad de la de Algatrium Plus
P
ROTE
CCIOacute
N
0
10
20
30
40
50
60
05 μM
(DHA)
FA-BSA
Algatrium Plus
CEacuteLULAS DE RETINA
Efecto de la estructura quiacutemica Fa vs Ee vs Tg
70
5 μM
TG 50 CHEM
EE 70
FA Aacutecido graso libre
EE Eacutester etiacutelico
TG Trigliceacuterido
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE CELULAR
Comparado con los antioxidantes normalmente utilizados en tratamien-
tos oculares a las concentraciones oacuteptimas descritas Algatrium Plus pre-
senta a todas las dosis estudiadas un efecto superior
P
ROTE
CCIOacute
N
0
10
20
30
40
50
60CEacuteLULAS DE RETINA
Algatrium Plus vs antioxidantes
Algatrium Plus
NAC mM
Cys 1 m
M
Co Q 100 μM
Vit E 100 μM
Vit C 100 μM
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE CELULAR
Incluso si estos antioxidantes se combinan o se incrementa su concen-
tracioacuten 10 oacute 100 veces
P
ROTE
CCIOacute
N
0
10
20
30
40
50
60CEacuteLULAS DE RETINA
Algatrium Plus vs antioxidantes
Algatrium Plus
ANT1
ANT1 x10
ANT1 x100ANT2
BIOACTIVIDAD
En este punto la cuestioacuten es iquestCuaacutel es el mecanismo por el cual el Algatrium Plus
ejerce este efecto antioxidante tan potente
Los Omega-3 pueden actuar a diferentes niveles en la fisiologiacutea celular La de-
fensa antioxidante celular se basa en la actividad de un nuacutemero de enzimas an-
tioxidantes junto con otros antioxidantes quiacutemicos conjuntamente previenen la
peroxidacioacuten lipiacutedica la proteiacuteca y el dantildeo en DNA Hemos estudiado el efecto de
Algatrium Plus en diversos aspectos del sistema antioxidante celular
Generacioacuten del anioacuten superoacutexido (O-)
La actividad superoacutexido dismutasa (SOD) y de la glutatioacuten peroxidasa (GPx)
La concentracioacuten intracelular de glutatioacuten (GSH)
La peroxidacioacuten lipiacutedica
Y el dantildeo en DNA
BIOACTIVIDAD
Mecanismo de actividad antioxidante
CellularRespiration
OxidativeBurst
EnvironmentalFactors
O-SOD
GSH
GPx
LipidPeroxidation
ProteinPeroxidation
DNA Damage
HO
HO + O
HO
GSSG
GRed
Catalase
OH
1 3
30
BIOACTIVIDAD
Mecanismo de actividad antioxidante
CellularRespiration
OxidativeBurst
EnvironmentalFactors
O-SOD
GSH
GPx
LipidPeroxidation
ProteinPeroxidation
DNA Damage
HO
HO + O
HO
GSSG
GRed
Catalase
OH
1 3
=
+
BIOACTIVIDAD
Hemos encontrado que la incorporacioacuten de Algatrium Plus en las ceacutelulas disminuye la genera-
cioacuten del anioacuten superoacutexido la peroxidacioacuten lipiacutedica de una manera dosis-dependiente inversa y
el dantildeo en DNA
Los niveles inferiores del anioacuten superoacutexido bajo estreacutes oxidativo en ceacutelulas tratadas con Alga-
trium Plus puede ser debido a la actividad maacutes alta de la SOD respecto al control
Por otra parte la actividad de la GPx en las ceacutelulas tratadas no era diferente de las ceacutelulas control
con o sin estreacutes oxidativo
El cambio maacutes significativo fue el incremento (300) de la concentracioacuten intracelular de GSH
relacionado con un incremento de la siacutentesis de novo
Estos resultados nos indican que Algatrium Plus ejerce su efecto antioxidante mediante un
incremento de la actividad del sistema antioxidante celular sin una participacioacuten directa en
el mismo que lo diferencia de los antioxidantes quiacutemicos convencionales
Esto sugiere que las ceacutelulas toleran cantidades pequentildeas de DHA y que eacuteste actuacutea a modo de
estiacutemulo para evitar cualquier acumulacioacuten de radicales libres la incorporacioacuten de Algatrium
Plus en las biomembranes provoca una respuesta celular antioxidante adaptativa
3
ESTUDIOS IN VIVO
Para valorar la accioacuten de Algatrium Plus se utilizoacute como modelo de es-
treacutes oxidativo el inducido por el ejercicio fiacutesico aerobio
Se sometioacute a deportistas a un esfuerzo continuado al 75 de su consu-
mo maacuteximo de oxiacutegeno durante 90 minutos lo cual supone una produc-
cioacuten suficiente de radicales libres y estreacutes oxidativo como para conocer
la capacidad antioxidante de cualquier manipulacioacuten dieteacutetica
Para dar credibilidad a los resultados obtenidos in vitro es necesario una
constatacioacuten de los mismos in vivo En este sentido se ha desarrollado
un ensayo cliacutenico controlado cruzadov de 4 meses de duracioacuten (N = 40
deportistas) a una dosis de 2 gdiacutea de Algatrium Plus
Las variables a estudiar fueron el dantildeo en DNA y paraacutemetros antioxidan-
tes seacutericos
Se observoacute un aumento estadiacutesticamente significativo en la capacidad
antioxidante total del serum (plt005) antes y despueacutes de la realizacioacuten
de las pruebas rectangulares en los deportistas que habiacutean ingerido Al-
gatrium Plus durante un periodo de tres semanas a cuatro meses
H2O
2 (n
mol
L m
in)
150
160
170
180
190
200
BASAL
CAPACIDAD ANTIOXIDANTE TOTAL
Paraacutemetros antioxidantes in vivo
4 MESES
ESTUDIOS IN VIVO
20 DIacuteAS
Algatrium Plus
Control
3
El nivel plasmaacutetico de MDA como iacutendice de peroxidacioacuten lipiacutedica fue
aumentando durante la realizacioacuten de todas las pruebas de esfuerzo
(plt0035) Despueacutes de la ingesta de Algatrium Plus durante 3 semanas
el dantildeo oxidativo a nivel lipiacutedico en las mismas condiciones disminuye
praacutecticamente a nivel basal (plt005) observaacutendose a los 4 meses de tra-
tamiento un efecto protector en esta variable MD
A (n
mol
L)
10
20
30
40
60
BASAL
PEROXIDACIOacuteN LIPIacuteDICA
Paraacutemetros antioxidantes in vivo
4 MESES
ESTUDIOS IN VIVO
20 DIacuteAS
50
0
-10
Hay un aumento en el dantildeo oxidativo del DNA durante la realizacioacuten de
las pruebas rectangulares del esfuerzo medidas como el nivel de 8-oxo-
dG en la orina (plt0011) La ingesta de Algatrium Plus durante 3 sema-
nas y hasta 4 meses protege el DNA del dantildeo oxidativo inducido por el
esfuerzo de una manera significativa (plt0035)
8-ox
o-dG
(pm
olK
gx24
h)
100
200
300
400
600
BASAL
DANtildeO MOLECULAR EN EL DNA
Paraacutemetros antioxidantes in vivo
4 MESES
ESTUDIOS IN VIVO
20 DIacuteAS
500
0
700
800
900
3
Como efectos colaterales en el rendimiento deportivo se ha observado
que los niveles de glicemia disminuyen durante la realizacioacuten de la prue-
ba rectangular de esfuerzo (plt00009) Esta reduccioacuten en la glicemia era
menor despueacutes de 3 semanas de ingesta de Algatrium Plus se traduciacutea
en un aumento del nivel de glicemia a los 4 meses de tratamiento con
Algatrium Plus
mg
dL
-6
-4
-2
BASAL
VARIACIOacuteN EN LA CONCENTRACIOacuteN DE GLUCOSA
Variables fisioloacutegicas de rendimiento deportivo
4 MESES
ESTUDIOS IN VIVO
3 SEMANAS
4
0
-8
2
mL
min
2600
2650
2700
BASAL
CONSUMO DE OXIacuteGENO
Variables fisioloacutegicas de rendimiento deportivo
4 MESES
ESTUDIOS IN VIVO
3 SEMANAS
2900
2550
2850Tambieacuten se ha observado un aumento significativo del consumo abso-
luto (plt0019) y relativo (plt0036) de oxiacutegeno determinado en el umbral
del esfuerzo triangular con la ingesta de Algatrium Plus hasta 4 meses
Estos resultados parecen indicar que la ingesta de Algatrium PLus pue-
de incrementar el rendimiento deportivo
2750
2800
3
CONCLUSIONES
Los aacutecidos grasos omega-3 son un concepto vigente tanto desde un punto de
vista nutricional como terapeacuteutico con un alto potencial de desarrollo
La aplicacioacuten de los aacutecidos grasos omega-3 en estos campos requiere de produc-
tos manufacturados de acuerdo con los estaacutendares que se aplican a productos
farmaceacuteuticos que incluyen controles de calidad para asegurar su pureza y cali-
dad estructural que condiciona su bioactividad Como estaacutendar es exigible una
riqueza miacutenima superior al 5 en una estructura quiacutemica muy biodisponible
como un trigliceacuterido
La incorporacioacuten de Algatrium Plus en las membranas celulares no soacutelo no pro-
mueve la peroxidacioacuten lipiacutedica sino que actuacutea como un activador del sistema
antioxidante celular probablemente como consecuencia de una respuesta adap-
tativa de la ceacutelula
INFORMACIOacuteN LEGAL
ALGATRIUM es una Marca Internacional propiedad de BRUDY TECHNOLOGY
El uso de DHA de alta concentracioacuten para el tratamiento de enfermedades tu-
morales estaacute protegido por la Patente Internacional nordm200501141 Propiedad de
BRUDY TECHNOLOGY
La comercializacioacuten y el uso de Omega-3 Antioxidantes estaacute protegido por la
Patente Internacional nordm200503202 propiedad de BRUDY TECHNOLOGY
Dr Joan C Domingo Pedrol - Departamento de Bioquiacutemica y Biologiacutea Molecular - Universidad de Barcelona - Telf 934 021 214 - e-mail jcdomingoubedu
Fabricado en Espantildea por Brudy Technology - CRiera de Sant Miquel 3 - ordm ordf - 000 Barcelona - Tel 93 17 03
Otra actividad interesante de los PUFAs omega-3 en caacutencer es su uso como
adyuvantes en la quimioterapia convencional En este sentido determina-
mos los efectos de Algatrium Plus a concentraciones subtoacutexicas sobre la toxi-
cidad de la Doxorrubicina y del 5-fluoroacilo La exposicioacuten simultaacutenea de las
ceacutelulas tumorales al DHA y a la droga aumenta la toxicidad de la misma dos
veces (disminuye el valor de la IC50) Por otra parte si Algatrium Plus se ha
incorporado previamente a la membrana celular este efecto potenciador au-
menta hasta 10 veces
ACTIVIDAD COMO ADYUVANTE ANTITUMORAL
Efecto del DHA sobre la actividad antitumoral de la Doxorrubicina o del 5-fluoroacilo Toxicidad celular
Este efecto potenciador depende del contenido en DHA ya que con el uso de
un aceite quiacutemico (50 en DHA) o de aceite de pescado (20 en DHA) se pier-
de progresivamente dicho efecto potenciador Tambieacuten es significativo que
este efecto no incrementa la toxicidad de los citostaacuteticos en ceacutelulas sanas
Efecto del contenido en dha sobre la actividad antitumoral de la doxorrubicina Toxicidad celular
Control 0 2953 plusmn316 (n=8)
Pre-incorporado15
10
301 plusmn54 (n=8)287 plusmn67 (n=8)370 plusmn44 (n=6)
Simultaacuteneo 5 1843 plusmn162 (n=4)
Control 0 2330 plusmn368 (n=12)
Pre-incorporado15
10
280 plusmn110 (n=7)238 plusmn101 (n=4)380 plusmn142 (n=6)
Simultaacuteneo 5 1480 plusmn801 (n=6)
LIacuteNEA CELULAR
HeLa-Epitelial (Dox)
HT-29-Colon (5-FU)
SISTEMADE ADICIOacuteN
ALGATRIUM PLUS μM IC50 (μM)
0 2953 plusmn316 11586 plusmn3699
5 287 plusmn67 10466 plusmn2304
10 370 plusmn44 10805 plusmn1742
5 1309 plusmn156 11633 plusmn1569
10 1063 plusmn207 9801 plusmn2709
5 2574 plusmn296 11575 plusmn1249
10 2365 plusmn157 15303 plusmn4813
CONTENIDOEN DHA
Control
DHAAlgatrium Plus
DHA TG 50Quiacutemico
DHA TG 20Pescado
DHA (μM)CEacuteLULA TUMORAL CEacuteLULA SANA
IC50 (nM)
1
BIOACTIVIDAD - SEGURIDAD
En los sistemas quiacutemicos puros las moleacuteculas maacutes susceptibles al ataque de los
radicales libres son los aacutecidos grasos poliinsaturados (PUFAs) como el aacutecido do-
cosahexaenoico (DHA n-3) y en general esta susceptibilidad aumenta con
el nuacutemero de dobles enlaces In vivo se supone el mismo comportamiento
Entonces iquestpor queacute el DHA una diana molecular de los radiaciones libres es el
aacutecido graso maacutes abundante en tejidos expuestos a un potencial estreacutes oxidativo
como la retina o en tejidos con un sistema antioxidante celular deficiente como
el sistema nervioso central
iquestACTIVIDAD PRO-O ANTIOXIDANTE
BIOACTIVIDAD - SEGURIDAD
En este contexto hemos estudiado la influencia de la presencia del DHA enzimaacutetico
en la membrana celular sobre la generacioacuten intracelular de radicales libres utilizando
como sistema experimental dos liacuteneas celulares humanas sanas fibroblastos de piel
(Foreskin ATC CRL 2076) y ceacutelulas epiteliales pigmentarias de la retina (ARPE-19 ATCC
CRL 2302)
La cuantificacioacuten de los radicales libres generados se ha realizado mediante metodolo-
giacuteas fluorescentes usando sondas moleculares como el HDCF-DA DHR y DHE
Como inductores exoacutegenos de estreacutes oxidativo se ha utilizado el AAPH y el sistema
xantinaxantin oxidasa y como inductores endoacutegenos la rotenona y la antimicina A
0
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE CELULAR
Como se muestra en la figura la presencia de Algatrium Plus en la
membrana celular disminuye la generacioacuten intracelular de radicales
libres despueacutes de estar sometidas las ceacutelulas a un estreacutes oxidativo
Este comportamiento es independiente de la ceacutelula en estudio (piel o
retina) y del marcador utilizado (H2DCF-DA o DHR) lo cual nos indica la
activacioacuten de un mecanismo general El nivel de proteccioacuten observado
tambieacuten es similar frente al mismo estiacutemulo oxidativo
0 50 100 150 200 250Tiempo (min)
Fluo
resc
enci
a (U
A)
-49
CEacuteLULAS DE RETINA
H2DCF-DA
0 50 100 150 200Tiempo (min)
Fluo
resc
enci
a (U
A)
-42
CEacuteLULAS DE PIEL
0 50 100 150 200 250Tiempo (min)
Fluo
resc
enci
a (U
A)
-56DHR
0 50 100 150 200 250Tiempo (min)
Fluo
resc
enci
a (U
A)
-50
Control
Algatrium Plus
Incr
emen
to
Pro
tecc
ioacuten
EFECTO ADITIVO
Algatrium Plus
0
0306
09
18
21
05 5
1215
Para determinar que la proteccioacuten antioxidante de Algatrium Plus era un
proceso general cambiamos el inductor de estreacutes oxidativo de un produc-
to quiacutemico (el AAPH) a un sistema enzimaacutetico (sistema XXO) o inductores
endoacutegenos (ROT y ANT A) Se ha observado el mismo comportamiento en
todos los casos
El efecto antioxidante de Algatrium Plus depende de la dosis mostrando
un comportamiento dosis-dependiente a la inversa El mayor efecto se ha
observado en una concentracioacuten baja de DHA mientras que a altas con-
centraciones el efecto antioxidante disminuye independientemente de la
potencia del estreacutes oxidativo
Tambieacuten el efecto antioxidante de Algatrium Plus presenta un efecto adi-
tivo con la frecuencia de la administracioacuten La administracioacuten de una do-
sis diaria inrementa el efecto antioxidante respecto a una sola administra-
cioacuten
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE CELULAR
0 50 100 150 200 250Tiempo (min)
Fluo
resc
enci
a (U
A)
-49
CEacuteLULAS DE RETINA AAPH
P
rote
ccioacute
n
ROT ANT A XXO0
10
20
3040
50
60
INDEPENDIENTE DEL INDUCTOR
P
rote
ccioacute
n
DEPENDENCIA DE LA DOSIS
Algatrium Plus
0
10
20
3040
50
60
05 5 50Dosis diaria
Una dosis
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE CELULAR
La generacioacuten intracelular de radicales libres se confirmoacute mediante
microscopia de fluorescencia confocal Las micrografiacuteas muestran una
acumulacioacuten progresiva en el tiempo de radicales libres en las ceacutelulas
control sin DHA mientras que en las que han incorporado Algatrium
Plus en su membrana el nivel intracelular de radicales libres no ha
aumentado
T= 0 min
T= 15 min
T= 30 min
CONTROL ALGATRIUM PLUS 05 μM
CEacuteLULAS DE PIEL
A nivel celular la generacioacuten de radicales libres parece ser dependiente de
la composicioacuten en aacutecidos grasos de la ceacutelula pero la influencia especiacutefica de
cada clase de aacutecido graso no ha sido estudiada
Por otra parte a nivel industrial el meacutetodo de siacutentesis usado para obtener
el aceite enriquecido en DHA puede ser muy importante en la calidad final
del producto En este sentido hemos estudiado la importancia del contenido
de DHA y del origen sinteacutetico en el efecto antioxidante
Como se puede observar en la figura una disminucioacuten del contenido en DHA
al 50 (origen quiacutemico) o al 20 (aceite de pescado) de los aacutecidos grasos to-
tales induce una disminucioacuten del efecto antioxidante en las ceacutelulas de retina
aunque en ninguacuten caso llega a ser pro-oxidante Sin embargo en ceacutelulas de
piel esta reduccioacuten es tan acusada que soacutelo Algatrium Plus es antioxidante
siendo los otros dos pro-oxidantes
Dado el caraacutecter multifactorial de un tratamiento nutricional no es aconseja-
ble administrar un producto que presente actividades divergentes en funcioacuten
del tejido al que se incorpore
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE CELULAR
CEacuteLULASDE PIEL
05 μM
5 μM
50 μM
ACEITE DE PESCADO
P
ROTE
CCIOacute
N
0
20
40
60
-20
-40
DHA TG50QUIacuteMICO
ALGATRIUMPLUS
P
ROTE
CCIOacute
N
60
20
0
CEacuteLULASDE RETINA
40
DHA quiacutemico vs Algatrium Plus
ACEITE DE PESCADO
DHA TG50QUIacuteMICO
ALGATRIUMPLUS
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE CELULAR
Si la baja actividad del aceite de origen quiacutemico (50 en DHA) pudie-
ra estar relacionado con la presencia de estructuras polimeacutericas su eli-
minacioacuten por cromatografiacutea en columna deberiacutea permitir recuperar su
actividad antioxidante Como se puede observar en la figura una mani-
pulacioacuten excesiva del producto original para eliminar contaminantes
o para mejorar sus caracteriacutesticas organoleacutepticas se traduce en una
peacuterdida de bioactividad
P
ROTE
CCIOacute
N
0
10
20
30
40
50
60
-10DHA TG50QUIacuteMICO
ALGATRIUMPLUS
DHA TG50 QUIacuteMICOPURIFICADO
(DHA)
05 μM
5 μM
50 μM
CEacuteLULAS DE RETINA
DHA quiacutemico vs Algatrium Plus
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE CELULAR
La actividad antioxidante del Algatrium Plus tambieacuten esta relacionada
con su mayor biodisponibilidad ya que un eacutester etiacutelico o un aacutecido graso
libre con el mismo contenido en DHA presenta una actividad antioxi-
dante como maacuteximo la mitad de la de Algatrium Plus
P
ROTE
CCIOacute
N
0
10
20
30
40
50
60
05 μM
(DHA)
FA-BSA
Algatrium Plus
CEacuteLULAS DE RETINA
Efecto de la estructura quiacutemica Fa vs Ee vs Tg
70
5 μM
TG 50 CHEM
EE 70
FA Aacutecido graso libre
EE Eacutester etiacutelico
TG Trigliceacuterido
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE CELULAR
Comparado con los antioxidantes normalmente utilizados en tratamien-
tos oculares a las concentraciones oacuteptimas descritas Algatrium Plus pre-
senta a todas las dosis estudiadas un efecto superior
P
ROTE
CCIOacute
N
0
10
20
30
40
50
60CEacuteLULAS DE RETINA
Algatrium Plus vs antioxidantes
Algatrium Plus
NAC mM
Cys 1 m
M
Co Q 100 μM
Vit E 100 μM
Vit C 100 μM
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE CELULAR
Incluso si estos antioxidantes se combinan o se incrementa su concen-
tracioacuten 10 oacute 100 veces
P
ROTE
CCIOacute
N
0
10
20
30
40
50
60CEacuteLULAS DE RETINA
Algatrium Plus vs antioxidantes
Algatrium Plus
ANT1
ANT1 x10
ANT1 x100ANT2
BIOACTIVIDAD
En este punto la cuestioacuten es iquestCuaacutel es el mecanismo por el cual el Algatrium Plus
ejerce este efecto antioxidante tan potente
Los Omega-3 pueden actuar a diferentes niveles en la fisiologiacutea celular La de-
fensa antioxidante celular se basa en la actividad de un nuacutemero de enzimas an-
tioxidantes junto con otros antioxidantes quiacutemicos conjuntamente previenen la
peroxidacioacuten lipiacutedica la proteiacuteca y el dantildeo en DNA Hemos estudiado el efecto de
Algatrium Plus en diversos aspectos del sistema antioxidante celular
Generacioacuten del anioacuten superoacutexido (O-)
La actividad superoacutexido dismutasa (SOD) y de la glutatioacuten peroxidasa (GPx)
La concentracioacuten intracelular de glutatioacuten (GSH)
La peroxidacioacuten lipiacutedica
Y el dantildeo en DNA
BIOACTIVIDAD
Mecanismo de actividad antioxidante
CellularRespiration
OxidativeBurst
EnvironmentalFactors
O-SOD
GSH
GPx
LipidPeroxidation
ProteinPeroxidation
DNA Damage
HO
HO + O
HO
GSSG
GRed
Catalase
OH
1 3
30
BIOACTIVIDAD
Mecanismo de actividad antioxidante
CellularRespiration
OxidativeBurst
EnvironmentalFactors
O-SOD
GSH
GPx
LipidPeroxidation
ProteinPeroxidation
DNA Damage
HO
HO + O
HO
GSSG
GRed
Catalase
OH
1 3
=
+
BIOACTIVIDAD
Hemos encontrado que la incorporacioacuten de Algatrium Plus en las ceacutelulas disminuye la genera-
cioacuten del anioacuten superoacutexido la peroxidacioacuten lipiacutedica de una manera dosis-dependiente inversa y
el dantildeo en DNA
Los niveles inferiores del anioacuten superoacutexido bajo estreacutes oxidativo en ceacutelulas tratadas con Alga-
trium Plus puede ser debido a la actividad maacutes alta de la SOD respecto al control
Por otra parte la actividad de la GPx en las ceacutelulas tratadas no era diferente de las ceacutelulas control
con o sin estreacutes oxidativo
El cambio maacutes significativo fue el incremento (300) de la concentracioacuten intracelular de GSH
relacionado con un incremento de la siacutentesis de novo
Estos resultados nos indican que Algatrium Plus ejerce su efecto antioxidante mediante un
incremento de la actividad del sistema antioxidante celular sin una participacioacuten directa en
el mismo que lo diferencia de los antioxidantes quiacutemicos convencionales
Esto sugiere que las ceacutelulas toleran cantidades pequentildeas de DHA y que eacuteste actuacutea a modo de
estiacutemulo para evitar cualquier acumulacioacuten de radicales libres la incorporacioacuten de Algatrium
Plus en las biomembranes provoca una respuesta celular antioxidante adaptativa
3
ESTUDIOS IN VIVO
Para valorar la accioacuten de Algatrium Plus se utilizoacute como modelo de es-
treacutes oxidativo el inducido por el ejercicio fiacutesico aerobio
Se sometioacute a deportistas a un esfuerzo continuado al 75 de su consu-
mo maacuteximo de oxiacutegeno durante 90 minutos lo cual supone una produc-
cioacuten suficiente de radicales libres y estreacutes oxidativo como para conocer
la capacidad antioxidante de cualquier manipulacioacuten dieteacutetica
Para dar credibilidad a los resultados obtenidos in vitro es necesario una
constatacioacuten de los mismos in vivo En este sentido se ha desarrollado
un ensayo cliacutenico controlado cruzadov de 4 meses de duracioacuten (N = 40
deportistas) a una dosis de 2 gdiacutea de Algatrium Plus
Las variables a estudiar fueron el dantildeo en DNA y paraacutemetros antioxidan-
tes seacutericos
Se observoacute un aumento estadiacutesticamente significativo en la capacidad
antioxidante total del serum (plt005) antes y despueacutes de la realizacioacuten
de las pruebas rectangulares en los deportistas que habiacutean ingerido Al-
gatrium Plus durante un periodo de tres semanas a cuatro meses
H2O
2 (n
mol
L m
in)
150
160
170
180
190
200
BASAL
CAPACIDAD ANTIOXIDANTE TOTAL
Paraacutemetros antioxidantes in vivo
4 MESES
ESTUDIOS IN VIVO
20 DIacuteAS
Algatrium Plus
Control
3
El nivel plasmaacutetico de MDA como iacutendice de peroxidacioacuten lipiacutedica fue
aumentando durante la realizacioacuten de todas las pruebas de esfuerzo
(plt0035) Despueacutes de la ingesta de Algatrium Plus durante 3 semanas
el dantildeo oxidativo a nivel lipiacutedico en las mismas condiciones disminuye
praacutecticamente a nivel basal (plt005) observaacutendose a los 4 meses de tra-
tamiento un efecto protector en esta variable MD
A (n
mol
L)
10
20
30
40
60
BASAL
PEROXIDACIOacuteN LIPIacuteDICA
Paraacutemetros antioxidantes in vivo
4 MESES
ESTUDIOS IN VIVO
20 DIacuteAS
50
0
-10
Hay un aumento en el dantildeo oxidativo del DNA durante la realizacioacuten de
las pruebas rectangulares del esfuerzo medidas como el nivel de 8-oxo-
dG en la orina (plt0011) La ingesta de Algatrium Plus durante 3 sema-
nas y hasta 4 meses protege el DNA del dantildeo oxidativo inducido por el
esfuerzo de una manera significativa (plt0035)
8-ox
o-dG
(pm
olK
gx24
h)
100
200
300
400
600
BASAL
DANtildeO MOLECULAR EN EL DNA
Paraacutemetros antioxidantes in vivo
4 MESES
ESTUDIOS IN VIVO
20 DIacuteAS
500
0
700
800
900
3
Como efectos colaterales en el rendimiento deportivo se ha observado
que los niveles de glicemia disminuyen durante la realizacioacuten de la prue-
ba rectangular de esfuerzo (plt00009) Esta reduccioacuten en la glicemia era
menor despueacutes de 3 semanas de ingesta de Algatrium Plus se traduciacutea
en un aumento del nivel de glicemia a los 4 meses de tratamiento con
Algatrium Plus
mg
dL
-6
-4
-2
BASAL
VARIACIOacuteN EN LA CONCENTRACIOacuteN DE GLUCOSA
