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PTH: MPTH: MTODOS DE TODOS DE DETERMINACIDETERMINACINN

Eva Mrquez Litor6 de febrero 2008

XIII JORNADA INTERHOSPITALARIA

PTHPTH

HORMONA PEPTDICA

(84 aminocidos)

MANTENER LA HOMEOSTASIS Ca2+

SNTESIS Y SECRECINSNTESIS Y SECRECIN

CLULAS PRINCIPALES


PTH Ca2+


RECEPTOR ACOPLADO A PROTENAS G

SNTESIS Y SECRECINSNTESIS Y SECRECINPresecuencia

Prosecuencia

PTH


PTH PTH

PTH

PTHPTH

Ca2+

Ca2+

Ca2+

Ca2+

Ca2+

Ca2+

Ca2+

Ca2+

Ca2+

Ca2+ TRANSCRIPCIN DEL GEN DE LA

PTH

IP3E

C-PTH

C-PTH

C-PTH

C-PTH

PTH

PTH

Vitamina D


PTH PTH

PTH

PTHPTH

Ca2+

Ca2+

Ca2+

TRANSCRIPCIN DEL GEN DE LA

PTHPTHPTHPTH

Mg2+E C-

PTHC-

PTH

C-PTH

C-PTH

PTH

PTH

METABOLISMO Y EXCRECINMETABOLISMO Y EXCRECIN

t1/2= 2-4

HGADO(kupffer)C-terminal

N-terminal

5 veces PTHintacta

METABOLISMO Y EXCRECINMETABOLISMO Y EXCRECIN

PTH (1-84)Aclaramiento renal

C-terminal

funcin renal PTHi + C-terminal

N-PTH y PTHi (1-84) actividad biolgicaC-PTH inactivos

EFECTOS BIOLGICOSEFECTOS BIOLGICOS

MANTENER [Ca2+] EN LEC

HUESO

RIN

INTESTINO


RECEPTOR DE PTH

RECEPTOR TRANSMEMBRANA

ACOPLADO A PROTENAS G

ACCIN HUESO Y

RIN

Activacin: residuo 1-6 PTH


RIN

Incrementa la reabsorcin de Ca2+ en la porcin distal del tbuloInhibe la reabsorcin de fosfato en el tbulo proximal (efecto fosfatrico)Estimula la produccin de 1,25-(OH)2-vitamina D (forma activa) aumenta la absorcin intestinal de Ca2+ (efecto indirecto sobre intestino)


HUESO

Receptor de PTH en osteoblastos:Inhibe sntesis de enzimas formadoras de tejido seoInduce expresin de citoquinas que promueven la proliferacin y diferenciacin de osteoclastos (sistema RANKL/OPG)

Accin bimodal:Temprana: induce resorcin sea (inhibe osteoblastos y activa osteoclastos) Ca2+ srico Tarda: remodelacin sea de sitios afectados (estimula proliferacin de osteoblastos)


RECEPTOR DE PTH



Activacin selectiva

explicara los efectos dispares

seos

ACCIN HUESO Y

RIN

Activacin: residuo 1-6 PTH


RECEPTOR DE C-PTH



Activacin: residuos C-PTH Efectos biolgicos de fragmentos inactivos

resorcin seaContrarrestan efecto del Ca2+

Osteoblastos y osteocitos

Pr-PTHPr-PTH

Pptido de 141aa con homologa estructural en extremo N-terminalcon PTH (13aa).Inicialmente descubierto en tumores (pulmn, mama, rin...)Hipercalcemia grave por activacin del receptor de PTH:-Incrementa resorcin sea-Aumenta reabsorcin renal de Ca2+ Menor efecto fosfatrico que PTH

Pr-PTHPr-PTH

Produccin en tejidos fetales y adultos.Funcin fisiolgica:-Feto:

-Regula proliferacin y mineralizacin de cartlago-Regula transporte placentario de calcio

-Vida postnatal (accin paracrina):-Regula interacciones entre epitelio y mesnquima (desarrollo de mama, piel y folculo piloso)

Elevada en hipercalcemia asociada a malignidad y en carcinomas epidermoides de pulmn, esfago, tero, piel y en otros cnceres sin relacin con su localizacin (feocromocitoma, mielomas, linfomas...)

DETERMINACIN DE PTHDETERMINACIN DE PTH

Gran controversia en varios puntos:1.Denominacin de los distintos tipos de ensayos

Radioinmunoanlisis

Anlisis inmunomtricos

PTHintacta

PTHbiointacta

1generacin

2generacin

3generacin

1generacin

2generacin


2. Uso de diferentes unidades de medida. La adopcin de unidades molares es difcil por la heterogenicidad de especies moleculares de PTH. Se acepta la conversin, en ensayos de PTH intacta, de unidades de masa a unidades molares utilizando un factor de conversin.

