Tinción de gram
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Fundamento, pasos y técnica de la tinción de Gram
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TINCIÓN DE GRAM
DEFINICIÓN
PASOS
FUNDAMENTO
TÉCNICA
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TINCIÓN DE GRAM: DEFINICIÓN
La tinción de Gram es una tinción diferencial
muy utilizada en Bacteriología para observar
bacterias en muestras clínicas.
Debe su nombre a Christian Gram (1984)
Morfología bacteriana
Diferenciación bacteriana
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TINCIÓN DE GRAM: FUNDAMENTO
El fundamento de la tinción de Gram se basa
en las diferencias de la pared celular de las
bacterias Grampositivas y Gramnegativas.
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TINCIÓN DE GRAM: FUNDAMENTO
La pared celular de las Bacterias Gram positivas
posee una gruesa capa de peptidoglicano
(retiene el complejo colorante-mordiente)y dos
clases de ácido teicoico
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TINCIÓN DE GRAM: FUNDAMENTO
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TINCIÓN DE GRAM: FUNDAMENTO
La pared celular de las bacterias Gram negativas
tiene una capa de peptidoglucano más fina
(facilita la salida del complejo colorante-
mordiente)
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TINCIÓN DE GRAM: PASOS
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TINCIÓN DE GRAM: PASOS
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El cristal violeta penetra en todas las células
bacterianas a través de la pared bacteriana
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TINCIÓN DE GRAM: PASOS
El lugol actúa como mordiente haciendo que el
cristal violeta se fije con mayor intensidad a la
pared de la célula bacteriana.
El I2 entra en las células y forma un complejo
insoluble en solución acuosa con el cristal violeta.
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TINCIÓN DE GRAM: PASOS
La mezcla de alcohol-acetona que se agrega,
sirve para realizar la decoloración, ya que en
la misma es soluble el complejo I2-cristal
violeta.
Los organismos Gram positivos no se
decoloran, mientras que los Gram negativos sí
lo hacen.
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TINCIÓN DE GRAM: PASOS
Para poner de manifiesto las células Gram
negativas se utiliza una coloración de
contraste. Habitualmente es un colorante de
color rojo, como la safranina o la fucsina.
Después de la coloración de contraste las
células Gram negativas son rojas, mientras que
las Gram positivas permanecen azules.
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TINCIÓN DE GRAM: TÉCNICA
Realizar un frotis fino.
Dejar secar.
Fijar con metanol.
Añadir Violeta de Genciana (1 minuto)
Lavar con agua.
Añadir Lugol
Lavar con agua
Decolorar con alcohol-acetona
Lavar con agua
Añadir colorante de contraste (1 minuto)
Lavar con agua
Dejar secar
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