Variables fisioloacutegicas de rendimiento deportivo
4 MESES
ESTUDIOS IN VIVO
3 SEMANAS
4
0
-8
2
mL
min
2600
2650
2700
BASAL
CONSUMO DE OXIacuteGENO
Variables fisioloacutegicas de rendimiento deportivo
4 MESES
ESTUDIOS IN VIVO
3 SEMANAS
2900
2550
2850Tambieacuten se ha observado un aumento significativo del consumo abso-
luto (plt0019) y relativo (plt0036) de oxiacutegeno determinado en el umbral
del esfuerzo triangular con la ingesta de Algatrium Plus hasta 4 meses
Estos resultados parecen indicar que la ingesta de Algatrium PLus pue-
de incrementar el rendimiento deportivo
2750
2800
3
CONCLUSIONES
Los aacutecidos grasos omega-3 son un concepto vigente tanto desde un punto de
vista nutricional como terapeacuteutico con un alto potencial de desarrollo
La aplicacioacuten de los aacutecidos grasos omega-3 en estos campos requiere de produc-
tos manufacturados de acuerdo con los estaacutendares que se aplican a productos
farmaceacuteuticos que incluyen controles de calidad para asegurar su pureza y cali-
dad estructural que condiciona su bioactividad Como estaacutendar es exigible una
riqueza miacutenima superior al 5 en una estructura quiacutemica muy biodisponible
como un trigliceacuterido
La incorporacioacuten de Algatrium Plus en las membranas celulares no soacutelo no pro-
mueve la peroxidacioacuten lipiacutedica sino que actuacutea como un activador del sistema
antioxidante celular probablemente como consecuencia de una respuesta adap-
tativa de la ceacutelula
INFORMACIOacuteN LEGAL
ALGATRIUM es una Marca Internacional propiedad de BRUDY TECHNOLOGY
El uso de DHA de alta concentracioacuten para el tratamiento de enfermedades tu-
morales estaacute protegido por la Patente Internacional nordm200501141 Propiedad de
BRUDY TECHNOLOGY
La comercializacioacuten y el uso de Omega-3 Antioxidantes estaacute protegido por la
Patente Internacional nordm200503202 propiedad de BRUDY TECHNOLOGY
Dr Joan C Domingo Pedrol - Departamento de Bioquiacutemica y Biologiacutea Molecular - Universidad de Barcelona - Telf 934 021 214 - e-mail jcdomingoubedu
Fabricado en Espantildea por Brudy Technology - CRiera de Sant Miquel 3 - ordm ordf - 000 Barcelona - Tel 93 17 03
1
BIOACTIVIDAD - SEGURIDAD
En los sistemas quiacutemicos puros las moleacuteculas maacutes susceptibles al ataque de los
radicales libres son los aacutecidos grasos poliinsaturados (PUFAs) como el aacutecido do-
cosahexaenoico (DHA n-3) y en general esta susceptibilidad aumenta con
el nuacutemero de dobles enlaces In vivo se supone el mismo comportamiento
Entonces iquestpor queacute el DHA una diana molecular de los radiaciones libres es el
aacutecido graso maacutes abundante en tejidos expuestos a un potencial estreacutes oxidativo
como la retina o en tejidos con un sistema antioxidante celular deficiente como
el sistema nervioso central
iquestACTIVIDAD PRO-O ANTIOXIDANTE
BIOACTIVIDAD - SEGURIDAD
En este contexto hemos estudiado la influencia de la presencia del DHA enzimaacutetico
en la membrana celular sobre la generacioacuten intracelular de radicales libres utilizando
como sistema experimental dos liacuteneas celulares humanas sanas fibroblastos de piel
(Foreskin ATC CRL 2076) y ceacutelulas epiteliales pigmentarias de la retina (ARPE-19 ATCC
CRL 2302)
La cuantificacioacuten de los radicales libres generados se ha realizado mediante metodolo-
giacuteas fluorescentes usando sondas moleculares como el HDCF-DA DHR y DHE
Como inductores exoacutegenos de estreacutes oxidativo se ha utilizado el AAPH y el sistema
xantinaxantin oxidasa y como inductores endoacutegenos la rotenona y la antimicina A
0
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE CELULAR
Como se muestra en la figura la presencia de Algatrium Plus en la
membrana celular disminuye la generacioacuten intracelular de radicales
libres despueacutes de estar sometidas las ceacutelulas a un estreacutes oxidativo
Este comportamiento es independiente de la ceacutelula en estudio (piel o
retina) y del marcador utilizado (H2DCF-DA o DHR) lo cual nos indica la
activacioacuten de un mecanismo general El nivel de proteccioacuten observado
tambieacuten es similar frente al mismo estiacutemulo oxidativo
0 50 100 150 200 250Tiempo (min)
Fluo
resc
enci
a (U
A)
-49
CEacuteLULAS DE RETINA
H2DCF-DA
0 50 100 150 200Tiempo (min)
Fluo
resc
enci
a (U
A)
-42
CEacuteLULAS DE PIEL
0 50 100 150 200 250Tiempo (min)
Fluo
resc
enci
a (U
A)
-56DHR
0 50 100 150 200 250Tiempo (min)
Fluo
resc
enci
a (U
A)
-50
Control
Algatrium Plus
Incr
emen
to
Pro
tecc
ioacuten
EFECTO ADITIVO
Algatrium Plus
0
0306
09
18
21
05 5
1215
Para determinar que la proteccioacuten antioxidante de Algatrium Plus era un
proceso general cambiamos el inductor de estreacutes oxidativo de un produc-
to quiacutemico (el AAPH) a un sistema enzimaacutetico (sistema XXO) o inductores
endoacutegenos (ROT y ANT A) Se ha observado el mismo comportamiento en
todos los casos
El efecto antioxidante de Algatrium Plus depende de la dosis mostrando
un comportamiento dosis-dependiente a la inversa El mayor efecto se ha
observado en una concentracioacuten baja de DHA mientras que a altas con-
centraciones el efecto antioxidante disminuye independientemente de la
potencia del estreacutes oxidativo
Tambieacuten el efecto antioxidante de Algatrium Plus presenta un efecto adi-
tivo con la frecuencia de la administracioacuten La administracioacuten de una do-
sis diaria inrementa el efecto antioxidante respecto a una sola administra-
cioacuten
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE CELULAR
0 50 100 150 200 250Tiempo (min)
Fluo
resc
enci
a (U
A)
-49
CEacuteLULAS DE RETINA AAPH
P
rote
ccioacute
n
ROT ANT A XXO0
10
20
3040
50
60
INDEPENDIENTE DEL INDUCTOR
P
rote
ccioacute
n
DEPENDENCIA DE LA DOSIS
Algatrium Plus
0
10
20
3040
50
60
05 5 50Dosis diaria
Una dosis
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE CELULAR
La generacioacuten intracelular de radicales libres se confirmoacute mediante
microscopia de fluorescencia confocal Las micrografiacuteas muestran una
acumulacioacuten progresiva en el tiempo de radicales libres en las ceacutelulas
control sin DHA mientras que en las que han incorporado Algatrium
Plus en su membrana el nivel intracelular de radicales libres no ha
aumentado
T= 0 min
T= 15 min
T= 30 min
CONTROL ALGATRIUM PLUS 05 μM
CEacuteLULAS DE PIEL
A nivel celular la generacioacuten de radicales libres parece ser dependiente de
la composicioacuten en aacutecidos grasos de la ceacutelula pero la influencia especiacutefica de
cada clase de aacutecido graso no ha sido estudiada
Por otra parte a nivel industrial el meacutetodo de siacutentesis usado para obtener
el aceite enriquecido en DHA puede ser muy importante en la calidad final
del producto En este sentido hemos estudiado la importancia del contenido
de DHA y del origen sinteacutetico en el efecto antioxidante
Como se puede observar en la figura una disminucioacuten del contenido en DHA
al 50 (origen quiacutemico) o al 20 (aceite de pescado) de los aacutecidos grasos to-
tales induce una disminucioacuten del efecto antioxidante en las ceacutelulas de retina
aunque en ninguacuten caso llega a ser pro-oxidante Sin embargo en ceacutelulas de
piel esta reduccioacuten es tan acusada que soacutelo Algatrium Plus es antioxidante
siendo los otros dos pro-oxidantes
Dado el caraacutecter multifactorial de un tratamiento nutricional no es aconseja-
ble administrar un producto que presente actividades divergentes en funcioacuten
del tejido al que se incorpore
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE CELULAR
CEacuteLULASDE PIEL
05 μM
5 μM
50 μM
ACEITE DE PESCADO
P
ROTE
CCIOacute
N
0
20
40
60
-20
-40
DHA TG50QUIacuteMICO
ALGATRIUMPLUS
P
ROTE
CCIOacute
N
60
20
0
CEacuteLULASDE RETINA
40
DHA quiacutemico vs Algatrium Plus
ACEITE DE PESCADO
DHA TG50QUIacuteMICO
ALGATRIUMPLUS
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE CELULAR
Si la baja actividad del aceite de origen quiacutemico (50 en DHA) pudie-
ra estar relacionado con la presencia de estructuras polimeacutericas su eli-
minacioacuten por cromatografiacutea en columna deberiacutea permitir recuperar su
actividad antioxidante Como se puede observar en la figura una mani-
pulacioacuten excesiva del producto original para eliminar contaminantes
o para mejorar sus caracteriacutesticas organoleacutepticas se traduce en una
peacuterdida de bioactividad
P
ROTE
CCIOacute
N
0
10
20
30
40
50
60
-10DHA TG50QUIacuteMICO
ALGATRIUMPLUS
DHA TG50 QUIacuteMICOPURIFICADO
(DHA)
05 μM
5 μM
50 μM
CEacuteLULAS DE RETINA
DHA quiacutemico vs Algatrium Plus
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE CELULAR
La actividad antioxidante del Algatrium Plus tambieacuten esta relacionada
con su mayor biodisponibilidad ya que un eacutester etiacutelico o un aacutecido graso
libre con el mismo contenido en DHA presenta una actividad antioxi-
dante como maacuteximo la mitad de la de Algatrium Plus
P
ROTE
CCIOacute
N
0
10
20
30
40
50
60
05 μM
(DHA)
FA-BSA
Algatrium Plus
CEacuteLULAS DE RETINA
Efecto de la estructura quiacutemica Fa vs Ee vs Tg
70
5 μM
TG 50 CHEM
EE 70
FA Aacutecido graso libre
EE Eacutester etiacutelico
TG Trigliceacuterido
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE CELULAR
Comparado con los antioxidantes normalmente utilizados en tratamien-
tos oculares a las concentraciones oacuteptimas descritas Algatrium Plus pre-
senta a todas las dosis estudiadas un efecto superior
P
ROTE
CCIOacute
N
0
10
20
30
40
50
60CEacuteLULAS DE RETINA
Algatrium Plus vs antioxidantes
Algatrium Plus
NAC mM
Cys 1 m
M
Co Q 100 μM
Vit E 100 μM
Vit C 100 μM
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE CELULAR
Incluso si estos antioxidantes se combinan o se incrementa su concen-
tracioacuten 10 oacute 100 veces
P
ROTE
CCIOacute
N
0
10
20
30
40
50
60CEacuteLULAS DE RETINA
Algatrium Plus vs antioxidantes
Algatrium Plus
ANT1
ANT1 x10
ANT1 x100ANT2
BIOACTIVIDAD
En este punto la cuestioacuten es iquestCuaacutel es el mecanismo por el cual el Algatrium Plus
ejerce este efecto antioxidante tan potente
Los Omega-3 pueden actuar a diferentes niveles en la fisiologiacutea celular La de-
fensa antioxidante celular se basa en la actividad de un nuacutemero de enzimas an-
tioxidantes junto con otros antioxidantes quiacutemicos conjuntamente previenen la
peroxidacioacuten lipiacutedica la proteiacuteca y el dantildeo en DNA Hemos estudiado el efecto de
Algatrium Plus en diversos aspectos del sistema antioxidante celular
Generacioacuten del anioacuten superoacutexido (O-)
La actividad superoacutexido dismutasa (SOD) y de la glutatioacuten peroxidasa (GPx)
La concentracioacuten intracelular de glutatioacuten (GSH)
La peroxidacioacuten lipiacutedica
Y el dantildeo en DNA
BIOACTIVIDAD
Mecanismo de actividad antioxidante
CellularRespiration
OxidativeBurst
EnvironmentalFactors
O-SOD
GSH
GPx
LipidPeroxidation
ProteinPeroxidation
DNA Damage
HO
HO + O
HO
GSSG
GRed
Catalase
OH
1 3
30
BIOACTIVIDAD
Mecanismo de actividad antioxidante
CellularRespiration
OxidativeBurst
EnvironmentalFactors
O-SOD
GSH
GPx
LipidPeroxidation
ProteinPeroxidation
DNA Damage
HO
HO + O
HO
GSSG
GRed
Catalase
OH
1 3
=
+
BIOACTIVIDAD
Hemos encontrado que la incorporacioacuten de Algatrium Plus en las ceacutelulas disminuye la genera-
cioacuten del anioacuten superoacutexido la peroxidacioacuten lipiacutedica de una manera dosis-dependiente inversa y
el dantildeo en DNA
Los niveles inferiores del anioacuten superoacutexido bajo estreacutes oxidativo en ceacutelulas tratadas con Alga-
trium Plus puede ser debido a la actividad maacutes alta de la SOD respecto al control
Por otra parte la actividad de la GPx en las ceacutelulas tratadas no era diferente de las ceacutelulas control
con o sin estreacutes oxidativo
El cambio maacutes significativo fue el incremento (300) de la concentracioacuten intracelular de GSH
relacionado con un incremento de la siacutentesis de novo
Estos resultados nos indican que Algatrium Plus ejerce su efecto antioxidante mediante un
incremento de la actividad del sistema antioxidante celular sin una participacioacuten directa en
el mismo que lo diferencia de los antioxidantes quiacutemicos convencionales
Esto sugiere que las ceacutelulas toleran cantidades pequentildeas de DHA y que eacuteste actuacutea a modo de
estiacutemulo para evitar cualquier acumulacioacuten de radicales libres la incorporacioacuten de Algatrium
Plus en las biomembranes provoca una respuesta celular antioxidante adaptativa
3
ESTUDIOS IN VIVO
Para valorar la accioacuten de Algatrium Plus se utilizoacute como modelo de es-
treacutes oxidativo el inducido por el ejercicio fiacutesico aerobio
Se sometioacute a deportistas a un esfuerzo continuado al 75 de su consu-
mo maacuteximo de oxiacutegeno durante 90 minutos lo cual supone una produc-
cioacuten suficiente de radicales libres y estreacutes oxidativo como para conocer
la capacidad antioxidante de cualquier manipulacioacuten dieteacutetica
Para dar credibilidad a los resultados obtenidos in vitro es necesario una
constatacioacuten de los mismos in vivo En este sentido se ha desarrollado
un ensayo cliacutenico controlado cruzadov de 4 meses de duracioacuten (N = 40
deportistas) a una dosis de 2 gdiacutea de Algatrium Plus
Las variables a estudiar fueron el dantildeo en DNA y paraacutemetros antioxidan-
tes seacutericos
Se observoacute un aumento estadiacutesticamente significativo en la capacidad
antioxidante total del serum (plt005) antes y despueacutes de la realizacioacuten
de las pruebas rectangulares en los deportistas que habiacutean ingerido Al-
gatrium Plus durante un periodo de tres semanas a cuatro meses
H2O
2 (n
mol
L m
in)
150
160
170
180
190
200
BASAL
CAPACIDAD ANTIOXIDANTE TOTAL
Paraacutemetros antioxidantes in vivo
4 MESES
ESTUDIOS IN VIVO
20 DIacuteAS
Algatrium Plus
Control
3
El nivel plasmaacutetico de MDA como iacutendice de peroxidacioacuten lipiacutedica fue
aumentando durante la realizacioacuten de todas las pruebas de esfuerzo
(plt0035) Despueacutes de la ingesta de Algatrium Plus durante 3 semanas
el dantildeo oxidativo a nivel lipiacutedico en las mismas condiciones disminuye
praacutecticamente a nivel basal (plt005) observaacutendose a los 4 meses de tra-
tamiento un efecto protector en esta variable MD
A (n
mol
L)
10
20
30
40
60
BASAL
PEROXIDACIOacuteN LIPIacuteDICA
Paraacutemetros antioxidantes in vivo
4 MESES
ESTUDIOS IN VIVO
20 DIacuteAS
50
0
-10
Hay un aumento en el dantildeo oxidativo del DNA durante la realizacioacuten de
las pruebas rectangulares del esfuerzo medidas como el nivel de 8-oxo-
dG en la orina (plt0011) La ingesta de Algatrium Plus durante 3 sema-
nas y hasta 4 meses protege el DNA del dantildeo oxidativo inducido por el
esfuerzo de una manera significativa (plt0035)
8-ox
o-dG
(pm
olK
gx24
h)
100
200
300
400
600
BASAL
DANtildeO MOLECULAR EN EL DNA
Paraacutemetros antioxidantes in vivo
4 MESES
ESTUDIOS IN VIVO
20 DIacuteAS
500
0
700
800
900
3
Como efectos colaterales en el rendimiento deportivo se ha observado
que los niveles de glicemia disminuyen durante la realizacioacuten de la prue-
ba rectangular de esfuerzo (plt00009) Esta reduccioacuten en la glicemia era
menor despueacutes de 3 semanas de ingesta de Algatrium Plus se traduciacutea
en un aumento del nivel de glicemia a los 4 meses de tratamiento con
Algatrium Plus
mg
dL
-6
-4
-2
BASAL
VARIACIOacuteN EN LA CONCENTRACIOacuteN DE GLUCOSA
Variables fisioloacutegicas de rendimiento deportivo
4 MESES
ESTUDIOS IN VIVO
3 SEMANAS
4
0
-8
2
mL
min
2600
2650
2700
BASAL
CONSUMO DE OXIacuteGENO
Variables fisioloacutegicas de rendimiento deportivo
4 MESES
ESTUDIOS IN VIVO
3 SEMANAS
2900
2550
2850Tambieacuten se ha observado un aumento significativo del consumo abso-
luto (plt0019) y relativo (plt0036) de oxiacutegeno determinado en el umbral
del esfuerzo triangular con la ingesta de Algatrium Plus hasta 4 meses
Estos resultados parecen indicar que la ingesta de Algatrium PLus pue-
de incrementar el rendimiento deportivo
2750
2800
3
CONCLUSIONES
Los aacutecidos grasos omega-3 son un concepto vigente tanto desde un punto de
vista nutricional como terapeacuteutico con un alto potencial de desarrollo
La aplicacioacuten de los aacutecidos grasos omega-3 en estos campos requiere de produc-
tos manufacturados de acuerdo con los estaacutendares que se aplican a productos
farmaceacuteuticos que incluyen controles de calidad para asegurar su pureza y cali-
dad estructural que condiciona su bioactividad Como estaacutendar es exigible una
riqueza miacutenima superior al 5 en una estructura quiacutemica muy biodisponible
como un trigliceacuterido
La incorporacioacuten de Algatrium Plus en las membranas celulares no soacutelo no pro-
mueve la peroxidacioacuten lipiacutedica sino que actuacutea como un activador del sistema
antioxidante celular probablemente como consecuencia de una respuesta adap-
tativa de la ceacutelula
INFORMACIOacuteN LEGAL
ALGATRIUM es una Marca Internacional propiedad de BRUDY TECHNOLOGY
El uso de DHA de alta concentracioacuten para el tratamiento de enfermedades tu-
morales estaacute protegido por la Patente Internacional nordm200501141 Propiedad de
BRUDY TECHNOLOGY
La comercializacioacuten y el uso de Omega-3 Antioxidantes estaacute protegido por la
Patente Internacional nordm200503202 propiedad de BRUDY TECHNOLOGY
Dr Joan C Domingo Pedrol - Departamento de Bioquiacutemica y Biologiacutea Molecular - Universidad de Barcelona - Telf 934 021 214 - e-mail jcdomingoubedu
Fabricado en Espantildea por Brudy Technology - CRiera de Sant Miquel 3 - ordm ordf - 000 Barcelona - Tel 93 17 03
BIOACTIVIDAD - SEGURIDAD
En este contexto hemos estudiado la influencia de la presencia del DHA enzimaacutetico
en la membrana celular sobre la generacioacuten intracelular de radicales libres utilizando
como sistema experimental dos liacuteneas celulares humanas sanas fibroblastos de piel
(Foreskin ATC CRL 2076) y ceacutelulas epiteliales pigmentarias de la retina (ARPE-19 ATCC
CRL 2302)
La cuantificacioacuten de los radicales libres generados se ha realizado mediante metodolo-
giacuteas fluorescentes usando sondas moleculares como el HDCF-DA DHR y DHE
Como inductores exoacutegenos de estreacutes oxidativo se ha utilizado el AAPH y el sistema
xantinaxantin oxidasa y como inductores endoacutegenos la rotenona y la antimicina A
0
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE CELULAR
Como se muestra en la figura la presencia de Algatrium Plus en la
membrana celular disminuye la generacioacuten intracelular de radicales
libres despueacutes de estar sometidas las ceacutelulas a un estreacutes oxidativo
Este comportamiento es independiente de la ceacutelula en estudio (piel o
retina) y del marcador utilizado (H2DCF-DA o DHR) lo cual nos indica la
activacioacuten de un mecanismo general El nivel de proteccioacuten observado
tambieacuten es similar frente al mismo estiacutemulo oxidativo
0 50 100 150 200 250Tiempo (min)
Fluo
resc
enci
a (U
A)
-49
CEacuteLULAS DE RETINA
H2DCF-DA
0 50 100 150 200Tiempo (min)
Fluo
resc
enci
a (U
A)
-42
CEacuteLULAS DE PIEL
0 50 100 150 200 250Tiempo (min)
Fluo
resc
enci
a (U
A)
-56DHR
0 50 100 150 200 250Tiempo (min)
Fluo
resc
enci
a (U
A)
-50
Control
Algatrium Plus
Incr
emen
to
Pro
tecc
ioacuten
EFECTO ADITIVO
Algatrium Plus
0
0306
09
18
21
05 5
1215
Para determinar que la proteccioacuten antioxidante de Algatrium Plus era un
proceso general cambiamos el inductor de estreacutes oxidativo de un produc-
to quiacutemico (el AAPH) a un sistema enzimaacutetico (sistema XXO) o inductores
endoacutegenos (ROT y ANT A) Se ha observado el mismo comportamiento en
todos los casos
El efecto antioxidante de Algatrium Plus depende de la dosis mostrando
un comportamiento dosis-dependiente a la inversa El mayor efecto se ha
observado en una concentracioacuten baja de DHA mientras que a altas con-
centraciones el efecto antioxidante disminuye independientemente de la
potencia del estreacutes oxidativo
Tambieacuten el efecto antioxidante de Algatrium Plus presenta un efecto adi-
tivo con la frecuencia de la administracioacuten La administracioacuten de una do-
sis diaria inrementa el efecto antioxidante respecto a una sola administra-
cioacuten
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE CELULAR
0 50 100 150 200 250Tiempo (min)
Fluo
resc
enci
a (U
A)
-49
CEacuteLULAS DE RETINA AAPH
P
rote
ccioacute
n
ROT ANT A XXO0
10
20
3040
50
60
INDEPENDIENTE DEL INDUCTOR
P
rote
ccioacute
n
DEPENDENCIA DE LA DOSIS
Algatrium Plus
0
10
20
3040
50
60
05 5 50Dosis diaria
Una dosis
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE CELULAR
La generacioacuten intracelular de radicales libres se confirmoacute mediante
microscopia de fluorescencia confocal Las micrografiacuteas muestran una
acumulacioacuten progresiva en el tiempo de radicales libres en las ceacutelulas
control sin DHA mientras que en las que han incorporado Algatrium
Plus en su membrana el nivel intracelular de radicales libres no ha
aumentado
T= 0 min
T= 15 min
T= 30 min
CONTROL ALGATRIUM PLUS 05 μM
CEacuteLULAS DE PIEL
A nivel celular la generacioacuten de radicales libres parece ser dependiente de
la composicioacuten en aacutecidos grasos de la ceacutelula pero la influencia especiacutefica de
cada clase de aacutecido graso no ha sido estudiada
Por otra parte a nivel industrial el meacutetodo de siacutentesis usado para obtener
el aceite enriquecido en DHA puede ser muy importante en la calidad final
del producto En este sentido hemos estudiado la importancia del contenido
de DHA y del origen sinteacutetico en el efecto antioxidante
Como se puede observar en la figura una disminucioacuten del contenido en DHA
al 50 (origen quiacutemico) o al 20 (aceite de pescado) de los aacutecidos grasos to-
tales induce una disminucioacuten del efecto antioxidante en las ceacutelulas de retina
aunque en ninguacuten caso llega a ser pro-oxidante Sin embargo en ceacutelulas de
piel esta reduccioacuten es tan acusada que soacutelo Algatrium Plus es antioxidante
siendo los otros dos pro-oxidantes
Dado el caraacutecter multifactorial de un tratamiento nutricional no es aconseja-
ble administrar un producto que presente actividades divergentes en funcioacuten
del tejido al que se incorpore
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE CELULAR
CEacuteLULASDE PIEL
05 μM
5 μM
50 μM
ACEITE DE PESCADO
P
ROTE
CCIOacute
N
0
20
40
60
-20
-40
DHA TG50QUIacuteMICO
ALGATRIUMPLUS
P
ROTE
CCIOacute
N
60
20
0
CEacuteLULASDE RETINA
40
DHA quiacutemico vs Algatrium Plus
ACEITE DE PESCADO
DHA TG50QUIacuteMICO
ALGATRIUMPLUS
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE CELULAR
Si la baja actividad del aceite de origen quiacutemico (50 en DHA) pudie-
ra estar relacionado con la presencia de estructuras polimeacutericas su eli-
minacioacuten por cromatografiacutea en columna deberiacutea permitir recuperar su
actividad antioxidante Como se puede observar en la figura una mani-
pulacioacuten excesiva del producto original para eliminar contaminantes
o para mejorar sus caracteriacutesticas organoleacutepticas se traduce en una
peacuterdida de bioactividad
P
ROTE
CCIOacute
N
0
10
20
30
40
50
60
-10DHA TG50QUIacuteMICO
ALGATRIUMPLUS
DHA TG50 QUIacuteMICOPURIFICADO
(DHA)
05 μM
5 μM
50 μM
CEacuteLULAS DE RETINA
DHA quiacutemico vs Algatrium Plus
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE CELULAR
La actividad antioxidante del Algatrium Plus tambieacuten esta relacionada
con su mayor biodisponibilidad ya que un eacutester etiacutelico o un aacutecido graso
libre con el mismo contenido en DHA presenta una actividad antioxi-
dante como maacuteximo la mitad de la de Algatrium Plus
P
ROTE
CCIOacute
N
0
10
20
30
40
50
60
05 μM
(DHA)
FA-BSA
Algatrium Plus
CEacuteLULAS DE RETINA
Efecto de la estructura quiacutemica Fa vs Ee vs Tg
70
5 μM
TG 50 CHEM
EE 70
FA Aacutecido graso libre
