Presentacin de PowerPoint

EXAMENES INMUNOSEROLOGICOSCIRO OROZCOMEDICINAUCC

La serologa aprovecha la habilidad de los organismos de defenderse ante unainfeccin por un patgeno. Esta defensa incluye diferentes mecanismos especficos e inespecficos, de los cuales los inespecficos son innatosTras una infeccin la presencia de anticuerpos se puede detectar en general en un plazo de entre 10 y 15 das dependiendo de:

Tipo, cantidad, virulencia y patogenicidad del antgeno

Estado, la va de infeccin y la capacidad inmune del organismo infectado.

PRINCIPIOS DE LAS TCNICAS DE SEROLOGA

La deteccin de anticuerpos circulantes no solo depende de factores ligados al individuo o el patgeno investigado, sino tambin de los mtodos empleados para su deteccinEl sistema de complemento: Su activacin resulta en una reaccin con las membranas de clulas que puede causar bien su activacin, la alteracin de su estructura o su destruccin. Eritrocitos sobre la superficie de los cuales se han fijado anticuerpos son destruidos mediante lisis por el sistema de complemento. La tcnica utiliza cantidades conocidas de complemento para medir la cantidad de anticuerpos presentes en una muestra.b) La reaccin de anticuerpos con el antgeno:es muy especfica, y por esta razn constituye un instrumento muy valioso para mediante un componente conocido (antgeno) identificar la presencia de uno desconocido con un alto nivel de seguridad.La reaccin de un antgeno con anticuerpos resulta en la formacin de complejos inmunes de diferentes tipos. Dependiendo del antgeno y el sistema de prueba utilizados se pueden obtener y medir diferentes tipos de estos complejos. En general, en las pruebas de serologa se emplea una cantidad conocida de antgeno y se diluye el suero que se investiga de forma seriada. Se mide la concentracin del suero que an inhibe (mediante complejos anticuerpo antgeno) una accin concreta del antgeno, o la que an forma complejos que provocan una reaccin demostrable.

METODOS SERODIAGNOSTICOS

Pruebas indirectas que demuestran que el sistema inmune del individuo afectado ha estado en contacto con el agente en cuestin.1- PrecipitacinLa adicin de un antgeno soluble a una solucin con anticuerpos homlogos resultaen la formacin de complejos inmunes que precipitan de la solucin.

2- InmunodifusinCuando esta tcnica se utiliza en un medio semisolido como los geles de agar en los cuales los dos componentes el antgeno y el anticuerpo migran a travs del agar hasta que se encuentren y precipitan en el lugar donde su proporcin es optima, se trata de inmunodifusin.

3- AglutinacinAnticuerpos pueden reaccionar con un antgeno determinado y luego interconectar entre ellos o diferentes componentes antgenos presentes por ejemplo en la superficie de una bacteria. Este proceso resulta en la aglutinacin que es visible macroscopicamente y es un instrumento til en la identificacin de bacterias, hongos e incluso protozoos mediante antisueros especficos.

4- Floculacin La reaccin de floculacin es una prueba de agrupamiento microscpico del antgeno y el anticuerpo. Esta prueba es basada en la reaccin de floculacin visible del antgeno artificial, esto es debido por el desarrollo de anticuerpos IgG que reaccionan mediante la combinacin de un lipoide.

5- Inmunoelectroforesis6- Fijacin de complemento (CFT)7- Hemaglutinacin e inhibicin de la misma (HA y HAI)8- Enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA)9- Radioimmunoassay (RIA)10- Inmunofluorescencia11- Inmunoperoxidasa12- Test de neutralizacin de virusESPECIFIDAD Y SENSIBILIDADTodo depende de su especificad (capacidad de distinguir el material (anticuerpo, antgeno) objetivo de la prueba de otro parecido y de su sensibilidad (capacidad de detectar cantidades pequeas del material objetivo de la prueba).

El ideal sera una prueba que al mismo tiempo garantizara la mxima especificad (sin falsos positivos) y la mxima sensibilidad (sin falsos negativos) y que la mismo tiempo diera resultados rpidos.

LA INMUNO AGLUTINACIONEs una tcnica en la que se utilizan los principios de la reaccin Ag-Ac para determinar la presencia de diferentes componentes inmunolgicos utilizando directamente estos o materiales de soporte que permiten visualizar una aglutinacin macro y microscpica para su posterior interpretacin clnica En esta presentacin se mencionaran al LATEX, la aglutinacin directa y al CARBON

INMUNOAGLUTINACION CON LATEXEl ltex es un material polimrico compuesto de grasas y resinas vegetales.Contiene grupos carboxilos que le dan la propiedad ligar imunocomponentes de manera eficaz.Se pegan los Acs o Ags en partculas de ltex de un tamao de 0,5 a 1 m por condensacion

YA EN NUESTRO LABORATORIOEntonces cuando se aada el reactante a las partculas de ltex con recubierto inmunolgico se formaran aglutinados que se observan macroscpicamente.