3. En un mismo tipo de ensayo no hay estandarizacin para armonizar resultados entre distintos mtodos. Estudio de comparacin entre 15 mtodos encontr una diferencia de PTH comprendida (-44%- +123%)


Laboratorios dependen de los intervalos de referencia aportados por los fabricantes que no son comparables entre s

FABRICANTE MTODO INTERVALO REFERENCIA (pmol/L)

BMC Elecsys (Roche) Electroquimioluminiscencia 1.6-6.9

Modular (Roche) Electroquimioluminiscencia 1.4-7.6

Immulite 2000 (DPC) Quimioluminiscencia 1.0-7.0

Immulite (DPC) Quimioluminiscencia 1.1-7.3

Advia Centaur (Bayer) Inmunoquimioluminiscencia 1.2-8.5

N-tact PTH (Diasorin) Inmunoradiometra 1.2-4.9


Intervalos de referencias se basan en adultos jvenes y de mediana edad, pero sus lmites varan en ciertos grupos:-Ancianos: elevacin edad-dependiente relacionada con la disminucin de funcin renal.-Embarazadas: disminucin en el primer trimestre seguido por un aumento hasta valores normales a trmino del embarazo-Recin nacidos: presentan hipocalcemia porque su glndula ha estado suprimida durante el embarazo y tarda en responder


Mejora de sensibilidad clnica: Uso de intervalos de referencia dinmicos (rangos de valores de PTH en suero obtenidos a partir de modificaciones extremas de las [Ca2+] en individuos sanos) mejor que intervalos gaussianos (valores de PTH en individuos con valores de Ca2+ normales)


RADIOINMUNOANLISIS

Inmunoanlisis competitivos con Ac dirigidos hacia porciones ms antignicas (regin media o C-terminal)

Limitaciones

Detectan pptidos PTH amino terminal truncados y PTH (1-84).

IR avanzada resultados anormalmente elevados


ANLISIS INMUNOMTRICOS

-Inmunorradiometra (IRMA) M= radiacin (I125)-Inmunoquimioluminiscencia (ICMA) M= enzima o sonda quimioluminiscente

M SSSS= soporte slido


SS

SS

E

SS

E

S

SS

+ +

+


1.Gran sensibilidad y especificidad por uso de Ac de secuencia especfica

2.Rango de concentracin ms amplio

3.Menos tiempo de incubacin


Capaces de realizar diagnstico diferencial de hipercalcemia:-Niveles elevados de PTH en trastornos hiperparatiroideos-Niveles deprimidos de PTH en hipercalcemia con base no paratiroideaResultados reproducibles en pacientes con dilisis (gran retencin de fragmentos C-PTH)


Anlisis inmunomtricos PTH intacta (1-84)

PTH (7-84)

Ensayos de PTHintacta:- Detectan formas moleculares con efecto biolgico opuesto- Sobreestiman la concentracin de PTH

Nuevos inmunoanlisis


1 84

deteccin captura

7 34

PTH bio-intacta

Detectan exclusivamente PTH (1-84), no reaccionan con fragmentos grandes N-terminales truncados


No se ha determinado qu inmunoanlisis es superior:-Los resultados de ambos se correlacionan tanto en sujetos normales como en pacientes con IR, aunque los valores obtenidos con los primeros son ~ 50% superiores -Punto de vista cientfico: medir la verdadera concentracin de PTH (1-84) hara posible entender mejor la fisiologa de la glndula paratiroides y el metabolismo fosfoclcico-Punto de vista clnico: valores con PTH bio-intacta noson mejores para discriminar enfermedades seas asociadas a fallo renal y tienen igual sensibilidad diagnstica en hiperparatiroidismo primario


Muestra de eleccin: SUERO

PTH es inestable separacin y congelacin rpida

Retraso 2-4h enSeparar descenso de 6%

Congelar descenso de 8%

Extraccin en ayunas y por la maana incremento bifsico (18:00 y 02:00)Podra utilizarse plasma con EDTA que estabiliza la muestra pero es incompatible con algunas tcnicas analticas


PTH>>>57 seguimiento

10


Interpretacin de niveles de PTH junto con :-Calcio total o inico-Albmina (complemento a la medida de calcio total)-Creatinina (indicador de funcin renal)-Fsforo y AMPc en orina

Tambin podran servirnos la cuantificacin de vitamina D3 y calcitonina que tambin forman parte del sistema de regulacin del metabolismo mineral.


VALORES ELEVADOS Hiperparatiroidismo

(primario y secundario) Sd. Zollinger Ellison Neoplasias IRC Acidosis tubular renal

proximal y distal Enfermedad celaca

VALORES DISMINUIDOS Hipoparatiroidismo Paratiroidismo

autoinmune Hipomagnesemia Hipocalcemia neonatal

transitoria Sd. Di George Alcoholismo Sarcoidosis


VALORES ELEVADOS Ejercicio intenso Fractura sea Obesidad postparto Frmacos:

Litio Isoniazida Corticoides Anticonvulsivantes Furosemida Rifampicina...

VALORES DISMINUIDOS

Embarazo Neonatos Prdida de peso Trasplante renal Hemodilisis Frmacos:

Heparina Cimetidina, famotidina Propranolol Gentamicina

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