EE Eacutester etiacutelico
TG Trigliceacuterido
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE CELULAR
Comparado con los antioxidantes normalmente utilizados en tratamien-
tos oculares a las concentraciones oacuteptimas descritas Algatrium Plus pre-
senta a todas las dosis estudiadas un efecto superior
P
ROTE
CCIOacute
N
0
10
20
30
40
50
60CEacuteLULAS DE RETINA
Algatrium Plus vs antioxidantes
Algatrium Plus
NAC mM
Cys 1 m
M
Co Q 100 μM
Vit E 100 μM
Vit C 100 μM
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE CELULAR
Incluso si estos antioxidantes se combinan o se incrementa su concen-
tracioacuten 10 oacute 100 veces
P
ROTE
CCIOacute
N
0
10
20
30
40
50
60CEacuteLULAS DE RETINA
Algatrium Plus vs antioxidantes
Algatrium Plus
ANT1
ANT1 x10
ANT1 x100ANT2
BIOACTIVIDAD
En este punto la cuestioacuten es iquestCuaacutel es el mecanismo por el cual el Algatrium Plus
ejerce este efecto antioxidante tan potente
Los Omega-3 pueden actuar a diferentes niveles en la fisiologiacutea celular La de-
fensa antioxidante celular se basa en la actividad de un nuacutemero de enzimas an-
tioxidantes junto con otros antioxidantes quiacutemicos conjuntamente previenen la
peroxidacioacuten lipiacutedica la proteiacuteca y el dantildeo en DNA Hemos estudiado el efecto de
Algatrium Plus en diversos aspectos del sistema antioxidante celular
Generacioacuten del anioacuten superoacutexido (O-)
La actividad superoacutexido dismutasa (SOD) y de la glutatioacuten peroxidasa (GPx)
La concentracioacuten intracelular de glutatioacuten (GSH)
La peroxidacioacuten lipiacutedica
Y el dantildeo en DNA
BIOACTIVIDAD
Mecanismo de actividad antioxidante
CellularRespiration
OxidativeBurst
EnvironmentalFactors
O-SOD
GSH
GPx
LipidPeroxidation
ProteinPeroxidation
DNA Damage
HO
HO + O
HO
GSSG
GRed
Catalase
OH
1 3
30
BIOACTIVIDAD
Mecanismo de actividad antioxidante
CellularRespiration
OxidativeBurst
EnvironmentalFactors
O-SOD
GSH
GPx
LipidPeroxidation
ProteinPeroxidation
DNA Damage
HO
HO + O
HO
GSSG
GRed
Catalase
OH
1 3
=
+
BIOACTIVIDAD
Hemos encontrado que la incorporacioacuten de Algatrium Plus en las ceacutelulas disminuye la genera-
cioacuten del anioacuten superoacutexido la peroxidacioacuten lipiacutedica de una manera dosis-dependiente inversa y
el dantildeo en DNA
Los niveles inferiores del anioacuten superoacutexido bajo estreacutes oxidativo en ceacutelulas tratadas con Alga-
trium Plus puede ser debido a la actividad maacutes alta de la SOD respecto al control
Por otra parte la actividad de la GPx en las ceacutelulas tratadas no era diferente de las ceacutelulas control
con o sin estreacutes oxidativo
El cambio maacutes significativo fue el incremento (300) de la concentracioacuten intracelular de GSH
relacionado con un incremento de la siacutentesis de novo
Estos resultados nos indican que Algatrium Plus ejerce su efecto antioxidante mediante un
incremento de la actividad del sistema antioxidante celular sin una participacioacuten directa en
el mismo que lo diferencia de los antioxidantes quiacutemicos convencionales
Esto sugiere que las ceacutelulas toleran cantidades pequentildeas de DHA y que eacuteste actuacutea a modo de
estiacutemulo para evitar cualquier acumulacioacuten de radicales libres la incorporacioacuten de Algatrium
Plus en las biomembranes provoca una respuesta celular antioxidante adaptativa
3
ESTUDIOS IN VIVO
Para valorar la accioacuten de Algatrium Plus se utilizoacute como modelo de es-
treacutes oxidativo el inducido por el ejercicio fiacutesico aerobio
Se sometioacute a deportistas a un esfuerzo continuado al 75 de su consu-
mo maacuteximo de oxiacutegeno durante 90 minutos lo cual supone una produc-
cioacuten suficiente de radicales libres y estreacutes oxidativo como para conocer
la capacidad antioxidante de cualquier manipulacioacuten dieteacutetica
Para dar credibilidad a los resultados obtenidos in vitro es necesario una
constatacioacuten de los mismos in vivo En este sentido se ha desarrollado
un ensayo cliacutenico controlado cruzadov de 4 meses de duracioacuten (N = 40
deportistas) a una dosis de 2 gdiacutea de Algatrium Plus
Las variables a estudiar fueron el dantildeo en DNA y paraacutemetros antioxidan-
tes seacutericos
Se observoacute un aumento estadiacutesticamente significativo en la capacidad
antioxidante total del serum (plt005) antes y despueacutes de la realizacioacuten
de las pruebas rectangulares en los deportistas que habiacutean ingerido Al-
gatrium Plus durante un periodo de tres semanas a cuatro meses
H2O
2 (n
mol
L m
in)
150
160
170
180
190
200
BASAL
CAPACIDAD ANTIOXIDANTE TOTAL
Paraacutemetros antioxidantes in vivo
4 MESES
ESTUDIOS IN VIVO
20 DIacuteAS
Algatrium Plus
Control
3
El nivel plasmaacutetico de MDA como iacutendice de peroxidacioacuten lipiacutedica fue
aumentando durante la realizacioacuten de todas las pruebas de esfuerzo
(plt0035) Despueacutes de la ingesta de Algatrium Plus durante 3 semanas
el dantildeo oxidativo a nivel lipiacutedico en las mismas condiciones disminuye
praacutecticamente a nivel basal (plt005) observaacutendose a los 4 meses de tra-
tamiento un efecto protector en esta variable MD
A (n
mol
L)
10
20
30
40
60
BASAL
PEROXIDACIOacuteN LIPIacuteDICA
Paraacutemetros antioxidantes in vivo
4 MESES
ESTUDIOS IN VIVO
20 DIacuteAS
50
0
-10
Hay un aumento en el dantildeo oxidativo del DNA durante la realizacioacuten de
las pruebas rectangulares del esfuerzo medidas como el nivel de 8-oxo-
dG en la orina (plt0011) La ingesta de Algatrium Plus durante 3 sema-
nas y hasta 4 meses protege el DNA del dantildeo oxidativo inducido por el
esfuerzo de una manera significativa (plt0035)
8-ox
o-dG
(pm
olK
gx24
h)
100
200
300
400
600
BASAL
DANtildeO MOLECULAR EN EL DNA
Paraacutemetros antioxidantes in vivo
4 MESES
ESTUDIOS IN VIVO
20 DIacuteAS
500
0
700
800
900
3
Como efectos colaterales en el rendimiento deportivo se ha observado
que los niveles de glicemia disminuyen durante la realizacioacuten de la prue-
ba rectangular de esfuerzo (plt00009) Esta reduccioacuten en la glicemia era
menor despueacutes de 3 semanas de ingesta de Algatrium Plus se traduciacutea
en un aumento del nivel de glicemia a los 4 meses de tratamiento con
Algatrium Plus
mg
dL
-6
-4
-2
BASAL
VARIACIOacuteN EN LA CONCENTRACIOacuteN DE GLUCOSA
Variables fisioloacutegicas de rendimiento deportivo
4 MESES
ESTUDIOS IN VIVO
3 SEMANAS
4
0
-8
2
mL
min
2600
2650
2700
BASAL
CONSUMO DE OXIacuteGENO
Variables fisioloacutegicas de rendimiento deportivo
4 MESES
ESTUDIOS IN VIVO
3 SEMANAS
2900
2550
2850Tambieacuten se ha observado un aumento significativo del consumo abso-
luto (plt0019) y relativo (plt0036) de oxiacutegeno determinado en el umbral
del esfuerzo triangular con la ingesta de Algatrium Plus hasta 4 meses
Estos resultados parecen indicar que la ingesta de Algatrium PLus pue-
de incrementar el rendimiento deportivo
2750
2800
3
CONCLUSIONES
Los aacutecidos grasos omega-3 son un concepto vigente tanto desde un punto de
vista nutricional como terapeacuteutico con un alto potencial de desarrollo
La aplicacioacuten de los aacutecidos grasos omega-3 en estos campos requiere de produc-
tos manufacturados de acuerdo con los estaacutendares que se aplican a productos
farmaceacuteuticos que incluyen controles de calidad para asegurar su pureza y cali-
dad estructural que condiciona su bioactividad Como estaacutendar es exigible una
riqueza miacutenima superior al 5 en una estructura quiacutemica muy biodisponible
como un trigliceacuterido
La incorporacioacuten de Algatrium Plus en las membranas celulares no soacutelo no pro-
mueve la peroxidacioacuten lipiacutedica sino que actuacutea como un activador del sistema
antioxidante celular probablemente como consecuencia de una respuesta adap-
tativa de la ceacutelula
INFORMACIOacuteN LEGAL
ALGATRIUM es una Marca Internacional propiedad de BRUDY TECHNOLOGY
El uso de DHA de alta concentracioacuten para el tratamiento de enfermedades tu-
morales estaacute protegido por la Patente Internacional nordm200501141 Propiedad de
BRUDY TECHNOLOGY
La comercializacioacuten y el uso de Omega-3 Antioxidantes estaacute protegido por la
Patente Internacional nordm200503202 propiedad de BRUDY TECHNOLOGY
Dr Joan C Domingo Pedrol - Departamento de Bioquiacutemica y Biologiacutea Molecular - Universidad de Barcelona - Telf 934 021 214 - e-mail jcdomingoubedu
Fabricado en Espantildea por Brudy Technology - CRiera de Sant Miquel 3 - ordm ordf - 000 Barcelona - Tel 93 17 03
0
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE CELULAR
Como se muestra en la figura la presencia de Algatrium Plus en la
membrana celular disminuye la generacioacuten intracelular de radicales
libres despueacutes de estar sometidas las ceacutelulas a un estreacutes oxidativo
Este comportamiento es independiente de la ceacutelula en estudio (piel o
retina) y del marcador utilizado (H2DCF-DA o DHR) lo cual nos indica la
activacioacuten de un mecanismo general El nivel de proteccioacuten observado
tambieacuten es similar frente al mismo estiacutemulo oxidativo
0 50 100 150 200 250Tiempo (min)
Fluo
resc
enci
a (U
A)
-49
CEacuteLULAS DE RETINA
H2DCF-DA
0 50 100 150 200Tiempo (min)
Fluo
resc
enci
a (U
A)
-42
CEacuteLULAS DE PIEL
0 50 100 150 200 250Tiempo (min)
Fluo
resc
enci
a (U
A)
-56DHR
0 50 100 150 200 250Tiempo (min)
Fluo
resc
enci
a (U
A)
-50
Control
Algatrium Plus
Incr
emen
to
Pro
tecc
ioacuten
EFECTO ADITIVO
Algatrium Plus
0
0306
09
18
21
05 5
1215
Para determinar que la proteccioacuten antioxidante de Algatrium Plus era un
proceso general cambiamos el inductor de estreacutes oxidativo de un produc-
to quiacutemico (el AAPH) a un sistema enzimaacutetico (sistema XXO) o inductores
endoacutegenos (ROT y ANT A) Se ha observado el mismo comportamiento en
todos los casos
El efecto antioxidante de Algatrium Plus depende de la dosis mostrando
un comportamiento dosis-dependiente a la inversa El mayor efecto se ha
observado en una concentracioacuten baja de DHA mientras que a altas con-
centraciones el efecto antioxidante disminuye independientemente de la
potencia del estreacutes oxidativo
Tambieacuten el efecto antioxidante de Algatrium Plus presenta un efecto adi-
tivo con la frecuencia de la administracioacuten La administracioacuten de una do-
sis diaria inrementa el efecto antioxidante respecto a una sola administra-
cioacuten
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE CELULAR
0 50 100 150 200 250Tiempo (min)
Fluo
resc
enci
a (U
A)
-49
CEacuteLULAS DE RETINA AAPH
P
rote
ccioacute
n
ROT ANT A XXO0
10
20
3040
50
60
INDEPENDIENTE DEL INDUCTOR
P
rote
ccioacute
n
DEPENDENCIA DE LA DOSIS
Algatrium Plus
0
10
20
3040
50
60
05 5 50Dosis diaria
Una dosis
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE CELULAR
La generacioacuten intracelular de radicales libres se confirmoacute mediante
microscopia de fluorescencia confocal Las micrografiacuteas muestran una
acumulacioacuten progresiva en el tiempo de radicales libres en las ceacutelulas
control sin DHA mientras que en las que han incorporado Algatrium
Plus en su membrana el nivel intracelular de radicales libres no ha
aumentado
T= 0 min
T= 15 min
T= 30 min
CONTROL ALGATRIUM PLUS 05 μM
CEacuteLULAS DE PIEL
A nivel celular la generacioacuten de radicales libres parece ser dependiente de
la composicioacuten en aacutecidos grasos de la ceacutelula pero la influencia especiacutefica de
cada clase de aacutecido graso no ha sido estudiada
Por otra parte a nivel industrial el meacutetodo de siacutentesis usado para obtener
el aceite enriquecido en DHA puede ser muy importante en la calidad final
del producto En este sentido hemos estudiado la importancia del contenido
de DHA y del origen sinteacutetico en el efecto antioxidante
Como se puede observar en la figura una disminucioacuten del contenido en DHA
al 50 (origen quiacutemico) o al 20 (aceite de pescado) de los aacutecidos grasos to-
tales induce una disminucioacuten del efecto antioxidante en las ceacutelulas de retina
aunque en ninguacuten caso llega a ser pro-oxidante Sin embargo en ceacutelulas de
piel esta reduccioacuten es tan acusada que soacutelo Algatrium Plus es antioxidante
siendo los otros dos pro-oxidantes
Dado el caraacutecter multifactorial de un tratamiento nutricional no es aconseja-
ble administrar un producto que presente actividades divergentes en funcioacuten
del tejido al que se incorpore
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE CELULAR
CEacuteLULASDE PIEL
05 μM
5 μM
50 μM
ACEITE DE PESCADO
P
ROTE
CCIOacute
N
0
20
40
60
-20
-40
DHA TG50QUIacuteMICO
ALGATRIUMPLUS
P
ROTE
CCIOacute
N
60
20
0
CEacuteLULASDE RETINA
40
DHA quiacutemico vs Algatrium Plus
ACEITE DE PESCADO
DHA TG50QUIacuteMICO
ALGATRIUMPLUS
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE CELULAR
Si la baja actividad del aceite de origen quiacutemico (50 en DHA) pudie-
ra estar relacionado con la presencia de estructuras polimeacutericas su eli-
minacioacuten por cromatografiacutea en columna deberiacutea permitir recuperar su
actividad antioxidante Como se puede observar en la figura una mani-
pulacioacuten excesiva del producto original para eliminar contaminantes
o para mejorar sus caracteriacutesticas organoleacutepticas se traduce en una
peacuterdida de bioactividad
P
ROTE
CCIOacute
N
0
10
20
30
40
50
60
-10DHA TG50QUIacuteMICO
ALGATRIUMPLUS
DHA TG50 QUIacuteMICOPURIFICADO
(DHA)
05 μM
5 μM
50 μM
CEacuteLULAS DE RETINA
DHA quiacutemico vs Algatrium Plus
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE CELULAR
La actividad antioxidante del Algatrium Plus tambieacuten esta relacionada
con su mayor biodisponibilidad ya que un eacutester etiacutelico o un aacutecido graso
libre con el mismo contenido en DHA presenta una actividad antioxi-
dante como maacuteximo la mitad de la de Algatrium Plus
P
ROTE
CCIOacute
N
0
10
20
30
40
50
60
05 μM
(DHA)
FA-BSA
Algatrium Plus
CEacuteLULAS DE RETINA
Efecto de la estructura quiacutemica Fa vs Ee vs Tg
70
5 μM
TG 50 CHEM
EE 70
FA Aacutecido graso libre
EE Eacutester etiacutelico
TG Trigliceacuterido
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE CELULAR
Comparado con los antioxidantes normalmente utilizados en tratamien-
tos oculares a las concentraciones oacuteptimas descritas Algatrium Plus pre-
senta a todas las dosis estudiadas un efecto superior
P
ROTE
CCIOacute
N
0
10
20
30
40
50
60CEacuteLULAS DE RETINA
Algatrium Plus vs antioxidantes
Algatrium Plus
NAC mM
Cys 1 m
M
Co Q 100 μM
Vit E 100 μM
Vit C 100 μM
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE CELULAR
Incluso si estos antioxidantes se combinan o se incrementa su concen-
tracioacuten 10 oacute 100 veces
P
ROTE
CCIOacute
N
0
10
20
30
40
50
60CEacuteLULAS DE RETINA
Algatrium Plus vs antioxidantes
Algatrium Plus
ANT1
ANT1 x10
ANT1 x100ANT2
BIOACTIVIDAD
En este punto la cuestioacuten es iquestCuaacutel es el mecanismo por el cual el Algatrium Plus
ejerce este efecto antioxidante tan potente
Los Omega-3 pueden actuar a diferentes niveles en la fisiologiacutea celular La de-
fensa antioxidante celular se basa en la actividad de un nuacutemero de enzimas an-
tioxidantes junto con otros antioxidantes quiacutemicos conjuntamente previenen la
peroxidacioacuten lipiacutedica la proteiacuteca y el dantildeo en DNA Hemos estudiado el efecto de
Algatrium Plus en diversos aspectos del sistema antioxidante celular
Generacioacuten del anioacuten superoacutexido (O-)
La actividad superoacutexido dismutasa (SOD) y de la glutatioacuten peroxidasa (GPx)
La concentracioacuten intracelular de glutatioacuten (GSH)
La peroxidacioacuten lipiacutedica
Y el dantildeo en DNA
BIOACTIVIDAD
Mecanismo de actividad antioxidante
CellularRespiration
OxidativeBurst
EnvironmentalFactors
O-SOD
GSH
GPx
LipidPeroxidation
ProteinPeroxidation
DNA Damage
HO
HO + O
HO
GSSG
GRed
Catalase
OH
1 3
30
BIOACTIVIDAD
Mecanismo de actividad antioxidante
CellularRespiration
OxidativeBurst
EnvironmentalFactors
O-SOD
GSH
GPx
LipidPeroxidation
ProteinPeroxidation
DNA Damage
HO
HO + O
HO
GSSG
GRed
Catalase
OH
1 3
=
+
BIOACTIVIDAD
Hemos encontrado que la incorporacioacuten de Algatrium Plus en las ceacutelulas disminuye la genera-
cioacuten del anioacuten superoacutexido la peroxidacioacuten lipiacutedica de una manera dosis-dependiente inversa y
el dantildeo en DNA
Los niveles inferiores del anioacuten superoacutexido bajo estreacutes oxidativo en ceacutelulas tratadas con Alga-
trium Plus puede ser debido a la actividad maacutes alta de la SOD respecto al control
Por otra parte la actividad de la GPx en las ceacutelulas tratadas no era diferente de las ceacutelulas control
con o sin estreacutes oxidativo
El cambio maacutes significativo fue el incremento (300) de la concentracioacuten intracelular de GSH
relacionado con un incremento de la siacutentesis de novo
Estos resultados nos indican que Algatrium Plus ejerce su efecto antioxidante mediante un
incremento de la actividad del sistema antioxidante celular sin una participacioacuten directa en
el mismo que lo diferencia de los antioxidantes quiacutemicos convencionales
Esto sugiere que las ceacutelulas toleran cantidades pequentildeas de DHA y que eacuteste actuacutea a modo de
estiacutemulo para evitar cualquier acumulacioacuten de radicales libres la incorporacioacuten de Algatrium
Plus en las biomembranes provoca una respuesta celular antioxidante adaptativa
3
ESTUDIOS IN VIVO
Para valorar la accioacuten de Algatrium Plus se utilizoacute como modelo de es-
treacutes oxidativo el inducido por el ejercicio fiacutesico aerobio
Se sometioacute a deportistas a un esfuerzo continuado al 75 de su consu-
mo maacuteximo de oxiacutegeno durante 90 minutos lo cual supone una produc-
cioacuten suficiente de radicales libres y estreacutes oxidativo como para conocer
la capacidad antioxidante de cualquier manipulacioacuten dieteacutetica
Para dar credibilidad a los resultados obtenidos in vitro es necesario una
constatacioacuten de los mismos in vivo En este sentido se ha desarrollado
un ensayo cliacutenico controlado cruzadov de 4 meses de duracioacuten (N = 40
deportistas) a una dosis de 2 gdiacutea de Algatrium Plus
Las variables a estudiar fueron el dantildeo en DNA y paraacutemetros antioxidan-
tes seacutericos
Se observoacute un aumento estadiacutesticamente significativo en la capacidad
antioxidante total del serum (plt005) antes y despueacutes de la realizacioacuten
de las pruebas rectangulares en los deportistas que habiacutean ingerido Al-
gatrium Plus durante un periodo de tres semanas a cuatro meses
H2O
2 (n
mol
L m
in)
150
160
170
180
190
200
BASAL
CAPACIDAD ANTIOXIDANTE TOTAL
Paraacutemetros antioxidantes in vivo
4 MESES
ESTUDIOS IN VIVO
20 DIacuteAS
Algatrium Plus
Control
3
El nivel plasmaacutetico de MDA como iacutendice de peroxidacioacuten lipiacutedica fue
aumentando durante la realizacioacuten de todas las pruebas de esfuerzo
(plt0035) Despueacutes de la ingesta de Algatrium Plus durante 3 semanas
el dantildeo oxidativo a nivel lipiacutedico en las mismas condiciones disminuye
praacutecticamente a nivel basal (plt005) observaacutendose a los 4 meses de tra-
tamiento un efecto protector en esta variable MD
A (n
mol
L)
10
20
30
40
60
BASAL
PEROXIDACIOacuteN LIPIacuteDICA
Paraacutemetros antioxidantes in vivo
4 MESES
ESTUDIOS IN VIVO
20 DIacuteAS
50
0
-10
Hay un aumento en el dantildeo oxidativo del DNA durante la realizacioacuten de
las pruebas rectangulares del esfuerzo medidas como el nivel de 8-oxo-
dG en la orina (plt0011) La ingesta de Algatrium Plus durante 3 sema-
nas y hasta 4 meses protege el DNA del dantildeo oxidativo inducido por el
esfuerzo de una manera significativa (plt0035)
8-ox
o-dG
(pm
olK
gx24
h)
100
200
300
400
600
BASAL
DANtildeO MOLECULAR EN EL DNA
Paraacutemetros antioxidantes in vivo
4 MESES
ESTUDIOS IN VIVO
20 DIacuteAS
500
0
700
800
900
3
Como efectos colaterales en el rendimiento deportivo se ha observado
que los niveles de glicemia disminuyen durante la realizacioacuten de la prue-
ba rectangular de esfuerzo (plt00009) Esta reduccioacuten en la glicemia era
menor despueacutes de 3 semanas de ingesta de Algatrium Plus se traduciacutea
en un aumento del nivel de glicemia a los 4 meses de tratamiento con
Algatrium Plus
mg
dL
-6
-4
-2
BASAL
VARIACIOacuteN EN LA CONCENTRACIOacuteN DE GLUCOSA
Variables fisioloacutegicas de rendimiento deportivo
4 MESES
ESTUDIOS IN VIVO
3 SEMANAS
4
0
-8
2
mL
min
2600
2650
2700
BASAL
CONSUMO DE OXIacuteGENO
Variables fisioloacutegicas de rendimiento deportivo
4 MESES
ESTUDIOS IN VIVO
3 SEMANAS
2900
2550
2850Tambieacuten se ha observado un aumento significativo del consumo abso-
luto (plt0019) y relativo (plt0036) de oxiacutegeno determinado en el umbral
del esfuerzo triangular con la ingesta de Algatrium Plus hasta 4 meses
Estos resultados parecen indicar que la ingesta de Algatrium PLus pue-
de incrementar el rendimiento deportivo
2750
2800
3
CONCLUSIONES
Los aacutecidos grasos omega-3 son un concepto vigente tanto desde un punto de
vista nutricional como terapeacuteutico con un alto potencial de desarrollo
La aplicacioacuten de los aacutecidos grasos omega-3 en estos campos requiere de produc-
tos manufacturados de acuerdo con los estaacutendares que se aplican a productos
farmaceacuteuticos que incluyen controles de calidad para asegurar su pureza y cali-
dad estructural que condiciona su bioactividad Como estaacutendar es exigible una
riqueza miacutenima superior al 5 en una estructura quiacutemica muy biodisponible
como un trigliceacuterido
La incorporacioacuten de Algatrium Plus en las membranas celulares no soacutelo no pro-
mueve la peroxidacioacuten lipiacutedica sino que actuacutea como un activador del sistema
antioxidante celular probablemente como consecuencia de una respuesta adap-
tativa de la ceacutelula
INFORMACIOacuteN LEGAL
ALGATRIUM es una Marca Internacional propiedad de BRUDY TECHNOLOGY
El uso de DHA de alta concentracioacuten para el tratamiento de enfermedades tu-
morales estaacute protegido por la Patente Internacional nordm200501141 Propiedad de
BRUDY TECHNOLOGY
La comercializacioacuten y el uso de Omega-3 Antioxidantes estaacute protegido por la
Patente Internacional nordm200503202 propiedad de BRUDY TECHNOLOGY
Dr Joan C Domingo Pedrol - Departamento de Bioquiacutemica y Biologiacutea Molecular - Universidad de Barcelona - Telf 934 021 214 - e-mail jcdomingoubedu
Fabricado en Espantildea por Brudy Technology - CRiera de Sant Miquel 3 - ordm ordf - 000 Barcelona - Tel 93 17 03
Incr
emen
to
Pro
tecc
ioacuten
EFECTO ADITIVO
Algatrium Plus
0
0306
09
18
21
05 5
1215
Para determinar que la proteccioacuten antioxidante de Algatrium Plus era un
proceso general cambiamos el inductor de estreacutes oxidativo de un produc-
to quiacutemico (el AAPH) a un sistema enzimaacutetico (sistema XXO) o inductores
endoacutegenos (ROT y ANT A) Se ha observado el mismo comportamiento en
todos los casos
El efecto antioxidante de Algatrium Plus depende de la dosis mostrando
un comportamiento dosis-dependiente a la inversa El mayor efecto se ha
observado en una concentracioacuten baja de DHA mientras que a altas con-
centraciones el efecto antioxidante disminuye independientemente de la
potencia del estreacutes oxidativo
Tambieacuten el efecto antioxidante de Algatrium Plus presenta un efecto adi-
tivo con la frecuencia de la administracioacuten La administracioacuten de una do-
sis diaria inrementa el efecto antioxidante respecto a una sola administra-
cioacuten
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE CELULAR
0 50 100 150 200 250Tiempo (min)
Fluo
resc
enci
a (U
A)
-49
CEacuteLULAS DE RETINA AAPH
P
rote
ccioacute
n
ROT ANT A XXO0
10
20
3040
50
60
INDEPENDIENTE DEL INDUCTOR
P
rote
ccioacute
n
DEPENDENCIA DE LA DOSIS
Algatrium Plus
0
10
20
3040
50
60
05 5 50Dosis diaria
Una dosis
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE CELULAR
