PROYECTO INTEGRADO

TINCIÓN DE GRAMTINCIÓN DE GRAM

Objetivos del proyecto

Este proyecto tiene como objetivo llevar a la práctica los conocimientos teóricos explicados en clase, consiguiendo con ello un mayor conocimiento y profundización en la materia.

Con este trabajo conseguimos además una mayor práctica y desenvolvimiento con los utensilios del laboratorio.

Materiales

Bacterias (sarro, saliva, yogurt)

Alcohol

Cristal violeta

Lugol

Safranina o fucsina básica

Agua destilada

Procedimiento

El método de tinción es el siguiente:

1. Se prepara el frotis, se seca y se fija.

2. Se cubre con cristal violeta durante un minuto.

3. Lavar suavemente con agua destilada para eliminar el exceso de colorante.

4. Se traza con lugol un minuto. El lugol actúa como mordiente aumentando la afinidad del colorante por la bacteria.

5. Lavar con agua el exceso de lugol.

6. Se gotea alcohol-acetona de forma continua hasta que la preparación deje de perder color y se lava enseguida con agua abundante.

7. Se cubre la preparación con un colorante de contraste, como la safranina, durante un minuto. 8. Se lava con agua y se seca al aire, observándose a continuación con el objetivo de inmersión.9. Clasificar las bacterias según su forma (esférica -cocos- ,alargada -bacilos- ,bacilos cortos -cocobacilos-) y por su agrupación (aislado, diplos, tétraadas, cadenas, racimos, empalizada).

Mecanismo de la tinción de Gram

Productos que se utilizan

Reacción y coloración de la bacterias

GRAM + GRAM -

1) Cristal violeta Células color violeta. Células color violeta.

2) Lugol solución iodada Se forma el complejo CV-I. Las células continúan teñidas de color violeta.

Se forma el complejo CV-I.Las células continúan teñidas de color violeta.

3) Alcohol Se deshidratan las paredes celulares. Se contraen los poros. Disminuyen la permeabilidad. El complejo CV-I no sale de las células que continúan teñidas de color violeta.

Eliminación pro extracción de grasas de las paredes celulares. Aumenta la porosidad. El complejo CV-I se separa de la célula.

4) Safranina Células no decoloradas; quedan teñidas de color violeta.

Células decoloradas; se tiñen de color rosado.

¿Por qué unas bacterias se tiñen de violeta y otras rosadas?

Las diferencias básicas que nos permiten ver las bacterias de distintos colores residen en la pared bacteriana, las paredes celulares de bacterias de tipo gramnegativo poseen una capa lipídica externa la cual se tiñe con cristal violeta al igual que la pared de las células de tipo grampositivo pero con la diferencia de que estas no tienen una esa capa lipídica, que al ser tratada con alcohol desaparece (debido a que el alcohol es un disolvente orgánico y disuelve la pared lipídica) y por tanto la célula queda de nuevo sin teñir y para poder observarla basta con añadir safranina (colorante) que se quedará en la capa de mureina que ha quedado ahora expuesta.

Dificultades encontradas

Dificultad para encontrar las cantidades con las cuales realizar la tinción, por ello al mirar al microscopio encontrábamos grandes restos sólidos de los colorantes.

Los colorantes tiñen mucho y al no estar familiarizados con los utensilios que debíamos utilizar, manchamos tanto el laboratorio como a nosotros mismos.

No sabíamos con certeza cómo era la vista al microscopio de las bacterias que buscábamos, por ello es posible que pasásemos por alto algunas bacterias creyendo que eran restos de colorante.