Sistema de IdentificaciónSistema de IdentificaciónMicrobianaMicrobiana

APIAPI

¿Qué son las galerías API?¿Qué son las galerías API?• API® sistema miniaturizado y estandarizado de identificación,

que asocia una galería de pruebas bioquímicas (10 – 20 sustratos) y una base de datos. (manual o digital).

• Fue creada en 1970, y con el tiempo la gama de galerías API se ha ido ampliando rapidamente, en colaboración con los grandes centros de referencia internacionales en USA, Japón, Australia y Europa…

SISTEMA DE IDENTIFICACIÓN MICROBIANA SISTEMA DE IDENTIFICACIÓN MICROBIANA API API

• Identifica más de 550 especies de Bacterias (gram negativas y positivas) y 15 especies de Levaduras.

• Es una galería miniaturizada y estandarizada con una base de datos (Apiweb).

• Es un método de referencia mundial.

Enfoques BásicosEnfoques Básicos

• MORFOLOGIA DE COLONIA (Idx. macroscópica)

• COLORACION DE GRAM (Idx. Microcóspica)

• PRUEBAS BIOQUIMICAS (tradicionales o API)

• SEROLOGIA (pruebas de complemento)

TIPOS DE GALERIAS

• API 20E : BACILOS GRAM NEGATIVOS FERMENTADORES (Enterobacteriaceae): 108 especies

TIPOS DE GALERIAS

• API NE : BACILOS GRAM NEGATIVOS NO FERMENTADORES: 64 especies

TIPOS DE GALERIAS

• API STAPH: ESTAFILOCOCOS Y MICROCOCO: 23 especies

TIPOS DE GALERIAS

•API STREP: ESTREPTOCOCOS: 47 especies

TIPOS DE GALERIAS

•API NH: NEISSERIAS Y HAEMOPHYLUS: 11 especies

TIPOS DE GALERIAS

TIPOS DE GALERIAS

•API LISTERIA . 6 especies

TIPOS DE GALERIAS

• API CAMPYLOBACTER: 18 especies• API CORYNEBACTERIA: 42 especies• API CH : 22 especies de Bacillus• API CHE : 96 especies de Enterobacteriaceae• API CHL : 52 especies de Lactobacillus• API ANAEROBIOS : 67 especies• API 20 C AUX: LEVADURAS:43 especies

Principio• La galería del sistema API 20 E se compone de 20

microtubos que contienen los sustratos sustratos deshidratadosdeshidratados. Los microtubos se inoculan con una suspensión bacteriana que reconstituye los tests. Las reacciones producidas durante el período de incubación se traducen en cambios de cambios de colorcolor espontáneos o revelados mediante la adición de reactivos.

• La lectura de estas reacciones se lleva a cabo utilizando la Tabla de LecturaTabla de Lectura, y la identificación se obtiene con la ayuda del Catalogo AnalíticoCatalogo Analítico o del softwaresoftware de identificación.

REACCIONES BIOQUIMICAS

• OXIDACION

• FERMENTACION

• ASIMILACION

• HIDRÓLISIS

• DEGRADACION

Metodología AnalíticaMetodología Analítica

• Cultivo bacteriano (no mayor de 24 horas) en un medio nutritivo.

• Tubo con 5 mL de NaCl 0.85%• Galerías API 20E: galería,

y cámara de incubación.• Reactivos API: TDA,

JAMES, VP1+2, NIT1+2• Reactivo de Oxidasa• Aceite de Parafina.• Hoja de Resultados.• Catálago Analítico o Software APIweb.

Materiales:Materiales:

Metodología AnalíticaMetodología Analítica

• La galería API 20 E no debe ser utilizada directamente a partir de muestras de origen clínico o de otro tipo.

• Los microorganismos a identificar deben aislarse en una primera fase sobre un MEDIO de cultivo adecuado según las técnicas usuales de bacteriología.

Muestras (Recolección y PreparaciónMuestras (Recolección y Preparación))

Aislamiento de V.alginolyticus en Agar TCBS

Aislamiento de V.alginolyticus en Agar NUTRITIVO

Metodología AnalíticaMetodología AnalíticaSelección de la GaleríaSelección de la Galería

Metodología AnalíticaMetodología Analítica

• Colocar una gota del reactivo de la oxidasa sobre el cultivo (no mayor de 24 horas) o con un palillo tomar una colonia sospechosa y colocar sobre papel filtro humedecido con reactivo.

• Color morado: OXIDASA (+)

Test de la OxidasaTest de la Oxidasa

1. Preparación del inóculo

ProcedimientoProcedimiento

2. Llenado de la cámara de incubación con agua estéril (5 mL)

3. Colocar la galería API en la cámara de incubación.

4. Llenado de la galería API.

VP, GEL -- tubos y cúpulas

ADH, LDC, ODC, H2S, URE – cúpula con aceite de parafina

5. Incubar la galería API a 36°C durante 18-24 horas

6. Hacer la Lectura de la galería remitiéndose a la TABLA DE LECTURA

Tabla de LecturaTabla de Lectura

Galería después de 24 hrs de incubación (Sin Reactivos)

Galería después de adicionar Reactivos

TDA: 1 gota de Reactivo de TDATDA: 1 gota de Reactivo de TDA

IND: 1 gota de Reactivo de JamesIND: 1 gota de Reactivo de James

VP: 1 gota de Rtvo. VP1 + 1 gota Rtvo. VP2VP: 1 gota de Rtvo. VP1 + 1 gota Rtvo. VP2

Ejemplos:

Hoja de ResultadosHoja de Resultados

VA001 2 0 0 7 0 4 30

Mx. De alimentos

- -+ + + + - - + - - + + - + + + + - + -

1+2+47 1 4 4 5 7 2

7 144 572 Escherichia coli

Buscar en Catalogo AnalíticoO

Api web (software)

LA VOLUNTAD ES ALGO GRANDE PUES LA ACCION Y EL TRABAJO GENERALMENTE SIGUEN A LA VOLUNTAD Y CASI SIEMPRE EL TRABAJO SE

ACOMPAÑA DE ÉXITO.

ESTAS TRES COSAS TRABAJO, VOLUNTAD Y ÉXITO, LLENAN LA EXISTENCIA HUMANA.

LA VOLUNTAD ABRE LA PUERTA AL ÉXITO, AMBOS BRILLANTES Y FELICES PASA ESTAS PUERTAS Y AL

FINAL DEL VIAJE EL ÉXITO CORONA NUESTROS ESFUERZOS.

LOUIS PASTEUR