La generacioacuten intracelular de radicales libres se confirmoacute mediante
microscopia de fluorescencia confocal Las micrografiacuteas muestran una
acumulacioacuten progresiva en el tiempo de radicales libres en las ceacutelulas
control sin DHA mientras que en las que han incorporado Algatrium
Plus en su membrana el nivel intracelular de radicales libres no ha
aumentado
T= 0 min
T= 15 min
T= 30 min
CONTROL ALGATRIUM PLUS 05 μM
CEacuteLULAS DE PIEL
A nivel celular la generacioacuten de radicales libres parece ser dependiente de
la composicioacuten en aacutecidos grasos de la ceacutelula pero la influencia especiacutefica de
cada clase de aacutecido graso no ha sido estudiada
Por otra parte a nivel industrial el meacutetodo de siacutentesis usado para obtener
el aceite enriquecido en DHA puede ser muy importante en la calidad final
del producto En este sentido hemos estudiado la importancia del contenido
de DHA y del origen sinteacutetico en el efecto antioxidante
Como se puede observar en la figura una disminucioacuten del contenido en DHA
al 50 (origen quiacutemico) o al 20 (aceite de pescado) de los aacutecidos grasos to-
tales induce una disminucioacuten del efecto antioxidante en las ceacutelulas de retina
aunque en ninguacuten caso llega a ser pro-oxidante Sin embargo en ceacutelulas de
piel esta reduccioacuten es tan acusada que soacutelo Algatrium Plus es antioxidante
siendo los otros dos pro-oxidantes
Dado el caraacutecter multifactorial de un tratamiento nutricional no es aconseja-
ble administrar un producto que presente actividades divergentes en funcioacuten
del tejido al que se incorpore
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE CELULAR
CEacuteLULASDE PIEL
05 μM
5 μM
50 μM
ACEITE DE PESCADO
P
ROTE
CCIOacute
N
0
20
40
60
-20
-40
DHA TG50QUIacuteMICO
ALGATRIUMPLUS
P
ROTE
CCIOacute
N
60
20
0
CEacuteLULASDE RETINA
40
DHA quiacutemico vs Algatrium Plus
ACEITE DE PESCADO
DHA TG50QUIacuteMICO
ALGATRIUMPLUS
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE CELULAR
Si la baja actividad del aceite de origen quiacutemico (50 en DHA) pudie-
ra estar relacionado con la presencia de estructuras polimeacutericas su eli-
minacioacuten por cromatografiacutea en columna deberiacutea permitir recuperar su
actividad antioxidante Como se puede observar en la figura una mani-
pulacioacuten excesiva del producto original para eliminar contaminantes
o para mejorar sus caracteriacutesticas organoleacutepticas se traduce en una
peacuterdida de bioactividad
P
ROTE
CCIOacute
N
0
10
20
30
40
50
60
-10DHA TG50QUIacuteMICO
ALGATRIUMPLUS
DHA TG50 QUIacuteMICOPURIFICADO
(DHA)
05 μM
5 μM
50 μM
CEacuteLULAS DE RETINA
DHA quiacutemico vs Algatrium Plus
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE CELULAR
La actividad antioxidante del Algatrium Plus tambieacuten esta relacionada
con su mayor biodisponibilidad ya que un eacutester etiacutelico o un aacutecido graso
libre con el mismo contenido en DHA presenta una actividad antioxi-
dante como maacuteximo la mitad de la de Algatrium Plus
P
ROTE
CCIOacute
N
0
10
20
30
40
50
60
05 μM
(DHA)
FA-BSA
Algatrium Plus
CEacuteLULAS DE RETINA
Efecto de la estructura quiacutemica Fa vs Ee vs Tg
70
5 μM
TG 50 CHEM
EE 70
FA Aacutecido graso libre
EE Eacutester etiacutelico
TG Trigliceacuterido
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE CELULAR
Comparado con los antioxidantes normalmente utilizados en tratamien-
tos oculares a las concentraciones oacuteptimas descritas Algatrium Plus pre-
senta a todas las dosis estudiadas un efecto superior
P
ROTE
CCIOacute
N
0
10
20
30
40
50
60CEacuteLULAS DE RETINA
Algatrium Plus vs antioxidantes
Algatrium Plus
NAC mM
Cys 1 m
M
Co Q 100 μM
Vit E 100 μM
Vit C 100 μM
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE CELULAR
Incluso si estos antioxidantes se combinan o se incrementa su concen-
tracioacuten 10 oacute 100 veces
P
ROTE
CCIOacute
N
0
10
20
30
40
50
60CEacuteLULAS DE RETINA
Algatrium Plus vs antioxidantes
Algatrium Plus
ANT1
ANT1 x10
ANT1 x100ANT2
BIOACTIVIDAD
En este punto la cuestioacuten es iquestCuaacutel es el mecanismo por el cual el Algatrium Plus
ejerce este efecto antioxidante tan potente
Los Omega-3 pueden actuar a diferentes niveles en la fisiologiacutea celular La de-
fensa antioxidante celular se basa en la actividad de un nuacutemero de enzimas an-
tioxidantes junto con otros antioxidantes quiacutemicos conjuntamente previenen la
peroxidacioacuten lipiacutedica la proteiacuteca y el dantildeo en DNA Hemos estudiado el efecto de
Algatrium Plus en diversos aspectos del sistema antioxidante celular
Generacioacuten del anioacuten superoacutexido (O-)
La actividad superoacutexido dismutasa (SOD) y de la glutatioacuten peroxidasa (GPx)
La concentracioacuten intracelular de glutatioacuten (GSH)
La peroxidacioacuten lipiacutedica
Y el dantildeo en DNA
BIOACTIVIDAD
Mecanismo de actividad antioxidante
CellularRespiration
OxidativeBurst
EnvironmentalFactors
O-SOD
GSH
GPx
LipidPeroxidation
ProteinPeroxidation
DNA Damage
HO
HO + O
HO
GSSG
GRed
Catalase
OH
1 3
30
BIOACTIVIDAD
Mecanismo de actividad antioxidante
CellularRespiration
OxidativeBurst
EnvironmentalFactors
O-SOD
GSH
GPx
LipidPeroxidation
ProteinPeroxidation
DNA Damage
HO
HO + O
HO
GSSG
GRed
Catalase
OH
1 3
=
+
BIOACTIVIDAD
Hemos encontrado que la incorporacioacuten de Algatrium Plus en las ceacutelulas disminuye la genera-
cioacuten del anioacuten superoacutexido la peroxidacioacuten lipiacutedica de una manera dosis-dependiente inversa y
el dantildeo en DNA
Los niveles inferiores del anioacuten superoacutexido bajo estreacutes oxidativo en ceacutelulas tratadas con Alga-
trium Plus puede ser debido a la actividad maacutes alta de la SOD respecto al control
Por otra parte la actividad de la GPx en las ceacutelulas tratadas no era diferente de las ceacutelulas control
con o sin estreacutes oxidativo
El cambio maacutes significativo fue el incremento (300) de la concentracioacuten intracelular de GSH
relacionado con un incremento de la siacutentesis de novo
Estos resultados nos indican que Algatrium Plus ejerce su efecto antioxidante mediante un
incremento de la actividad del sistema antioxidante celular sin una participacioacuten directa en
el mismo que lo diferencia de los antioxidantes quiacutemicos convencionales
Esto sugiere que las ceacutelulas toleran cantidades pequentildeas de DHA y que eacuteste actuacutea a modo de
estiacutemulo para evitar cualquier acumulacioacuten de radicales libres la incorporacioacuten de Algatrium
Plus en las biomembranes provoca una respuesta celular antioxidante adaptativa
3
ESTUDIOS IN VIVO
Para valorar la accioacuten de Algatrium Plus se utilizoacute como modelo de es-
treacutes oxidativo el inducido por el ejercicio fiacutesico aerobio
Se sometioacute a deportistas a un esfuerzo continuado al 75 de su consu-
mo maacuteximo de oxiacutegeno durante 90 minutos lo cual supone una produc-
cioacuten suficiente de radicales libres y estreacutes oxidativo como para conocer
la capacidad antioxidante de cualquier manipulacioacuten dieteacutetica
Para dar credibilidad a los resultados obtenidos in vitro es necesario una
constatacioacuten de los mismos in vivo En este sentido se ha desarrollado
un ensayo cliacutenico controlado cruzadov de 4 meses de duracioacuten (N = 40
deportistas) a una dosis de 2 gdiacutea de Algatrium Plus
Las variables a estudiar fueron el dantildeo en DNA y paraacutemetros antioxidan-
tes seacutericos
Se observoacute un aumento estadiacutesticamente significativo en la capacidad
antioxidante total del serum (plt005) antes y despueacutes de la realizacioacuten
de las pruebas rectangulares en los deportistas que habiacutean ingerido Al-
gatrium Plus durante un periodo de tres semanas a cuatro meses
H2O
2 (n
mol
L m
in)
150
160
170
180
190
200
BASAL
CAPACIDAD ANTIOXIDANTE TOTAL
Paraacutemetros antioxidantes in vivo
4 MESES
ESTUDIOS IN VIVO
20 DIacuteAS
Algatrium Plus
Control
3
El nivel plasmaacutetico de MDA como iacutendice de peroxidacioacuten lipiacutedica fue
aumentando durante la realizacioacuten de todas las pruebas de esfuerzo
(plt0035) Despueacutes de la ingesta de Algatrium Plus durante 3 semanas
el dantildeo oxidativo a nivel lipiacutedico en las mismas condiciones disminuye
praacutecticamente a nivel basal (plt005) observaacutendose a los 4 meses de tra-
tamiento un efecto protector en esta variable MD
A (n
mol
L)
10
20
30
40
60
BASAL
PEROXIDACIOacuteN LIPIacuteDICA
Paraacutemetros antioxidantes in vivo
4 MESES
ESTUDIOS IN VIVO
20 DIacuteAS
50
0
-10
Hay un aumento en el dantildeo oxidativo del DNA durante la realizacioacuten de
las pruebas rectangulares del esfuerzo medidas como el nivel de 8-oxo-
dG en la orina (plt0011) La ingesta de Algatrium Plus durante 3 sema-
nas y hasta 4 meses protege el DNA del dantildeo oxidativo inducido por el
esfuerzo de una manera significativa (plt0035)
8-ox
o-dG
(pm
olK
gx24
h)
100
200
300
400
600
BASAL
DANtildeO MOLECULAR EN EL DNA
Paraacutemetros antioxidantes in vivo
4 MESES
ESTUDIOS IN VIVO
20 DIacuteAS
500
0
700
800
900
3
Como efectos colaterales en el rendimiento deportivo se ha observado
que los niveles de glicemia disminuyen durante la realizacioacuten de la prue-
ba rectangular de esfuerzo (plt00009) Esta reduccioacuten en la glicemia era
menor despueacutes de 3 semanas de ingesta de Algatrium Plus se traduciacutea
en un aumento del nivel de glicemia a los 4 meses de tratamiento con
Algatrium Plus
mg
dL
-6
-4
-2
BASAL
VARIACIOacuteN EN LA CONCENTRACIOacuteN DE GLUCOSA
Variables fisioloacutegicas de rendimiento deportivo
4 MESES
ESTUDIOS IN VIVO
3 SEMANAS
4
0
-8
2
mL
min
2600
2650
2700
BASAL
CONSUMO DE OXIacuteGENO
Variables fisioloacutegicas de rendimiento deportivo
4 MESES
ESTUDIOS IN VIVO
3 SEMANAS
2900
2550
2850Tambieacuten se ha observado un aumento significativo del consumo abso-
luto (plt0019) y relativo (plt0036) de oxiacutegeno determinado en el umbral
del esfuerzo triangular con la ingesta de Algatrium Plus hasta 4 meses
Estos resultados parecen indicar que la ingesta de Algatrium PLus pue-
de incrementar el rendimiento deportivo
2750
2800
3
CONCLUSIONES
Los aacutecidos grasos omega-3 son un concepto vigente tanto desde un punto de
vista nutricional como terapeacuteutico con un alto potencial de desarrollo
La aplicacioacuten de los aacutecidos grasos omega-3 en estos campos requiere de produc-
tos manufacturados de acuerdo con los estaacutendares que se aplican a productos
farmaceacuteuticos que incluyen controles de calidad para asegurar su pureza y cali-
dad estructural que condiciona su bioactividad Como estaacutendar es exigible una
riqueza miacutenima superior al 5 en una estructura quiacutemica muy biodisponible
como un trigliceacuterido
La incorporacioacuten de Algatrium Plus en las membranas celulares no soacutelo no pro-
mueve la peroxidacioacuten lipiacutedica sino que actuacutea como un activador del sistema
antioxidante celular probablemente como consecuencia de una respuesta adap-
tativa de la ceacutelula
INFORMACIOacuteN LEGAL
ALGATRIUM es una Marca Internacional propiedad de BRUDY TECHNOLOGY
El uso de DHA de alta concentracioacuten para el tratamiento de enfermedades tu-
morales estaacute protegido por la Patente Internacional nordm200501141 Propiedad de
BRUDY TECHNOLOGY
La comercializacioacuten y el uso de Omega-3 Antioxidantes estaacute protegido por la
Patente Internacional nordm200503202 propiedad de BRUDY TECHNOLOGY
Dr Joan C Domingo Pedrol - Departamento de Bioquiacutemica y Biologiacutea Molecular - Universidad de Barcelona - Telf 934 021 214 - e-mail jcdomingoubedu
Fabricado en Espantildea por Brudy Technology - CRiera de Sant Miquel 3 - ordm ordf - 000 Barcelona - Tel 93 17 03
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE CELULAR
La generacioacuten intracelular de radicales libres se confirmoacute mediante
microscopia de fluorescencia confocal Las micrografiacuteas muestran una
acumulacioacuten progresiva en el tiempo de radicales libres en las ceacutelulas
control sin DHA mientras que en las que han incorporado Algatrium
Plus en su membrana el nivel intracelular de radicales libres no ha
aumentado
T= 0 min
T= 15 min
T= 30 min
CONTROL ALGATRIUM PLUS 05 μM
CEacuteLULAS DE PIEL
A nivel celular la generacioacuten de radicales libres parece ser dependiente de
la composicioacuten en aacutecidos grasos de la ceacutelula pero la influencia especiacutefica de
cada clase de aacutecido graso no ha sido estudiada
Por otra parte a nivel industrial el meacutetodo de siacutentesis usado para obtener
el aceite enriquecido en DHA puede ser muy importante en la calidad final
del producto En este sentido hemos estudiado la importancia del contenido
de DHA y del origen sinteacutetico en el efecto antioxidante
Como se puede observar en la figura una disminucioacuten del contenido en DHA
al 50 (origen quiacutemico) o al 20 (aceite de pescado) de los aacutecidos grasos to-
tales induce una disminucioacuten del efecto antioxidante en las ceacutelulas de retina
aunque en ninguacuten caso llega a ser pro-oxidante Sin embargo en ceacutelulas de
piel esta reduccioacuten es tan acusada que soacutelo Algatrium Plus es antioxidante
siendo los otros dos pro-oxidantes
Dado el caraacutecter multifactorial de un tratamiento nutricional no es aconseja-
ble administrar un producto que presente actividades divergentes en funcioacuten
del tejido al que se incorpore
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE CELULAR
CEacuteLULASDE PIEL
05 μM
5 μM
50 μM
ACEITE DE PESCADO
P
ROTE
CCIOacute
N
0
20
40
60
-20
-40
DHA TG50QUIacuteMICO
ALGATRIUMPLUS
P
ROTE
CCIOacute
N
60
20
0
CEacuteLULASDE RETINA
40
DHA quiacutemico vs Algatrium Plus
ACEITE DE PESCADO
DHA TG50QUIacuteMICO
ALGATRIUMPLUS
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE CELULAR
Si la baja actividad del aceite de origen quiacutemico (50 en DHA) pudie-
ra estar relacionado con la presencia de estructuras polimeacutericas su eli-
minacioacuten por cromatografiacutea en columna deberiacutea permitir recuperar su
actividad antioxidante Como se puede observar en la figura una mani-
pulacioacuten excesiva del producto original para eliminar contaminantes
o para mejorar sus caracteriacutesticas organoleacutepticas se traduce en una
peacuterdida de bioactividad
P
ROTE
CCIOacute
N
0
10
20
30
40
50
60
-10DHA TG50QUIacuteMICO
ALGATRIUMPLUS
DHA TG50 QUIacuteMICOPURIFICADO
(DHA)
05 μM
5 μM
50 μM
CEacuteLULAS DE RETINA
DHA quiacutemico vs Algatrium Plus
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE CELULAR
La actividad antioxidante del Algatrium Plus tambieacuten esta relacionada
con su mayor biodisponibilidad ya que un eacutester etiacutelico o un aacutecido graso
libre con el mismo contenido en DHA presenta una actividad antioxi-
dante como maacuteximo la mitad de la de Algatrium Plus
P
ROTE
CCIOacute
N
0
10
20
30
40
50
60
05 μM
(DHA)
FA-BSA
Algatrium Plus
CEacuteLULAS DE RETINA
Efecto de la estructura quiacutemica Fa vs Ee vs Tg
70
5 μM
TG 50 CHEM
EE 70
FA Aacutecido graso libre
EE Eacutester etiacutelico
TG Trigliceacuterido
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE CELULAR
Comparado con los antioxidantes normalmente utilizados en tratamien-
tos oculares a las concentraciones oacuteptimas descritas Algatrium Plus pre-
senta a todas las dosis estudiadas un efecto superior
P
ROTE
CCIOacute
N
0
10
20
30
40
50
60CEacuteLULAS DE RETINA
Algatrium Plus vs antioxidantes
Algatrium Plus
NAC mM
Cys 1 m
M
Co Q 100 μM
Vit E 100 μM
Vit C 100 μM
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE CELULAR
Incluso si estos antioxidantes se combinan o se incrementa su concen-
tracioacuten 10 oacute 100 veces
P
ROTE
CCIOacute
N
0
10
20
30
40
50
60CEacuteLULAS DE RETINA
Algatrium Plus vs antioxidantes
Algatrium Plus
ANT1
ANT1 x10
ANT1 x100ANT2
BIOACTIVIDAD
En este punto la cuestioacuten es iquestCuaacutel es el mecanismo por el cual el Algatrium Plus
ejerce este efecto antioxidante tan potente
Los Omega-3 pueden actuar a diferentes niveles en la fisiologiacutea celular La de-
fensa antioxidante celular se basa en la actividad de un nuacutemero de enzimas an-
tioxidantes junto con otros antioxidantes quiacutemicos conjuntamente previenen la
peroxidacioacuten lipiacutedica la proteiacuteca y el dantildeo en DNA Hemos estudiado el efecto de
Algatrium Plus en diversos aspectos del sistema antioxidante celular
Generacioacuten del anioacuten superoacutexido (O-)
La actividad superoacutexido dismutasa (SOD) y de la glutatioacuten peroxidasa (GPx)
La concentracioacuten intracelular de glutatioacuten (GSH)
La peroxidacioacuten lipiacutedica
Y el dantildeo en DNA
BIOACTIVIDAD
Mecanismo de actividad antioxidante
CellularRespiration
OxidativeBurst
EnvironmentalFactors
O-SOD
GSH
GPx
LipidPeroxidation
ProteinPeroxidation
DNA Damage
HO
HO + O
HO
GSSG
GRed
Catalase
OH
1 3
30
BIOACTIVIDAD
Mecanismo de actividad antioxidante
CellularRespiration
OxidativeBurst
EnvironmentalFactors
O-SOD
GSH
GPx
LipidPeroxidation
ProteinPeroxidation
DNA Damage
HO
HO + O
HO
GSSG
GRed
Catalase
OH
1 3
=
+
BIOACTIVIDAD
Hemos encontrado que la incorporacioacuten de Algatrium Plus en las ceacutelulas disminuye la genera-
cioacuten del anioacuten superoacutexido la peroxidacioacuten lipiacutedica de una manera dosis-dependiente inversa y
el dantildeo en DNA
Los niveles inferiores del anioacuten superoacutexido bajo estreacutes oxidativo en ceacutelulas tratadas con Alga-
trium Plus puede ser debido a la actividad maacutes alta de la SOD respecto al control
Por otra parte la actividad de la GPx en las ceacutelulas tratadas no era diferente de las ceacutelulas control
con o sin estreacutes oxidativo
El cambio maacutes significativo fue el incremento (300) de la concentracioacuten intracelular de GSH
relacionado con un incremento de la siacutentesis de novo
Estos resultados nos indican que Algatrium Plus ejerce su efecto antioxidante mediante un
incremento de la actividad del sistema antioxidante celular sin una participacioacuten directa en
el mismo que lo diferencia de los antioxidantes quiacutemicos convencionales
Esto sugiere que las ceacutelulas toleran cantidades pequentildeas de DHA y que eacuteste actuacutea a modo de
estiacutemulo para evitar cualquier acumulacioacuten de radicales libres la incorporacioacuten de Algatrium
Plus en las biomembranes provoca una respuesta celular antioxidante adaptativa
3
ESTUDIOS IN VIVO
Para valorar la accioacuten de Algatrium Plus se utilizoacute como modelo de es-
treacutes oxidativo el inducido por el ejercicio fiacutesico aerobio
Se sometioacute a deportistas a un esfuerzo continuado al 75 de su consu-
mo maacuteximo de oxiacutegeno durante 90 minutos lo cual supone una produc-
cioacuten suficiente de radicales libres y estreacutes oxidativo como para conocer
la capacidad antioxidante de cualquier manipulacioacuten dieteacutetica
Para dar credibilidad a los resultados obtenidos in vitro es necesario una
constatacioacuten de los mismos in vivo En este sentido se ha desarrollado
un ensayo cliacutenico controlado cruzadov de 4 meses de duracioacuten (N = 40
deportistas) a una dosis de 2 gdiacutea de Algatrium Plus
Las variables a estudiar fueron el dantildeo en DNA y paraacutemetros antioxidan-
tes seacutericos
Se observoacute un aumento estadiacutesticamente significativo en la capacidad
antioxidante total del serum (plt005) antes y despueacutes de la realizacioacuten
de las pruebas rectangulares en los deportistas que habiacutean ingerido Al-
gatrium Plus durante un periodo de tres semanas a cuatro meses
H2O
2 (n
mol
L m
in)
150
160
170
180
190
200
BASAL
CAPACIDAD ANTIOXIDANTE TOTAL
Paraacutemetros antioxidantes in vivo
4 MESES
ESTUDIOS IN VIVO
20 DIacuteAS
Algatrium Plus
Control
3
El nivel plasmaacutetico de MDA como iacutendice de peroxidacioacuten lipiacutedica fue
aumentando durante la realizacioacuten de todas las pruebas de esfuerzo
(plt0035) Despueacutes de la ingesta de Algatrium Plus durante 3 semanas
el dantildeo oxidativo a nivel lipiacutedico en las mismas condiciones disminuye
praacutecticamente a nivel basal (plt005) observaacutendose a los 4 meses de tra-
tamiento un efecto protector en esta variable MD
A (n
mol
L)
10
20
30
40
60
BASAL
PEROXIDACIOacuteN LIPIacuteDICA
Paraacutemetros antioxidantes in vivo
4 MESES
ESTUDIOS IN VIVO
20 DIacuteAS
50
0
-10
Hay un aumento en el dantildeo oxidativo del DNA durante la realizacioacuten de
las pruebas rectangulares del esfuerzo medidas como el nivel de 8-oxo-
dG en la orina (plt0011) La ingesta de Algatrium Plus durante 3 sema-
nas y hasta 4 meses protege el DNA del dantildeo oxidativo inducido por el
esfuerzo de una manera significativa (plt0035)
8-ox
o-dG
(pm
olK
gx24
h)
100
200
300
400
600
BASAL
DANtildeO MOLECULAR EN EL DNA
Paraacutemetros antioxidantes in vivo
4 MESES
ESTUDIOS IN VIVO
20 DIacuteAS
500
0
700
800
900
3
Como efectos colaterales en el rendimiento deportivo se ha observado
que los niveles de glicemia disminuyen durante la realizacioacuten de la prue-
ba rectangular de esfuerzo (plt00009) Esta reduccioacuten en la glicemia era
menor despueacutes de 3 semanas de ingesta de Algatrium Plus se traduciacutea
en un aumento del nivel de glicemia a los 4 meses de tratamiento con
Algatrium Plus
mg
dL
-6
-4
-2
BASAL
VARIACIOacuteN EN LA CONCENTRACIOacuteN DE GLUCOSA
Variables fisioloacutegicas de rendimiento deportivo
4 MESES
ESTUDIOS IN VIVO
3 SEMANAS
4
0
-8
2
mL
min
2600
2650
2700
BASAL
CONSUMO DE OXIacuteGENO
Variables fisioloacutegicas de rendimiento deportivo
4 MESES
ESTUDIOS IN VIVO
3 SEMANAS
2900
2550
2850Tambieacuten se ha observado un aumento significativo del consumo abso-
luto (plt0019) y relativo (plt0036) de oxiacutegeno determinado en el umbral
del esfuerzo triangular con la ingesta de Algatrium Plus hasta 4 meses
Estos resultados parecen indicar que la ingesta de Algatrium PLus pue-
de incrementar el rendimiento deportivo
2750
2800
3
CONCLUSIONES
Los aacutecidos grasos omega-3 son un concepto vigente tanto desde un punto de
vista nutricional como terapeacuteutico con un alto potencial de desarrollo
La aplicacioacuten de los aacutecidos grasos omega-3 en estos campos requiere de produc-
tos manufacturados de acuerdo con los estaacutendares que se aplican a productos
farmaceacuteuticos que incluyen controles de calidad para asegurar su pureza y cali-
dad estructural que condiciona su bioactividad Como estaacutendar es exigible una
riqueza miacutenima superior al 5 en una estructura quiacutemica muy biodisponible
como un trigliceacuterido
La incorporacioacuten de Algatrium Plus en las membranas celulares no soacutelo no pro-
mueve la peroxidacioacuten lipiacutedica sino que actuacutea como un activador del sistema
antioxidante celular probablemente como consecuencia de una respuesta adap-
tativa de la ceacutelula
INFORMACIOacuteN LEGAL
ALGATRIUM es una Marca Internacional propiedad de BRUDY TECHNOLOGY
El uso de DHA de alta concentracioacuten para el tratamiento de enfermedades tu-
morales estaacute protegido por la Patente Internacional nordm200501141 Propiedad de
BRUDY TECHNOLOGY
La comercializacioacuten y el uso de Omega-3 Antioxidantes estaacute protegido por la
Patente Internacional nordm200503202 propiedad de BRUDY TECHNOLOGY
Dr Joan C Domingo Pedrol - Departamento de Bioquiacutemica y Biologiacutea Molecular - Universidad de Barcelona - Telf 934 021 214 - e-mail jcdomingoubedu
Fabricado en Espantildea por Brudy Technology - CRiera de Sant Miquel 3 - ordm ordf - 000 Barcelona - Tel 93 17 03
A nivel celular la generacioacuten de radicales libres parece ser dependiente de
la composicioacuten en aacutecidos grasos de la ceacutelula pero la influencia especiacutefica de
cada clase de aacutecido graso no ha sido estudiada
Por otra parte a nivel industrial el meacutetodo de siacutentesis usado para obtener
