Reacción en cadena de la polimerasa
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Reacción en Cadena de la Polimerasa
Cooperación. Dr. Cristian Francisco*
La Reacción En Cadena De La Polimerasa, conocida como PCR por sus siglas en
inglés (polymerase chain reaction), es una técnica de
biología molecular desarrollada en 1983 por Kary
Banks Mullis1 premio nobel de Química, cuyo
objetivo es obtener un gran número de copias de un
fragmento de ADN particular, partiendo de un mínimo;
en teoría basta partir de una única copia de ese
fragmento original, o molde.
La reacción en cadena de la polimerasa (PCR), es una
técnica de biología molecular, que permite la rápida
replicación del ADN. Con la PCR, técnica que con
cantidades mínimas de material genético, pueden ser
amplificadas millones de veces en pocas horas, permitiendo la detección rápida y
fiable de los marcadores genéticos de enfermedades infecciosas, cáncer y
desórdenes genéticos.
El uso de la tecnología de la reacción en cadena de la polimerasa ha aumentado
mucho la capacidad de los científicos para estudiar el material genético. Desde su
invención en 1983, la PCR ha cambiado la forma en la que se lleva a cabo la
investigación y diagnóstico médico. La capacidad de producir rápidamente
grandes cantidades de material genético ha permitido avances científicos
significativos, incluyendo huella dactilar del ADN y la secuenciación el genoma
humano. Además, la tecnología PCR ha influido mucho en los campos del
diagnóstico de la enfermedad y manejo del paciente, particularmente en las áreas
de SIDA y hepatitis C.
Esta técnica sirve para amplificar un fragmento de ADN; su utilidad es que tras la
amplificación resulta mucho más fácil identificar con una muy alta probabilidad,
virus o bacterias causantes de una enfermedad, identificar personas (cadáveres) o
hacer investigación científica sobre el ADN amplificado. Estos usos derivados de
la amplificación han hecho que se convierta en una técnica muy extendida, con el
consiguiente abaratamiento del equipo necesario para llevarla a cabo.
1 Bartlett & Stirling (2003)—A Short History of the Polymerase Chain Reaction. In: Methods Mol Biol. 226:3-6
Médico, Obstetra, Ginecologo/Oncólogo. Encargado de la “Clínica de Patología del Cérvix y Colposcopía” (CpCC) Hospital Docente Universitario de “La Mujer Dominicana” Docente Universitario. Asesor y jurado de trabajo Investigativo, Universidad Autónoma de Santo Domingo (UASD). Santo Domingo. República Dominicana.
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El proceso de PCR por lo general consiste en una serie de 20 a 35 cambios
repetidos de temperatura llamados ciclos; cada ciclo suele consistir en 2-3 pasos a
diferentes temperaturas. La PCR común se realiza con ciclos que tienen tres
pasos de temperatura. Los pasos de ciclos a menudo están precedidos por un
choque térmico (llamado "hold") a alta temperatura (> 90 °C), y seguido por otro
hold al final del proceso para la extensión de producto final o el breve almacenaje.
Las temperaturas usadas y el tiempo aplicado en cada ciclo dependen de gran
variedad de parámetros. Éstos incluyen la enzima usada para la síntesis de ADN,
la concentración de iones divalentes y de los dNTP en la reacción, y la
temperatura de unión de los cebadores, así como la longitud del ADN que se
desea amplificar. 2
Los pasos en PCR
La PCR está diseñada según el principio natural de replicación del ADN. Es un
proceso de tres pasos, designado como un ciclo, que se repite un número
específico de veces.
Un ciclo de PCR consiste en los siguientes pasos:
1. Desnaturalización 2. Alineación 3. Extensión
Este proceso tiene lugar en un
termociclador, un instrumento que
automáticamente controla y alterna las
temperaturas durante períodos
programados de tiempo para el número
apropiado de ciclos de PCR
(generalmente entre 30 y 40 ciclos).3
Las pruebas de ácido nucleico de ADN
mediante PCR constituyen una
metodología sensible y no invasiva para
determinar la presencia de una infección
por VPH activa.
2 Joseph Sambrook and David W. Russel (2001). Molecular Cloning: A Laboratory Manual (3rd ed. edición). Cold Spring Harbor, N.Y.: Cold Spring Harbor Laboratory Press. ISBN 0-87969-576-5. 3 http://www.roche.es/portal/roche-spain/acerca_de_la_pcr
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la prueba Linear Array HPV Genotyping Test para la detección y genotipificación
cualitativa de 37 genotipos anogenitales, 13 de alto riesgo y 24 de bajo riesgo, del
virus del papiloma humano (VpH), en muestras obtenidas y conservadas en un
medio para esta prueba que es el PreservCyt (ThinPrep) .
Usos importantes de la Genotipificación:
•Estudios epidemiológicos. - Monitoreo de infecciones persistentes por genotipos de alto riesgo. •Identificación de infecciones por genotipos 16 y 18. - Es idónea para detectar infecciones causadas por varios genotipos a la vez. •Discrimina entre genotipos de alto y bajo riesgo.
Se ha demostrado que los productos de higiene personal femenina, lubricantes,
cremas fungicidas y gelatinas anticonceptivas de uso habitual no interfieren con el
uso de la prueba. La presencia de sangre en un porciento reducido puede
reportar resultados falsos negativos. La presencia de moco endocervical o
exocervical en la muestra no interfiere con los resultados.
Genotipos analizados
Bajo Riesgo
6 11 26 40 42 53 54 55 61 62 64 66
67 69 70 71 72 73 81 82 83 84 IS39 CP6108
Alto Riesgo
16 18 31 33 35 39 45 51 52 56 58 59 68
Especificidad y sensitividad de la prueba de genotipado del HPV Linear Array para ADN de HPV de alto riesgo
Parámetro Estimación 95 % IC*
Sensitividad 96 % 92 -98 %
Especificidad 99 % 98- 100 %
*Intervalo de confianza del 95% mediante el método de Wald
Hoy en los servicios específicos para detectar ADN/ VpH , se presentan altas demandas de análisis, esta acción ha popularizado numerosamente esta prueba, pero se evidencia una debilidad interpretativa y de acciones terapéuticas agresivas cuya credibilidad se inclina a lo comercial.