De esta manera funcionan muchos de los kits comerciales usados en el laboratorio de inmunologa clnica tales como:Determinacin de estreptolisina O (ASTO)Determinacin de factores reumatoideos (RF)Determinacin de protena C-reactiva (PCR)13

PARTICULAS DE LATEX RECUBIERTAS CON AgANTICUERPOS IgM PENTAMERICOS EN EL SUEROAGLUTINADO MACROSCOPICAMENTE VISIBLE

Principio de aglutinacin

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Aglutinacion en latexEs un mtodo de laboratorio para examinar ciertos anticuerpos o antgenosLos anticuerpos o antgenos conocidos son unidos a partculas de ltex, con el objeto de facilitar la visualizacin de la prueba. Se pueden emplear otras partculas insolubles como el poliestireno o la bentonita

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Tipos de reactivos en ltex

PREPARACIONREACTIVOREACCIONANTICUERPOSANTIGENOS17

Aglutinacin en ltex

DE FCIL USOPRESUNTIVOMuy cmodoMUY RPIDOCUALITATIVO Y SEMICUANTITATIVOSENSIBLE Y ESPECIFICO18

procedimiento

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PCR protena c reactivase produce en el hgado cuando hay una infeccin o inflamacin aguda en el cuerpo. Su importancia es que reacciona con el sistema del complemento que es un sistema de defensa contra agresiones externas del cuerpo humanoPARA QU SE REALIZA?enfermedades infecciosas bacterianasenfermedades inflamatorias Para realizar este anlisis No se precisa estar en ayunas.20

PRUEBA EN PORTALa determinacin se efecta ensayando una suspensin de ltex recubierto con anticuerpos anti-PCR, frente a los sueros problema. La presencia de aglutinacin es indicativa de un aumento del nivel de PCR por encima del lmite superior del intervalo de referencia de las muestras ensayadasCOMPOSICION DE LOS REACTIVOSR CONTROL + CONTROL - Reactivo PCR-Latex. Suspensin estabilizada y tamponada de partculas de ltex recubiertas con anticuerpos especficos anti-PCR humana. Contiene 0,95g/L de azida sdicaSuero humano con una concentracin de PCR > 15 mg/L. Contiene 0,95 g/L de azida sdicaSuero animal, con una concentracin mxima de 1 mg/L de PCR humana. Contiene 0,95 g/L de azida sdica21

PCRArtritis agudaArtritis reumatoideFiebre reumticaOtras enfermedades autoinmunes (Sndrome de Reiter, Enfermedad de Crohn, vasculitis, LED, etc...)Infarto de miocardioInfarto pulmonarProblemas de rechazo de transplantesTraumatismosInfecciones bacterianas (urinarias, tuberculosis, etc...)Cncer.22

PCR

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ANTIESTREPTOLISINA-O (AS0)

es la medicin de anticuerpos anti-Estreptococo betahemolticos del tipo A. Esta bacteria produce una enzima llamada estreptolisina O, que puede destruir los hemates y el cuerpo reacciona contra ella produciendo anticuerpos especficos antiestreptolisina O. PARA QU SE REALIZA?La presencia de ttulos altos de antiestreptolisinas O ASLO, indican una infeccin por la bacteria Estreptococo betahemolticos del tipo A, que puede producir una glomerulonefritis, una fiebre reumtica, una endocarditis bacteriana o una escarlatinaPara realizar este anlisis NO se precisa estar en ayunas. 26

La determinacin se efecta ensayando una suspensin de partculas de ltex recubiertos con estreptolisina frente a los sueros problema. La presencia o ausencia de aglutinacin visible es indicativa de la presencia o ausencia de ASLO en las muestras nsayadas a niveles significativosASLO-LatexDeterminacin de anti-estreptolisina OPRUEBA EN PORTA R CONTROL+ CONTROL- Antgeno ASLO-Latex. Suspensin estabilizada y tamponada de partculas de ltex recubiertas con estreptolisina O. Contiene 0,95 g/L de azida sdica. Suero humano con una actividad ASLO superior a 200 UI/mL. Contiene 0,95 g/L de azida sdica Suero animal con una actividad ASLO inferior a 100 UI/mL. Contiene 0,95 g/L de azida sdica. COMPOSICION DE LOS REACTIVOS27

Niveles normales de ASLOen adultosMenores de 160 Unidades/mlen nios menores de 2 aosMenores de 50 Unidades/mlen nios entre 2 y 4 aosMenores de 160 Unidades/mlen nios entre 4 y 12 aosEntre 160 y 300 Unidades/mlNiveles normales de Saturacin de la transferrinaHombresdel 20 al 50%Mujeresdel 15 al 50%En estos valores puede haber ciertas diferencias 28

ASO

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ASLOInfeccin por Estreptococo beta hemolticos del tipo A

Glomerulonefritis

Fiebre reumtica

Endocarditis bacteriana

Escarlatina

Pioderma por Estreptococo betahemolticos del tipo A

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FACTOR REMATOIDEO (FR)