el aceite enriquecido en DHA puede ser muy importante en la calidad final
del producto En este sentido hemos estudiado la importancia del contenido
de DHA y del origen sinteacutetico en el efecto antioxidante
Como se puede observar en la figura una disminucioacuten del contenido en DHA
al 50 (origen quiacutemico) o al 20 (aceite de pescado) de los aacutecidos grasos to-
tales induce una disminucioacuten del efecto antioxidante en las ceacutelulas de retina
aunque en ninguacuten caso llega a ser pro-oxidante Sin embargo en ceacutelulas de
piel esta reduccioacuten es tan acusada que soacutelo Algatrium Plus es antioxidante
siendo los otros dos pro-oxidantes
Dado el caraacutecter multifactorial de un tratamiento nutricional no es aconseja-
ble administrar un producto que presente actividades divergentes en funcioacuten
del tejido al que se incorpore
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE CELULAR
CEacuteLULASDE PIEL
05 μM
5 μM
50 μM
ACEITE DE PESCADO
P
ROTE
CCIOacute
N
0
20
40
60
-20
-40
DHA TG50QUIacuteMICO
ALGATRIUMPLUS
P
ROTE
CCIOacute
N
60
20
0
CEacuteLULASDE RETINA
40
DHA quiacutemico vs Algatrium Plus
ACEITE DE PESCADO
DHA TG50QUIacuteMICO
ALGATRIUMPLUS
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE CELULAR
Si la baja actividad del aceite de origen quiacutemico (50 en DHA) pudie-
ra estar relacionado con la presencia de estructuras polimeacutericas su eli-
minacioacuten por cromatografiacutea en columna deberiacutea permitir recuperar su
actividad antioxidante Como se puede observar en la figura una mani-
pulacioacuten excesiva del producto original para eliminar contaminantes
o para mejorar sus caracteriacutesticas organoleacutepticas se traduce en una
peacuterdida de bioactividad
P
ROTE
CCIOacute
N
0
10
20
30
40
50
60
-10DHA TG50QUIacuteMICO
ALGATRIUMPLUS
DHA TG50 QUIacuteMICOPURIFICADO
(DHA)
05 μM
5 μM
50 μM
CEacuteLULAS DE RETINA
DHA quiacutemico vs Algatrium Plus
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE CELULAR
La actividad antioxidante del Algatrium Plus tambieacuten esta relacionada
con su mayor biodisponibilidad ya que un eacutester etiacutelico o un aacutecido graso
libre con el mismo contenido en DHA presenta una actividad antioxi-
dante como maacuteximo la mitad de la de Algatrium Plus
P
ROTE
CCIOacute
N
0
10
20
30
40
50
60
05 μM
(DHA)
FA-BSA
Algatrium Plus
CEacuteLULAS DE RETINA
Efecto de la estructura quiacutemica Fa vs Ee vs Tg
70
5 μM
TG 50 CHEM
EE 70
FA Aacutecido graso libre
EE Eacutester etiacutelico
TG Trigliceacuterido
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE CELULAR
Comparado con los antioxidantes normalmente utilizados en tratamien-
tos oculares a las concentraciones oacuteptimas descritas Algatrium Plus pre-
senta a todas las dosis estudiadas un efecto superior
P
ROTE
CCIOacute
N
0
10
20
30
40
50
60CEacuteLULAS DE RETINA
Algatrium Plus vs antioxidantes
Algatrium Plus
NAC mM
Cys 1 m
M
Co Q 100 μM
Vit E 100 μM
Vit C 100 μM
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE CELULAR
Incluso si estos antioxidantes se combinan o se incrementa su concen-
tracioacuten 10 oacute 100 veces
P
ROTE
CCIOacute
N
0
10
20
30
40
50
60CEacuteLULAS DE RETINA
Algatrium Plus vs antioxidantes
Algatrium Plus
ANT1
ANT1 x10
ANT1 x100ANT2
BIOACTIVIDAD
En este punto la cuestioacuten es iquestCuaacutel es el mecanismo por el cual el Algatrium Plus
ejerce este efecto antioxidante tan potente
Los Omega-3 pueden actuar a diferentes niveles en la fisiologiacutea celular La de-
fensa antioxidante celular se basa en la actividad de un nuacutemero de enzimas an-
tioxidantes junto con otros antioxidantes quiacutemicos conjuntamente previenen la
peroxidacioacuten lipiacutedica la proteiacuteca y el dantildeo en DNA Hemos estudiado el efecto de
Algatrium Plus en diversos aspectos del sistema antioxidante celular
Generacioacuten del anioacuten superoacutexido (O-)
La actividad superoacutexido dismutasa (SOD) y de la glutatioacuten peroxidasa (GPx)
La concentracioacuten intracelular de glutatioacuten (GSH)
La peroxidacioacuten lipiacutedica
Y el dantildeo en DNA
BIOACTIVIDAD
Mecanismo de actividad antioxidante
CellularRespiration
OxidativeBurst
EnvironmentalFactors
O-SOD
GSH
GPx
LipidPeroxidation
ProteinPeroxidation
DNA Damage
HO
HO + O
HO
GSSG
GRed
Catalase
OH
1 3
30
BIOACTIVIDAD
Mecanismo de actividad antioxidante
CellularRespiration
OxidativeBurst
EnvironmentalFactors
O-SOD
GSH
GPx
LipidPeroxidation
ProteinPeroxidation
DNA Damage
HO
HO + O
HO
GSSG
GRed
Catalase
OH
1 3
=
+
BIOACTIVIDAD
Hemos encontrado que la incorporacioacuten de Algatrium Plus en las ceacutelulas disminuye la genera-
cioacuten del anioacuten superoacutexido la peroxidacioacuten lipiacutedica de una manera dosis-dependiente inversa y
el dantildeo en DNA
Los niveles inferiores del anioacuten superoacutexido bajo estreacutes oxidativo en ceacutelulas tratadas con Alga-
trium Plus puede ser debido a la actividad maacutes alta de la SOD respecto al control
Por otra parte la actividad de la GPx en las ceacutelulas tratadas no era diferente de las ceacutelulas control
con o sin estreacutes oxidativo
El cambio maacutes significativo fue el incremento (300) de la concentracioacuten intracelular de GSH
relacionado con un incremento de la siacutentesis de novo
Estos resultados nos indican que Algatrium Plus ejerce su efecto antioxidante mediante un
incremento de la actividad del sistema antioxidante celular sin una participacioacuten directa en
el mismo que lo diferencia de los antioxidantes quiacutemicos convencionales
Esto sugiere que las ceacutelulas toleran cantidades pequentildeas de DHA y que eacuteste actuacutea a modo de
estiacutemulo para evitar cualquier acumulacioacuten de radicales libres la incorporacioacuten de Algatrium
Plus en las biomembranes provoca una respuesta celular antioxidante adaptativa
3
ESTUDIOS IN VIVO
Para valorar la accioacuten de Algatrium Plus se utilizoacute como modelo de es-
treacutes oxidativo el inducido por el ejercicio fiacutesico aerobio
Se sometioacute a deportistas a un esfuerzo continuado al 75 de su consu-
mo maacuteximo de oxiacutegeno durante 90 minutos lo cual supone una produc-
cioacuten suficiente de radicales libres y estreacutes oxidativo como para conocer
la capacidad antioxidante de cualquier manipulacioacuten dieteacutetica
Para dar credibilidad a los resultados obtenidos in vitro es necesario una
constatacioacuten de los mismos in vivo En este sentido se ha desarrollado
un ensayo cliacutenico controlado cruzadov de 4 meses de duracioacuten (N = 40
deportistas) a una dosis de 2 gdiacutea de Algatrium Plus
Las variables a estudiar fueron el dantildeo en DNA y paraacutemetros antioxidan-
tes seacutericos
Se observoacute un aumento estadiacutesticamente significativo en la capacidad
antioxidante total del serum (plt005) antes y despueacutes de la realizacioacuten
de las pruebas rectangulares en los deportistas que habiacutean ingerido Al-
gatrium Plus durante un periodo de tres semanas a cuatro meses
H2O
2 (n
mol
L m
in)
150
160
170
180
190
200
BASAL
CAPACIDAD ANTIOXIDANTE TOTAL
Paraacutemetros antioxidantes in vivo
4 MESES
ESTUDIOS IN VIVO
20 DIacuteAS
Algatrium Plus
Control
3
El nivel plasmaacutetico de MDA como iacutendice de peroxidacioacuten lipiacutedica fue
aumentando durante la realizacioacuten de todas las pruebas de esfuerzo
(plt0035) Despueacutes de la ingesta de Algatrium Plus durante 3 semanas
el dantildeo oxidativo a nivel lipiacutedico en las mismas condiciones disminuye
praacutecticamente a nivel basal (plt005) observaacutendose a los 4 meses de tra-
tamiento un efecto protector en esta variable MD
A (n
mol
L)
10
20
30
40
60
BASAL
PEROXIDACIOacuteN LIPIacuteDICA
Paraacutemetros antioxidantes in vivo
4 MESES
ESTUDIOS IN VIVO
20 DIacuteAS
50
0
-10
Hay un aumento en el dantildeo oxidativo del DNA durante la realizacioacuten de
las pruebas rectangulares del esfuerzo medidas como el nivel de 8-oxo-
dG en la orina (plt0011) La ingesta de Algatrium Plus durante 3 sema-
nas y hasta 4 meses protege el DNA del dantildeo oxidativo inducido por el
esfuerzo de una manera significativa (plt0035)
8-ox
o-dG
(pm
olK
gx24
h)
100
200
300
400
600
BASAL
DANtildeO MOLECULAR EN EL DNA
Paraacutemetros antioxidantes in vivo
4 MESES
ESTUDIOS IN VIVO
20 DIacuteAS
500
0
700
800
900
3
Como efectos colaterales en el rendimiento deportivo se ha observado
que los niveles de glicemia disminuyen durante la realizacioacuten de la prue-
ba rectangular de esfuerzo (plt00009) Esta reduccioacuten en la glicemia era
menor despueacutes de 3 semanas de ingesta de Algatrium Plus se traduciacutea
en un aumento del nivel de glicemia a los 4 meses de tratamiento con
Algatrium Plus
mg
dL
-6
-4
-2
BASAL
VARIACIOacuteN EN LA CONCENTRACIOacuteN DE GLUCOSA
Variables fisioloacutegicas de rendimiento deportivo
4 MESES
ESTUDIOS IN VIVO
3 SEMANAS
4
0
-8
2
mL
min
2600
2650
2700
BASAL
CONSUMO DE OXIacuteGENO
Variables fisioloacutegicas de rendimiento deportivo
4 MESES
ESTUDIOS IN VIVO
3 SEMANAS
2900
2550
2850Tambieacuten se ha observado un aumento significativo del consumo abso-
luto (plt0019) y relativo (plt0036) de oxiacutegeno determinado en el umbral
del esfuerzo triangular con la ingesta de Algatrium Plus hasta 4 meses
Estos resultados parecen indicar que la ingesta de Algatrium PLus pue-
de incrementar el rendimiento deportivo
2750
2800
3
CONCLUSIONES
Los aacutecidos grasos omega-3 son un concepto vigente tanto desde un punto de
vista nutricional como terapeacuteutico con un alto potencial de desarrollo
La aplicacioacuten de los aacutecidos grasos omega-3 en estos campos requiere de produc-
tos manufacturados de acuerdo con los estaacutendares que se aplican a productos
farmaceacuteuticos que incluyen controles de calidad para asegurar su pureza y cali-
dad estructural que condiciona su bioactividad Como estaacutendar es exigible una
riqueza miacutenima superior al 5 en una estructura quiacutemica muy biodisponible
como un trigliceacuterido
La incorporacioacuten de Algatrium Plus en las membranas celulares no soacutelo no pro-
mueve la peroxidacioacuten lipiacutedica sino que actuacutea como un activador del sistema
antioxidante celular probablemente como consecuencia de una respuesta adap-
tativa de la ceacutelula
INFORMACIOacuteN LEGAL
ALGATRIUM es una Marca Internacional propiedad de BRUDY TECHNOLOGY
El uso de DHA de alta concentracioacuten para el tratamiento de enfermedades tu-
morales estaacute protegido por la Patente Internacional nordm200501141 Propiedad de
BRUDY TECHNOLOGY
La comercializacioacuten y el uso de Omega-3 Antioxidantes estaacute protegido por la
Patente Internacional nordm200503202 propiedad de BRUDY TECHNOLOGY
Dr Joan C Domingo Pedrol - Departamento de Bioquiacutemica y Biologiacutea Molecular - Universidad de Barcelona - Telf 934 021 214 - e-mail jcdomingoubedu
Fabricado en Espantildea por Brudy Technology - CRiera de Sant Miquel 3 - ordm ordf - 000 Barcelona - Tel 93 17 03
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE CELULAR
Si la baja actividad del aceite de origen quiacutemico (50 en DHA) pudie-
ra estar relacionado con la presencia de estructuras polimeacutericas su eli-
minacioacuten por cromatografiacutea en columna deberiacutea permitir recuperar su
actividad antioxidante Como se puede observar en la figura una mani-
pulacioacuten excesiva del producto original para eliminar contaminantes
o para mejorar sus caracteriacutesticas organoleacutepticas se traduce en una
peacuterdida de bioactividad
P
ROTE
CCIOacute
N
0
10
20
30
40
50
60
-10DHA TG50QUIacuteMICO
ALGATRIUMPLUS
DHA TG50 QUIacuteMICOPURIFICADO
(DHA)
05 μM
5 μM
50 μM
CEacuteLULAS DE RETINA
DHA quiacutemico vs Algatrium Plus
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE CELULAR
La actividad antioxidante del Algatrium Plus tambieacuten esta relacionada
con su mayor biodisponibilidad ya que un eacutester etiacutelico o un aacutecido graso
libre con el mismo contenido en DHA presenta una actividad antioxi-
dante como maacuteximo la mitad de la de Algatrium Plus
P
ROTE
CCIOacute
N
0
10
20
30
40
50
60
05 μM
(DHA)
FA-BSA
Algatrium Plus
CEacuteLULAS DE RETINA
Efecto de la estructura quiacutemica Fa vs Ee vs Tg
70
5 μM
TG 50 CHEM
EE 70
FA Aacutecido graso libre
EE Eacutester etiacutelico
TG Trigliceacuterido
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE CELULAR
Comparado con los antioxidantes normalmente utilizados en tratamien-
tos oculares a las concentraciones oacuteptimas descritas Algatrium Plus pre-
senta a todas las dosis estudiadas un efecto superior
P
ROTE
CCIOacute
N
0
10
20
30
40
50
60CEacuteLULAS DE RETINA
Algatrium Plus vs antioxidantes
Algatrium Plus
NAC mM
Cys 1 m
M
Co Q 100 μM
Vit E 100 μM
Vit C 100 μM
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE CELULAR
Incluso si estos antioxidantes se combinan o se incrementa su concen-
tracioacuten 10 oacute 100 veces
P
ROTE
CCIOacute
N
0
10
20
30
40
50
60CEacuteLULAS DE RETINA
Algatrium Plus vs antioxidantes
Algatrium Plus
ANT1
ANT1 x10
ANT1 x100ANT2
BIOACTIVIDAD
En este punto la cuestioacuten es iquestCuaacutel es el mecanismo por el cual el Algatrium Plus
ejerce este efecto antioxidante tan potente
Los Omega-3 pueden actuar a diferentes niveles en la fisiologiacutea celular La de-
fensa antioxidante celular se basa en la actividad de un nuacutemero de enzimas an-
tioxidantes junto con otros antioxidantes quiacutemicos conjuntamente previenen la
peroxidacioacuten lipiacutedica la proteiacuteca y el dantildeo en DNA Hemos estudiado el efecto de
Algatrium Plus en diversos aspectos del sistema antioxidante celular
Generacioacuten del anioacuten superoacutexido (O-)
La actividad superoacutexido dismutasa (SOD) y de la glutatioacuten peroxidasa (GPx)
La concentracioacuten intracelular de glutatioacuten (GSH)
La peroxidacioacuten lipiacutedica
Y el dantildeo en DNA
BIOACTIVIDAD
Mecanismo de actividad antioxidante
CellularRespiration
OxidativeBurst
EnvironmentalFactors
O-SOD
GSH
GPx
LipidPeroxidation
ProteinPeroxidation
DNA Damage
HO
HO + O
HO
GSSG
GRed
Catalase
OH
1 3
30
BIOACTIVIDAD
Mecanismo de actividad antioxidante
CellularRespiration
OxidativeBurst
EnvironmentalFactors
O-SOD
GSH
GPx
LipidPeroxidation
ProteinPeroxidation
DNA Damage
HO
HO + O
HO
GSSG
GRed
Catalase
OH
1 3
=
+
BIOACTIVIDAD
Hemos encontrado que la incorporacioacuten de Algatrium Plus en las ceacutelulas disminuye la genera-
cioacuten del anioacuten superoacutexido la peroxidacioacuten lipiacutedica de una manera dosis-dependiente inversa y
el dantildeo en DNA
Los niveles inferiores del anioacuten superoacutexido bajo estreacutes oxidativo en ceacutelulas tratadas con Alga-
trium Plus puede ser debido a la actividad maacutes alta de la SOD respecto al control
Por otra parte la actividad de la GPx en las ceacutelulas tratadas no era diferente de las ceacutelulas control
con o sin estreacutes oxidativo
El cambio maacutes significativo fue el incremento (300) de la concentracioacuten intracelular de GSH
relacionado con un incremento de la siacutentesis de novo
Estos resultados nos indican que Algatrium Plus ejerce su efecto antioxidante mediante un
incremento de la actividad del sistema antioxidante celular sin una participacioacuten directa en
el mismo que lo diferencia de los antioxidantes quiacutemicos convencionales
Esto sugiere que las ceacutelulas toleran cantidades pequentildeas de DHA y que eacuteste actuacutea a modo de
estiacutemulo para evitar cualquier acumulacioacuten de radicales libres la incorporacioacuten de Algatrium
Plus en las biomembranes provoca una respuesta celular antioxidante adaptativa
3
ESTUDIOS IN VIVO
Para valorar la accioacuten de Algatrium Plus se utilizoacute como modelo de es-
treacutes oxidativo el inducido por el ejercicio fiacutesico aerobio
Se sometioacute a deportistas a un esfuerzo continuado al 75 de su consu-
mo maacuteximo de oxiacutegeno durante 90 minutos lo cual supone una produc-
cioacuten suficiente de radicales libres y estreacutes oxidativo como para conocer
la capacidad antioxidante de cualquier manipulacioacuten dieteacutetica
Para dar credibilidad a los resultados obtenidos in vitro es necesario una
constatacioacuten de los mismos in vivo En este sentido se ha desarrollado
un ensayo cliacutenico controlado cruzadov de 4 meses de duracioacuten (N = 40
deportistas) a una dosis de 2 gdiacutea de Algatrium Plus
Las variables a estudiar fueron el dantildeo en DNA y paraacutemetros antioxidan-
tes seacutericos
Se observoacute un aumento estadiacutesticamente significativo en la capacidad
antioxidante total del serum (plt005) antes y despueacutes de la realizacioacuten
de las pruebas rectangulares en los deportistas que habiacutean ingerido Al-
gatrium Plus durante un periodo de tres semanas a cuatro meses
H2O
2 (n
mol
L m
in)
150
160
170
180
190
200
BASAL
CAPACIDAD ANTIOXIDANTE TOTAL
Paraacutemetros antioxidantes in vivo
4 MESES
ESTUDIOS IN VIVO
20 DIacuteAS
Algatrium Plus
Control
3
El nivel plasmaacutetico de MDA como iacutendice de peroxidacioacuten lipiacutedica fue
aumentando durante la realizacioacuten de todas las pruebas de esfuerzo
(plt0035) Despueacutes de la ingesta de Algatrium Plus durante 3 semanas
el dantildeo oxidativo a nivel lipiacutedico en las mismas condiciones disminuye
praacutecticamente a nivel basal (plt005) observaacutendose a los 4 meses de tra-
tamiento un efecto protector en esta variable MD
A (n
mol
L)
10
20
30
40
60
BASAL
PEROXIDACIOacuteN LIPIacuteDICA
Paraacutemetros antioxidantes in vivo
4 MESES
ESTUDIOS IN VIVO
20 DIacuteAS
50
0
-10
Hay un aumento en el dantildeo oxidativo del DNA durante la realizacioacuten de
las pruebas rectangulares del esfuerzo medidas como el nivel de 8-oxo-
dG en la orina (plt0011) La ingesta de Algatrium Plus durante 3 sema-
nas y hasta 4 meses protege el DNA del dantildeo oxidativo inducido por el
esfuerzo de una manera significativa (plt0035)
8-ox
o-dG
(pm
olK
gx24
h)
100
200
300
400
600
BASAL
DANtildeO MOLECULAR EN EL DNA
Paraacutemetros antioxidantes in vivo
4 MESES
ESTUDIOS IN VIVO
20 DIacuteAS
500
0
700
800
900
3
Como efectos colaterales en el rendimiento deportivo se ha observado
que los niveles de glicemia disminuyen durante la realizacioacuten de la prue-
ba rectangular de esfuerzo (plt00009) Esta reduccioacuten en la glicemia era
menor despueacutes de 3 semanas de ingesta de Algatrium Plus se traduciacutea
en un aumento del nivel de glicemia a los 4 meses de tratamiento con
Algatrium Plus
mg
dL
-6
-4
-2
BASAL
VARIACIOacuteN EN LA CONCENTRACIOacuteN DE GLUCOSA
Variables fisioloacutegicas de rendimiento deportivo
4 MESES
ESTUDIOS IN VIVO
3 SEMANAS
4
0
-8
2
mL
min
2600
2650
2700
BASAL
CONSUMO DE OXIacuteGENO
Variables fisioloacutegicas de rendimiento deportivo
4 MESES
ESTUDIOS IN VIVO
3 SEMANAS
2900
2550
2850Tambieacuten se ha observado un aumento significativo del consumo abso-
luto (plt0019) y relativo (plt0036) de oxiacutegeno determinado en el umbral
del esfuerzo triangular con la ingesta de Algatrium Plus hasta 4 meses
Estos resultados parecen indicar que la ingesta de Algatrium PLus pue-
de incrementar el rendimiento deportivo
2750
2800
3
CONCLUSIONES
Los aacutecidos grasos omega-3 son un concepto vigente tanto desde un punto de
vista nutricional como terapeacuteutico con un alto potencial de desarrollo
La aplicacioacuten de los aacutecidos grasos omega-3 en estos campos requiere de produc-
tos manufacturados de acuerdo con los estaacutendares que se aplican a productos
farmaceacuteuticos que incluyen controles de calidad para asegurar su pureza y cali-
dad estructural que condiciona su bioactividad Como estaacutendar es exigible una
riqueza miacutenima superior al 5 en una estructura quiacutemica muy biodisponible
como un trigliceacuterido
La incorporacioacuten de Algatrium Plus en las membranas celulares no soacutelo no pro-
mueve la peroxidacioacuten lipiacutedica sino que actuacutea como un activador del sistema
antioxidante celular probablemente como consecuencia de una respuesta adap-
tativa de la ceacutelula
INFORMACIOacuteN LEGAL
ALGATRIUM es una Marca Internacional propiedad de BRUDY TECHNOLOGY
El uso de DHA de alta concentracioacuten para el tratamiento de enfermedades tu-
morales estaacute protegido por la Patente Internacional nordm200501141 Propiedad de
BRUDY TECHNOLOGY
La comercializacioacuten y el uso de Omega-3 Antioxidantes estaacute protegido por la
Patente Internacional nordm200503202 propiedad de BRUDY TECHNOLOGY
Dr Joan C Domingo Pedrol - Departamento de Bioquiacutemica y Biologiacutea Molecular - Universidad de Barcelona - Telf 934 021 214 - e-mail jcdomingoubedu
Fabricado en Espantildea por Brudy Technology - CRiera de Sant Miquel 3 - ordm ordf - 000 Barcelona - Tel 93 17 03
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE CELULAR
La actividad antioxidante del Algatrium Plus tambieacuten esta relacionada
con su mayor biodisponibilidad ya que un eacutester etiacutelico o un aacutecido graso
libre con el mismo contenido en DHA presenta una actividad antioxi-
dante como maacuteximo la mitad de la de Algatrium Plus
P
ROTE
CCIOacute
N
0
10
20
30
40
50
60
05 μM
(DHA)
FA-BSA
Algatrium Plus
CEacuteLULAS DE RETINA
Efecto de la estructura quiacutemica Fa vs Ee vs Tg
70
5 μM
TG 50 CHEM
EE 70
FA Aacutecido graso libre
EE Eacutester etiacutelico
TG Trigliceacuterido
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE CELULAR
Comparado con los antioxidantes normalmente utilizados en tratamien-
tos oculares a las concentraciones oacuteptimas descritas Algatrium Plus pre-
senta a todas las dosis estudiadas un efecto superior
P
ROTE
CCIOacute
N
0
10
20
30
40
50
60CEacuteLULAS DE RETINA
Algatrium Plus vs antioxidantes
Algatrium Plus
NAC mM
Cys 1 m
M
Co Q 100 μM
Vit E 100 μM
Vit C 100 μM
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE CELULAR
Incluso si estos antioxidantes se combinan o se incrementa su concen-
tracioacuten 10 oacute 100 veces
P
ROTE
CCIOacute
N
0
10
20
30
40
50
60CEacuteLULAS DE RETINA
Algatrium Plus vs antioxidantes
Algatrium Plus
ANT1
ANT1 x10
ANT1 x100ANT2
BIOACTIVIDAD
En este punto la cuestioacuten es iquestCuaacutel es el mecanismo por el cual el Algatrium Plus
ejerce este efecto antioxidante tan potente
Los Omega-3 pueden actuar a diferentes niveles en la fisiologiacutea celular La de-
fensa antioxidante celular se basa en la actividad de un nuacutemero de enzimas an-
tioxidantes junto con otros antioxidantes quiacutemicos conjuntamente previenen la
peroxidacioacuten lipiacutedica la proteiacuteca y el dantildeo en DNA Hemos estudiado el efecto de
Algatrium Plus en diversos aspectos del sistema antioxidante celular
Generacioacuten del anioacuten superoacutexido (O-)
La actividad superoacutexido dismutasa (SOD) y de la glutatioacuten peroxidasa (GPx)
La concentracioacuten intracelular de glutatioacuten (GSH)
La peroxidacioacuten lipiacutedica
Y el dantildeo en DNA
BIOACTIVIDAD
Mecanismo de actividad antioxidante
CellularRespiration
OxidativeBurst
EnvironmentalFactors
O-SOD
GSH
GPx
LipidPeroxidation
ProteinPeroxidation
DNA Damage
HO
HO + O
HO
GSSG
GRed
Catalase
OH
1 3
30
BIOACTIVIDAD
Mecanismo de actividad antioxidante
CellularRespiration
OxidativeBurst
EnvironmentalFactors
O-SOD
GSH
GPx
LipidPeroxidation
ProteinPeroxidation
DNA Damage
HO
HO + O
HO
GSSG
GRed
Catalase
OH
1 3
=
+
BIOACTIVIDAD
Hemos encontrado que la incorporacioacuten de Algatrium Plus en las ceacutelulas disminuye la genera-
cioacuten del anioacuten superoacutexido la peroxidacioacuten lipiacutedica de una manera dosis-dependiente inversa y
el dantildeo en DNA
Los niveles inferiores del anioacuten superoacutexido bajo estreacutes oxidativo en ceacutelulas tratadas con Alga-
trium Plus puede ser debido a la actividad maacutes alta de la SOD respecto al control
Por otra parte la actividad de la GPx en las ceacutelulas tratadas no era diferente de las ceacutelulas control
con o sin estreacutes oxidativo
El cambio maacutes significativo fue el incremento (300) de la concentracioacuten intracelular de GSH
relacionado con un incremento de la siacutentesis de novo
Estos resultados nos indican que Algatrium Plus ejerce su efecto antioxidante mediante un
incremento de la actividad del sistema antioxidante celular sin una participacioacuten directa en
el mismo que lo diferencia de los antioxidantes quiacutemicos convencionales
Esto sugiere que las ceacutelulas toleran cantidades pequentildeas de DHA y que eacuteste actuacutea a modo de
estiacutemulo para evitar cualquier acumulacioacuten de radicales libres la incorporacioacuten de Algatrium
Plus en las biomembranes provoca una respuesta celular antioxidante adaptativa
3
ESTUDIOS IN VIVO
Para valorar la accioacuten de Algatrium Plus se utilizoacute como modelo de es-
treacutes oxidativo el inducido por el ejercicio fiacutesico aerobio
Se sometioacute a deportistas a un esfuerzo continuado al 75 de su consu-
mo maacuteximo de oxiacutegeno durante 90 minutos lo cual supone una produc-
cioacuten suficiente de radicales libres y estreacutes oxidativo como para conocer
la capacidad antioxidante de cualquier manipulacioacuten dieteacutetica
Para dar credibilidad a los resultados obtenidos in vitro es necesario una
constatacioacuten de los mismos in vivo En este sentido se ha desarrollado
un ensayo cliacutenico controlado cruzadov de 4 meses de duracioacuten (N = 40
deportistas) a una dosis de 2 gdiacutea de Algatrium Plus
Las variables a estudiar fueron el dantildeo en DNA y paraacutemetros antioxidan-
tes seacutericos
Se observoacute un aumento estadiacutesticamente significativo en la capacidad
antioxidante total del serum (plt005) antes y despueacutes de la realizacioacuten
de las pruebas rectangulares en los deportistas que habiacutean ingerido Al-
gatrium Plus durante un periodo de tres semanas a cuatro meses
H2O
2 (n
mol
L m
in)
150
160
170
180
190
200
BASAL
CAPACIDAD ANTIOXIDANTE TOTAL
Paraacutemetros antioxidantes in vivo
4 MESES
ESTUDIOS IN VIVO
20 DIacuteAS
Algatrium Plus
Control
3
El nivel plasmaacutetico de MDA como iacutendice de peroxidacioacuten lipiacutedica fue
aumentando durante la realizacioacuten de todas las pruebas de esfuerzo
(plt0035) Despueacutes de la ingesta de Algatrium Plus durante 3 semanas
el dantildeo oxidativo a nivel lipiacutedico en las mismas condiciones disminuye
praacutecticamente a nivel basal (plt005) observaacutendose a los 4 meses de tra-
tamiento un efecto protector en esta variable MD
A (n
mol
L)
10
20
30
40
60
BASAL
PEROXIDACIOacuteN LIPIacuteDICA
Paraacutemetros antioxidantes in vivo
4 MESES
ESTUDIOS IN VIVO
20 DIacuteAS
50
0
-10
Hay un aumento en el dantildeo oxidativo del DNA durante la realizacioacuten de
las pruebas rectangulares del esfuerzo medidas como el nivel de 8-oxo-
dG en la orina (plt0011) La ingesta de Algatrium Plus durante 3 sema-
nas y hasta 4 meses protege el DNA del dantildeo oxidativo inducido por el
esfuerzo de una manera significativa (plt0035)
8-ox
o-dG
(pm
olK
gx24
h)
100
200
300
400
600
BASAL
DANtildeO MOLECULAR EN EL DNA
Paraacutemetros antioxidantes in vivo
4 MESES
ESTUDIOS IN VIVO
20 DIacuteAS
500
0
700
800
900
3
Como efectos colaterales en el rendimiento deportivo se ha observado
que los niveles de glicemia disminuyen durante la realizacioacuten de la prue-
ba rectangular de esfuerzo (plt00009) Esta reduccioacuten en la glicemia era
menor despueacutes de 3 semanas de ingesta de Algatrium Plus se traduciacutea
en un aumento del nivel de glicemia a los 4 meses de tratamiento con
Algatrium Plus
mg
dL
-6
-4
-2
BASAL
VARIACIOacuteN EN LA CONCENTRACIOacuteN DE GLUCOSA
Variables fisioloacutegicas de rendimiento deportivo
4 MESES
ESTUDIOS IN VIVO
3 SEMANAS
4
0
-8
2
mL
min
2600
2650
2700
BASAL
CONSUMO DE OXIacuteGENO
Variables fisioloacutegicas de rendimiento deportivo
4 MESES
ESTUDIOS IN VIVO
3 SEMANAS
2900
2550
2850Tambieacuten se ha observado un aumento significativo del consumo abso-
luto (plt0019) y relativo (plt0036) de oxiacutegeno determinado en el umbral
del esfuerzo triangular con la ingesta de Algatrium Plus hasta 4 meses
Estos resultados parecen indicar que la ingesta de Algatrium PLus pue-
de incrementar el rendimiento deportivo
2750
2800
3
CONCLUSIONES
Los aacutecidos grasos omega-3 son un concepto vigente tanto desde un punto de
vista nutricional como terapeacuteutico con un alto potencial de desarrollo
La aplicacioacuten de los aacutecidos grasos omega-3 en estos campos requiere de produc-
tos manufacturados de acuerdo con los estaacutendares que se aplican a productos
farmaceacuteuticos que incluyen controles de calidad para asegurar su pureza y cali-
dad estructural que condiciona su bioactividad Como estaacutendar es exigible una
riqueza miacutenima superior al 5 en una estructura quiacutemica muy biodisponible
como un trigliceacuterido
La incorporacioacuten de Algatrium Plus en las membranas celulares no soacutelo no pro-
mueve la peroxidacioacuten lipiacutedica sino que actuacutea como un activador del sistema
antioxidante celular probablemente como consecuencia de una respuesta adap-
tativa de la ceacutelula
INFORMACIOacuteN LEGAL
ALGATRIUM es una Marca Internacional propiedad de BRUDY TECHNOLOGY
El uso de DHA de alta concentracioacuten para el tratamiento de enfermedades tu-
morales estaacute protegido por la Patente Internacional nordm200501141 Propiedad de
BRUDY TECHNOLOGY
La comercializacioacuten y el uso de Omega-3 Antioxidantes estaacute protegido por la
Patente Internacional nordm200503202 propiedad de BRUDY TECHNOLOGY
Dr Joan C Domingo Pedrol - Departamento de Bioquiacutemica y Biologiacutea Molecular - Universidad de Barcelona - Telf 934 021 214 - e-mail jcdomingoubedu
Fabricado en Espantildea por Brudy Technology - CRiera de Sant Miquel 3 - ordm ordf - 000 Barcelona - Tel 93 17 03
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE CELULAR
Comparado con los antioxidantes normalmente utilizados en tratamien-
tos oculares a las concentraciones oacuteptimas descritas Algatrium Plus pre-
senta a todas las dosis estudiadas un efecto superior
P
ROTE
CCIOacute
N
0
10
20
30
40
50
60CEacuteLULAS DE RETINA
Algatrium Plus vs antioxidantes
Algatrium Plus
NAC mM
Cys 1 m
M
Co Q 100 μM
Vit E 100 μM
Vit C 100 μM
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE CELULAR
Incluso si estos antioxidantes se combinan o se incrementa su concen-
tracioacuten 10 oacute 100 veces
P
ROTE
CCIOacute
N
0
10
20
30
40
50
60CEacuteLULAS DE RETINA
Algatrium Plus vs antioxidantes
Algatrium Plus
ANT1
ANT1 x10
ANT1 x100ANT2
BIOACTIVIDAD
En este punto la cuestioacuten es iquestCuaacutel es el mecanismo por el cual el Algatrium Plus
ejerce este efecto antioxidante tan potente
Los Omega-3 pueden actuar a diferentes niveles en la fisiologiacutea celular La de-
fensa antioxidante celular se basa en la actividad de un nuacutemero de enzimas an-
tioxidantes junto con otros antioxidantes quiacutemicos conjuntamente previenen la
peroxidacioacuten lipiacutedica la proteiacuteca y el dantildeo en DNA Hemos estudiado el efecto de
Algatrium Plus en diversos aspectos del sistema antioxidante celular
Generacioacuten del anioacuten superoacutexido (O-)
La actividad superoacutexido dismutasa (SOD) y de la glutatioacuten peroxidasa (GPx)
La concentracioacuten intracelular de glutatioacuten (GSH)
La peroxidacioacuten lipiacutedica
Y el dantildeo en DNA
BIOACTIVIDAD
Mecanismo de actividad antioxidante
CellularRespiration
OxidativeBurst
EnvironmentalFactors
O-SOD
GSH
GPx
LipidPeroxidation
ProteinPeroxidation
DNA Damage
HO
HO + O
HO
GSSG
GRed
Catalase
OH
1 3
30
BIOACTIVIDAD
Mecanismo de actividad antioxidante
CellularRespiration
OxidativeBurst
EnvironmentalFactors
O-SOD
GSH
GPx
LipidPeroxidation
ProteinPeroxidation
DNA Damage
HO
HO + O
HO
GSSG
GRed
Catalase
OH
1 3
=
+
BIOACTIVIDAD
Hemos encontrado que la incorporacioacuten de Algatrium Plus en las ceacutelulas disminuye la genera-
cioacuten del anioacuten superoacutexido la peroxidacioacuten lipiacutedica de una manera dosis-dependiente inversa y
el dantildeo en DNA
Los niveles inferiores del anioacuten superoacutexido bajo estreacutes oxidativo en ceacutelulas tratadas con Alga-
trium Plus puede ser debido a la actividad maacutes alta de la SOD respecto al control
Por otra parte la actividad de la GPx en las ceacutelulas tratadas no era diferente de las ceacutelulas control
con o sin estreacutes oxidativo
El cambio maacutes significativo fue el incremento (300) de la concentracioacuten intracelular de GSH
relacionado con un incremento de la siacutentesis de novo
Estos resultados nos indican que Algatrium Plus ejerce su efecto antioxidante mediante un
incremento de la actividad del sistema antioxidante celular sin una participacioacuten directa en
el mismo que lo diferencia de los antioxidantes quiacutemicos convencionales
Esto sugiere que las ceacutelulas toleran cantidades pequentildeas de DHA y que eacuteste actuacutea a modo de
estiacutemulo para evitar cualquier acumulacioacuten de radicales libres la incorporacioacuten de Algatrium
Plus en las biomembranes provoca una respuesta celular antioxidante adaptativa
3
ESTUDIOS IN VIVO
Para valorar la accioacuten de Algatrium Plus se utilizoacute como modelo de es-
treacutes oxidativo el inducido por el ejercicio fiacutesico aerobio
Se sometioacute a deportistas a un esfuerzo continuado al 75 de su consu-
mo maacuteximo de oxiacutegeno durante 90 minutos lo cual supone una produc-
cioacuten suficiente de radicales libres y estreacutes oxidativo como para conocer
la capacidad antioxidante de cualquier manipulacioacuten dieteacutetica
Para dar credibilidad a los resultados obtenidos in vitro es necesario una
constatacioacuten de los mismos in vivo En este sentido se ha desarrollado
un ensayo cliacutenico controlado cruzadov de 4 meses de duracioacuten (N = 40
deportistas) a una dosis de 2 gdiacutea de Algatrium Plus
Las variables a estudiar fueron el dantildeo en DNA y paraacutemetros antioxidan-
tes seacutericos
Se observoacute un aumento estadiacutesticamente significativo en la capacidad
antioxidante total del serum (plt005) antes y despueacutes de la realizacioacuten
de las pruebas rectangulares en los deportistas que habiacutean ingerido Al-
gatrium Plus durante un periodo de tres semanas a cuatro meses
H2O
2 (n
mol
L m
in)
150
160
170
180
190
200
BASAL
CAPACIDAD ANTIOXIDANTE TOTAL
Paraacutemetros antioxidantes in vivo
4 MESES
ESTUDIOS IN VIVO
20 DIacuteAS
Algatrium Plus
Control
3
El nivel plasmaacutetico de MDA como iacutendice de peroxidacioacuten lipiacutedica fue
aumentando durante la realizacioacuten de todas las pruebas de esfuerzo
(plt0035) Despueacutes de la ingesta de Algatrium Plus durante 3 semanas
el dantildeo oxidativo a nivel lipiacutedico en las mismas condiciones disminuye
praacutecticamente a nivel basal (plt005) observaacutendose a los 4 meses de tra-
tamiento un efecto protector en esta variable MD
A (n
mol
L)
10
20
30
40
60
BASAL
PEROXIDACIOacuteN LIPIacuteDICA
Paraacutemetros antioxidantes in vivo
4 MESES
ESTUDIOS IN VIVO
20 DIacuteAS
50
0
-10
Hay un aumento en el dantildeo oxidativo del DNA durante la realizacioacuten de
las pruebas rectangulares del esfuerzo medidas como el nivel de 8-oxo-
dG en la orina (plt0011) La ingesta de Algatrium Plus durante 3 sema-
nas y hasta 4 meses protege el DNA del dantildeo oxidativo inducido por el
esfuerzo de una manera significativa (plt0035)
8-ox
o-dG
(pm
olK
gx24
h)
100
200
300
400
600
BASAL
DANtildeO MOLECULAR EN EL DNA
Paraacutemetros antioxidantes in vivo
4 MESES
ESTUDIOS IN VIVO
20 DIacuteAS
500
0
700
800
900
3
Como efectos colaterales en el rendimiento deportivo se ha observado
que los niveles de glicemia disminuyen durante la realizacioacuten de la prue-
ba rectangular de esfuerzo (plt00009) Esta reduccioacuten en la glicemia era
menor despueacutes de 3 semanas de ingesta de Algatrium Plus se traduciacutea
en un aumento del nivel de glicemia a los 4 meses de tratamiento con
Algatrium Plus
mg
dL
-6
-4
-2
BASAL
VARIACIOacuteN EN LA CONCENTRACIOacuteN DE GLUCOSA
Variables fisioloacutegicas de rendimiento deportivo
4 MESES
ESTUDIOS IN VIVO
3 SEMANAS
4
0
-8
2
mL
min
2600
2650
2700
BASAL
CONSUMO DE OXIacuteGENO
Variables fisioloacutegicas de rendimiento deportivo
4 MESES
ESTUDIOS IN VIVO
3 SEMANAS
2900
2550
2850Tambieacuten se ha observado un aumento significativo del consumo abso-
luto (plt0019) y relativo (plt0036) de oxiacutegeno determinado en el umbral
del esfuerzo triangular con la ingesta de Algatrium Plus hasta 4 meses
Estos resultados parecen indicar que la ingesta de Algatrium PLus pue-
de incrementar el rendimiento deportivo
2750
2800
3
CONCLUSIONES
Los aacutecidos grasos omega-3 son un concepto vigente tanto desde un punto de
vista nutricional como terapeacuteutico con un alto potencial de desarrollo
La aplicacioacuten de los aacutecidos grasos omega-3 en estos campos requiere de produc-
tos manufacturados de acuerdo con los estaacutendares que se aplican a productos
farmaceacuteuticos que incluyen controles de calidad para asegurar su pureza y cali-
dad estructural que condiciona su bioactividad Como estaacutendar es exigible una
riqueza miacutenima superior al 5 en una estructura quiacutemica muy biodisponible
como un trigliceacuterido
La incorporacioacuten de Algatrium Plus en las membranas celulares no soacutelo no pro-
mueve la peroxidacioacuten lipiacutedica sino que actuacutea como un activador del sistema
antioxidante celular probablemente como consecuencia de una respuesta adap-
tativa de la ceacutelula
INFORMACIOacuteN LEGAL
ALGATRIUM es una Marca Internacional propiedad de BRUDY TECHNOLOGY
El uso de DHA de alta concentracioacuten para el tratamiento de enfermedades tu-
morales estaacute protegido por la Patente Internacional nordm200501141 Propiedad de
BRUDY TECHNOLOGY
La comercializacioacuten y el uso de Omega-3 Antioxidantes estaacute protegido por la
Patente Internacional nordm200503202 propiedad de BRUDY TECHNOLOGY
Dr Joan C Domingo Pedrol - Departamento de Bioquiacutemica y Biologiacutea Molecular - Universidad de Barcelona - Telf 934 021 214 - e-mail jcdomingoubedu
Fabricado en Espantildea por Brudy Technology - CRiera de Sant Miquel 3 - ordm ordf - 000 Barcelona - Tel 93 17 03
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE CELULAR
Incluso si estos antioxidantes se combinan o se incrementa su concen-
tracioacuten 10 oacute 100 veces
P
ROTE
CCIOacute
N
0
10
20
30
40
50
60CEacuteLULAS DE RETINA
Algatrium Plus vs antioxidantes
Algatrium Plus
ANT1
ANT1 x10
ANT1 x100ANT2
BIOACTIVIDAD
En este punto la cuestioacuten es iquestCuaacutel es el mecanismo por el cual el Algatrium Plus
ejerce este efecto antioxidante tan potente
Los Omega-3 pueden actuar a diferentes niveles en la fisiologiacutea celular La de-
fensa antioxidante celular se basa en la actividad de un nuacutemero de enzimas an-
tioxidantes junto con otros antioxidantes quiacutemicos conjuntamente previenen la
peroxidacioacuten lipiacutedica la proteiacuteca y el dantildeo en DNA Hemos estudiado el efecto de
Algatrium Plus en diversos aspectos del sistema antioxidante celular
Generacioacuten del anioacuten superoacutexido (O-)
La actividad superoacutexido dismutasa (SOD) y de la glutatioacuten peroxidasa (GPx)
La concentracioacuten intracelular de glutatioacuten (GSH)
La peroxidacioacuten lipiacutedica
Y el dantildeo en DNA
BIOACTIVIDAD
Mecanismo de actividad antioxidante
CellularRespiration
OxidativeBurst
EnvironmentalFactors
O-SOD
GSH
GPx
LipidPeroxidation
ProteinPeroxidation
DNA Damage
HO
HO + O
HO
GSSG
GRed
Catalase
OH
1 3
30
BIOACTIVIDAD
Mecanismo de actividad antioxidante
CellularRespiration
OxidativeBurst
EnvironmentalFactors
O-SOD
GSH
GPx
LipidPeroxidation
ProteinPeroxidation
DNA Damage
HO
HO + O
HO
GSSG
GRed
Catalase
OH
1 3
=
+
BIOACTIVIDAD
Hemos encontrado que la incorporacioacuten de Algatrium Plus en las ceacutelulas disminuye la genera-
cioacuten del anioacuten superoacutexido la peroxidacioacuten lipiacutedica de una manera dosis-dependiente inversa y
el dantildeo en DNA
Los niveles inferiores del anioacuten superoacutexido bajo estreacutes oxidativo en ceacutelulas tratadas con Alga-
trium Plus puede ser debido a la actividad maacutes alta de la SOD respecto al control
Por otra parte la actividad de la GPx en las ceacutelulas tratadas no era diferente de las ceacutelulas control
con o sin estreacutes oxidativo
El cambio maacutes significativo fue el incremento (300) de la concentracioacuten intracelular de GSH
relacionado con un incremento de la siacutentesis de novo
Estos resultados nos indican que Algatrium Plus ejerce su efecto antioxidante mediante un
incremento de la actividad del sistema antioxidante celular sin una participacioacuten directa en
el mismo que lo diferencia de los antioxidantes quiacutemicos convencionales
Esto sugiere que las ceacutelulas toleran cantidades pequentildeas de DHA y que eacuteste actuacutea a modo de
estiacutemulo para evitar cualquier acumulacioacuten de radicales libres la incorporacioacuten de Algatrium
Plus en las biomembranes provoca una respuesta celular antioxidante adaptativa
3
ESTUDIOS IN VIVO
Para valorar la accioacuten de Algatrium Plus se utilizoacute como modelo de es-
treacutes oxidativo el inducido por el ejercicio fiacutesico aerobio
Se sometioacute a deportistas a un esfuerzo continuado al 75 de su consu-
mo maacuteximo de oxiacutegeno durante 90 minutos lo cual supone una produc-
cioacuten suficiente de radicales libres y estreacutes oxidativo como para conocer
la capacidad antioxidante de cualquier manipulacioacuten dieteacutetica
Para dar credibilidad a los resultados obtenidos in vitro es necesario una
constatacioacuten de los mismos in vivo En este sentido se ha desarrollado
un ensayo cliacutenico controlado cruzadov de 4 meses de duracioacuten (N = 40
deportistas) a una dosis de 2 gdiacutea de Algatrium Plus
Las variables a estudiar fueron el dantildeo en DNA y paraacutemetros antioxidan-
tes seacutericos
Se observoacute un aumento estadiacutesticamente significativo en la capacidad
antioxidante total del serum (plt005) antes y despueacutes de la realizacioacuten
de las pruebas rectangulares en los deportistas que habiacutean ingerido Al-
gatrium Plus durante un periodo de tres semanas a cuatro meses
H2O
2 (n
mol
L m
in)
150
160
170
180
190
200
BASAL
CAPACIDAD ANTIOXIDANTE TOTAL
Paraacutemetros antioxidantes in vivo
4 MESES
ESTUDIOS IN VIVO
20 DIacuteAS
Algatrium Plus
Control
3
El nivel plasmaacutetico de MDA como iacutendice de peroxidacioacuten lipiacutedica fue
aumentando durante la realizacioacuten de todas las pruebas de esfuerzo
(plt0035) Despueacutes de la ingesta de Algatrium Plus durante 3 semanas
el dantildeo oxidativo a nivel lipiacutedico en las mismas condiciones disminuye
praacutecticamente a nivel basal (plt005) observaacutendose a los 4 meses de tra-
tamiento un efecto protector en esta variable MD
A (n
mol
L)
10
20
30
40
60
BASAL
PEROXIDACIOacuteN LIPIacuteDICA
Paraacutemetros antioxidantes in vivo
4 MESES
ESTUDIOS IN VIVO
20 DIacuteAS
50
0
-10
Hay un aumento en el dantildeo oxidativo del DNA durante la realizacioacuten de
las pruebas rectangulares del esfuerzo medidas como el nivel de 8-oxo-
dG en la orina (plt0011) La ingesta de Algatrium Plus durante 3 sema-
nas y hasta 4 meses protege el DNA del dantildeo oxidativo inducido por el
esfuerzo de una manera significativa (plt0035)
8-ox
o-dG
(pm
olK
gx24
h)
100
200
300
400
600
BASAL
DANtildeO MOLECULAR EN EL DNA
Paraacutemetros antioxidantes in vivo
4 MESES
ESTUDIOS IN VIVO
20 DIacuteAS
500
0
700
800
900
3
Como efectos colaterales en el rendimiento deportivo se ha observado
que los niveles de glicemia disminuyen durante la realizacioacuten de la prue-
ba rectangular de esfuerzo (plt00009) Esta reduccioacuten en la glicemia era
menor despueacutes de 3 semanas de ingesta de Algatrium Plus se traduciacutea
en un aumento del nivel de glicemia a los 4 meses de tratamiento con
Algatrium Plus
mg
dL
-6
-4
-2
BASAL
VARIACIOacuteN EN LA CONCENTRACIOacuteN DE GLUCOSA
Variables fisioloacutegicas de rendimiento deportivo
4 MESES
ESTUDIOS IN VIVO
3 SEMANAS
4
0
-8
2
mL
min
2600
2650
2700
BASAL
CONSUMO DE OXIacuteGENO
Variables fisioloacutegicas de rendimiento deportivo
4 MESES
ESTUDIOS IN VIVO
3 SEMANAS
2900
2550
2850Tambieacuten se ha observado un aumento significativo del consumo abso-
luto (plt0019) y relativo (plt0036) de oxiacutegeno determinado en el umbral
del esfuerzo triangular con la ingesta de Algatrium Plus hasta 4 meses
Estos resultados parecen indicar que la ingesta de Algatrium PLus pue-
de incrementar el rendimiento deportivo
2750
2800
3
CONCLUSIONES
Los aacutecidos grasos omega-3 son un concepto vigente tanto desde un punto de
vista nutricional como terapeacuteutico con un alto potencial de desarrollo
La aplicacioacuten de los aacutecidos grasos omega-3 en estos campos requiere de produc-
tos manufacturados de acuerdo con los estaacutendares que se aplican a productos
farmaceacuteuticos que incluyen controles de calidad para asegurar su pureza y cali-
dad estructural que condiciona su bioactividad Como estaacutendar es exigible una
riqueza miacutenima superior al 5 en una estructura quiacutemica muy biodisponible
como un trigliceacuterido
La incorporacioacuten de Algatrium Plus en las membranas celulares no soacutelo no pro-
mueve la peroxidacioacuten lipiacutedica sino que actuacutea como un activador del sistema
antioxidante celular probablemente como consecuencia de una respuesta adap-
tativa de la ceacutelula
INFORMACIOacuteN LEGAL
ALGATRIUM es una Marca Internacional propiedad de BRUDY TECHNOLOGY
El uso de DHA de alta concentracioacuten para el tratamiento de enfermedades tu-
morales estaacute protegido por la Patente Internacional nordm200501141 Propiedad de
BRUDY TECHNOLOGY
La comercializacioacuten y el uso de Omega-3 Antioxidantes estaacute protegido por la
Patente Internacional nordm200503202 propiedad de BRUDY TECHNOLOGY
Dr Joan C Domingo Pedrol - Departamento de Bioquiacutemica y Biologiacutea Molecular - Universidad de Barcelona - Telf 934 021 214 - e-mail jcdomingoubedu
Fabricado en Espantildea por Brudy Technology - CRiera de Sant Miquel 3 - ordm ordf - 000 Barcelona - Tel 93 17 03
BIOACTIVIDAD
En este punto la cuestioacuten es iquestCuaacutel es el mecanismo por el cual el Algatrium Plus
ejerce este efecto antioxidante tan potente
Los Omega-3 pueden actuar a diferentes niveles en la fisiologiacutea celular La de-
fensa antioxidante celular se basa en la actividad de un nuacutemero de enzimas an-
tioxidantes junto con otros antioxidantes quiacutemicos conjuntamente previenen la
peroxidacioacuten lipiacutedica la proteiacuteca y el dantildeo en DNA Hemos estudiado el efecto de
Algatrium Plus en diversos aspectos del sistema antioxidante celular
Generacioacuten del anioacuten superoacutexido (O-)
La actividad superoacutexido dismutasa (SOD) y de la glutatioacuten peroxidasa (GPx)
La concentracioacuten intracelular de glutatioacuten (GSH)
La peroxidacioacuten lipiacutedica
Y el dantildeo en DNA
BIOACTIVIDAD
Mecanismo de actividad antioxidante
CellularRespiration
OxidativeBurst
EnvironmentalFactors
O-SOD
GSH
GPx
LipidPeroxidation
ProteinPeroxidation
DNA Damage
HO
HO + O
HO
GSSG
GRed
Catalase
OH
1 3
30
BIOACTIVIDAD
Mecanismo de actividad antioxidante
CellularRespiration
OxidativeBurst
EnvironmentalFactors
O-SOD
GSH
GPx
LipidPeroxidation
ProteinPeroxidation
DNA Damage
HO
HO + O
HO
GSSG
GRed
Catalase
OH
1 3
=
+
BIOACTIVIDAD
Hemos encontrado que la incorporacioacuten de Algatrium Plus en las ceacutelulas disminuye la genera-
cioacuten del anioacuten superoacutexido la peroxidacioacuten lipiacutedica de una manera dosis-dependiente inversa y
el dantildeo en DNA
Los niveles inferiores del anioacuten superoacutexido bajo estreacutes oxidativo en ceacutelulas tratadas con Alga-