El factor reumatoide (FR) es una prueba que mide la presencia y nivel de la IgM especfica contra las inmunoglobulinas IgG anormales, producidas por los linfocitos de la membrana sinovial, de las articulaciones de personas afectadas por la Artritis ReumatoidePARA QU SE REALIZA ESTE ESTUDIO?La Artritis Reumatoide es una enfermedad crnica, que produce la inflamacin de las articulaciones principalmente de manos y pies. VALORES NORMALES DE FACTOR REUMATOIDE (FR)Valores normales o NEGATIVOS:

Menor de 60 U/ ml (por nefelometra). Ttulo menor de 1:80 (mtodo de aglutinacin)

En estos valores puede haber muy pequeas diferencias por la tcnica o por criterios de normalidad propios de laboratorios concretos, a veces en el rango de valores y otras veces por las unidades a las que se hace referencia.31

PRUEBA EN PORTA

La determinacin se efecta ensayando una suspensin de partculas de ltex recubiertos con gamma globulina humana frente a los sueros problema. La presencia o ausencia de aglutinacin visible es indicativa de la presencia o ausencia de FR en las muestras ensayadasCOMPOSICION DE LOS REACTIVOSRCONTROL + CONTROL - Reactivo FR-Latex. Suspensin estabilizada y tamponada de partculas de ltex recubiertas con gamma globulina humana. Contiene 0,95 g/L de azida sdicaSuero humano con una actividad aproximada equivalente a 25 UI/mL. Contiene 0,95 g/L de azida sdicaSuero animal con una actividad inferior a 5 UI/mL. Contiene 0,95 g/L de azida sdica32

FR

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(FR) Artritis ReumatoideDermatomiositisEsclerodermaHepatitis crnicaInfeccin viral crnica Mononucleosis infecciosa LeucemiaLupus Eritematoso Sistmico Sndrome de SjogrenSndrome Nefrtico Tuberculosis34

AGLUTINACION DIRECTA EN SUSPENSIN DE ANTIGENOSEn este caso se utilizan directamente los antgenos en una suspensin salina sin un soporte como el ltex o carbn.Se usan clulas muertas de los agentes infecciosos como en la prueba de widal para la deteccin de salmonella y brucella

WIDALAGLUTINAEn el suero del paciente se encuentran anticuerpos anti-membranas flagelares de salmonella y brucellaEl paciente cursa una infeccin por salmonella o brucellaEl paciente podra estar cursando una FIEBRE ENTERICA, SEPTICEMIA, ENTERITISSe hacen otras pruebas para confirmar el estado aparentemente saludable del pacienteNO AGLUTINA

INTERPRETACION DE LOS RESULTADOS 4+: todos los microorganismos aglutinan.3+: aglutinan aproximadamente el 75%. 2+: aglutinan aproximadamente el 50%. 1+: aglutinan aproximadamente el 25%. Negativo: no aparece aglutinacin. Tcnica I: se indica solamente positivo o negativo. Tcnica II: el ttulo se considerar la ltima dilucin que da aglutinacin del 50% (++).

VALORES DE REFERENCIA Generalmente ttulos de 1:40 1:80 son sospechosos de enfermedad.

Slo ttulos mayores de 1:80 pueden considerarse probatorios de diagnstico de enfermedad cuando estn acompaados de la sintomatologa clnica.

Ttulos mayores de 1:320, son concluyentes.

AGLUTINACION EN CARBONEl carbn (activado) proveniente de la combustin de materias vegetales y es un potente adsorbente de varias sustancias. Esta propiedad adsorbente se le atribuyen a los micro poros que tienen sus partculas con poros de aproximadamente 1 nm de radio o menos.

En inmunoaglutinacion las partculas de carbn tienen adsorbidas a sus partculas sustancias como colesterol, leticina y cardiolipina o conocidas como reagininas plasmticas en la prueba de RPR

BASICAMENTE FUNCIONA ASI

COLESTEROLLECITINACARDIOLIPINACARBON ACTIVADOLIPIDOS ADSORBIDOS EN EL CARBONANTICUERPOS IgMAGLUTINADO

INTERPRETACION CLINICARPRAGLUTINAEn el suero del paciente se encuentran anticuerpos anti-reaginas producidas por las celulas infectadas posiblemente con T. pallidum y por el mismo MOEl paciente posiblemente cursa o curso una infeccin por T. pallidumSe debe confirmar si se trata de SIFILIS relacionando el resultado de laboratorio con la clinica o pruebas mas especificas ya que el RPR no es especifico del Ag de T. pallidumSe hacen otras pruebas para confirmar el estado aparentemente saludable del pacienteNO AGLUTINA

Husped produce anticuerpos: contra material lipoidal liberado por las clulas daadas (reaginas) contra material lipoproteico y cardiolipina liberada por los treponemas (anticuerpos especficos)Anticuerpos antilipdicos: Se detectan en etapa primaria Aumenta cantidad en etapa secundaria Disminuyen en etapas posteriores Se producen en otras enfermedades Treponmicas Se producen en respuesta a enfermedades No treponmicas agudas o crnicas

GRACIAS!