trium Plus puede ser debido a la actividad maacutes alta de la SOD respecto al control
Por otra parte la actividad de la GPx en las ceacutelulas tratadas no era diferente de las ceacutelulas control
con o sin estreacutes oxidativo
El cambio maacutes significativo fue el incremento (300) de la concentracioacuten intracelular de GSH
relacionado con un incremento de la siacutentesis de novo
Estos resultados nos indican que Algatrium Plus ejerce su efecto antioxidante mediante un
incremento de la actividad del sistema antioxidante celular sin una participacioacuten directa en
el mismo que lo diferencia de los antioxidantes quiacutemicos convencionales
Esto sugiere que las ceacutelulas toleran cantidades pequentildeas de DHA y que eacuteste actuacutea a modo de
estiacutemulo para evitar cualquier acumulacioacuten de radicales libres la incorporacioacuten de Algatrium
Plus en las biomembranes provoca una respuesta celular antioxidante adaptativa
3
ESTUDIOS IN VIVO
Para valorar la accioacuten de Algatrium Plus se utilizoacute como modelo de es-
treacutes oxidativo el inducido por el ejercicio fiacutesico aerobio
Se sometioacute a deportistas a un esfuerzo continuado al 75 de su consu-
mo maacuteximo de oxiacutegeno durante 90 minutos lo cual supone una produc-
cioacuten suficiente de radicales libres y estreacutes oxidativo como para conocer
la capacidad antioxidante de cualquier manipulacioacuten dieteacutetica
Para dar credibilidad a los resultados obtenidos in vitro es necesario una
constatacioacuten de los mismos in vivo En este sentido se ha desarrollado
un ensayo cliacutenico controlado cruzadov de 4 meses de duracioacuten (N = 40
deportistas) a una dosis de 2 gdiacutea de Algatrium Plus
Las variables a estudiar fueron el dantildeo en DNA y paraacutemetros antioxidan-
tes seacutericos
Se observoacute un aumento estadiacutesticamente significativo en la capacidad
antioxidante total del serum (plt005) antes y despueacutes de la realizacioacuten
de las pruebas rectangulares en los deportistas que habiacutean ingerido Al-
gatrium Plus durante un periodo de tres semanas a cuatro meses
H2O
2 (n
mol
L m
in)
150
160
170
180
190
200
BASAL
CAPACIDAD ANTIOXIDANTE TOTAL
Paraacutemetros antioxidantes in vivo
4 MESES
ESTUDIOS IN VIVO
20 DIacuteAS
Algatrium Plus
Control
3
El nivel plasmaacutetico de MDA como iacutendice de peroxidacioacuten lipiacutedica fue
aumentando durante la realizacioacuten de todas las pruebas de esfuerzo
(plt0035) Despueacutes de la ingesta de Algatrium Plus durante 3 semanas
el dantildeo oxidativo a nivel lipiacutedico en las mismas condiciones disminuye
praacutecticamente a nivel basal (plt005) observaacutendose a los 4 meses de tra-
tamiento un efecto protector en esta variable MD
A (n
mol
L)
10
20
30
40
60
BASAL
PEROXIDACIOacuteN LIPIacuteDICA
Paraacutemetros antioxidantes in vivo
4 MESES
ESTUDIOS IN VIVO
20 DIacuteAS
50
0
-10
Hay un aumento en el dantildeo oxidativo del DNA durante la realizacioacuten de
las pruebas rectangulares del esfuerzo medidas como el nivel de 8-oxo-
dG en la orina (plt0011) La ingesta de Algatrium Plus durante 3 sema-
nas y hasta 4 meses protege el DNA del dantildeo oxidativo inducido por el
esfuerzo de una manera significativa (plt0035)
8-ox
o-dG
(pm
olK
gx24
h)
100
200
300
400
600
BASAL
DANtildeO MOLECULAR EN EL DNA
Paraacutemetros antioxidantes in vivo
4 MESES
ESTUDIOS IN VIVO
20 DIacuteAS
500
0
700
800
900
3
Como efectos colaterales en el rendimiento deportivo se ha observado
que los niveles de glicemia disminuyen durante la realizacioacuten de la prue-
ba rectangular de esfuerzo (plt00009) Esta reduccioacuten en la glicemia era
menor despueacutes de 3 semanas de ingesta de Algatrium Plus se traduciacutea
en un aumento del nivel de glicemia a los 4 meses de tratamiento con
Algatrium Plus
mg
dL
-6
-4
-2
BASAL
VARIACIOacuteN EN LA CONCENTRACIOacuteN DE GLUCOSA
Variables fisioloacutegicas de rendimiento deportivo
4 MESES
ESTUDIOS IN VIVO
3 SEMANAS
4
0
-8
2
mL
min
2600
2650
2700
BASAL
CONSUMO DE OXIacuteGENO
Variables fisioloacutegicas de rendimiento deportivo
4 MESES
ESTUDIOS IN VIVO
3 SEMANAS
2900
2550
2850Tambieacuten se ha observado un aumento significativo del consumo abso-
luto (plt0019) y relativo (plt0036) de oxiacutegeno determinado en el umbral
del esfuerzo triangular con la ingesta de Algatrium Plus hasta 4 meses
Estos resultados parecen indicar que la ingesta de Algatrium PLus pue-
de incrementar el rendimiento deportivo
2750
2800
3
CONCLUSIONES
Los aacutecidos grasos omega-3 son un concepto vigente tanto desde un punto de
vista nutricional como terapeacuteutico con un alto potencial de desarrollo
La aplicacioacuten de los aacutecidos grasos omega-3 en estos campos requiere de produc-
tos manufacturados de acuerdo con los estaacutendares que se aplican a productos
farmaceacuteuticos que incluyen controles de calidad para asegurar su pureza y cali-
dad estructural que condiciona su bioactividad Como estaacutendar es exigible una
riqueza miacutenima superior al 5 en una estructura quiacutemica muy biodisponible
como un trigliceacuterido
La incorporacioacuten de Algatrium Plus en las membranas celulares no soacutelo no pro-
mueve la peroxidacioacuten lipiacutedica sino que actuacutea como un activador del sistema
antioxidante celular probablemente como consecuencia de una respuesta adap-
tativa de la ceacutelula
INFORMACIOacuteN LEGAL
ALGATRIUM es una Marca Internacional propiedad de BRUDY TECHNOLOGY
El uso de DHA de alta concentracioacuten para el tratamiento de enfermedades tu-
morales estaacute protegido por la Patente Internacional nordm200501141 Propiedad de
BRUDY TECHNOLOGY
La comercializacioacuten y el uso de Omega-3 Antioxidantes estaacute protegido por la
Patente Internacional nordm200503202 propiedad de BRUDY TECHNOLOGY
Dr Joan C Domingo Pedrol - Departamento de Bioquiacutemica y Biologiacutea Molecular - Universidad de Barcelona - Telf 934 021 214 - e-mail jcdomingoubedu
Fabricado en Espantildea por Brudy Technology - CRiera de Sant Miquel 3 - ordm ordf - 000 Barcelona - Tel 93 17 03
BIOACTIVIDAD
Mecanismo de actividad antioxidante
CellularRespiration
OxidativeBurst
EnvironmentalFactors
O-SOD
GSH
GPx
LipidPeroxidation
ProteinPeroxidation
DNA Damage
HO
HO + O
HO
GSSG
GRed
Catalase
OH
1 3
30
BIOACTIVIDAD
Mecanismo de actividad antioxidante
CellularRespiration
OxidativeBurst
EnvironmentalFactors
O-SOD
GSH
GPx
LipidPeroxidation
ProteinPeroxidation
DNA Damage
HO
HO + O
HO
GSSG
GRed
Catalase
OH
1 3
=
+
BIOACTIVIDAD
Hemos encontrado que la incorporacioacuten de Algatrium Plus en las ceacutelulas disminuye la genera-
cioacuten del anioacuten superoacutexido la peroxidacioacuten lipiacutedica de una manera dosis-dependiente inversa y
el dantildeo en DNA
Los niveles inferiores del anioacuten superoacutexido bajo estreacutes oxidativo en ceacutelulas tratadas con Alga-
trium Plus puede ser debido a la actividad maacutes alta de la SOD respecto al control
Por otra parte la actividad de la GPx en las ceacutelulas tratadas no era diferente de las ceacutelulas control
con o sin estreacutes oxidativo
El cambio maacutes significativo fue el incremento (300) de la concentracioacuten intracelular de GSH
relacionado con un incremento de la siacutentesis de novo
Estos resultados nos indican que Algatrium Plus ejerce su efecto antioxidante mediante un
incremento de la actividad del sistema antioxidante celular sin una participacioacuten directa en
el mismo que lo diferencia de los antioxidantes quiacutemicos convencionales
Esto sugiere que las ceacutelulas toleran cantidades pequentildeas de DHA y que eacuteste actuacutea a modo de
estiacutemulo para evitar cualquier acumulacioacuten de radicales libres la incorporacioacuten de Algatrium
Plus en las biomembranes provoca una respuesta celular antioxidante adaptativa
3
ESTUDIOS IN VIVO
Para valorar la accioacuten de Algatrium Plus se utilizoacute como modelo de es-
treacutes oxidativo el inducido por el ejercicio fiacutesico aerobio
Se sometioacute a deportistas a un esfuerzo continuado al 75 de su consu-
mo maacuteximo de oxiacutegeno durante 90 minutos lo cual supone una produc-
cioacuten suficiente de radicales libres y estreacutes oxidativo como para conocer
la capacidad antioxidante de cualquier manipulacioacuten dieteacutetica
Para dar credibilidad a los resultados obtenidos in vitro es necesario una
constatacioacuten de los mismos in vivo En este sentido se ha desarrollado
un ensayo cliacutenico controlado cruzadov de 4 meses de duracioacuten (N = 40
deportistas) a una dosis de 2 gdiacutea de Algatrium Plus
Las variables a estudiar fueron el dantildeo en DNA y paraacutemetros antioxidan-
tes seacutericos
Se observoacute un aumento estadiacutesticamente significativo en la capacidad
antioxidante total del serum (plt005) antes y despueacutes de la realizacioacuten
de las pruebas rectangulares en los deportistas que habiacutean ingerido Al-
gatrium Plus durante un periodo de tres semanas a cuatro meses
H2O
2 (n
mol
L m
in)
150
160
170
180
190
200
BASAL
CAPACIDAD ANTIOXIDANTE TOTAL
Paraacutemetros antioxidantes in vivo
4 MESES
ESTUDIOS IN VIVO
20 DIacuteAS
Algatrium Plus
Control
3
El nivel plasmaacutetico de MDA como iacutendice de peroxidacioacuten lipiacutedica fue
aumentando durante la realizacioacuten de todas las pruebas de esfuerzo
(plt0035) Despueacutes de la ingesta de Algatrium Plus durante 3 semanas
el dantildeo oxidativo a nivel lipiacutedico en las mismas condiciones disminuye
praacutecticamente a nivel basal (plt005) observaacutendose a los 4 meses de tra-
tamiento un efecto protector en esta variable MD
A (n
mol
L)
10
20
30
40
60
BASAL
PEROXIDACIOacuteN LIPIacuteDICA
Paraacutemetros antioxidantes in vivo
4 MESES
ESTUDIOS IN VIVO
20 DIacuteAS
50
0
-10
Hay un aumento en el dantildeo oxidativo del DNA durante la realizacioacuten de
las pruebas rectangulares del esfuerzo medidas como el nivel de 8-oxo-
dG en la orina (plt0011) La ingesta de Algatrium Plus durante 3 sema-
nas y hasta 4 meses protege el DNA del dantildeo oxidativo inducido por el
esfuerzo de una manera significativa (plt0035)
8-ox
o-dG
(pm
olK
gx24
h)
100
200
300
400
600
BASAL
DANtildeO MOLECULAR EN EL DNA
Paraacutemetros antioxidantes in vivo
4 MESES
ESTUDIOS IN VIVO
20 DIacuteAS
500
0
700
800
900
3
Como efectos colaterales en el rendimiento deportivo se ha observado
que los niveles de glicemia disminuyen durante la realizacioacuten de la prue-
ba rectangular de esfuerzo (plt00009) Esta reduccioacuten en la glicemia era
menor despueacutes de 3 semanas de ingesta de Algatrium Plus se traduciacutea
en un aumento del nivel de glicemia a los 4 meses de tratamiento con
Algatrium Plus
mg
dL
-6
-4
-2
BASAL
VARIACIOacuteN EN LA CONCENTRACIOacuteN DE GLUCOSA
Variables fisioloacutegicas de rendimiento deportivo
4 MESES
ESTUDIOS IN VIVO
3 SEMANAS
4
0
-8
2
mL
min
2600
2650
2700
BASAL
CONSUMO DE OXIacuteGENO
Variables fisioloacutegicas de rendimiento deportivo
4 MESES
ESTUDIOS IN VIVO
3 SEMANAS
2900
2550
2850Tambieacuten se ha observado un aumento significativo del consumo abso-
luto (plt0019) y relativo (plt0036) de oxiacutegeno determinado en el umbral
del esfuerzo triangular con la ingesta de Algatrium Plus hasta 4 meses
Estos resultados parecen indicar que la ingesta de Algatrium PLus pue-
de incrementar el rendimiento deportivo
2750
2800
3
CONCLUSIONES
Los aacutecidos grasos omega-3 son un concepto vigente tanto desde un punto de
vista nutricional como terapeacuteutico con un alto potencial de desarrollo
La aplicacioacuten de los aacutecidos grasos omega-3 en estos campos requiere de produc-
tos manufacturados de acuerdo con los estaacutendares que se aplican a productos
farmaceacuteuticos que incluyen controles de calidad para asegurar su pureza y cali-
dad estructural que condiciona su bioactividad Como estaacutendar es exigible una
riqueza miacutenima superior al 5 en una estructura quiacutemica muy biodisponible
como un trigliceacuterido
La incorporacioacuten de Algatrium Plus en las membranas celulares no soacutelo no pro-
mueve la peroxidacioacuten lipiacutedica sino que actuacutea como un activador del sistema
antioxidante celular probablemente como consecuencia de una respuesta adap-
tativa de la ceacutelula
INFORMACIOacuteN LEGAL
ALGATRIUM es una Marca Internacional propiedad de BRUDY TECHNOLOGY
El uso de DHA de alta concentracioacuten para el tratamiento de enfermedades tu-
morales estaacute protegido por la Patente Internacional nordm200501141 Propiedad de
BRUDY TECHNOLOGY
La comercializacioacuten y el uso de Omega-3 Antioxidantes estaacute protegido por la
Patente Internacional nordm200503202 propiedad de BRUDY TECHNOLOGY
Dr Joan C Domingo Pedrol - Departamento de Bioquiacutemica y Biologiacutea Molecular - Universidad de Barcelona - Telf 934 021 214 - e-mail jcdomingoubedu
Fabricado en Espantildea por Brudy Technology - CRiera de Sant Miquel 3 - ordm ordf - 000 Barcelona - Tel 93 17 03
30
BIOACTIVIDAD
Mecanismo de actividad antioxidante
CellularRespiration
OxidativeBurst
EnvironmentalFactors
O-SOD
GSH
GPx
LipidPeroxidation
ProteinPeroxidation
DNA Damage
HO
HO + O
HO
GSSG
GRed
Catalase
OH
1 3
=
+
BIOACTIVIDAD
Hemos encontrado que la incorporacioacuten de Algatrium Plus en las ceacutelulas disminuye la genera-
cioacuten del anioacuten superoacutexido la peroxidacioacuten lipiacutedica de una manera dosis-dependiente inversa y
el dantildeo en DNA
Los niveles inferiores del anioacuten superoacutexido bajo estreacutes oxidativo en ceacutelulas tratadas con Alga-
trium Plus puede ser debido a la actividad maacutes alta de la SOD respecto al control
Por otra parte la actividad de la GPx en las ceacutelulas tratadas no era diferente de las ceacutelulas control
con o sin estreacutes oxidativo
El cambio maacutes significativo fue el incremento (300) de la concentracioacuten intracelular de GSH
relacionado con un incremento de la siacutentesis de novo
Estos resultados nos indican que Algatrium Plus ejerce su efecto antioxidante mediante un
incremento de la actividad del sistema antioxidante celular sin una participacioacuten directa en
el mismo que lo diferencia de los antioxidantes quiacutemicos convencionales
Esto sugiere que las ceacutelulas toleran cantidades pequentildeas de DHA y que eacuteste actuacutea a modo de
estiacutemulo para evitar cualquier acumulacioacuten de radicales libres la incorporacioacuten de Algatrium
Plus en las biomembranes provoca una respuesta celular antioxidante adaptativa
3
ESTUDIOS IN VIVO
Para valorar la accioacuten de Algatrium Plus se utilizoacute como modelo de es-
treacutes oxidativo el inducido por el ejercicio fiacutesico aerobio
Se sometioacute a deportistas a un esfuerzo continuado al 75 de su consu-
mo maacuteximo de oxiacutegeno durante 90 minutos lo cual supone una produc-
cioacuten suficiente de radicales libres y estreacutes oxidativo como para conocer
la capacidad antioxidante de cualquier manipulacioacuten dieteacutetica
Para dar credibilidad a los resultados obtenidos in vitro es necesario una
constatacioacuten de los mismos in vivo En este sentido se ha desarrollado
un ensayo cliacutenico controlado cruzadov de 4 meses de duracioacuten (N = 40
deportistas) a una dosis de 2 gdiacutea de Algatrium Plus
Las variables a estudiar fueron el dantildeo en DNA y paraacutemetros antioxidan-
tes seacutericos
Se observoacute un aumento estadiacutesticamente significativo en la capacidad
antioxidante total del serum (plt005) antes y despueacutes de la realizacioacuten
de las pruebas rectangulares en los deportistas que habiacutean ingerido Al-
gatrium Plus durante un periodo de tres semanas a cuatro meses
H2O
2 (n
mol
L m
in)
150
160
170
180
190
200
BASAL
CAPACIDAD ANTIOXIDANTE TOTAL
Paraacutemetros antioxidantes in vivo
4 MESES
ESTUDIOS IN VIVO
20 DIacuteAS
Algatrium Plus
Control
3
El nivel plasmaacutetico de MDA como iacutendice de peroxidacioacuten lipiacutedica fue
aumentando durante la realizacioacuten de todas las pruebas de esfuerzo
(plt0035) Despueacutes de la ingesta de Algatrium Plus durante 3 semanas
el dantildeo oxidativo a nivel lipiacutedico en las mismas condiciones disminuye
praacutecticamente a nivel basal (plt005) observaacutendose a los 4 meses de tra-
tamiento un efecto protector en esta variable MD
A (n
mol
L)
10
20
30
40
60
BASAL
PEROXIDACIOacuteN LIPIacuteDICA
Paraacutemetros antioxidantes in vivo
4 MESES
ESTUDIOS IN VIVO
20 DIacuteAS
50
0
-10
Hay un aumento en el dantildeo oxidativo del DNA durante la realizacioacuten de
las pruebas rectangulares del esfuerzo medidas como el nivel de 8-oxo-
dG en la orina (plt0011) La ingesta de Algatrium Plus durante 3 sema-
nas y hasta 4 meses protege el DNA del dantildeo oxidativo inducido por el
esfuerzo de una manera significativa (plt0035)
8-ox
o-dG
(pm
olK
gx24
h)
100
200
300
400
600
BASAL
DANtildeO MOLECULAR EN EL DNA
Paraacutemetros antioxidantes in vivo
4 MESES
ESTUDIOS IN VIVO
20 DIacuteAS
500
0
700
800
900
3
Como efectos colaterales en el rendimiento deportivo se ha observado
que los niveles de glicemia disminuyen durante la realizacioacuten de la prue-
ba rectangular de esfuerzo (plt00009) Esta reduccioacuten en la glicemia era
menor despueacutes de 3 semanas de ingesta de Algatrium Plus se traduciacutea
en un aumento del nivel de glicemia a los 4 meses de tratamiento con
Algatrium Plus
mg
dL
-6
-4
-2
BASAL
VARIACIOacuteN EN LA CONCENTRACIOacuteN DE GLUCOSA
Variables fisioloacutegicas de rendimiento deportivo
4 MESES
ESTUDIOS IN VIVO
3 SEMANAS
4
0
-8
2
mL
min
2600
2650
2700
BASAL
CONSUMO DE OXIacuteGENO
Variables fisioloacutegicas de rendimiento deportivo
4 MESES
ESTUDIOS IN VIVO
3 SEMANAS
2900
2550
2850Tambieacuten se ha observado un aumento significativo del consumo abso-
luto (plt0019) y relativo (plt0036) de oxiacutegeno determinado en el umbral
del esfuerzo triangular con la ingesta de Algatrium Plus hasta 4 meses
Estos resultados parecen indicar que la ingesta de Algatrium PLus pue-
de incrementar el rendimiento deportivo
2750
2800
3
CONCLUSIONES
Los aacutecidos grasos omega-3 son un concepto vigente tanto desde un punto de
vista nutricional como terapeacuteutico con un alto potencial de desarrollo
La aplicacioacuten de los aacutecidos grasos omega-3 en estos campos requiere de produc-
tos manufacturados de acuerdo con los estaacutendares que se aplican a productos
farmaceacuteuticos que incluyen controles de calidad para asegurar su pureza y cali-
dad estructural que condiciona su bioactividad Como estaacutendar es exigible una
riqueza miacutenima superior al 5 en una estructura quiacutemica muy biodisponible
como un trigliceacuterido
La incorporacioacuten de Algatrium Plus en las membranas celulares no soacutelo no pro-
mueve la peroxidacioacuten lipiacutedica sino que actuacutea como un activador del sistema
antioxidante celular probablemente como consecuencia de una respuesta adap-
tativa de la ceacutelula
INFORMACIOacuteN LEGAL
ALGATRIUM es una Marca Internacional propiedad de BRUDY TECHNOLOGY
El uso de DHA de alta concentracioacuten para el tratamiento de enfermedades tu-
morales estaacute protegido por la Patente Internacional nordm200501141 Propiedad de
BRUDY TECHNOLOGY
La comercializacioacuten y el uso de Omega-3 Antioxidantes estaacute protegido por la
Patente Internacional nordm200503202 propiedad de BRUDY TECHNOLOGY
Dr Joan C Domingo Pedrol - Departamento de Bioquiacutemica y Biologiacutea Molecular - Universidad de Barcelona - Telf 934 021 214 - e-mail jcdomingoubedu
Fabricado en Espantildea por Brudy Technology - CRiera de Sant Miquel 3 - ordm ordf - 000 Barcelona - Tel 93 17 03
BIOACTIVIDAD
Hemos encontrado que la incorporacioacuten de Algatrium Plus en las ceacutelulas disminuye la genera-
cioacuten del anioacuten superoacutexido la peroxidacioacuten lipiacutedica de una manera dosis-dependiente inversa y
el dantildeo en DNA
Los niveles inferiores del anioacuten superoacutexido bajo estreacutes oxidativo en ceacutelulas tratadas con Alga-
trium Plus puede ser debido a la actividad maacutes alta de la SOD respecto al control
Por otra parte la actividad de la GPx en las ceacutelulas tratadas no era diferente de las ceacutelulas control
con o sin estreacutes oxidativo
El cambio maacutes significativo fue el incremento (300) de la concentracioacuten intracelular de GSH
relacionado con un incremento de la siacutentesis de novo
Estos resultados nos indican que Algatrium Plus ejerce su efecto antioxidante mediante un
incremento de la actividad del sistema antioxidante celular sin una participacioacuten directa en
el mismo que lo diferencia de los antioxidantes quiacutemicos convencionales
Esto sugiere que las ceacutelulas toleran cantidades pequentildeas de DHA y que eacuteste actuacutea a modo de
estiacutemulo para evitar cualquier acumulacioacuten de radicales libres la incorporacioacuten de Algatrium
Plus en las biomembranes provoca una respuesta celular antioxidante adaptativa
3
ESTUDIOS IN VIVO
Para valorar la accioacuten de Algatrium Plus se utilizoacute como modelo de es-
treacutes oxidativo el inducido por el ejercicio fiacutesico aerobio
Se sometioacute a deportistas a un esfuerzo continuado al 75 de su consu-
mo maacuteximo de oxiacutegeno durante 90 minutos lo cual supone una produc-
cioacuten suficiente de radicales libres y estreacutes oxidativo como para conocer
la capacidad antioxidante de cualquier manipulacioacuten dieteacutetica
Para dar credibilidad a los resultados obtenidos in vitro es necesario una
constatacioacuten de los mismos in vivo En este sentido se ha desarrollado
un ensayo cliacutenico controlado cruzadov de 4 meses de duracioacuten (N = 40
deportistas) a una dosis de 2 gdiacutea de Algatrium Plus
Las variables a estudiar fueron el dantildeo en DNA y paraacutemetros antioxidan-
tes seacutericos
Se observoacute un aumento estadiacutesticamente significativo en la capacidad
antioxidante total del serum (plt005) antes y despueacutes de la realizacioacuten
de las pruebas rectangulares en los deportistas que habiacutean ingerido Al-
gatrium Plus durante un periodo de tres semanas a cuatro meses
H2O
2 (n
mol
L m
in)
150
160
170
180
190
200
BASAL
CAPACIDAD ANTIOXIDANTE TOTAL
Paraacutemetros antioxidantes in vivo
4 MESES
ESTUDIOS IN VIVO
20 DIacuteAS
Algatrium Plus
Control
3
El nivel plasmaacutetico de MDA como iacutendice de peroxidacioacuten lipiacutedica fue
aumentando durante la realizacioacuten de todas las pruebas de esfuerzo
(plt0035) Despueacutes de la ingesta de Algatrium Plus durante 3 semanas
el dantildeo oxidativo a nivel lipiacutedico en las mismas condiciones disminuye
praacutecticamente a nivel basal (plt005) observaacutendose a los 4 meses de tra-
tamiento un efecto protector en esta variable MD
A (n
mol
L)
10
20
30
40
60
BASAL
PEROXIDACIOacuteN LIPIacuteDICA
Paraacutemetros antioxidantes in vivo
4 MESES
ESTUDIOS IN VIVO
20 DIacuteAS
50
0
-10
Hay un aumento en el dantildeo oxidativo del DNA durante la realizacioacuten de
las pruebas rectangulares del esfuerzo medidas como el nivel de 8-oxo-
dG en la orina (plt0011) La ingesta de Algatrium Plus durante 3 sema-
nas y hasta 4 meses protege el DNA del dantildeo oxidativo inducido por el
esfuerzo de una manera significativa (plt0035)
8-ox
o-dG
(pm
olK
gx24
h)
100
200
300
400
600
BASAL
DANtildeO MOLECULAR EN EL DNA
Paraacutemetros antioxidantes in vivo
4 MESES
ESTUDIOS IN VIVO
20 DIacuteAS
500
0
700
800
900
3
Como efectos colaterales en el rendimiento deportivo se ha observado
que los niveles de glicemia disminuyen durante la realizacioacuten de la prue-
ba rectangular de esfuerzo (plt00009) Esta reduccioacuten en la glicemia era
menor despueacutes de 3 semanas de ingesta de Algatrium Plus se traduciacutea
en un aumento del nivel de glicemia a los 4 meses de tratamiento con
Algatrium Plus
mg
dL
-6
-4
-2
BASAL
VARIACIOacuteN EN LA CONCENTRACIOacuteN DE GLUCOSA
Variables fisioloacutegicas de rendimiento deportivo
4 MESES
ESTUDIOS IN VIVO
3 SEMANAS
4
0
-8
2
mL
min
2600
2650
2700
BASAL
CONSUMO DE OXIacuteGENO
Variables fisioloacutegicas de rendimiento deportivo
4 MESES
ESTUDIOS IN VIVO
3 SEMANAS
2900
2550
2850Tambieacuten se ha observado un aumento significativo del consumo abso-
luto (plt0019) y relativo (plt0036) de oxiacutegeno determinado en el umbral
del esfuerzo triangular con la ingesta de Algatrium Plus hasta 4 meses
Estos resultados parecen indicar que la ingesta de Algatrium PLus pue-
de incrementar el rendimiento deportivo
2750
2800
3
CONCLUSIONES
Los aacutecidos grasos omega-3 son un concepto vigente tanto desde un punto de
vista nutricional como terapeacuteutico con un alto potencial de desarrollo
La aplicacioacuten de los aacutecidos grasos omega-3 en estos campos requiere de produc-
tos manufacturados de acuerdo con los estaacutendares que se aplican a productos
farmaceacuteuticos que incluyen controles de calidad para asegurar su pureza y cali-
dad estructural que condiciona su bioactividad Como estaacutendar es exigible una
riqueza miacutenima superior al 5 en una estructura quiacutemica muy biodisponible
como un trigliceacuterido
La incorporacioacuten de Algatrium Plus en las membranas celulares no soacutelo no pro-
mueve la peroxidacioacuten lipiacutedica sino que actuacutea como un activador del sistema
antioxidante celular probablemente como consecuencia de una respuesta adap-
tativa de la ceacutelula
INFORMACIOacuteN LEGAL
ALGATRIUM es una Marca Internacional propiedad de BRUDY TECHNOLOGY
El uso de DHA de alta concentracioacuten para el tratamiento de enfermedades tu-
morales estaacute protegido por la Patente Internacional nordm200501141 Propiedad de
BRUDY TECHNOLOGY
La comercializacioacuten y el uso de Omega-3 Antioxidantes estaacute protegido por la
Patente Internacional nordm200503202 propiedad de BRUDY TECHNOLOGY
Dr Joan C Domingo Pedrol - Departamento de Bioquiacutemica y Biologiacutea Molecular - Universidad de Barcelona - Telf 934 021 214 - e-mail jcdomingoubedu
Fabricado en Espantildea por Brudy Technology - CRiera de Sant Miquel 3 - ordm ordf - 000 Barcelona - Tel 93 17 03
3
ESTUDIOS IN VIVO
Para valorar la accioacuten de Algatrium Plus se utilizoacute como modelo de es-
treacutes oxidativo el inducido por el ejercicio fiacutesico aerobio
Se sometioacute a deportistas a un esfuerzo continuado al 75 de su consu-
mo maacuteximo de oxiacutegeno durante 90 minutos lo cual supone una produc-
cioacuten suficiente de radicales libres y estreacutes oxidativo como para conocer
la capacidad antioxidante de cualquier manipulacioacuten dieteacutetica
Para dar credibilidad a los resultados obtenidos in vitro es necesario una
constatacioacuten de los mismos in vivo En este sentido se ha desarrollado
un ensayo cliacutenico controlado cruzadov de 4 meses de duracioacuten (N = 40
deportistas) a una dosis de 2 gdiacutea de Algatrium Plus
Las variables a estudiar fueron el dantildeo en DNA y paraacutemetros antioxidan-
tes seacutericos
Se observoacute un aumento estadiacutesticamente significativo en la capacidad
antioxidante total del serum (plt005) antes y despueacutes de la realizacioacuten
de las pruebas rectangulares en los deportistas que habiacutean ingerido Al-
gatrium Plus durante un periodo de tres semanas a cuatro meses
H2O
2 (n
mol
L m
in)
150
160
170
180
190
200
BASAL
CAPACIDAD ANTIOXIDANTE TOTAL
Paraacutemetros antioxidantes in vivo
4 MESES
ESTUDIOS IN VIVO
20 DIacuteAS
Algatrium Plus
Control
3
El nivel plasmaacutetico de MDA como iacutendice de peroxidacioacuten lipiacutedica fue
aumentando durante la realizacioacuten de todas las pruebas de esfuerzo
(plt0035) Despueacutes de la ingesta de Algatrium Plus durante 3 semanas
el dantildeo oxidativo a nivel lipiacutedico en las mismas condiciones disminuye
praacutecticamente a nivel basal (plt005) observaacutendose a los 4 meses de tra-
tamiento un efecto protector en esta variable MD
A (n
mol
L)
10
20
30
40
60
BASAL
PEROXIDACIOacuteN LIPIacuteDICA
Paraacutemetros antioxidantes in vivo
4 MESES
ESTUDIOS IN VIVO
20 DIacuteAS
50
0
-10
Hay un aumento en el dantildeo oxidativo del DNA durante la realizacioacuten de
las pruebas rectangulares del esfuerzo medidas como el nivel de 8-oxo-
dG en la orina (plt0011) La ingesta de Algatrium Plus durante 3 sema-
nas y hasta 4 meses protege el DNA del dantildeo oxidativo inducido por el
esfuerzo de una manera significativa (plt0035)
8-ox
o-dG
(pm
olK
gx24
h)
100
200
300
400
600
BASAL
DANtildeO MOLECULAR EN EL DNA
Paraacutemetros antioxidantes in vivo
4 MESES
ESTUDIOS IN VIVO
20 DIacuteAS
500
0
700
800
900
3
Como efectos colaterales en el rendimiento deportivo se ha observado
que los niveles de glicemia disminuyen durante la realizacioacuten de la prue-
ba rectangular de esfuerzo (plt00009) Esta reduccioacuten en la glicemia era
menor despueacutes de 3 semanas de ingesta de Algatrium Plus se traduciacutea
en un aumento del nivel de glicemia a los 4 meses de tratamiento con
Algatrium Plus
mg
dL
-6
-4
-2
BASAL
VARIACIOacuteN EN LA CONCENTRACIOacuteN DE GLUCOSA
Variables fisioloacutegicas de rendimiento deportivo
4 MESES
ESTUDIOS IN VIVO
3 SEMANAS
4
0
-8
2
mL
min
2600
2650
2700
BASAL
CONSUMO DE OXIacuteGENO
Variables fisioloacutegicas de rendimiento deportivo
4 MESES
ESTUDIOS IN VIVO
3 SEMANAS
2900
2550
2850Tambieacuten se ha observado un aumento significativo del consumo abso-
luto (plt0019) y relativo (plt0036) de oxiacutegeno determinado en el umbral
del esfuerzo triangular con la ingesta de Algatrium Plus hasta 4 meses
Estos resultados parecen indicar que la ingesta de Algatrium PLus pue-
de incrementar el rendimiento deportivo
2750
2800
3
CONCLUSIONES
Los aacutecidos grasos omega-3 son un concepto vigente tanto desde un punto de
vista nutricional como terapeacuteutico con un alto potencial de desarrollo
La aplicacioacuten de los aacutecidos grasos omega-3 en estos campos requiere de produc-
tos manufacturados de acuerdo con los estaacutendares que se aplican a productos
farmaceacuteuticos que incluyen controles de calidad para asegurar su pureza y cali-
dad estructural que condiciona su bioactividad Como estaacutendar es exigible una
riqueza miacutenima superior al 5 en una estructura quiacutemica muy biodisponible
como un trigliceacuterido
La incorporacioacuten de Algatrium Plus en las membranas celulares no soacutelo no pro-
mueve la peroxidacioacuten lipiacutedica sino que actuacutea como un activador del sistema
antioxidante celular probablemente como consecuencia de una respuesta adap-
tativa de la ceacutelula
INFORMACIOacuteN LEGAL
ALGATRIUM es una Marca Internacional propiedad de BRUDY TECHNOLOGY
El uso de DHA de alta concentracioacuten para el tratamiento de enfermedades tu-
morales estaacute protegido por la Patente Internacional nordm200501141 Propiedad de
BRUDY TECHNOLOGY
La comercializacioacuten y el uso de Omega-3 Antioxidantes estaacute protegido por la
Patente Internacional nordm200503202 propiedad de BRUDY TECHNOLOGY
Dr Joan C Domingo Pedrol - Departamento de Bioquiacutemica y Biologiacutea Molecular - Universidad de Barcelona - Telf 934 021 214 - e-mail jcdomingoubedu
Fabricado en Espantildea por Brudy Technology - CRiera de Sant Miquel 3 - ordm ordf - 000 Barcelona - Tel 93 17 03
Se observoacute un aumento estadiacutesticamente significativo en la capacidad
antioxidante total del serum (plt005) antes y despueacutes de la realizacioacuten
de las pruebas rectangulares en los deportistas que habiacutean ingerido Al-
gatrium Plus durante un periodo de tres semanas a cuatro meses
H2O
2 (n
mol
L m
in)
150
160
170
180
190
200
BASAL
CAPACIDAD ANTIOXIDANTE TOTAL
Paraacutemetros antioxidantes in vivo
4 MESES
ESTUDIOS IN VIVO
20 DIacuteAS
Algatrium Plus
Control
3
El nivel plasmaacutetico de MDA como iacutendice de peroxidacioacuten lipiacutedica fue
aumentando durante la realizacioacuten de todas las pruebas de esfuerzo
(plt0035) Despueacutes de la ingesta de Algatrium Plus durante 3 semanas
el dantildeo oxidativo a nivel lipiacutedico en las mismas condiciones disminuye
praacutecticamente a nivel basal (plt005) observaacutendose a los 4 meses de tra-
tamiento un efecto protector en esta variable MD
A (n
mol
L)
10
20
30
40
60
BASAL
PEROXIDACIOacuteN LIPIacuteDICA
Paraacutemetros antioxidantes in vivo
4 MESES
ESTUDIOS IN VIVO
20 DIacuteAS
50
0
-10
Hay un aumento en el dantildeo oxidativo del DNA durante la realizacioacuten de
las pruebas rectangulares del esfuerzo medidas como el nivel de 8-oxo-
dG en la orina (plt0011) La ingesta de Algatrium Plus durante 3 sema-
nas y hasta 4 meses protege el DNA del dantildeo oxidativo inducido por el
esfuerzo de una manera significativa (plt0035)
8-ox
o-dG
(pm
olK
gx24
h)
100
200
300
400
600
BASAL
DANtildeO MOLECULAR EN EL DNA
Paraacutemetros antioxidantes in vivo
4 MESES
ESTUDIOS IN VIVO
20 DIacuteAS
500
0
700
800
900
3
Como efectos colaterales en el rendimiento deportivo se ha observado
que los niveles de glicemia disminuyen durante la realizacioacuten de la prue-
ba rectangular de esfuerzo (plt00009) Esta reduccioacuten en la glicemia era
menor despueacutes de 3 semanas de ingesta de Algatrium Plus se traduciacutea
en un aumento del nivel de glicemia a los 4 meses de tratamiento con
Algatrium Plus
mg
dL
-6
-4
-2
BASAL
VARIACIOacuteN EN LA CONCENTRACIOacuteN DE GLUCOSA
Variables fisioloacutegicas de rendimiento deportivo
4 MESES
ESTUDIOS IN VIVO
3 SEMANAS
4
0
-8
2
mL
min
2600
2650
2700
BASAL
CONSUMO DE OXIacuteGENO
Variables fisioloacutegicas de rendimiento deportivo
4 MESES
ESTUDIOS IN VIVO
3 SEMANAS
2900
2550
2850Tambieacuten se ha observado un aumento significativo del consumo abso-
luto (plt0019) y relativo (plt0036) de oxiacutegeno determinado en el umbral
del esfuerzo triangular con la ingesta de Algatrium Plus hasta 4 meses
Estos resultados parecen indicar que la ingesta de Algatrium PLus pue-
de incrementar el rendimiento deportivo
2750
2800
3
CONCLUSIONES
Los aacutecidos grasos omega-3 son un concepto vigente tanto desde un punto de
vista nutricional como terapeacuteutico con un alto potencial de desarrollo
La aplicacioacuten de los aacutecidos grasos omega-3 en estos campos requiere de produc-
tos manufacturados de acuerdo con los estaacutendares que se aplican a productos
farmaceacuteuticos que incluyen controles de calidad para asegurar su pureza y cali-
dad estructural que condiciona su bioactividad Como estaacutendar es exigible una
riqueza miacutenima superior al 5 en una estructura quiacutemica muy biodisponible
como un trigliceacuterido
La incorporacioacuten de Algatrium Plus en las membranas celulares no soacutelo no pro-
mueve la peroxidacioacuten lipiacutedica sino que actuacutea como un activador del sistema
antioxidante celular probablemente como consecuencia de una respuesta adap-
tativa de la ceacutelula
INFORMACIOacuteN LEGAL
ALGATRIUM es una Marca Internacional propiedad de BRUDY TECHNOLOGY
El uso de DHA de alta concentracioacuten para el tratamiento de enfermedades tu-
morales estaacute protegido por la Patente Internacional nordm200501141 Propiedad de
BRUDY TECHNOLOGY
La comercializacioacuten y el uso de Omega-3 Antioxidantes estaacute protegido por la
Patente Internacional nordm200503202 propiedad de BRUDY TECHNOLOGY
Dr Joan C Domingo Pedrol - Departamento de Bioquiacutemica y Biologiacutea Molecular - Universidad de Barcelona - Telf 934 021 214 - e-mail jcdomingoubedu
Fabricado en Espantildea por Brudy Technology - CRiera de Sant Miquel 3 - ordm ordf - 000 Barcelona - Tel 93 17 03
3
El nivel plasmaacutetico de MDA como iacutendice de peroxidacioacuten lipiacutedica fue
aumentando durante la realizacioacuten de todas las pruebas de esfuerzo
(plt0035) Despueacutes de la ingesta de Algatrium Plus durante 3 semanas
el dantildeo oxidativo a nivel lipiacutedico en las mismas condiciones disminuye
praacutecticamente a nivel basal (plt005) observaacutendose a los 4 meses de tra-
tamiento un efecto protector en esta variable MD
A (n
mol
L)
10
20
30
40
60
BASAL
PEROXIDACIOacuteN LIPIacuteDICA
Paraacutemetros antioxidantes in vivo
4 MESES
ESTUDIOS IN VIVO
20 DIacuteAS
50
0
-10
Hay un aumento en el dantildeo oxidativo del DNA durante la realizacioacuten de
las pruebas rectangulares del esfuerzo medidas como el nivel de 8-oxo-
dG en la orina (plt0011) La ingesta de Algatrium Plus durante 3 sema-
nas y hasta 4 meses protege el DNA del dantildeo oxidativo inducido por el
esfuerzo de una manera significativa (plt0035)
8-ox
o-dG
(pm
olK
gx24
h)
100
200
300
400
600
BASAL
DANtildeO MOLECULAR EN EL DNA
Paraacutemetros antioxidantes in vivo
4 MESES
ESTUDIOS IN VIVO
20 DIacuteAS
500
0
700
800
900
3
Como efectos colaterales en el rendimiento deportivo se ha observado
que los niveles de glicemia disminuyen durante la realizacioacuten de la prue-
ba rectangular de esfuerzo (plt00009) Esta reduccioacuten en la glicemia era
menor despueacutes de 3 semanas de ingesta de Algatrium Plus se traduciacutea
en un aumento del nivel de glicemia a los 4 meses de tratamiento con
Algatrium Plus
mg
dL
-6
-4
-2
BASAL
VARIACIOacuteN EN LA CONCENTRACIOacuteN DE GLUCOSA
Variables fisioloacutegicas de rendimiento deportivo
4 MESES
ESTUDIOS IN VIVO
3 SEMANAS
4
0
-8
2
mL
min
2600
2650
2700
BASAL
CONSUMO DE OXIacuteGENO
Variables fisioloacutegicas de rendimiento deportivo
4 MESES
ESTUDIOS IN VIVO
3 SEMANAS
2900
2550
2850Tambieacuten se ha observado un aumento significativo del consumo abso-
luto (plt0019) y relativo (plt0036) de oxiacutegeno determinado en el umbral
del esfuerzo triangular con la ingesta de Algatrium Plus hasta 4 meses
Estos resultados parecen indicar que la ingesta de Algatrium PLus pue-
de incrementar el rendimiento deportivo
2750
2800
3
CONCLUSIONES
Los aacutecidos grasos omega-3 son un concepto vigente tanto desde un punto de
vista nutricional como terapeacuteutico con un alto potencial de desarrollo
La aplicacioacuten de los aacutecidos grasos omega-3 en estos campos requiere de produc-
tos manufacturados de acuerdo con los estaacutendares que se aplican a productos
farmaceacuteuticos que incluyen controles de calidad para asegurar su pureza y cali-
dad estructural que condiciona su bioactividad Como estaacutendar es exigible una
riqueza miacutenima superior al 5 en una estructura quiacutemica muy biodisponible
como un trigliceacuterido
La incorporacioacuten de Algatrium Plus en las membranas celulares no soacutelo no pro-
mueve la peroxidacioacuten lipiacutedica sino que actuacutea como un activador del sistema
antioxidante celular probablemente como consecuencia de una respuesta adap-
tativa de la ceacutelula
INFORMACIOacuteN LEGAL
ALGATRIUM es una Marca Internacional propiedad de BRUDY TECHNOLOGY
El uso de DHA de alta concentracioacuten para el tratamiento de enfermedades tu-
morales estaacute protegido por la Patente Internacional nordm200501141 Propiedad de
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La comercializacioacuten y el uso de Omega-3 Antioxidantes estaacute protegido por la
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Hay un aumento en el dantildeo oxidativo del DNA durante la realizacioacuten de
las pruebas rectangulares del esfuerzo medidas como el nivel de 8-oxo-
dG en la orina (plt0011) La ingesta de Algatrium Plus durante 3 sema-
nas y hasta 4 meses protege el DNA del dantildeo oxidativo inducido por el
esfuerzo de una manera significativa (plt0035)
8-ox
o-dG
(pm
olK
gx24
h)
100
200
300
400
600
BASAL
DANtildeO MOLECULAR EN EL DNA
Paraacutemetros antioxidantes in vivo
4 MESES
ESTUDIOS IN VIVO
20 DIacuteAS
500
0
700
800
900
3
Como efectos colaterales en el rendimiento deportivo se ha observado
que los niveles de glicemia disminuyen durante la realizacioacuten de la prue-
ba rectangular de esfuerzo (plt00009) Esta reduccioacuten en la glicemia era
menor despueacutes de 3 semanas de ingesta de Algatrium Plus se traduciacutea
en un aumento del nivel de glicemia a los 4 meses de tratamiento con
Algatrium Plus
mg
dL
-6
-4
-2
BASAL
VARIACIOacuteN EN LA CONCENTRACIOacuteN DE GLUCOSA
Variables fisioloacutegicas de rendimiento deportivo
4 MESES
ESTUDIOS IN VIVO
3 SEMANAS
4
0
-8
2
mL
min
2600
2650
2700
BASAL
CONSUMO DE OXIacuteGENO
Variables fisioloacutegicas de rendimiento deportivo
4 MESES
ESTUDIOS IN VIVO
3 SEMANAS
2900
2550
2850Tambieacuten se ha observado un aumento significativo del consumo abso-
luto (plt0019) y relativo (plt0036) de oxiacutegeno determinado en el umbral
del esfuerzo triangular con la ingesta de Algatrium Plus hasta 4 meses
Estos resultados parecen indicar que la ingesta de Algatrium PLus pue-
de incrementar el rendimiento deportivo
2750
2800
3
CONCLUSIONES
Los aacutecidos grasos omega-3 son un concepto vigente tanto desde un punto de
vista nutricional como terapeacuteutico con un alto potencial de desarrollo
La aplicacioacuten de los aacutecidos grasos omega-3 en estos campos requiere de produc-
tos manufacturados de acuerdo con los estaacutendares que se aplican a productos
farmaceacuteuticos que incluyen controles de calidad para asegurar su pureza y cali-
dad estructural que condiciona su bioactividad Como estaacutendar es exigible una
riqueza miacutenima superior al 5 en una estructura quiacutemica muy biodisponible
como un trigliceacuterido
La incorporacioacuten de Algatrium Plus en las membranas celulares no soacutelo no pro-
mueve la peroxidacioacuten lipiacutedica sino que actuacutea como un activador del sistema
antioxidante celular probablemente como consecuencia de una respuesta adap-
tativa de la ceacutelula
INFORMACIOacuteN LEGAL
ALGATRIUM es una Marca Internacional propiedad de BRUDY TECHNOLOGY
El uso de DHA de alta concentracioacuten para el tratamiento de enfermedades tu-
morales estaacute protegido por la Patente Internacional nordm200501141 Propiedad de
BRUDY TECHNOLOGY
La comercializacioacuten y el uso de Omega-3 Antioxidantes estaacute protegido por la
Patente Internacional nordm200503202 propiedad de BRUDY TECHNOLOGY
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3
Como efectos colaterales en el rendimiento deportivo se ha observado
que los niveles de glicemia disminuyen durante la realizacioacuten de la prue-
ba rectangular de esfuerzo (plt00009) Esta reduccioacuten en la glicemia era
menor despueacutes de 3 semanas de ingesta de Algatrium Plus se traduciacutea
en un aumento del nivel de glicemia a los 4 meses de tratamiento con
Algatrium Plus
mg
dL
-6
-4
-2
BASAL
VARIACIOacuteN EN LA CONCENTRACIOacuteN DE GLUCOSA
Variables fisioloacutegicas de rendimiento deportivo
4 MESES
ESTUDIOS IN VIVO
3 SEMANAS
4
0
-8
2
mL
min
2600
2650
2700
BASAL
CONSUMO DE OXIacuteGENO
Variables fisioloacutegicas de rendimiento deportivo
4 MESES
ESTUDIOS IN VIVO
3 SEMANAS
2900
2550
2850Tambieacuten se ha observado un aumento significativo del consumo abso-
luto (plt0019) y relativo (plt0036) de oxiacutegeno determinado en el umbral
del esfuerzo triangular con la ingesta de Algatrium Plus hasta 4 meses
Estos resultados parecen indicar que la ingesta de Algatrium PLus pue-
de incrementar el rendimiento deportivo
2750
2800
3
CONCLUSIONES
Los aacutecidos grasos omega-3 son un concepto vigente tanto desde un punto de
vista nutricional como terapeacuteutico con un alto potencial de desarrollo
La aplicacioacuten de los aacutecidos grasos omega-3 en estos campos requiere de produc-
tos manufacturados de acuerdo con los estaacutendares que se aplican a productos
farmaceacuteuticos que incluyen controles de calidad para asegurar su pureza y cali-
dad estructural que condiciona su bioactividad Como estaacutendar es exigible una
riqueza miacutenima superior al 5 en una estructura quiacutemica muy biodisponible
como un trigliceacuterido
La incorporacioacuten de Algatrium Plus en las membranas celulares no soacutelo no pro-
mueve la peroxidacioacuten lipiacutedica sino que actuacutea como un activador del sistema
antioxidante celular probablemente como consecuencia de una respuesta adap-
tativa de la ceacutelula
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ALGATRIUM es una Marca Internacional propiedad de BRUDY TECHNOLOGY
El uso de DHA de alta concentracioacuten para el tratamiento de enfermedades tu-
morales estaacute protegido por la Patente Internacional nordm200501141 Propiedad de
BRUDY TECHNOLOGY
La comercializacioacuten y el uso de Omega-3 Antioxidantes estaacute protegido por la
Patente Internacional nordm200503202 propiedad de BRUDY TECHNOLOGY
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mL
min
2600
2650
2700
BASAL
CONSUMO DE OXIacuteGENO
Variables fisioloacutegicas de rendimiento deportivo
4 MESES
ESTUDIOS IN VIVO
3 SEMANAS
2900
2550
2850Tambieacuten se ha observado un aumento significativo del consumo abso-
luto (plt0019) y relativo (plt0036) de oxiacutegeno determinado en el umbral
del esfuerzo triangular con la ingesta de Algatrium Plus hasta 4 meses
Estos resultados parecen indicar que la ingesta de Algatrium PLus pue-
de incrementar el rendimiento deportivo
2750
2800
3
CONCLUSIONES
Los aacutecidos grasos omega-3 son un concepto vigente tanto desde un punto de
vista nutricional como terapeacuteutico con un alto potencial de desarrollo
La aplicacioacuten de los aacutecidos grasos omega-3 en estos campos requiere de produc-
tos manufacturados de acuerdo con los estaacutendares que se aplican a productos
farmaceacuteuticos que incluyen controles de calidad para asegurar su pureza y cali-
dad estructural que condiciona su bioactividad Como estaacutendar es exigible una
riqueza miacutenima superior al 5 en una estructura quiacutemica muy biodisponible
como un trigliceacuterido
La incorporacioacuten de Algatrium Plus en las membranas celulares no soacutelo no pro-
mueve la peroxidacioacuten lipiacutedica sino que actuacutea como un activador del sistema
antioxidante celular probablemente como consecuencia de una respuesta adap-
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El uso de DHA de alta concentracioacuten para el tratamiento de enfermedades tu-
morales estaacute protegido por la Patente Internacional nordm200501141 Propiedad de
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3
CONCLUSIONES
Los aacutecidos grasos omega-3 son un concepto vigente tanto desde un punto de
vista nutricional como terapeacuteutico con un alto potencial de desarrollo
La aplicacioacuten de los aacutecidos grasos omega-3 en estos campos requiere de produc-
tos manufacturados de acuerdo con los estaacutendares que se aplican a productos
farmaceacuteuticos que incluyen controles de calidad para asegurar su pureza y cali-
dad estructural que condiciona su bioactividad Como estaacutendar es exigible una
riqueza miacutenima superior al 5 en una estructura quiacutemica muy biodisponible
como un trigliceacuterido
La incorporacioacuten de Algatrium Plus en las membranas celulares no soacutelo no pro-
mueve la peroxidacioacuten lipiacutedica sino que actuacutea como un activador del sistema
antioxidante celular probablemente como consecuencia de una respuesta adap-
tativa de la ceacutelula
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morales estaacute protegido por la Patente Internacional nordm200501141 Propiedad de
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La comercializacioacuten y el uso de Omega-3 Antioxidantes estaacute protegido por la
Patente Internacional nordm200503202 propiedad de BRUDY TECHNOLOGY
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El uso de DHA de alta concentracioacuten para el tratamiento de enfermedades tu-
morales estaacute protegido por la Patente Internacional nordm200501141 Propiedad de
BRUDY TECHNOLOGY
La comercializacioacuten y el uso de Omega-3 Antioxidantes estaacute protegido por la
Patente Internacional nordm200503202 propiedad de BRUDY TECHNOLOGY
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